Hypothermie geïnduceerd door Oxcarbazepine na voorbijgaande ischemie in de voorhersenen oefent therapeutische neurobescherming uit via voorbijgaande receptorpotentieel vanilloid type 1 en 4 bij gerbils deel 3

4. Materialen en methoden

4.1. Experimentele dieren

Mannelijke gerbils (totaal aantal=252) werden gebruikt op de leeftijd van 6 maanden (lichaamsgewicht 63-78 g). De gerbils zijn gefokt in het Experimental Animal Centre van de Kangwon National University (Chuncheon, Korea).

Gerbils zijn hele schattige kleine diertjes. Ze leven in woestijngebieden, zijn goed in het graven van grotten en hebben sterke instincten voor het opslaan en lokaliseren van voedsel. Onder deze kleine mannetjes hebben mannelijke gerbils een bijzonder goed geheugen, waardoor mensen hun geheimen willen kennen.

Ten eerste gebruiken mannelijke gerbils, wanneer ze naar voedsel zoeken, een reeks signalen, zoals oriëntatiepunten en terrein, om de richting te bepalen. Door langdurige observatie en oefening hebben ze hun eigen "geografisch informatiesysteem" opgezet. Vrouwelijke gerbils hebben daarentegen een slechter geheugen voor deze signalen, vooral in een voortdurend veranderende omgeving.

Ten tweede tonen mannelijke gerbils ook een sterk geheugen in de strijd tegen natuurlijke vijanden. Volgens wetenschappers zullen gerbils, wanneer ze worden bedreigd, snel het hol binnengaan en proberen te ontsnappen. Maar wanneer ze met dezelfde dreiging worden geconfronteerd, zullen mannelijke gerbils de aanvalsmodus van natuurlijke vijanden onthouden en deze vermijden, waardoor hun overlevingskansen toenemen.

Ten slotte ligt de herinnering aan mannelijke gerbils ook in hun sociale gedrag met elkaar. Elke gerbil heeft zijn unieke geur. Wanneer ze andere gerbils ontmoeten, gebruiken ze hun reukvermogen om elkaars identiteit en status te identificeren. Dit geheugenvermogen zorgt er niet alleen voor dat gerbils een relatief stabiele sociale verbinding kunnen opbouwen, maar is ook een belangrijke garantie voor hun voortplanting.

Samenvattend is de relatie tussen mannelijke gerbils en het geheugen onlosmakelijk met elkaar verbonden. Tijdens hun zoektocht naar overleving en voortplanting in de natuur vertrouwen ze op hun sterke geheugen om zich voortdurend aan te passen aan de omgeving en zichzelf te verbeteren. Als mensen moeten we van deze kleine jongens leren en ons geheugen voortdurend aanscherpen om ons beter aan te passen aan deze steeds veranderende wereld. Het is duidelijk dat we ons geheugen moeten verbeteren, en Cistanche kan het geheugen aanzienlijk verbeteren omdat het ook de balans van neurotransmitters kan reguleren, zoals het verhogen van de niveaus van acetylcholine en groeifactoren, die erg belangrijk zijn voor het geheugen en het leren. Bovendien kan Cistanche ook de bloedstroom verbeteren en de zuurstoftoevoer bevorderen, wat ervoor kan zorgen dat de hersenen voldoende voeding en energie krijgen, waardoor de vitaliteit en het uithoudingsvermogen van de hersenen worden verbeterd.

Klik op Know om de geheugencapaciteit te vergroten

Voor dit onderzoek werd het experimentele protocol goedgekeurd (goedkeuringsnr. KW-200113-1; goedkeuringsdatum, 18 februari 2020) door de Institutional AnimalCare and Use Committee.

Het onderzoeksprotocol voldeed aan de richtlijnen die worden voorgesteld in de "Current International Laws and Policies" van de Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, gepubliceerd door The National Academies Press (8e editie, 2011).

4.2. Experimentele groepen, inductie van tFI en HyT- en OXC-behandelingen

Om de beschermende effecten van OXC tegen ischemische schade na tFI bij gerbils aan te tonen, werden de gerbils in zes groepen verdeeld: (1) schijn+voertuiggroep (n=24);(2) tFI+voertuiggroep (n {{5 }}); (3) schijn+HyT-groep (n=24); (4) tFI+HyT-groep (n=60); (5) sham+OXC (200 mg/kg) groep (n=24); en (6) tFI+OXC-groep (n=60).

Zeven en vijf gerbils in de drie tFI-groepen werden gebruikt voor respectievelijk Western blot-analyse en histologisch onderzoek, respectievelijk 30 minuten, 12 uur, 1 dag, 2 dagen en 4 dagen na de tFI-operatie, en in de drie sham-groepen zeven en vijf. gerbils werden 30 minuten en 4 dagen na de schijnoperatie gebruikt om de aantallen te minimaliseren. In dit experiment werd tFI ontwikkeld zoals eerder beschreven [34].

Kort gezegd werden de gerbils verdoofd met 2,5% isofluraan (in 32% zuurstof en 68% lachgas). Onder narcose werden beide gemeenschappelijke halsslagaders geïsoleerd uit de halsslagader en afgesloten met aneurysmaclips (Yasargil FE 723K) (Aesculap, Tuttlingen, Duitsland ) gedurende vijf minuten.

De perfecte stop van de bloedtoevoer naar de hersenen werd bevestigd door observatie van de arteriële bloedstroom in beide retinale slagaders (takken van interne halsslagaders) met behulp van een oftalmoscoop (HEINE K180®) van Heine Optotechnik (Herrsching, Duitsland).

De lichaamstemperatuur vóór en tijdens de operatie werd in alle groepen gecontroleerd op normothermie (37 ± 0.2 ◦C) met behulp van een thermometrische deken. Na vijf minuten occlusie werden de clips verwijderd.

In deze studie werd een schijnoperatie uitgevoerd door hen aan dezelfde tFI-operatie te onderwerpen zonder de occlusie van de gemeenschappelijke halsslagaders. HyT in de twee sham+HyT- en tFI+HyT-groepen werd gecontroleerd (vergelijkbaar met de verandering in lichaamstemperatuur in de tFI+-groep). OXC-groep) door het hele lichaam gedurende zes uur te koelen met een ijspakking.

De lichaamstemperatuur van de twee schijn+OXC- en tFI+OXC-groepen werd zes uur lang geregistreerd na onmiddellijke intraperitoneale injectie van 200 mg / kg OXC (Sigma – Aldrich, St. Louis, MO, VS) na de tFI-operatie.

De dosering van OXC werd gekozen op basis van een eerder onderzoek dat rapporteerde dat 200 mg/kg OXC effectief beschermde tegen celdood in de hersenen na de [36]. Om veranderingen in de lichaamstemperatuur vast te leggen, werd de lichaamstemperatuur elk uur na tFI in het rectum gemeten, gedurende een periode van 6 uur, bij kamertemperatuur (ongeveer 22 ◦C).

De gerbils kregen een hersteltijd van vier dagen na tFI omdat piramidale cellen in het CA1-gebied van de hippocampus vier dagen na tFI beginnen te sterven [30,34,62].

4.3. SMA-test

De SMA-test werd uitgevoerd om veranderingen in hyperactiviteit in alle groepen te onderzoeken. Kortom, zoals eerder beschreven [63], werd de SMA-test uitgevoerd op dag 1 na tFI, aangezien de locomotorische activiteit het hoogste punt bereikt op dag 1 na ischemische schade na tFI.

De gerbils van alle groepen kregen gedurende twee uur een aanpassing aan de omgeving en werden geplaatst in een open veldkooi (breedte, 44 cm; lengte, 44 cm; hoogte, 30) verkregen van Ugo Basile SRL (Gemonio, Italië), waarin twee parallelle horizontale gedurende een uur werden infraroodstralen van 4 × 8 vanaf de vloer geïnstalleerd. SMA werd opgenomen met behulp van een Photobeam Activity System-Home Cage van San Diego Instruments (San Diego, CA, VS).

Beweging (traject en totale afgelegde afstand) werd gedetecteerd door de onderbreking van de reeks infraroodstralen geproduceerd door fotocellen.

SMA werd gedurende één uur continu gevolgd en de gegevens werden verzameld met behulp van een AMB-analysator van IPC Electronics (Cumbria, VK).

De gegevensverzameling werd 15 minuten na gewenning in de open veldkooi gestart. Tenslotte werden de verkregen resultaten geëvalueerd als de afstand (meters) van beweging tijdens de testperiode (één uur).

4.4. Tests van cognitieve functies

4.4.1. RAMT

Om het ruimtelijk geheugen van alle groepen te vergelijken, werd de RAMT uitgevoerd volgens toonaangevende onderzoeken [38,44]. Voor deze test werd een radiaal 8-armdoolhof van Stoelting Co (Wood Dale, IL, VS) gebruikt.

Het doolhofinstrument bestond uit een centraal platform en acht armen (elke armbreedte 5 cm; hoogte 9 cm; lengte 35 cm). De gerbils werden drie dagen lang één keer per dag getraind.

Er werd namelijk pelletvoer verkregen van DBL Co (Chungbuk, Korea) aan het uiteinde van elke arm gedaan en elke gerbil werd op het centrale platform geplaatst. Daarna zocht de gerbil naar het voer.

Na de schijn- of tFI-operatie werd de echte test vier dagen lang één keer per dag uitgevoerd, beginnend één dag na de operatie.

Voor de analyse werd het aantal fouten geëvalueerd, waarbij één fout optrad elke keer dat de gerbil een arm binnenging die al eerder was bezocht. De test was afgelopen toen de gerbil het voer op had.

4.4.2. PAT

Om het kortetermijngeheugen tussen de groepen te vergelijken, werd de PAT uitgevoerd volgens eerder gerapporteerde methoden [64,65] met enkele aanpassingen. Kortom, de gerbils zijn getest met het Gemini Vermijding Systeem (GEM 392) van San Diego Instruments (SanDiego, CA, VS), dat bestaat uit twee (donkere en lichte) compartimenten die met elkaar communiceren via een verticaal schuifhek.

De experimentele sessies werden in twee fasen uitgevoerd: een trainingssessie en een echte testsessie, één dag vóór en vier dagen na de tFI- of schijnoperatie.

De echte test werd 20 minuten na de trainingssessie uitgevoerd door de latentietijd (seconden) te meten tijdens het verblijf in de donkere kamer. Tijdens de trainingssessie mocht de gerbil namelijk gedurende één minuut de twee compartimenten vrij verkennen terwijl het hek open was. .

Toen de gerbil daarna het donkere compartiment binnenging, werd de deur gesloten en kreeg de gerbil gedurende vijf seconden een elektrische voetschok (0.5 mA) via een stalen rooster op de vloer.

Tijdens de echte testsessie, op dag 4 na tFI, werd de gerbil in het lichte compartiment geplaatst en werd de latentietijd in het lichtcompartiment voordat hij het donkere compartiment binnenging, geregistreerd.

4.5. Western Blot-analyse voor TRPV1 en TRPV4

Om de expressieniveaus van TRPV1 en TRPV4 in de hippocampus CA1 van de gerbil te onderzoeken, werd de Western blot-techniek uitgevoerd volgens eerder beschreven methoden [66,67].

In het kort: volgens het aangegeven schema (30 min, 12 uur, 1 dag, 2 dagen en 4 dagen na een schijn- of tFI-operatie) kregen gerbils (n=5 voor elke groep) anesthesie voor euthanasie door middel van intraperitoneale injectie met 200 mg/kg pentobarbital-natrium (JW Pharm.Co., Ltd., Seoul, Korea).

Daarna werden hun hersenen geoogst en gehomogeniseerd met 50 mM fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS, pH 7,4) die 0,1 mM ethyleenglycol-bis (aminoethylether)-N, N, N{{ 11}}, N0-tetra-azijnzuur (EGTA) (pH 8.0), 10 mM ethyleendiaminetetra-azijnzuur (EDTA) (pH 8,0), 0,2% Nonidet P{{17 }}, 15 mM natriumpyrofosfaat, 100 mM -glycerofosfaat, 2 mM natriumorthovanadaat, 50 mM NaF, 150 mM NaCl, 1 mMfenylmethylsulfonylfluoride (PMSF) en 1 mM dithiothreitol (DTT).

Vervolgens werden de monsters gecentrifugeerd en werden de supernatanten genomen om de eiwitniveaus te bepalen met behulp van een Micro BCA-testkit van Thermo Fisher Scientific Inc (Waltham, MA, VS) met bovineserumalbumine van Pierce Chemical Co (Rockford, IL, VS).

Porties die 20 µg totaaleiwit bevatten, werden gekookt in laadbuffer, 150 mM Tris (pH 6,8) met 6% natriumdodecylsulfaat (SDS), 3 mM DTT, 0,3% broomfenolblauw en 30% glycerol.

De monsters werden gescheiden via 10% SDS-polyacrylamidegelelektroforese (PAGE). Vervolgens werden de gels gedurende 90 minuten bij 350 mA en 4 °C overgebracht naar nitrocellulosemembranen van Pall Co (East Hills, NY, VS).

Om niet-specifieke kleuring te blokkeren werden de membranen gedurende 60 minuten bij kamertemperatuur geïncubeerd in 5% ontvette melk. Daarna werd er een immuunreactie uitgevoerd met elk primair antilichaam: konijnen-anti-TRPV1 (verdund 1:1000) (Abcam, Cambridge, VK), konijnen-anti-TRPV4 (verdund 1:1000) (Abcam) en konijnen-anti- - actine (verdund 1:2000) (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, VS) bij 4 ◦C gedurende 7 uur.

Vervolgens werden ze gedurende 1 uur bij kamertemperatuur gereageerd met mierikswortelperoxidase (HRP)-geconjugeerd ezel-anti-konijn-IgG (verdund 1: 4500) (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, VS).

Ten slotte werd een op aluminol gebaseerde chemiluminescentiekit van Thermo Fisher Scientific Inc (Waltham, MA, VS) gebruikt om de visualisatie te verbeteren.

Zoals eerder beschreven [68] werden de immunoblots van TRPV1 en TRPV4 geanalyseerd met behulp van Scion Image-software van Scion Crop (Frederick, MD, VS). De banden werden gescand en densitometrische analyse werd uitgevoerd. De eiwitniveaus werden genormaliseerd ten opzichte van het overeenkomstige niveau van -actine.

4.6. Voorbereiding van histologische secties

Voor immunohistochemische en histopathologische onderzoeken werden gerbils (n=7 voor elke groep) opgeofferd volgens het aangegeven schema (30 min, 12 uur, 1 dag, 2 dagen en 4 dagen na tFI of schijnoperatie).

Zoals eerder beschreven [34] werden de gerbils diep verdoofd met natriumpentobarbital (200 mg/kg) (JW Pharmaceutical, Seoul, Korea). Onder verdoving werden de gerbils transcardiaal gespoeld met 0,1 M fosfaatbufferzoutoplossing (pH 7,4) en gefixeerd met 4% paraformaldehyde (in 0,1 M fosfaatbuffer, pH 7,4).

Vervolgens werden hun hersenen verkregen en zes uur lang met hetzelfde fixeermiddel gefixeerd. Daarna werden de hersenweefsels gesneden (25 µm dikte van coronale vlakken) in een acryostaat (Leica, Wetzlar, Duitsland).

4.7. Histochemische kleuring met behulp van CV

Om de morfologische en neuronale schade in de hippocampus van elke groep te onderzoeken, werd cresylviolet (CV) kleuring uitgevoerd zoals we eerder beschreven [69]. Kortom, cresylvioletacetaat (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, VS) werd opgelost bij 1,0% (w/v) in gedestilleerd water en ijsazijn (0.28 %) werd aan deze oplossing toegevoegd. De secties werden gekleurd en gemonteerd met Canadese balsem (Kanto, Tokio, Japan).

4.8. FJ B-kleuring

FJB-kleuring werd uitgevoerd om neuronale degeneratie (dood of verlies) te onderzoeken. Volgens de gepubliceerde procedure [34] werden de voorbereide hersencoupes gedrenkt in 1% natriumhydroxide, onmiddellijk overgebracht naar 0.06% kaliumpermanganaat en onmiddellijk gereageerd met 0,0004% Fluoro-Jade B (Histochem , Jefferson, AR, VS).

De coupes werden kort gewassen en op een objectglaasjesverwarmer (ongeveer 50 ◦C) geplaatst voor reactie met FJ B. Om het therapeutische effect van OXC tegen tFI te beoordelen, werden de aantallen FJ B+-cellen in het CA1-gebied geteld volgens een methode gepubliceerd in [ 70].

In het kort werden digitale beelden van FJ B+-cellen vastgelegd uit vijf secties per woestijnrat met behulp van een epifluorescerende microscoop (Carl Zeiss) (Oberkochen, Duitsland) bij een golflengte van 450-490 nm. De cellen werden geteld in 250 µm2, inclusief de SP, in het midden van het CA1-gebied met behulp van een beeldanalysesysteem (Optimas 6.5) (CyberMetrics, Scottsdale, AZ, VS).

4.9. Immunohistochemie

Om veranderingen in de immunoreactiviteit van NeuN, TRPV1 en TRPV4 in het CA1-gebied te onderzoeken, werd algemene immunohistochemie uitgevoerd. Kortom, volgens een gepubliceerde methode [34] werden de bereide hersencoupes geïncubeerd met primaire antilichamen: muis anti-NeuN (verdund, 1:1100) (Chemicon, Temecula, CA, VS), muis anti-TRPV1 (verdund, 1:500) (Abcam, Cambridge, VK) en konijnen-anti-TRPV4 (verdund, 1:500) (Abcam, Cambridge, VK).

Daarna werden deze geïncubeerde secties geïncubeerd in de overeenkomstige secundaire antilichamen (verdund, 1:250) (Vector Laboratories Inc., Burlingame, CA, VS) en ontwikkeld met behulp van Vectastain ABC (verdund, 1:250) (Vector Laboratories Inc., Burlingame, CA , VS). Tenslotte hadden deze immuungereageerde secties kleur na visualisatie met 3,3'-diaminobenzidine.

Het aantal NeuN+cellen werd als volgt geteld. Digitale beelden van NeuN+cellen werden gemaakt van vijf secties per gerbil met behulp van een lichtmicroscoop (AxioM1) (Carl Zeiss, Duitsland).

De cellen werden op dezelfde manier geteld als de FJ B+-celtelling. Om de dichtheid van TRPV1+- en TRPV4+-structuren te evalueren, werden de overeenkomstige gebieden in de CA1-regio gebruikt in vijf secties per dier. Beelden van de TRPV1+- en TRPV4+-structuren werden vastgelegd met behulp van een AxioM1-lichtmicroscoop (Carl Zeiss) (Duitsland).

De dichtheden van TRPV{{0}} en TRPV4+structuren werden geëvalueerd als de relatieve optische dichtheid (ROD). Hiertoe werden de beelden getransformeerd naar het gemiddelde grijsniveau. De ROD werd gepresenteerd als een percentage met behulp van Adobe Photoshop (versie 8.0) en NIH Image J-software (NationalInstitutes of Health, Bethesda, MD, VS).

4.10. Statistische analyse

We presenteerden de gegevens als het gemiddelde ± standaardfout van het gemiddelde (SEM). Alle statistische analyses werden uitgevoerd met behulp van GraphPad Prism (versie 5.0) (GraphPadSoftware, La Jolla, CA, VS). Verschillen in de gemiddelden tussen de experimentele groepen werden statistisch geanalyseerd door middel van tweeweg variantieanalyse (ANOVA) met een post-hoc Bonferroni's meervoudige vergelijkingstest om tFI-gerelateerde verschillen tussen alle groepen op te helderen. Statistische significantie werd overwogen bij p < 0. 05.

Auteursbijdragen: Conceptualisering: M.-HW en T.-KL; Methodologie, J.-CL en DWK;Software, H.-IK en MCS; Validatie, JHA, IJK en JHP; Onderzoek, J.-CL, H.-IK en M.CS; Datacuratie, JHC, IJK en JHP; Schrijven - Originele conceptvoorbereiding, H.-IK en J.-CL; Schrijven-recensie en redactie, M.-HW; Toezicht, S.-SL; Projectadministratie, M.-HW; Financiering Acquisitie, S.-SL en T.-KL Alle auteurs hebben de gepubliceerde versie van het manuscript gelezen en gaan ermee akkoord.

Financiering: Dit werk werd ondersteund door Brain Korea 21 (BK21) Fostering Outstanding Universities for Research (FOUR, 4220200913807), gefinancierd door de National Research Foundation (NRF) van Korea, en door het Basic Science Research Program via de National Research Foundation of Korea (NRF) gefinancierd door het ministerie van Onderwijs (NRF-2020R1I1A1A01070897).

Verklaring van de Institutional Review Board: De gerbils zijn gefokt in het Experimental Animal Centre van de Kangwon National University (Chuncheon, Korea). Voor dit onderzoek werd het experimentele protocol goedgekeurd (goedkeuringsnummer, KW-200113-1; goedkeuringsdatum, 18 februari 2020) door het Institutional Animal Care and Use Committee.

Het onderzoeksprotocol voldeed aan de richtlijnen die worden voorgesteld in de "Current International Laws and Policies" van de Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, gepubliceerd door The National Academies Press (8e editie, 2011).

Verklaring van geïnformeerde toestemming: Niet van toepassing.

Verklaring over beschikbaarheid van gegevens: De in dit onderzoek gepresenteerde gegevens zijn op verzoek verkrijgbaar bij de corresponderende auteur.

Dankbetuiging: De auteurs waarderen Hyun Sook Kim en Seung Uk Lee voor hun technische hulp bij dit onderzoek.

Belangenverstrengeling: De auteurs hebben verklaard dat er geen sprake is van een financieel belangenverstrengeling.

Afkortingen

CA1: subveld Cornu Ammonis 1; CZS, centraal zenuwstelsel; CV, cresylviolet; DG, getande gyrus; FJ B, Fluor-Jade B; HyT, onderkoeling; NeuN, neuronale kernen; OXC, oxcarbazepine; PAT, passieve vermijdingstest; ROD, relatieve optische dichtheid; SMA, spontane motorische activiteit; SO, stratum oriens;SP, stratum piramidaal; SR, stratum radiatum; tFI, voorbijgaande ischemie van de voorhersenen; TRPV1, transiëntreceptorpotentieel vanilloïde type 1.

Referenties

1. Busto, R.; Dietrich, WD; Globus, MIJN; Valdes, ik; Scheinberg, P.; Ginsberg, MD Kleine verschillen in intra-ischemische hersentemperatuur bepalen op kritische wijze de omvang van ischemische neuronale schade. J. Cereb. Bloedstroommetab. 1987, 7, 729-738. [Kruisref][PubMed]

2. Maher, J.; Hachinski, V. Hypothermie als mogelijke behandeling voor cerebrale ischemie. Cerebrovasc. Hersenmetab. 1993, 5.277–300.

3. Verpleegster, S.; Corbett, D. Neuroprotectie na enkele dagen van milde, door medicijnen geïnduceerde onderkoeling. J. Cereb. Bloedstroommetab. 1996, 16.474–480. [Kruisref]

4. Visser, M.; Feuerstein, G.; Howells, DW; Hurn, politie; Kent, TA; Savitz, SI; Lo, EH; Group, S. Update van de preklinische aanbevelingen van de academische industrie voor beroertetherapie. Beroerte 2009, 40, 2244–2250. [Kruisref]

5. Liu, L.; Yenari, MA Therapeutische hypothermie: neuroprotectieve mechanismen. Voorkant. Biosci. 2007, 12, 816-825. [Kruisref]

6. Lyden, politie; Krieger, D.; Yenari, M.; Dietrich, WD Therapeutische hypothermie voor acute beroerte. Int. J. Beroerte 2006, 1, 9–19. [Kruisref][PubMed]

7. Klassman, L. Therapeutische hypothermie bij acute beroerte. J. Neurosci. Verpleegsters. 2011, 43, 94–103. [Kruisref]

8. Groysman, LI; Emmanuel, BA; Kim-Tenser, MA; Gezongen, GY; Mack, WJ Therapeutische hypothermie bij acute ischemische beroerte. Neurosurg. Focus 2011, 30, E17. [Kruisref] [PubMed]

9. Schwab, S.; Georgiadis, D.; Berrouschot, J.; Schellinger, PD; Graffagnino, C.; Mayer, SA Haalbaarheid en veiligheid van matige hypothermie na een groot hemisferisch infarct. Beroerte 2001, 32, 2033-2035. [Kruisref]

10. Katz, LM; Jong, AS; Frank, JE; Wang, Y.; Park, K. Gereguleerde hypothermie vermindert oxidatieve stress in de hersenen na hypoxische ischemie. Hersenonderzoek. 2004, 1017, 85–91. [Kruisref]

11. Liu, K.; Khan, H.; Geng, X.; Zhang, J.; Ding, Y. Farmacologische hypothermie: een potentieel voor toekomstige beroertetherapie? Neurol. Onderzoek 2016, 38, 478–490. [Kruisref]

12. Ma, J.; Wang, Y.; Wang, Z.; Li, H.; Wang, Z.; Chen, G. Neuroprotectieve effecten van door geneesmiddelen geïnduceerde therapeutische hypothermie bij ziekten van het centrale zenuwstelsel. Huidig Drugsdoelstellingen 2017, 18, 1392–1398. [Kruisref]

13. Calabresi, P.; Cupini, LM; Centonze, D.; Pisani, F.; Bernardi, G. Anti-epileptica als mogelijke neuroprotectieve strategie bij hersenischemie. Ann. Neurol. 2003, 53, 693-702. [Kruisref]

14. Tanaka, T.; Litofsky, NS Anti-epileptica bij traumatisch hersenletsel bij kinderen. Deskundige ds. Neurother. 2016, 16, 1229–1234. [Kruisref]

For more information:1950477648nn@gmail.com