Een bivalent levend verzwakt influenzavirusvaccin beschermt tegen verspreide H1N2- en H3N2-klinische isolaten bij varkens Deel 2

2.5. Enzym-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)

Om coating-antigenen te maken, werden SD435 en SD467 vermeerderd in MDCK-cellen en gezuiverd met behulp van sucrosegradiënt-ultracentrifugatie. Inactivering van de virussen vond plaats door 97 procent -propiolacton aan het virus toe te voegen in een concentratie van 1:1000 (v/v) (Thermo Fisher Scientific, AAB2319703). Dit mengsel werd een nacht geschud bij 4 ◦C, twee uur geïncubeerd bij 37 ◦C om de hydrolyse van -propiolacton te vergemakkelijken, en vervolgens bewaard bij -80 ◦C tot gebruik.

Antigenen en immuniteit zijn onlosmakelijk met elkaar verbonden. Antigeen verwijst naar elke stof die door het immuunsysteem kan worden herkend en een immuunrespons veroorzaakt, inclusief bacteriën, virussen, tumorcellen, enz., Terwijl immuniteit verwijst naar het vermogen van het lichaam om op deze antigenen te reageren.

De relatie tussen antigenen en immuniteit kan worden geïllustreerd met een simpele metafoor: net zoals sporten voldoende training en voedingssupplementen vereist, hangt het verbeteren van de immuniteit ook af van herhaald contact met antigenen en de bijbehorende immuuncellen en immuunmoleculen. produceren. Wanneer het immuunsysteem een ​​antigeen tegenkomt, valt het aan door specifieke antilichamen of immuuncellen te produceren, samen met geheugencellen om ons te beschermen tegen herinfectie.

De wetenschap heeft bevestigd dat het ontwikkelen van goede leef- en eetgewoonten de immuniteit kan helpen verbeteren. Schoon blijven, niet roken, matige lichaamsbeweging en slaapgewoonten kunnen bijvoorbeeld helpen de invasie van antigenen zoals bacteriën en virussen te verminderen. Tegelijkertijd kan het eten van sommige voedingsmiddelen die rijk zijn aan antioxidanten, vitamines en mineralen, zoals groenten en fruit, volle granen en vis, ook helpen de immuniteit te verbeteren.

Kortom, de relatie tussen antigeen en immuniteit is zeer nauw. Alleen door herhaaldelijk contact met antigenen en goede leefgewoonten kan de immuniteit voortdurend worden verbeterd en kunnen verschillende ziekten worden voorkomen en behandeld. Daarom moeten we een positieve houding behouden en goede leefgewoonten ontwikkelen om onszelf tegen ziekten te beschermen. Het is duidelijk dat we onze immuniteit moeten verbeteren. Cistanche kan ons helpen onze immuniteit te verbeteren, omdat Cistanche rijk is aan een verscheidenheid aan antioxidanten, zoals vitamine C, carotenoïden, enz. Deze ingrediënten kunnen vrije radicalen wegvangen en oxidatieve stress verminderen, waardoor de weerstand van het immuunsysteem wordt verbeterd.

Klik op cistanche deserticola-supplement

Om de swIAV-specifieke IgG-spiegels geïnduceerd door vaccinatie en provocatie te meten, werd varkensserum genomen na de eerste (dag 20) en tweede (dag 30) vaccinaties en vóór necropsie (dag 36).

Gezuiverde propiolacton-geïnactiveerde virussen SD435 (1 µg/ml) en SD467 (2 µg/ml), verdund in carbonaat/bicarbonaat coatingbuffer, (pH 9,6) werden aangebracht op Immulon-2 96-putjesplaten bij 1{{ 12}}0 µL/well (Thermo Labsystems, Ottawa, ON, Canada, 3655) en overnacht geïncubeerd bij 4 ◦C. Na incubatie gedurende de nacht werden de gecoate platen vier keer gewassen met TBST (0.1 M Tris, 0,17 M NaCl en 0,05 procent Tween 20), waaraan viervoudige seriële verdunningen van het serum of BALF werden toegevoegd aan de plaat in duplo, gevolgd door een incubatie van twee uur bij kamertemperatuur. Serum werd toegevoegd in een beginverdunning van 1:10 en BALF werd onverdund toegevoegd. Monsters van eerder gedefinieerde positieve controlesera en de juiste negatieve controles, serum en BALF van niet-gevaccineerde varkens in een eerder onderzoek werden op elke plaat uitgevoerd [14].

De platen werden vier keer gewassen met TBST, waarna geit-anti-varkens-IgG (H plus L) met fosfatase gemerkt affiniteitsgezuiverd antilichaam (1:5000) (Sigma Aldrich, SAB3700435) of muizen-anti-varkens-IgA (Serotec, MCA658) ( 1:300) verdund in TBST toegevoegd en één uur bij kamertemperatuur geïncubeerd. De IgA ELISA's werden ontwikkeld door de toevoeging van gebiotinyleerde anti-muis IgG (H plus L) antilichamen van geiten (CALTAG, Burlingame, CA, VS, M30015) en streptavidine-alkalische fosfatase-oplossing (Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA), beide gedurende één uur. op kamertemperatuur.

Na incubatie werden zowel IgG- als IgA-platen vier keer gewassen met TBST, waaraan p-nitrofenylfosfaatsubstraat (PNPP) [10 mg/ml p-nitrofenylfosfaatdi(tris) kristallijn zout (Sigma-Aldrich) toevoegde. , 1 procent diethanolamine (Sigma-Aldrich), 0,5 mg/ml MgCl2 en pH 9,8] (1 mg/ml) werd toegevoegd en twee uur bij kamertemperatuur geïncubeerd.

De reactie werd gestopt door de toevoeging van 0.3 M ethyleendiaminetetraazijnzuur (EDTA) en de platen werden afgelezen in een spectrofotometer bij 405 nm met een referentie van 490 nm. De titer van het monster werd gedefinieerd als de hoogste verdunning waarbij de OD van dat monster hoger was dan de gedefinieerde grenswaarde (de gemiddelde OD van een bekend negatief monster plus tweemaal de standaarddeviatie).

2.6. Virus Neutralisatie (VN) Assay

MDCK-cellen (3,5 x 104) werden uitgeplaat in 96-putjesplaten. Serum en BALF werden door warmte geïnactiveerd bij 56 ◦C gedurende 30 minuten. Tweevoudige verdunningen van het serum en BALF werden in viervoud aan de plaat toegevoegd en 60 µl verdund serum of BALF werd geïncubeerd met een gelijk volume SD435 of SD456 met 100 TCID50 bij 37 °C gedurende 1 uur. Vervolgens werd 100 µl van het mengsel aan de MDCK-cellen toegevoegd en het cytopathogene effect (CPE) werd 48 uur en 72 uur na infectie (pi) gedocumenteerd. De neutralisatie-antilichaamtiter was de hoogste verdunning van elk serummonster die de cellen volledig beschermde tegen CPE in ten minste 2 van de 4 putjes.

2.7. Virale bepaling

Na verzameling werden de longmonsters onmiddellijk op ijs geplaatst en tot verwerking ingevroren bij -80 ◦C. Voor verwerking werd elk longweefsel gewogen en werd een concentratie van 10 procent (w/v) MEM aangevuld met 1 x antibioticum-antimycoticum (Thermo Fisher Scientific, 15240-062) toegevoegd. Longweefsel werd gehomogeniseerd in de TissueLyser II (Qiagen, Hilden, Duitsland) bij 30 Hz gedurende 5 minuten, gevolgd door centrifugatie bij 5000 x g gedurende 10 minuten bij 4 °C. Het gehomogeniseerde supernatant werd verzameld en bewaard bij -80 ◦C tot verdere analyse. De neusuitstrijkjes werden gedurende 15 seconden gevortext en gedurende 25 minuten bij 4 °C bij 1600 x g gecentrifugeerd. De supernatanten werden verzameld en bewaard bij -80 ◦C tot verdere analyse. De virale titers werden bepaald door middel van TCID50-assay voor de long en kwantitatieve RT-PCR voor de neusuitstrijkjes.

2.8. RNA-extractie en kwantitatieve RT-PCR (qRT-PCR)

Om de virale RNA-niveaus van SD467 en SD435 in de neusuitstrijkjes na provocatie te bepalen, werd qRT-PCR uitgevoerd. Er werd een standaardkromme gemaakt met behulp van RNA geëxtraheerd uit SD435 en SD467 met een bekende titer. In het kort werd de RNeasy Plus Mini Kit (Qiagen, Toronto, ON, Canada, 74136) gebruikt om vRNA te extraheren uit 200 μl neusspoeling. RNA werd omgezet in cDNA met behulp van de universele influenzaprimer Uni12 en SuperScript III Transcriptase (Invitrogen, Burlington, ON, Canada) [19]. qPCR werd in drievoud uitgevoerd op een StepOnePlusTM Real-Time PCR-systeem (Applied Biosystems, CA, VS) met de Power SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems), 5 µL cDNA en 1 µL van 10 µM voorwaartse en achterwaartse primers. PCR-reacties werden uitgevoerd bij een annealingstemperatuur van 58 °C gedurende 40 cycli. Alle sequenties van qPCR-primers zijn op aanvraag verkrijgbaar.

2.9. Statistische analyse

Statistische analyse werd uitgevoerd met behulp van GraphPad Prism 8-software. De niet-parametrische tests van Mann-Whitney en Kruskal-Wallis werden gebruikt. Significante verschillen worden aangegeven met * (p < 0.05), ** (p < 0.01), *** (p < 0,001) of **** (p < 0,0001). ns=niet significant.

3. Resultaat

3.1. Vaccinatie met het bivalente vaccin bood bescherming tegen nieuwe klinische isolaten

We hebben zowel de fysieke respons op challenge-virussen als de virale replicatie in de luchtwegen gemeten om de bescherming te beoordelen die het bivalente vaccin biedt tegen deze nieuwe klinische isolaten. De temperatuur werd in alle groepen gedurende vijf dagen na de virale uitdaging dagelijks geregistreerd. Varkens die schijngevaccineerd waren en geprovoceerd werden met SD435 (H3N2) (MEM/SD435) of SD467 (H1N2) (MEM/SD467) vertoonden een typische temperatuurpiek op dag 1 na de virale provocatie, met mediane temperaturen van 40,6 ◦C en 41,1 ◦ respectievelijk C. Deze piek werd niet gezien in de gevaccineerde groepen die werden geprovoceerd met SD435 (Bivalent/SD435) of SD467 (Bivalent/SD467), die mediane temperaturen hadden van respectievelijk 39,4 ◦C en 39,6 ◦C. Op dag 2-5 na de prikkeling hadden zowel de gevaccineerde als de niet-gevaccineerde groepen temperaturen rond de 39 ◦C (Figuur 2A).

Vijf dagen na prikkeling werden alle varkens onderworpen aan autopsie, waarbij de longen in hun geheel werden verwijderd en geanalyseerd om de hoeveelheid aanwezige laesies te kwantificeren. De Bivalent/SD435-groep vertoonde minimale of geen laesies, met een mediaan van 0,65 procent totale longlaesies. De MEM/SD435-groep had significant meer laesies dan zijn gevaccineerde tegenhanger, met een mediaan van 5,1 procent (p=0.0025) (Figuur 2B). In de Bivalent/SD467-groep hadden vijf van de zeven varkens weinig laesies (<2%), one had minor lesions (3.75%), and one outlier had high lesions (31%), with a group median of 1.9%. Compared with the vaccinated group, the MEM/SD467 group had a higher degree of lesions with a median of 4.55% (p = 0.0417) (Figure 1C).

In de longen hadden de Bivalent/SD435- en Bivalent/SD467-groepen beide lage titers van het virus, met gemiddelden van respectievelijk 8,6 PFU/ml/gr en 3,0 PFU/ml/gr. Omgekeerd hadden MEM/SD435- en MEM/SD467-groepen grotere hoeveelheden virus, met gemiddelden van respectievelijk 656,1 en 9118,2 PFU/ml/gr (p=0.0025 voor beide) (Afbeelding 3A, B). Soortgelijke trends werden waargenomen bij de neusuitstrijkjes. In de Bivalent/SD435-groep waren de nasale titers laag op dag 1, 3 en 5 na provocatie (dpc), terwijl in de MEM/SD435-groep de titers enigszins verhoogd waren en toenamen naarmate de dagen vorderden (ns) (Figuur 3C). In de Bivalent/SD467-groep waren de nasale titers ook laag, gemiddeld lager dan 5 PFU/ml op dag 1 en 5, en 10,0 PFU/ml op dag 3 na provocatie. Titers waren elke dag hoger in de MEM/SD467-groep, gemiddeld 4123,6 PFU/ml/gr op 1dpc (p=0.0278), 77233,1 PFU/ml/gr (p=0.0009) op 3dpc en 65,2 PFU/mL/gr op 5dpc (ns) (Figuur 3D).

Al met al suggereren deze resultaten dat het bivalente vaccin een significante mate van bescherming bood tegen provocatiestammen, waardoor longlaesies en virale replicatie die verband houden met infectie met deze twee swIAV-isolaten in de longen en neusgangen werden verminderd.

3.2. Het bivalente vaccin induceert immuunresponsen tegen uitdagingsstammen

We maten de antilichaamrespons in het serum en longspecifiek voor beide challenge-stammen na prime-boost-vaccinatie met het bivalente vaccin. Serum werd verzameld van varkens na het eerste vaccin (dag 20) en na het tweede vaccin (dag 30). Challenge-virussen SD435 (H3N2) en SD467 (H1N2) werden gebruikt als capture-antigenen om de virusspecifieke IgG-antilichaamrespons in het serum te meten. Met SD435 was er geen significant verschil tussen antilichaamtiters in de MEM- en de bivalent gevaccineerde groepen na de eerste vaccinatie (dag 20). Tegen SD467 waren de antilichaamtiters echter significant hoger in de gevaccineerde groep op dag 20 (p=0.0321). Na het tweede vaccin (dag 31) waren de antilichaamtiters significant hoger in de gevaccineerde groep tegen zowel SD435 als SD467 dan in de MEM mock-vaccingroepen (p < 0,0001) (Figuur 4A, B). Specifiek, tegen capture-antigeen SD435, waren serum IgG-titers in de MEM nep-gevaccineerde groep gemiddeld 52 op dag 20 en 30, terwijl ze 311 (dag 20) en 4852 (dag 30) waren in de bivalente vaccingroep (Figuur 3A). Tegen SD467 waren serum-IgG-titers in de nep-gevaccineerde MEM-groep 39 (dag 20) en 38 (dag 30), terwijl ze in de bivalente vaccingroep 219 (dag 20) en 3509 (dag 30) waren (Figuur 3B).

Soortgelijke trends werden gezien wanneer neutraliserende antilichaamtiters werden gemeten in het serum tegen de twee provocatiestammen. Opnieuw was er geen significant verschil tussen de neutraliserende antilichaamtiters in de MEM- en bivalent gevaccineerde groepen tegen SD435 na één dosis vaccin (dag 20) ​​(Figuur 5A, B). Tegen SD467 waren de antilichaamniveaus significant hoger op dag 20, na één vaccin (p=0.0069). Tegen beide virussen was er een toename in antilichaamtiters in de bivalente vaccingroepen na de tweede dosis op dag 30) (p < 0,0001). Titers in de MEM nep-gevaccineerde groep werden uitgedaagd met SD435 gemiddeld 1 (dag 20) en 3 (dag 30), terwijl titers in de bivalente groep gemiddeld 10 (da20) en 77 (dag 30) waren (Figuur 5A). Titers in de MEM nep-gevaccineerde groep uitgedaagd met SD467 waren gemiddeld 0 (dag 20) en 2 (dag 30), terwijl titers in de bivalente vaccingroep gemiddeld 10 (dag 20) en 54 (dag 30) waren (Figuur 5B).

Bij autopsie (dag 36) werd BALF verzameld van elk van de varkens zodat antilichaamniveaus in de longen konden worden gemeten. Challenge-virussen SD435 en SD467 werden gebruikt als capture-antigenen om de virusspecifieke IgA- en IgG-respons te meten. Tegen SD435 waren de IgA-niveaus in de MEM-schijnvaccingroepen gemiddeld 17, terwijl de titers in de bivalente vaccingroep significant hoger waren, met een gemiddelde van 95 (p=0.0014) (Figuur 6A). Voor SD467 waren de IgA-niveaus gemiddeld 18 in de nep-vaccingroep en waren ze significant hoger met 158 ​​in de bivalente vaccingroep (p=0.0185) (Figuur 6B). In termen van IgG waren de titers tegen SD435 in de MEM-schijnvaccingroep gemiddeld 3, terwijl ze in de bivalente groep significant hoger waren, gemiddeld 138 (p < 0,0001) (Figuur 6C). IgG-antilichamen tegen SD467 waren gemiddeld 16 in de MEM-schijnvaccingroepen, terwijl ze in de bivalente vaccingroep significant hoger waren, met een gemiddelde van 259 (p < 0,0001) (Figuur 6D).

Met betrekking tot neutraliserende antilichamen in de BALF waren de trends vergelijkbaar met die in de IgA- en IgG-ELISA's. Tegen SD435 waren neutraliserende antilichaamtiters niet detecteerbaar in de MEM-schijnvaccingroepen, en ze waren gemiddeld significant hoger met 13,2 in de bivalente vaccingroep (p < 0.0001) (Figuur 7A). Evenzo waren de antilichaamtiters specifiek voor SD467 gemiddeld 0,7 in de MEM-schijnvaccingroepen en waren ze significant hoger in de bivalente vaccingroep met een gemiddelde titer van 10,9 (p=0.0002) (Figuur 7B). Al met al laten deze gegevens zien dat twee doses van het bivalente vaccin een krachtige systemische humorale respons induceren, evenals een lokale immuunrespons in de longen tegen deze twee niet-homologe klinische isolaten.

4. Discussie

We hebben eerder aangetoond dat de elastase-afhankelijke virussen SD{1}}R342V en SD69.K345V volledig verzwakt en niet-virulent waren bij varkens en dat twee vaccinaties met dit bivalente LAlV een robuuste immuunrespons opwekten en bescherming boden tegen infectie met homoloog SD191 ( H1N2) en SD69 (H3N2) stammen [14). In deze huidige studie wilden we testen of het bivalente vaccin in vivo stand zou houden tegen recentere klinische isolaten die antigene drift hebben ondergaan. SD467 is, net als SD191, een lid van de Ho-3-antigeengroep die in Canada is ontstaan, maar het heeft talloze mutaties op belangrijke antigene locaties verworven (12,15). Evenzo vertegenwoordigt SD435 het H3N2 IV-E-cluster dat aanwezig is in West-Canada en meerdere aminozuursubstituties bezit op belangrijke H3-antigeenplaatsen dan die aanwezig in SD69 (17).

De bivalente LAlV verminderde significant de laesies bij gevaccineerde varkens wanneer ze werden geprovoceerd met SD435 (H3N2) of SD467 (H1N2) en voorkwam een ​​temperatuurpiek die een dag na de provocatie werd waargenomen bij MEM (schijn)gevaccineerde groepen. Het leidde ook tot een vermindering van de virale replicatie van beide stammen in de longen en een vermindering van SD467 (H1N2) in de neusuitstrijkjes. Interessant genoeg waren de nasale titers van SD435 (H3N2) laag in zowel gevaccineerde als niet-gevaccineerde groepen, ondanks identieke bemonsteringsmethoden, wat suggereert dat deze stam misschien niet zoveel tropisme heeft voor de neusholtes. Met betrekking tot het uitbijtervarken in de groep, dat een hoge longlaesiescore van 31 had, toonden temperatuurmetingen geen piek bij de provocatie, en virustiters in de long waren lager dan 10 PFU/g/ml. Antilichaamspiegels in het serum en de lokale longrespons waren ook hetzelfde als bij alle andere gevaccineerde varkens. Dit brengt ons ertoe te speculeren dat de laesies niet griepgerelateerd waren. Sero-analyse onthulde dat na twee doses van het vaccin een sterke immuunrespons tegen beide stammen was opgezet en hetzelfde bleek waar te zijn met betrekking tot lokale analyse in de longen. Op antilichamen gerichte oppervlakteglycoproteïnen zijn van het grootste belang bij de bescherming tegen IAV-infectie, dus het hoge gehalte aan neutraliserende antilichamen evenals IgG en IgA die in gevaccineerde varkens worden aangetroffen, ondersteunen de in vivo waargenomen bescherming [20].

Geheel geïnactiveerde virus (WIV) vaccins zijn de meest algemeen beschikbare voor varkens, traditioneel geformuleerd met adjuvans, ze worden als een veilige benadering beschouwd, aangezien er geen risico is op herschikking met circulerende stammen. Ze bieden echter een beperkte werkzaamheid tegen niet-overeenkomende stammen en er is aangetoond dat ze leiden tot vaccin-geassocieerde verbeterde ademhalingsstoornis (VAERD) wanneer ze worden gebruikt tegen niet-overeenkomende stammen. Hun werkzaamheid neemt ook af in aanwezigheid van maternale antilichamen (MDA's) [4]. In de handel verkrijgbaar in Noord-Amerika is FluSure XP®, dat verkrijgbaar is als een vierwaardige formulering in de VS met H1N1-, H1N2- en H3N2-clusters IV-A en IV-B [21]. Een oudere formulering van Flusure XP® is verkrijgbaar in Canada met twee stammen van H1N1 en één H1N2-stam, geïsoleerd tussen 2000 en 2005 [22]. In beide Noord-Amerikaanse landen is FluSure® Pandemic beschikbaar, een monovalent vaccin bestaande uit de H1N1pdm09-stam, evenals Pneumostar SIV Complete (Elanco, Greensboro, North Carolina, US Inc.), dat H1N1, H1N2 en H3N2 bevat, en Pneumostar SIV, met stammen van het H1N1- en H3N2-subtype (GOC, USDA) [23,24]. Deze in de handel verkrijgbare vaccins zijn goed voor ongeveer 50 procent van de varkensgriepvaccins in Noord-Amerika, en de overige 50 procent van de vaccinaties zijn autogene vaccins [4].

Wat alternatieve vaccinplatforms betreft, werd in de VS een vergunning verleend voor een van recombinant alfavirus afgeleid replicondeeltjesvaccin [4]. Dit vaccinplatform maakt gebruik van een alfavirus met een veranderd genoom, waarbij virale structurele genen worden vervangen door een gen naar keuze, waardoor de replicatie van het alfavirus defect raakt. Dit RNA is zelfreplicerend, dus het vaccinplatform leidt tot hoge expressie van het gen van interesse, en voor influenza zijn zowel HA als nucleoproteïne (NP) getest als antigenen [25]. Studies hebben aangetoond dat het gebruik van dit platform beschermt tegen antigeen HA-matched en -mismatched challenges, evenals NP-mismatched stammen, hoewel het platform niet in staat was om te beschermen tegen de aanwezigheid van MDA's.

De eerste LAIV voor varkensgriep werd in 2017 goedgekeurd door het Amerikaanse ministerie van landbouw (USDA). Ingelvac Provenza™ is een bivalent H3N2- en H1N1-vaccin, met de HA en NA van twee in de VS geïsoleerde stammen, uitgedrukt op de TX98-ruggengraat, verzwakt door inkorting van het niet-structurele eiwit (NS1) [14,26]. LAIV's bootsen een natuurlijke infectie na en leiden tot verhoogde mucosale immuniteit in de bovenste luchtwegen wanneer ze intranasaal worden toegediend. Waar geïnactiveerde vaccins voornamelijk leiden tot de productie van systemische IgG-antilichamen, kunnen levende verzwakte vaccins mucosaal IgA in de luchtwegen induceren, evenals een verhoogde celgemedieerde respons als gevolg van de blootstelling van het immuunsysteem aan interne influenza-eiwitten, die meer T bevatten. celepitopen [27]. Dit leidt tot een betere bescherming tegen niet-overeenkomende stammen.

Ze hebben gedeeltelijke bescherming getoond in de aanwezigheid van MDA's. Hele IgG-antilichamen komen vaker voor in de onderste luchtwegen en polymere IgA-antilichamen zijn overheersend in de bovenste luchtwegen van varkens, meestal als dimeren [28]. Deze antilichamen worden lokaal geproduceerd en worden door de epitheelcellaag getransporteerd waar ze in het slijmvlies achterblijven, geholpen door een secretoire component die afbraak door proteasen tegengaat [28,29]. IgA-antilichamen zijn de eerste verdedigingslinie van het adaptieve immuunsysteem tegen binnenkomende pathogenen, die de hechting van virussen aan siaalzuurreceptoren blokkeren [30]. Polymere IgA-antilichamen zijn breder kruisreactief dan monomere IgG-antilichamen, mogelijk als gevolg van multivalente binding [31]. Studies hebben ook aangetoond dat deze antilichamen de afgifte van nieuw gevormd IAV uit geïnfecteerde cellen veel efficiënter kunnen voorkomen dan IgG of monomeer IgA, dat kan worden aangetroffen in varkensserum, wat suggereert dat de polymere structuur van IgA voordelig is voor het verknopen van het virale nageslacht. tot HA uitgedrukt op het geïnfecteerde celoppervlak [31-33]. De lokale IgA-antilichaamrespons is daarom een ​​integraal onderdeel van de bescherming tegen infectie met IAV en er is gesuggereerd dat het een correlaat is van bescherming bij mensen [34].

Het risico met LAIV is echter het potentieel voor herschikking met circulerende stammen. Een fylogenetische studie in de VS vond nieuwe stammen in omloop die opnieuw gesorteerd waren met de vaccinstammen in Ingelvac Provenza™ [26]. Het elastase-afhankelijke LAIV-platform verkleint dit risico, aangezien het elastase-eiwit zeer schaars is in de luchtwegen van varkens, waardoor replicatie van vaccinvirussen zeer beperkt is, evenals het tijdsbestek voor herschikking. Toekomstige studies zullen de evaluatie omvatten van het herschikkingsrisico van dit bivalente vaccin, evenals hoe dit vaccin standhoudt in de aanwezigheid van MDA's. Het zou ook interessant zijn om de celgemedieerde respons van dit vaccin te testen, aangezien dit een van de belangrijkste voordelen van LAIV is. Concluderend, de bivalente elastase-afhankelijke LAIV breidde de bescherming uit tot nieuwe klinische isolaten die in West-Canada werden gevonden, en zou een aantal hiaten in de varkensgriepvaccinmarkt opvullen.

Bijdragen van auteurs:

Conceptualisatie, YZ; methodologie, YZ en LA; formele analyse, LA; onderzoek, LA en UB-C.; middelen, SD; schrijven - voorbereiding van het oorspronkelijke concept, LA; schrijven - beoordelen en bewerken, YZ, UB-C., en SD; toezicht, YZ; financiering acquisitie, YZ Alle auteurs hebben de gepubliceerde versie van het manuscript gelezen en gaan ermee akkoord.

Financiering:

Dit onderzoek werd gefinancierd door het Agriculture Development Fund (ADF), Ministerie van Saskatchewan Agriculture. LA wordt gedeeltelijk ondersteund door de Vaccinology and Immunotherapeutics (V&I) Scholarship van de School of Public Health, de Universiteit van Saskatchewan. VIDO ontvangt operationele financiering van de regering van Saskatchewan via Innovation Saskatchewan en het ministerie van Landbouw en van de Canada Foundation for Innovation via de Major Science Initiatives voor haar CL3-faciliteit (InterVac).

Verklaring van de institutionele beoordelingsraad:

Niet toepasbaar.

Verklaring gegevensbeschikbaarheid:

De gegevens en analyses van deze studie worden allemaal in dit artikel gerapporteerd.

dankbetuigingen:

We willen de dierenartsen en diertechnici van VIDO bedanken voor het uitvoeren van al het dierwerk voor onze dierproeven. Dit werk is gepubliceerd met toestemming van de directeur van VIDO als manuscriptserie #1005.

Belangenconflicten:

De auteurs verklaren geen belangenverstrengeling.

Referenties

Webster, RG Influenza-virus: overdracht tussen soorten en relevantie voor de opkomst van de volgende menselijke pandemie. Boog. Virol. Toevoeging 1997, 13, 105-113. [PubMed]

2. Li, Y.; Robertson, I. De epidemiologie van Mexicaanse griep. Anim. Dis. 2021, 1, 21. [CrossRef] [PubMed]

3. Donovan, T. De rol van griep bij de prestaties van groeiende varkens; Universiteit van Minnesota: Minneapolis, MN, VS, 2005.

4. Gracia, JCM; Pearce, DS; Masic, A.; Balasch, M. Influenza A Virus in Swine: epidemiologie, uitdagingen en vaccinatiestrategieën. Voorkant. Dierenarts.-Sci. 2020, 7, 647. [CrossRef] [PubMed]

5. Ma, W. Varkensgriepvirus: huidige status en uitdaging. Virusres. 2020, 288, 198118. [KruisRef]

6. Suzuki, Y.; Ito, T.; Suzuki, T.; Nederland, RE; Kamers, TM; Kiso, M.; Ishida, H.; Kawaoka, Y. Siaalzuursoorten als bepalende factor voor het gastheerbereik van influenza A-virussen. J. Virol. 2000, 74, 11825-11831. [KruisRef]

7. Zon, H.; Xiao, Y.; Liu, J.; Wang, D.; Li, F.; Wang, C.; Li, C.; Zhu, J.; Lied, J.; zon, H.; et al. Prevalent Euraziatisch vogelachtig H1N1-varkensgriepvirus met pandemische virale genen uit 2009 die menselijke infectie vergemakkelijken. Proc. Natl. Acad. Wetenschap. VS 2020, 117, 17204–17210. [KruisRef]

8. Henritzi, D.; Petrisch, PP; Lewis, NS; Graaf, A.; Pessia, A.; Starick, E.; Breithaupt, A.; Strebelow, G.; Luttermann, C.; Parker, LMK; et al. Surveillance van Europese gedomesticeerde varkenspopulaties identificeert een opkomend reservoir van mogelijk zoönotische varkensinfluenza A-virussen. Cell Host Microbe 2020, 28, 614–627.e6. [KruisRef]

9. Vincent, AL; Ma, W.; Pils, KM; Janke, BH; Richt, JA Varkensgriepvirussen: een Noord-Amerikaans perspectief. Adv. Virusres. 2008, 72, 127-154.

10. Rajao, DS; Anderson, TK; Kitikoon, P.; Stratton, J.; Lewis, NS; Vincent, AL Antigene en genetische evolutie van hedendaagse H1-influenzavirussen van varkens in de Verenigde Staten. Virologie 2018, 518, 45-54. [KruisRef]

11. Mena, ik.; ik Nelson, M.; Quezada-Monroy, F.; Dutta, J.; Cortes-Fernández, R.; Lara-Puente, JH; Castro-Peralta, F.; Cunha, LF; Trovão, NS; Lozano-Dubernard, B.; et al. Oorsprong van de H1N1-grieppandemie in 2009 bij varkens in Mexico. Elife 2016, 5, e16777. [KruisRef]

12. Nelson, MI; Culhane, MR; Trovão, NS; Patnayak, DP; Halpin, RA; Lin, X.; Shilts, MH; Das, SR; Detmer, SE De opkomst en evolutie van influenza A (H1) virussen bij varkens in Canada en de Verenigde Staten. J. Gen. Virol. 2017, 98, 2663-2675. [Kruisreferentie] [PubMed]

13. Chauhan, RP; Gordon, ML Een systematische review die de prevalentie en circulatie van griepvirussen in de varkenspopulatie wereldwijd analyseert. Ziekteverwekkers 2020, 9, 355. [CrossRef]

14. Landreth, S.; Detmer, S.; Gerdts, V.; Zhou, Y. Een bivalent levend verzwakt griepvirusvaccin beschermt tegen H1N2- en H3N2-virale infectie bij varkens. Dierenarts. Microbiol. 2020, 253, 108968. [KruisRef] [PubMed]

15. McCormick, K.; Jiang, Z.; Zhu, L.; Lawson, SR; Langenhorst, R.; Ransburgh, R.; Brunick, C.; Tracy, MC; Hürtig, HR; Mabee, LM; et al. Constructie en immunogeniciteitsevaluatie van recombinante influenza A-virussen die chimere hemagglutininegenen bevatten afgeleid van genetisch afwijkende influenza A H1N1-subtypevirussen. PLoS ONE 2015, 10, e0127649. [Kruisreferentie] [PubMed]

For more information:1950477648nn@gmail.com