Een vergelijkende studie van eigenschappen en mechanismen tegen veroudering: resveratrol en caloriebeperking Ⅱ

Effect van resveratrol en CR op de mRNA-expressies van SIRT1, p53 en Foxo3a in weefsels van ouder wordende ratten

Oxidatieve stressconditiesinduceren vaak SIRT1-expressie en -activiteit. SIRT1 moduleert de functies van belangrijke overlevingsfactoren, waaronder p53 en Foxo3a [9]. Om het effect van resveratrol en CR op de mRNA-niveaus van SIRT1, p53 en Foxo3a bij door D-Gal geïnduceerde verouderende ratten te bepalen, werden kwantitatieve RT-PCR-assays uitgevoerd. Vergeleken met de overeenkomstige negatieve controlegroep waren de niveaus van SIRT1- en Foxo3a-mRNA-expressie significant verlaagd, maar het p53-niveau was significant verhoogd in de D-Gal-groep (P < 0.01; Afbeelding 9A en 9B). Bovendien veroorzaakte gelijktijdige behandeling van resveratrol of CR met D-gal bij ratten een toename van de niveaus van SIRT1- en Foxo3a-mRNA-expressies, maar verlaagde p53-niveaus in vergelijking met de modelcontrolegroep (P < 0.05). In vergelijking met CR-behandeling was het niveau van SIRT1-mRNA-expressie echter significant verhoogd in levers met een hoge dosis resveratrol plus D-gal-groep, het niveau van p53-mRNA-expressie was significant verlaagd in levers en hersenen met een hoge dosis resveratrol plus D- gal-groep (P < 0,05).

Klik hier om Cistanche anti-verouderingssupplementen te krijgen

Effect van resveratrol en CR op de expressie van het voornaamste SIRT1-geassocieerde eiwit in hersenweefsel van ouder wordende ratten

FOXO3a en p53, die worden gereguleerd door SIRT1, zijn de stroomafwaartse moleculen van SIRT1. Tegelijkertijd wordt de SIRT1-activiteit gereguleerd door zijn stroomopwaartse moleculen, bijvoorbeeld DBC1 (ook bekend als KIAA1967), AROS (ook bekend als RPS19BP1) en de tumoronderdrukker HuR (ook bekend als ELAVL1) [9, 10] . Om het effect van resveratrol en CR op de eiwitniveaus van p53, FOXO3a, HuR, AROS en DBC1 bij door D-Gal geïnduceerde verouderende ratten te bepalen, werden Western-blot-assays uitgevoerd. Vergeleken met de overeenkomstige negatieve controlegroep waren de niveaus van FOXO3a-, AROS- en HuR-eiwitexpressies significant verlaagd, maar waren de p53- en DBC1-niveaus significant verhoogd in de D-gal-groep (P < 0.01 ; Afbeelding 10). Bovendien veroorzaakte gelijktijdige behandeling van resveratrol of CR met D-gal bij ratten een toename in eiwitexpressies van FOXO3a, AROS en HuR, maar verlaagde p53- en DBC1-niveaus in vergelijking met de modelcontrolegroep (P <0,05). In vergelijking met CR-behandeling was het niveau van HuR-eiwitexpressie echter significant verhoogd, maar het DBC1-niveau was significant verlaagd in de hersenen van een hoge dosis resveratrol plus D-gal-groep (P <0,05). Er waren geen verschillen tussen de resveratrol plus D-gal-groep en de CR plus D-gal-groep in niveaus van p53-, FOXO3a- en AROS-eiwitexpressie (P > 0,05).

FOXO3a- en p53-expressies in hersen- en leverweefsels

De expressiestatus van FOXO3a en p53 werd bepaald in hersen- en leverweefsels door immunohistochemie. Immunohistochemische analyse van FOXO3a en p53 onthulde dat FOXO3a-expressie in hersen- en leverweefsel significant was afgenomen en dat p53-expressie significant was verhoogd in de D-Gal-groep, vergeleken met de negatieve controlegroep (P < 0.{{13} }5, Afbeelding 11). Bovendien veroorzaakte gelijktijdige behandeling van resveratrol of CR met D-gal bij ratten een toename van de FOXO3a-expressie, maar verminderde de p53-expressie in vergelijking met de modelcontrolegroep (P <0.05). Er waren echter geen verschillen tussen de resveratrol plus D-gal-groep en CR plus D-gal-groep in p53- en FOXO3a-expressies (P > 0,05).

DISCUSSIE

Het fundamentele chemische proces dat aan veroudering ten grondslag ligt, werd voor het eerst ontwikkeld door devrije radicalen theorie van veroudering[11], enoxidatieve stresswordt verondersteld een primaire factor te zijn in het normale verouderingsproces.Initiator van vrije radicalen AAPHgewend wasoxidatieve stress veroorzakenen stel een oxidatief model vastdoor stress veroorzaakte cellulaire senescentiein menselijke IMR-90-cellen [12, 13]. De voordelen van deze methode zijn dat de AAPH thermisch ontleedt totradicalen genererenzonder biotransformaties of enzymen, en de snelheid vanradicale generatiekan eenvoudig worden gecontroleerd door de concentratie van de initiator aan te passen [12]. AAPH werd gevondenremmen de verspreiding van de mensIMR- 90 cellen op een concentratie- en tijdsafhankelijke manier. De resultaten toonden aan dat 2 d incubatie met AAPH (1 mM) het percentage SA-Gal positieve verhouding, de populatie van apoptotische cellen significant verhoogde, de mRNA-expressie van SIRT1 verminderde en een vergrote en afgeplatte morfologie induceerde. Deze gaven aan dat oxidatieve stress als gevolg van AAPH IMR-90-cellen tot senescentie leidde. Op basis van dit cellulaire senescentiemodel remde behandeling met 10 μM resveratrol efficiënter AAPH-geïnduceerde senescentie en apoptose dan CR-behandeling.

D-gal diermodel is een internationaal erkend verouderend diermodel en wordt veel gebruikt op het gebied vanmedicijnen tegen veroudering. D-gal is een fysiologische voedingsstof die normaal wordt gemetaboliseerd door D-galactokinase en galactose-1-fosfaat bij dieren. Een overaanbod van D-gal, dat niet wordt gemetaboliseerd door bovengenoemde enzymen maar zich ophoopt in de cellen, leidt echter tot oxidatieve stress en cellulaire schade [14]. Langdurige toediening van D-gal induceert dus veranderingen die lijken op natuurlijke veroudering bij dieren, zoals een verkorte levensduur, cognitieve disfunctie, neurodegeneratie, oxidatieve stress, verminderde immuunresponsen en vorming van geavanceerde glycatie-eindproducten (AGE) [15]. De huidige studie wees op de succesvolle totstandkoming van het mimetische verouderingsmodel, wat blijkt uit opmerkelijke leer- en geheugenstoornissen, MDA-productie, accumulatie van lipofuscine, afname van T-AOC en SOD en neerwaartse regulatie van telomerase-activiteit in de hersenen. Ondertussen beschermden resveratrol- of CR-behandelingen de door D-gal geïnduceerde ratten tegen oxidatieve stress door de activiteit van antioxiderende enzymen te verhogen, de niveaus van lipideperoxidatieproducten te verlagen en de balans van oxidatieve en antioxidatieve systemen te behouden. Bij gedrags- en telomerase-activiteitstests zou de behandeling van resveratrol of CR door D-gal geïnduceerde cognitieve stoornissen en telomerase-activiteit kunnen omkeren. Bovendien vertoonden verouderende modelratten die werden behandeld met hoge doses resveratrol relatief meer significant effect op het gedrag dan degenen die werden behandeld met CR.

Figuur 11: Immunohistochemische analyse van p53 (A, B) en FOXO3a (C, D) expressies in lever (A, C) en hersenweefsel (B, D) van verouderende ratten. De vergroting was 20×. NG, negatieve controlegroep; MG, modelstuurgroep; RESL, lage dosis resveratrolgroep; RESH, hoge dosis resveratrolgroep; CR, caloriebeperkingsgroep

Studies hebben aangetoond dat CR, een vermindering van 10-40 procent in de inname van een voedzaam dieet, zou kunnenveroudering vertragen en levensduur verlengen, dus een algemeen gebruikt niveau van CR (40 procent vermindering van de voedselinname) werd toegepast in CR-groepsratten in de huidige studie. Desalniettemin hebben sommige onderzoeken aangetoond dat er geen gunstig effect is van CR op de levensduur bij primaten van natuurlijke leeftijd [16]. Ook al bleek behandeling met resveratrol CR-achtige effecten op te wekkenenergiemetabolismeen metabolisch profiel bij zwaarlijvige mensen [17], verbeterde het de metabole functie niet bij niet-zwaarlijvige vrouwen met normale glucosetolerantie [18]. De reden voor de verschillen tussen deze onderzoeken is niet duidelijk, maar het zou kunnen zijn dat CR en resveratrol werken om de homeostase te herstellen bij metabolisch gecompromitteerde individuen, en minder bij gezonde individuen, een mogelijkheid die consistent is met bekende functies van SIRT1 in dierstudies [19]. Daarom werden D-gal-geïnduceerde verouderingsrattenmodellen toegepast voor het vergelijken van de anti-verouderingsactiviteiten van resveratrol of CR, in plaats van het natuurlijk verouderde rattenmodel.

SIRT1, een (NAD plus)-afhankelijke deacetylase, heeft veel aandacht gekregen vanwege zijn meerdere rollen in levensduurverlenging, stressbestendigheid en apoptosereductie [20, 21]. Accumulerende onderzoeken hebben sterk gesuggereerd dat SIRT1 een belangrijk doelwit was van resveratrol en CR [22]. Er zijn enorme aantallen stroomafwaartse moleculen van SIRT1, waaronder p53, Foxo1, Foxo3, Foxo4 en E2F1, die worden gereguleerd door SIRT1. Tegelijkertijd wordt SIRT1-activiteit gereguleerd door zijn stroomopwaartse moleculen, bijvoorbeeld p53, HIC1, E2F1, DBC1, HuR en AROS. Acute onttrekking van voedingsstoffen activeert een transcriptioneel programma bij de SIRT1-promoter dat wordt aangestuurd door de transcriptiefactoren Foxo3a en p53. Omdat p53 SIRT1-genexpressie onderdrukt, activeert de verwijdering ervan door Foxo3a SIRT1-transcriptie [23]. DBC1 en AROS werden onlangs beschreven als directe negatieve en positieve regulatoren van respectievelijk SIRT1-activiteit, HuR toont het effect van het verlagen van SIRT1-expressieniveaus in verouderde senescente cellen [9, 10].

CRvertraagt ​​veroudering en verlengt de mediane en maximale levensduurin een verscheidenheid aan soorten, waaronder ratten, muizen, vissen, vliegen, wormen en gisten. Dergelijke rigoureuze dieetprogramma's bij vrijlevende personen hebben echter geleid tot ethische en methodologische problemen [24]. Op dit moment is het vergroten van de gezondheidsspanne wellicht belangrijker dan simpelweg het verlengen van de levensduur. Recent onderzoek suggereert dat resveratrol een van de krachtigste aanstichters van SIR2-activiteit is onder alle plantaardige polyfenolen [25], en het beïnvloedt de levensduur door vergelijkbare mechanismen als bij calorierestrictie. Deze resultaten toonden aan dat CR en resveratrol vergelijkbare activiteiten hadden bij het herstellen van SIRT1-mRNA-expressieniveaus, het verhogen van de eiwitexpressies van FOXO3a, AROS en HuR en het verlagen van p53- en DBC1-niveaus. Ondertussen wijzen meerdere lijnen van overtuigend bewijs op de gunstige effecten van resveratrol op de neurologische, hepatische en cardiovasculaire systemen.

MATERIALEN EN METHODES

Celkweek, stress en behandelingen

De humane diploïde fibroblaststam IMR-90 is verkregen van ATCC. Cellen werden gekweekt in minimaal essentieel medium (MEM) (Gibco, VK) aangevuld met 10 procent foetaal runderserum (FBS) (Gibco) bij 37 graden in 5 procent CO2. Nadat confluentie was bereikt, werden de cellen geënt in 6-kweekplaten met putjes. Een dag later werden de cellen gedurende 48 uur behandeld met 1 mM 2,2'-azobis (2-amidinopropane) dihydrochloride (AAPH) (Sigma, VS) verdund in MEM plus 10 procent FBS. Een incubatie van 48 uur met vrije-radicaalinitiator AAPH stelt een model vast van oxidatieve stress-geïnduceerde cellulaire senescentie [12, 13]. Controlecellen werden alleen in kweekmedium geïncubeerd. Na AAPH-behandeling werden IMR-90 gewassen met koude fosfaatbufferzoutoplossing (PBS) pH 7,4 en geïncubeerd met vers kweekmedium of kweekmedium met resveratrol (resveratrolgroep) of MEM aangevuld met 3 procent FBS (CR-groep) gedurende een extra 48 uur voor de oogst.

SA-gal kleuringsactiviteit

Het verschijnen van biomarkers van senescentie werd gecontroleerd (afname van het proliferatiepotentieel en toename van SA-gal-kleuring) [26] vanaf de dag na de behandeling. Vervolgens werden de cellen gekleurd volgens de instructies van de fabrikant van de SA-gal Staining Kit (CST, VS). Na kleuring werden ten minste 300 cellen in verschillende velden onderzocht en werden SA-gal-positieve cellen geteld. Deze experimenten werden drie keer herhaald en de resultaten werden gepresenteerd als de gemiddelde waarden met standaarddeviaties (SD). Om niet-specifieke kleuring te voorkomen, mogelijk als gevolg van celconfluentie, werd SA-gal histochemische kleuring uitgevoerd met subconfluente cellen.

Scanning-elektronenmicroscopie-analyse

Cellen werden gekweekt op dekglaasjes in 6-kweekplaten met putjes, zoals hierboven beschreven. Nadat resveratrol en CR waren behandeld, werden de dekglaasjes van de platen verwijderd, vervolgens werden de cellen gefixeerd in 2,5 procent met fosfaat gebufferde glutaaraldehyde en achteraf gefixeerd in 1 procent gebufferde osmiumtetroxide. Gefixeerde monsters werden ondergedompeld in t-butylalcohol na uitdroging door een gegradeerde reeks ethanol. De monsters werden gevriesdroogd uit t-butylalcohol, vervolgens verdampend gecoat met goud met behulp van een auto fine coater (JFC-1600, JEOC, Japan) en onderzocht met een scanning-elektronenmicroscoop (JEOL, JSM{{11} }LV, Japan).

Apoptotische analyse

Na resveratrol- of CR-incubatie werden alle cellen geoogst met trypsine en tweemaal gewassen met PBS, gevolgd door opnieuw gesuspendeerd in 400 μl Annexine V-bindingsbuffer. Vervolgens werden de cellen gekleurd volgens de instructies van de fabrikant van de Annexin V-FITC celapoptose-detectiekit (BestBio, China). Een FACSCalibur flowcytometer (Becton-Dickinson, San Jose, CA) werd gebruikt om fluorescentie te detecteren en het percentage apoptotische cellen werd berekend door het interne softwaresysteem van de FACSCalibur. Voor elk spoor werden ongeveer 104 cellen geanalyseerd.

Dierlijke procedures

Mannelijke albino Wistar-ratten, met een gewicht van ongeveer 200 ± 10 g, werden verkregen van het Experimental Animal Centre van Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology (SCXK 2010-0009). De dieren werden 2 weken geacclimatiseerd voordat ze werden gedoseerd in het Experimental Animal Centre van de Hubei University of Chinese Medicine, gedurende welke tijd ze onbeperkt toegang hadden tot voedsel en water. Na acclimatisatie werden 50 ratten geselecteerd en verdeeld in vijf groepen van elk tien. Dieren werden gehouden volgens de nationale richtlijnen en protocollen die zijn goedgekeurd door de Institutional Animal Ethical Committee (IAEC).

Groep I (negatieve controlegroep) ratten ontvingen alleen het vehiculum (1 ml/kg lichaamsgewicht van 0,9 procent zoutoplossing) gedurende 6 weken. Groep II (modelcontrolegroep) ratten ontvingen D-gal (200 mg/kg lichaamsgewicht, Sigma Chemical, St. Louis, MO) gedurende 6 weken. Groep III (lage dosis resveratrolgroep) ratten kregen D-gal en resveratrol (50 mg/kg lichaamsgewicht) opgelost in 5 procent dimethylsulfoxide (DMSO) gedurende 6 weken. Groep IV (groep met hoge dosis resveratrol) ratten kregen D-gal en resveratrol (100 mg/kg lichaamsgewicht). Groep V (CR-groep) ratten kregen D-gal en CR (gevoed met een dieet dat 40 procent minder calorieën bevatte dan de ad libitum-gevoede ratten [27]) gedurende 6 weken. D-gal werd intraperitoneaal toegediend, terwijl resveratrol gedurende de gehele duur van het experiment oraal werd toegediend. De ratten werden op de laatste dag van de behandeling opgeofferd, daarna werden het bloed, de sera en de organen onmiddellijk verzameld voor bioassay of bewaard bij -80 graden voor later gebruik.

Gedragstesten

De Morris water maze test was ontworpen om de capaciteit van ruimtelijk leren en geheugen van de ratten te beoordelen na 6 weken na de verwonding [28]. De Morris-waterdoolhoftest bestond uit 4-daagse leer- en geheugentraining en een sondetest op dag 5. De dieren werden getraind in een cirkelvormige poel (155 cm in diameter) met visuele aanwijzingen. Een ontsnappingsplatform (diameter van 9,0 cm) lag 1,0 cm onder het wateroppervlak van het zwembad, dat op 25 ± 2 graden werd gehouden. De locatie van het platform bleef gedurende de 4-daagse trainingsperiode in het midden van het noordwestelijke kwadrant. Elke dag werden de ratten één ochtendblok en één middagblok getraind. De rat zwom vrij rond tot hij binnen 120 seconden het platform vond. Als dit mislukte, werd het gedurende 10 seconden op het platform geplaatst. De ontsnappingslatentie (het vinden van het ondergedompelde ontsnappingsplatform) en de zwemsnelheid werden geregistreerd. De sondeproef werd uitgevoerd door het platform te verwijderen en elke rat 120 seconden vrij te laten zwemmen in het zwembad. Het aantal perronovergangen in het getrainde kwadrant (waar het perron werd verwijderd) werd geregistreerd met een geautomatiseerd videosysteem. De zichtbare platformversie van het waterlabyrint werd niet uitgevoerd nadat een significant verschil in zwemsnelheid was waargenomen tussen ratten die waren behandeld met D-gal en drager.

Detectie van oxidatieve stress-geassocieerde biologische indicatoren

De niveaus van MDA, SOD en T-AOC in bloed en weefsels werden fotometrisch bepaald in overeenstemming met het protocol van de fabrikant met behulp van in de handel verkrijgbare enzymatische testkits (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing City, PR China). Alle experimenten die in deze sectie worden beschreven, werden in drievoud uitgevoerd om gemiddelden en SD te verkrijgen.

Het lipofuscinegehalte werd bepaald met de Sohal-methode [29]. In het kort: we wogen 200 mg hersenschors, voegden 2 ml chloroform-methanol (2:1)-extract toe, homogeniseerden en filterden, spoelden vervolgens het residu met het extract, combineerden de filtraten, voegden het extract toe aan 5 ml en mat de fluorescentie-intensiteit op een fluorescentiespectrometer. De emissiegolflengte was 435 nm en de excitatiegolflengte was 365 nm. De spectrofluorometer werd gestandaardiseerd om een ​​deflectie van 50 te geven bij de bovenstaande golflengten met een 1 ug/ml oplossing van kininebisulfaat in 0,1 M H2S04. De resultaten werden uitgedrukt als relatieve fluorescerende eenheden/ml chloroform/g nat tissuegewicht.

Detectie van TE-activiteit

Voor telomerase-extractie werd ongeveer 30 mg weefsel twee keer gewassen in ijskoude PBS en tenslotte gehomogeniseerd in ongeveer 150 ml PBS. TE-activiteit werd gemeten met behulp van TE ELISA-kits volgens de instructies van de fabrikant (Nanjing Sen Beijia Biological Technology Co., Ltd., Nanjing, China). De gevoeligheidsgrenzen van de assays waren 0,8 IU/L voor TE.

RT-PCR-analyse

De mRNA-expressieniveaus van SIRT1, Foxo3 en p53 in lever- en hersenweefsels werden geanalyseerd met behulp van RT-PCR-analyse. Het totale RNA werd geëxtraheerd met behulp van Trizol en hun hoeveelheid en zuiverheid werden beoordeeld met een ultramicrospectrofotometer (Thermo Fisher Scientific, VS) op basis van de absorptiemeting bij 260 en 280 nm. Na kwantificering werd cDNA gesynthetiseerd met behulp van een FastQuant RT-kit (Tiangen Biotech, Beijing, China) volgens de instructies van de fabrikant. De niveaus van SIRT1, Foxo3, p53 mRNA-expressie werden gemeten met RT-PCR met behulp van TIANGEN SuperReal PreMix Plus (Tiangen Biotech, Beijing, China) met specifieke primers (Tabel 2). Kwantitatieve real-time PCR werd uitgevoerd met een LightCycler 480 graden PCR-systeem (Roche, Basel, Zwitserland) met 20 μL als het totale volume van elke reactie. PCR-amplificatie werd geïnitieerd door 15 minuten denaturatie bij 95 graden, gevolgd door 40 cycli van 95 graden gedurende 10 seconden, 59-63 graden (gloeitemperatuur) gedurende 20 seconden en 72 graden gedurende 30 seconden, en een laatste incubatie bij 72 graden. graden gedurende 5 min. Het verkregen cyclusdrempelgetal van elk gen (Ct-waarde) werd genormaliseerd in het aantal relatieve veranderingen volgens de vergelijking van de 2-∆∆CT-methode [30].

Tabel 2: Primerlijst

Western blot-analyse

De eiwitexpressieniveaus van p53, FOXO3a, HuR, RPS19BP1 en DBC1 in hersenweefsels werden geanalyseerd met behulp van Western-blotting-analyse. Het totale eiwit van hersenweefsel werd geëxtraheerd met behulp van RIPA Lysis Buffer (Beyotime, China) volgens de instructies van de fabrikant. Eiwitconcentraties werden bepaald met behulp van de BCA Protein Assay Kit (Beyotime, China). 5 mg eiwitten werden gescheiden met behulp van 12 procent SDS-polyacrylamidegels en overgebracht op een PVDF-membraan (0.45 μm, Millipore, VS). De blots werden geblokkeerd met 5 procent magere melk in TBS, vervolgens overnacht geïncubeerd bij 4 graden met de juiste verdunning van primaire antilichamen: anti-p53 (SC- 6243, Santa Cruz Biotechnology), anti-FOXO3a (#12829, Cell signaleringstechnologie), anti-HuR (#12582, Cell Signaling Technology), anti-AROS (Ab201091, abcam), anti-DBC1 (#5857, Cell Signaling Technology), anti- - actie (AC004, ABclonal Technology) . Na het wassen van de membranen om overtollige primaire antilichamen te verwijderen, werden de membranen gedurende 1 uur bij kamertemperatuur geïncubeerd met de juiste secundaire antilichamen in een verdunning van 1:2000-1:5000 (AC004 of AS003, ABclonal Technology). De membranen werden 3 keer gewassen en vervolgens gevisualiseerd met behulp van Pierce ECL Western Blotting Substrate (Thermo Scientific). -actie werd gebruikt als een interne controle.

Immunohistochemie

De weefselmonsters werden binnen 1 uur na chirurgische verwijdering gefixeerd in 10 procent neutraal gebufferde formaline en ingebed in paraffine met behulp van standaardprocedures. Vervolgens werden de gefixeerde, in paraffine ingebedde monsters gesneden in secties van 5-μm dik, die werden gedeparaffineerd in xyleen, opnieuw gehydrateerd in ethanol en in de magnetron behandeld om antigeen terug te winnen. Het correct verdunde primaire antilichaam, anti-p53 (SC-6243, Santa Cruz Biotechnology) en anti-FOXO3a (#12829, Cell Signaling Technology), werden gedurende 60 minuten bij kamertemperatuur in een vochtige kamer geïncubeerd. De objectglaasjes werden vervolgens gespoeld in PBS en vervolgens geïncubeerd met het secundaire antilichaam tegen anti-konijnenantilichaam en de visualisatie van HRP (concentratie 1:300, #074-1506, KPL). Vervolgens werden de objectglaasjes gewassen en werden de secties ontwikkeld in de enzym-substraat diaminobenzidine (DAB, Sigma) oplossing. Afbeeldingen van immunohistochemisch gekleurde secties werden vastgelegd met de digitale microscoop van Olympus (IX-73P1F, Olympus, Japan).

statistische analyse

Resultaten werden uitgedrukt als gemiddelden ± SD voor ten minste drie onafhankelijke experimenten en werden geanalyseerd met behulp van de SPSS 18.0-software. Groepsverschillen in de ontsnappingslatentie en zwemsnelheid in de Morris waterdoolhof-trainingstaak werden geanalyseerd met behulp van tweewegs variantieanalyse (ANOVA) met herhaalde metingen, met als factoren behandeling en trainingsdag. De andere gegevens werden geanalyseerd met one-way ANOVA gevolgd door een post-hoc Tukey-test. De waarde van P kleiner dan 0.05 werd als significant beschouwd.

CONCLUSIES

Resveratrol en CR vertoonden vergelijkbare antiverouderingsactiviteiten, zowel in vitro als in vivo, wat blijkt uit hun vermogen om AAPH-geïnduceerde senescentie en apoptose te remmen en de leeftijdsgerelateerde cognitieve stoornissen veroorzaakt door toediening van D-gal te herstellen. Hun antiverouderingsmechanismen omvatten opwaartse regulering van de TE-activiteit, het verminderen van oxidatieve schade en het reguleren van de SIRT1-route. Over het algemeen vertoonden 10 μM resveratrol in vitro en een hoge dosis resveratrol in vivo relatief sterkere activiteiten van anti-aging en stimulerende SIRT1-niveaus. Deze resultaten impliceerden het potentieel van resveratrol als CR-nabootser.

Afkortingen

AAPH, 2,2'-azobis (2-amidinopropaan) dihydrochloride; AMPK, door adenosinemonofosfaat geactiveerd proteïnekinase; ANOVA, variantieanalyse; AROS, actieve regelaar van SIRT1; CR, caloriebeperking; DBC1, verwijderd in borstkanker 1; D-gal, D-galactose; FBS, foetaal runderserum; Foxo3a, vorkkopdoos 3a; HuR, Hu-antigeen R; MEM, minimaal essentieel medium; PBS, fosfaatbufferzoutoplossing; PGC-1 , door peroxisoomproliferator geactiveerde receptor G-coactivator-1 ; RES, resveratrol; SA-gal, senescentie-geassocieerde galactosidase; SD, standaarddeviaties; SIRT1, zwijgende informatieregulator; TE, telomerase.

Auteur bijdragen

Conceptie en ontwerp van het onderzoek: Gang Chen; acquisitie, analyse en interpretatie van gegevens: Juan Li, Xia Chun Zhang, Yi-Mei Liu; het verkrijgen van financiering en kritische revisie van het manuscript voor intellectuele inhoud: Gang Chen, Ke-Li Chen; schrijven van het manuscript: Juan Li. Alle auteurs hebben de publicatie van dit manuscript gelezen en goedgekeurd. DANKWOORD EN FINANCIERING

Dit werk werd gefinancierd door China Postdoctoral Science Foundation (2016M601237), het Natural Science Foundation-project (81373704, 30873292).

BELANGENCONFLICTEN

Geen belangenverstrengeling van alle deelnemende auteurs.

REFERENTIES

1. Ramis MR, Esteban S, Miralles A, Tan DX, Reiter RJ. Calcorbeperking, resveratrol en melatonine: rol van SIRT1 en implicaties voor veroudering en aanverwante ziekten. Mech Veroudering Dev. 2015; 146–148:28–41.

2. Colman RJ, Beasley TM, Kemnitz JW, Johnson SC, Weindruch R, Anderson RM. Calorierestrictie vermindert leeftijdsgerelateerde sterfte en sterfte door alle oorzaken bij resusapen. Nat gemeenschappelijk. 2014; 5:3557.

3. Sohal RS, Weindruch R. Oxidatieve stress, caloriebeperking en veroudering. Wetenschap. 1996; 273:59-63.

4. Testa G, Biasi F, Poli G, Chiarpotto E. Caloriebeperking en nabootsing van dieetbeperkingen: een strategie voor het verbeteren van gezond ouder worden en een lang leven. Curr Pharm Des. 2014; 20:2950–77.

5. Lane MA, Roth GS, Ingram DK. Calorische restrictiemimetica: een nieuwe benadering voor biogerontologie. Methoden Mol Biol. 2007; 371:143-9.

6. Baur JA, Pearson KJ, Price NL, Jamieson HA, Lerin C, Kalra A, Prabhu VV, Allard JS, Lopez-Lluch G, Lewis K, Pistell PJ, Poosala S, Becker KG, et al. Resveratrol verbetert de gezondheid en overleving van muizen op een calorierijk dieet. Natuur. 2006; 444:337-42.

7. Lagouge M, Argmann C, Gerhart-Hines Z, Meziane H, Lerin C, Daussin F, Messadeq N, Milne J, Lambert P, Elliott P, Geny B, Laakso M, Puigserver P, et al. Resveratrol verbetert de mitochondriale functie en beschermt tegen stofwisselingsziekten door SIRT1 en PGC-1alpha te activeren. Cel. 2006; 127:1109–22.

8. Howitz KT, Bitterman KJ, Cohen HY, Lamming DW, Lavu S, Wood JG, Zipkin RE, Chung P, Kisielewski A, Zhang LL, Scherer B, Sinclair DA. Kleine molecule-activatoren van sirtuins verlengen de levensduur van Saccharomyces cerevisiae. Natuur. 2003; 425:191-6.

9. Kwon HS, Ott M. De ups en downs van SIRT1. Trends Biochem Sci. 2008; 33:517-25.

10. Brooks CL, Gu W. Hoe beïnvloedt SIRT1 het metabolisme, veroudering en kanker? Nat Rev Kanker. 2009; 9:123–8.

11. Harman D. Vrije radicalen theorie van veroudering. Mutat Re. 1992; 275:257-66.

12. Mayo JC, Tan DX, Sainz RM, Lopez-Burillo S, Reiter RJ. Oxidatieve schade aan catalase veroorzaakt door peroxylradicalen: functionele bescherming door melatonine en andere antioxidanten. Gratis radicale res. 2003; 37:543-53.

13. Hubackova S, Krejcikova K, Bartek J, Hodny Z. IL1- en TGF -Nox4-signalering, oxidatieve stress en reactie op DNA-schade zijn gedeelde kenmerken van replicatieve, oncogen-geïnduceerde en door geneesmiddelen geïnduceerde paracriene 'Bystander senescentie' '. Veroudering (Albany NY). 2012; 4:932-51. https://doi.org/10.18632/aging.100520.

14. Cui X, Zuo P, Zhang Q, Li X, Hu Y, Long J, Packer L, Liu J. Chronische systemische blootstelling aan D-galactose veroorzaakt geheugenverlies, neurodegeneratie en oxidatieve schade bij muizen: beschermende effecten van R{{ 2}}liponzuur. J Neurosci Res. 2006; 84:647-54.

Vraag voor meer:

E-mail:wallence.suen@wecistanche.com whatsapp: plus 86 15292862950