Analyse van bioactieve stoffen en oorsprongsverschillen van Cistanche Tuberosa in Xinjiang

Samenvatting: De zes producerende gebieden vanCistanche tubulosain de Taklamakan-woestijn werden geselecteerd als onderzoeksobject, en de bioactieve stoffen en antioxiderende activiteiten van verschillende delen (wortel, midden en top) werden bepaald en er werd een multivariate statistische analyse uitgevoerd. De resultaten toonden aan dat de verschillen in productiegebieden significante effecten hadden op de bioactieve stoffen van Cistanche tubulosa (totaal polyfenolen,

Het gehalte aan totaal flavonoïden, totaal triterpenen, totaal polysacchariden, totaal proanthocyanidinen, echinacoside en verbascoside) enantioxidante werkinghadden allemaal een significante impact, en er waren significante verschillen in debioactieve stoffenin verschillende delen.Cistanche tubulosavan verschillende origine is sterkantioxidante werkingin vitro is de IC50 van DPPH vrije radicalen wegvangende snelheid (IC50 DPPH) minder dan 7 mg/ml, en de IC50 van ABTS vrije radicalen wegvangende snelheid (IC50 ABTS) is minder dan 3 mg/ml ml. Correlatieanalyse toonde aan dat IC50 DPPH van Cistanche tubulosa significant negatief gecorreleerd was met totale polyfenolen enEchinacosideinhoud; IC50 ABTS was extreem significant negatief gecorreleerd met totaal polyfenolen, totaal polysacchariden, echinacoside enverbascosideinhoud. Analyse van hoofdcomponenten heeft 3 hoofdcomponenten geëxtraheerd, waarvan het cumulatieve bijdragepercentage 80 was. 57 procent; clusteranalyse verdeelde de monsters in 3 groepen. De volgorde van uitgebreide scores van Cistanche tubulosa uit verschillende producerende gebieden is Kashi Jiashi County (0. 445), Alar City (0. 313), Hotan Moyu County (0. 051), Turpan Shanshan County (-0. 057), district Hotan Yutian (-0. 071), district Bayingolengolengqiemo (-0. 680).

Trefwoorden: Cistanche tubulosa; bioactieve stoffen; verschillen in productiegebieden; begrijpelijke evaluatie

Klik om meer te weten Cistanche Tubulosa Extract Inleiding

Invoering

Cistanche tubulosa(Schrenk) Wight, ook bekend als Red Willow Dayun[1], werd samen met Cistanche deserticola opgenomen in de Farmacopee van de Volksrepubliek China als de bronplant van Cistanche deserticola, en werd opgenomen in de catalogus van "Food and Medicine Homoloog" door de National Health Commission in 2018 [2].Cistanche tubulosaBevat een verscheidenheid aan biologisch actieve stoffen, zoals polyfenolen, polysacchariden, fenylethanolglycosiden, iridoïden en hun glycosiden, etc. Verlagen van bloedvet [6], immuunregulatie [7], zenuwbescherming [8], preventie van osteoporose [{{3 }}], laxeermiddel [11-12], geheugenverbetering [13] en andere functionele activiteiten, heeft het de reputatie van "woestijnginseng".

Cistanche tubulosaparasiteert uitsluitend op de wortels van Tamarix-planten en wordt verspreid in Hetian, Kashgar, Aksu en andere gebieden rond de Taklamakan-woestijn in Xinjiang, mijn land. Uit onderzoek [14] is gebleken dat verschillende geografische locaties verschillende licht-, regenval-, temperatuur- en bodemomstandigheden hebben, die in verschillende mate van invloed zullen zijn op de groei, ontwikkeling en intrinsieke kwaliteit van planten. "Farmacopee van de Volksrepubliek China" gebruikt voornamelijk de inhoud van echinacoside en verbascoside als de index om de kwaliteit van Cistanche tubuloside te evalueren[2], maar de bioactieve stoffen in Cistanche tubatus zijn ingewikkelder. , totale flavonoïden, totale polysacchariden, totale triterpenen, totale proanthocyanidinen, enz. hebben een breed scala aan farmacologische effecten. Daarom kan de multi-index kwaliteitsevaluatiemethode de kwaliteit van medicinale materialen van Cistanche tubulosa uitgebreider evalueren [1]. Op basis hiervan wil dit artikel zich concentreren op de Taklamakan-woestijn in Xinjiang TakingCistanche tubulosaals onderzoeksobject, de soorten, inhoud en antioxiderende activiteiten van bioactieve stoffen inCistanche tubulosauit verschillende producerende gebieden werden onderzocht, en correlatieanalyse, hoofdcomponentenanalyse en systematische clusteranalyse werden gebruikt voor uitgebreide evaluatie, om de verschillende producerende gebieden in Xinjiang te verduidelijken. De kwaliteitsverschillen van Cistanche tubulosa bieden theoretische ondersteuning en referentie voor het versterken van de kwaliteitscontrole van Cistanche tubulosa en zijn producten, evenals het bevorderen van de diepe verwerking en uitgebreide ontwikkeling en gebruik van Cistanche tubulosa.

1. 1. 3 Belangrijkste instrumenten en apparatuur Piloot3-6 m type vriesdrogen

Centrifuge, geproduceerd door Beijing Boyikang Experimental Instrument Co., Ltd.; TGL-20B-centrifuge, geproduceerd door Shanghai Anting Scientific Instrument Co., Ltd.; 756 type UV-zichtbare spectrofotometer, geproduceerd door Shanghai Qinghua Technology Instrument Co., Ltd.; LC-20AB zeer efficiënte vloeistofchromatografie werd geproduceerd door Shimadzu Corporation uit Japan; Synergy H1 multifunctionele microplaatlezer werd geproduceerd door Porton Instruments Co., Ltd.

1.2 Bepaling van biologisch actieve stoffen

1. 2. 1 Bepaling van het totale polyfenolgehalte Raadpleeg de methode van FH Li et al. [17]. Bereiding van monsteroplossing: Weeg 0.50 g monster, gebruik 70 procent (indien niet gespecificeerd, verwijzen de percentages in de tekst naar volumefractie) ethanoloplossing als het extractieoplosmiddel en de verhouding vast tot vloeistof is 1 :40 (g/ml, hetzelfde hieronder. ), geëxtraheerd in 60 graden, 250 W ultrasoon apparaat gedurende 40 min, gekoeld en gecentrifugeerd bij 4000 r/min gedurende 10 min, verzamelde het supernatant en verdun tot 50 ml, zet opzij. Neem 1 ml van de monsteroplossing, voeg 5 ml 10 procent folinoloplossing toe, oscilleer en schud goed, voeg na 15 minuten staan ​​4 ml 7,5 procent Na2CO3-oplossing toe, oscilleer en schud goed en laat het in het donker staan 20 minuten. Meet na 1 minuut de absorptie (A765) en het resultaat wordt uitgedrukt in galluszuurequivalent (mg GAE/g DW).

1. 2. 2 Bepaling van het totale gehalte aan flavonoïden

Zie de methode van Zhang Wenye et al. [18]. Neem 1 ml van de monsteroplossing (hetzelfde als 1.2.1) in een bruine maatkolf van 10 ml, voeg 0,3 ml NaNO2-oplossing met een massafractie van 5 procent toe, schud en schud goed, laat 15 minuten staan, voeg dan 0,3 ml toe. Maak ml 10 procent Al(NO3)3-oplossing en 4 ml 4 procent NaOH-oplossing, verdun tot 10 ml met 50 procent ethanoloplossing, schud

Goed schudden en na 20 minuten in het donker staan ​​de absorptie meten (A510 ), het resultaat

Vruchten worden uitgedrukt in rutine-equivalenten (mg RE/g DW).

1. 2. 3 Bepaling van het totale gehalte aan triterpenen

Zie de methode van He Ce et al. [19]. Neem 0.4 ml van de monsteroplossing (hetzelfde als 1.2.1), damp het droog in een waterbad, voeg dan 0.4 ml 1,5 procent vanilline-ijsazijnoplossing toe en 1,6 ml perchloorzuurzuur, waterbad van 70 graden gedurende 15 minuten, voeg na afkoeling 5 ml ethylacetaat toe, meet na 10 minuten staan ​​de absorptie (A560) en het resultaat wordt uitgedrukt in oleanolzuurequivalent (mg OAE /g DW).

1. 2. 4 Bepaling van het totale polysaccharidegehalte

Raadpleeg de methode van Zhang Yadan et al. [20]. Bereiding van monstervloeistof: 1.00 g monster werd gewogen, gedeïoniseerd water werd gebruikt als extractieoplosmiddel, de verhouding van vaste stof tot vloeistof was 1:30, geëxtraheerd in 60 graden, 250 W ultrasoon apparaat gedurende 50 minuten, afgekoeld en vervolgens geëxtraheerd onder de voorwaarde van 4000 tpm Centrifugeer gedurende 10 minuten, verzamel het supernatant, voeg 4 keer het volume van 95 procent ethanoloplossing toe, laat 12 uur bij 4 graden staan, centrifugeer vervolgens met 5000 tpm, verzamel de precipiteren en wassen met aceton, ether en nee Was tweemaal met water en ethanol, voeg een geschikte hoeveelheid gedeïoniseerd water toe om opnieuw op te lossen, voer vervolgens de deproteïnisatie (Sevage-methode) en depigmentatiebehandeling (actieve koolmethode) uit en verdun tot 10 ml voor testen. Neem 1 ml van de monsteroplossing, voeg achtereenvolgens 0,6 ml fenoloplossing van 6 procent en 3 ml geconcentreerd H2SO4 toe, schud en schud goed, plaats gedurende 10 minuten in een kokendwaterbad en meet na afkoeling de absorptie (A490) , en het resultaat wordt uitgedrukt als glucose-equivalent (mg DE / g DW) gezegd.

1.2.5 Bepaling van het proanthocyanidinegehalte

Raadpleeg de methode van Lu Xiao et al. [21]. Bereiding van monsteroplossing: Weeg 0.50 g monster, voeg 80 procent ethanol toe

De oplossing werd gebruikt als het extractieoplosmiddel met een vastestof-vloeistofverhouding van 1:30. Het werd geëxtraheerd in een ultrasoon apparaat bij 50 graden en 250 W gedurende 40 minuten. Na afkoeling werd het gedurende 10 minuten gecentrifugeerd bij 4000 rpm. Het supernatant werd verzameld en het volume werd op 50 ml gebracht. ,Reserve.

Neem 0.5 ml van de monsteroplossing, voeg achtereenvolgens 3 ml 4 procent vanilline-methanoloplossing en 1,5 ml geconcentreerde HCl toe en laat 15 min reageren, meet vervolgens de absorptie (A500 ) en de resultaten worden uitgedrukt als proanthocyanidine-equivalent (mg PCE / g DW)express.

1. 2. 6 Bepaling van het gehalte aan echinacoside en verbascoside

Raadpleeg de methode van Xu Mingjun et al. [22]. Bereiding van monstervloeistof: weeg 1,00 g monster, gebruik 80 procent ethanoloplossing als extractie-oplosmiddel, de verhouding van vast tot vloeistof is 1:30, extract in 60 graden, 250 W ultrasoon apparaat gedurende 40 minuten, na afkoeling extraheren bij 400O Centrifugeer gedurende 10 minuten onder de conditie van 1/min, verzamel het supernatant, verdun tot 50 ml en zet opzij. De chromatografische kolom was een Alltima C18-kolom (4,6 mm x 250 mm x 5 μm), de mobiele fase was 0,4 procent waterig mierenzuur (A)-acetonitril (B), de kolomtemperatuur was 25 graden en de stroomsnelheid was 1,00 ml /min, het injectievolume was 10 μL en de detectiegolflengte was 330 nm. Kwantitatieve analyse werd uitgevoerd met behulp van een externe standaardmethode.

1.2.7 Bepaling van antioxidantactiviteit in vitro Bereiding van monsteroplossing: wegen

1. 20 g monsters werden geëxtraheerd met een 60 procent ethanoloplossing als extractieoplosmiddel en de verhouding van vast tot vloeistof was 1:25. Ze werden geëxtraheerd in een ultrasoon apparaat bij 60 graden en 250 W gedurende 40 minuten. Na afkoeling werden ze 15 minuten gecentrifugeerd bij 4500 rpm. , verzamel het supernatant; neem meerdere geschikte hoeveelheden supernatant, verdun met 60 procent ethanoloplossing om de vloeistofconcentratie van 1 mg / ml, 3 mg / ml, 5 mg / ml, 10 mg / ml, 20 mg / ml, 30 mg / ml, 40 mg te bemonsteren /ml, te testen.

1) DPPH-vermogen om vrije radicalen op te vangen. Raadpleeg de methode van Xu Chunping [23]. Neem 1{{10}} μL van de monsteroplossing, voeg 250 μL DPPH-oplossing toe, meng goed, voeg toe aan de microtiterplaat, houd 25 minuten uit de buurt van licht bij kamertemperatuur, gebruik 60 procent ethanoloplossing meet als de blanco controle de absorptie ervan (A517) en bereken DPPH volgens de volgende formule Vrije radicalen wegvangende snelheid. DPPH vrije radicalen afvangsnelheid=1-A1-A2A0( ) × 100 procent In de formule: A0 is de absorptie van 60 procent ethanoloplossing in plaats van monsteroplossing (blanco controle); A1 is de absorptie van monsteroplossing gemengd met DPPH-oplossing; A2 is Absorptie van absolute ethanol in plaats van DPPH-oplossing.

2) ABTS-vermogen om vrije radicalen op te ruimen. Raadpleeg de methode van Kong Yuting et al. [24]. De moederloog van ABTS was een gemengde oplossing van kaliumpersulfaat (eindconcentratie: 2,45 mmol/L) en ABTS (eindconcentratie: 7 mmol/L) bereid in gedeïoniseerd water en stond gedurende 12 uur in het donker op 25 graden. Voordat u de ABTS-moederoplossing gebruikt, verdunt u deze met gedeïoniseerd water zodat de absorptie (A734) 0.7{{10}}±0.05 is, wat de ABTS-werkoplossing is. Neem 10 μL monsteroplossing (1 ~ 40 mg / ml), voeg deze toe aan de microtiterplaat, voeg vervolgens 200 μL ABTS-werkoplossing toe, bewaar deze 30 minuten in het donker bij kamertemperatuur, gebruik 60 procent ethanoloplossing als de blanco controle , en meet de A734 volgens de volgende formule om de ABTS-snelheid voor het wegvangen van vrije radicalen te berekenen. ABTS-snelheid vrije radicalen=1-A′1-A′2A0( ) × 100 procent waarbij: A′1 de absorptie is na het mengen van de monsteroplossing en de ABTS-oplossing; A′2 is de absorptie van gedeïoniseerd water in plaats van ABTS-oplossing.

1.3 Gegevensanalyse

Alle gegevens werden drie keer parallel gemeten en de resultaten werden uitgedrukt als (gemiddelde ± standaarddeviatie). Origin 2019 werd gebruikt voor principale componentenanalyse en systematische clusteranalyse, en SPSS Statistics 26 werd gebruikt voor variantieanalyse. P<0. 05 indicated a significant difference.