Anterieure basolaterale Amygdala-neuronen omvatten een geheugen-engram voor angst op afstand, deel 1

Invoering:

Bedreigende signalen uit de omgeving genereren vaak blijvende angstherinneringen, maar hoe deze worden gevormd en opgeslagen, wordt nog actief onderzocht.

Angstgeheugen is een vorm van geheugen in onze hersenen. Het is een heel bijzondere vorm van herinnering waardoor we ons vaak bang, angstig en nerveus voelen. Maar de relatie tussen deze herinnering aan angst en onze herinnering is zeer complex.

Ten eerste hebben angstherinneringen niets te maken met ons kortetermijngeheugen. De meeste angstherinneringen worden opgeslagen in onze langetermijngeheugenbanken. Daarom zweven er soms herinneringen van lang geleden in onze gedachten rond.

Ten tweede hebben angstherinneringen niet noodzakelijkerwijs invloed op ons geheugen. Hoewel het veranderingen in onze aandacht en stemming kan veroorzaken, is er geen bewijs dat het geheugenverlies veroorzaakt. Veel mensen kunnen nog steeds zeer sterke herinneringen hebben nadat ze vreselijke dingen hebben meegemaakt.

Ten slotte mogen we niet toestaan ​​dat angstige herinneringen een thema in ons leven worden. We moeten positieve actie ondernemen om deze herinneringen te verwerken en in een positievere richting te gaan. Dit omvat het krijgen van therapie, sociaal actief zijn, het trainen van uw lichaam en hersenen, en het behouden van een positieve instelling en geestelijke gezondheid.

Dus hoewel angstige herinneringen ons veel stress en ongemak kunnen bezorgen, moeten we vertrouwen hebben in onze capaciteiten en inspanningen. We kunnen deze beangstigende herinneringen onder ogen zien, ons geheugen versterken, groeien en betere, zelfverzekerdere mensen worden. Het is duidelijk dat we ons geheugen moeten verbeteren. Cistanche deserticola kan het geheugen aanzienlijk verbeteren omdat Cistanche deserticola een traditioneel Chinees medicinaal materiaal is met veel unieke effecten, waaronder het verbeteren van het geheugen. De werkzaamheid van gehakt komt voort uit de verschillende actieve ingrediënten die het bevat, waaronder zuren, polysachariden, flavonoïden, enz. Deze ingrediënten kunnen op verschillende manieren de gezondheid van de hersenen bevorderen.

Klik op Weet hoe u uw kortetermijngeheugen kunt verbeteren

Er wordt gedacht dat het herinneren van een recent angstgeheugen de reactivering weerspiegelt van neuronen in meerdere hersengebieden, geactiveerd tijdens geheugenvorming, wat aangeeft dat anatomisch gedistribueerde en onderling verbonden neuronale ensembles angstgeheugen-engrammen omvatten.

De mate waarin anatomisch specifieke activatie-reactivatie-engrammen blijven bestaan ​​tijdens het terugroepen van angstherinneringen op de lange termijn blijft echter grotendeels onontgonnen. Onze hypothese was dat de belangrijkste neuronen in de anterieure basolaterale amygdala (BLA), die coderen voor negatieve valentie, acuut reactiveren tijdens het terugroepen van angst op afstand om angstgedrag te stimuleren.

Methoden:

Met behulp van volwassen nakomelingen van TRAP2- en Ai14-muizen werd aanhoudende tdTomato-expressie gebruikt om aBLA-neuronen te "TRAP"en die Fos-activatie ondergingen tijdens contextuele angstconditionering (elektrische schokken) of context-only conditionering (geen schokken) (n=5/groep) . Drie weken later werden muizen opnieuw blootgesteld aan dezelfde contextsignalen voor het oproepen van herinneringen op afstand en vervolgens opgeofferd voor fosimmunohistochemie.

Resultaten:

TRAPed (tdTomato +), Fos + en gereactiveerde (dubbel gelabelde) neuronale ensembles waren groter in angst dan contextgeconditioneerde muizen, waarbij de middelste subregio en middelste / caudale dorsomediale kwadranten van aBLA de grootste dichtheden van alle drie de ensemblepopulaties vertoonden.

Terwijl tdTomato + ensembles dominant glutamatergisch waren in context- en angstgroepen, was bevriezingsgedrag tijdens het oproepen van herinneringen op afstand in geen van beide groepen gecorreleerd met de grootte van het ensemble.

Discussie:

We concluderen dat, hoewel een aBLA-inclusief angstgeheugengram zich vormt en op een afgelegen tijdstip blijft bestaan, plasticiteit die de elektrofysiologische reacties van engramneuronen beïnvloedt, en niet hun populatiegrootte, angstgeheugen codeert en gedragsmanifestaties van langdurige angstherinnering aanstuurt.

Invoering

Angstopwekkende stimuli vormen vaak robuuste en duurzame associatieve herinneringen die signalen uit de omgeving verbinden met bedreigende levensgebeurtenissen.

Daaropvolgende ontmoetingen met soortgelijke waargenomen bedreigingen resulteren in robuuster beschermend gedrag, wat een weerspiegeling is van de herinnering aan angst. Fouten in de verwerking van angstassociaties kunnen psychiatrische uitkomsten met een negatieve valentie opleveren, waaronder angst en posttraumatische stressstoornis (PTSD) (Tovote et al., 2015).

Het begrijpen van de volledige complexiteit van de mechanismen die ten grondslag liggen aan het angstgeheugen is essentieel voor het identificeren van functionele circuitafwijkingen die angstgerelateerde psychiatrische ziekten bevorderen en nieuwe therapeutische doelen suggereren om de normale angstverwerking te herstellen.

De afgelopen decennia heeft het onderzoek naar angstgeheugen zich grotendeels gericht op de vorming, opslag en herinnering van kortetermijngeheugen (Kimand Jung, 2006; Kim en Cho, 2020; Lee et al., 2021).

Uit onderzoek is gebleken dat wijd verspreide, onderling verbonden neuronale ensembles van het centrale zenuwstelsel verantwoordelijk zijn voor de vorming en opslag van angstgeheugen (Ramirez et al., 2013; Liu et al., 2014; Roy et al., 2022). Activering van deze ensembles door waargenomen bedreigingen resulteert in een versterkte synaptische transmissie die een aanhoudende fysieke afdruk vertegenwoordigt die bekend staat als een geheugenengram (Yuan et al., 2011; Miyawaki en Mizuseki, 2022).

Aangenomen wordt dat kortetermijngeheugenherinnering de reactivering weerspiegelt van dezelfde neuronale ensembles die oorspronkelijk werden geactiveerd tijdens geheugenvorming, waarbij bewijsmateriaal aangeeft dat zelfs gedeeltelijke activering van een enkel neuronaal ensemble angstgerelateerd gedrag kan oproepen, wat wijst op geheugenherinnering (Roy et al., 2022). ). Hoewel anatomisch stabiele gepotentieerde circuit-engrammen het angstgeheugen op de korte termijn kunnen verklaren, blijft de mate waarin ze deelnemen aan het angstgeheugen op de lange termijn onduidelijk.

Hoewel men denkt dat consolidatie van het angstgeheugen op de lange termijn afhangt van progressieve of sporadische versterking van het kortetermijngeheugen, suggereren verschillende recente onderzoeken dat neuronale ensembles van angstgeheugen op de korte termijn een tijdsafhankelijke reorganisatie ondergaan, resulterend in migratie van het opgeslagen geheugen naar een ander neuronaal ensemble, hetzij binnen dezelfde hersenregio (DeNardo et al., 2019) of totaal verschillende hersenregio’s (Frankland en Bontempi, 2005; Do Monte et al., 2016).

De basolaterale amygdala (BLA) is een hersengebied dat een integraal onderdeel is van angstherinnering en is betrokken bij zowel recente als verre angstherinneringen (Maren et al., 1996; Gale et al., 2004; Kitamura et al., 2017; Liu et al. ., 2022).

Met name hebben rapporten een specifiek angst-geheugen-engram voor de korte termijn in de BLA beschreven dat (1) wordt geactiveerd tijdens geheugenvorming, (2) wordt gereactiveerd tijdens het oproepen van herinneringen, en (3) in staat is angstachtig gedrag te stimuleren in niet-angstcontexten. Roy et al., 2022; Zaki et al., 2022). De mate waarin een BLA-neuronenensemble dat tijdens geheugenvorming wordt geactiveerd, opnieuw wordt geactiveerd tijdens het ophalen van herinneringen op afstand, blijft echter onzeker.

In deze studie hebben we de hypothese getest dat reactivering van een BLAfear-geheugenensemble wordt waargenomen op een afgelegen tijdstip, drie weken na angstconditionering. Van bijzonder belang is dat de BLA-huiscircuits bijdragen aan zowel aversief als beloningszoekend gedrag (Hu, 2016), waarbij neuronen met een negatieve valentie reageren op angststimuli die specifiek gelokaliseerd zijn in de voorste BLA (aBLA) (Goosensand Maren, 2001; Kim et al., 2016, 2017; Zhang et al., 2020).

Door ons te concentreren op de aBLA, hebben we transgene muizen van de tweede generatie Targeted Recombination in Activated Populations (TRAP2) gebruikt (DeNardo et al., 2019), waarin Cre-recombinase-activiteit is gekoppeld aan c-fos onmiddellijke vroege genpromotorversterkerelementen door middel van een verbeterde Cre -oestrogeenreceptor (ER)-complex. Neuronen die dit complex tot expressie brengen, kunnen aanhoudende Cre-recombinatie ondergaan, dat wil zeggen, ze kunnen worden "TRAPed", door toediening van de ER-agonisttamoxifen of zijn korter werkende analoog 4-hydroxytamoxifen (4-OHT), waardoor aanhoudende expressie van Cre mogelijk is. -afhankelijke effectorreportermoleculen.

Hier kruisten we TRAP2-muizen en de Cre-afhankelijke tdTomato-reporterlijn Ai14 (Madisen et al., 2010) en kwantificeerden we de mate waarin aBLA-neuronen TRAPed (tdTomatopositief) tijdens contextuele angstconditionering worden gereactiveerd (expressie van Fos immunoreactief eiwit) tijdens het oproepen van herinneringen op afstand. 3 weken later.

Net als bij het kortetermijnangstgeheugen ondersteunen onze bevindingen de aanwezigheid van glutamatergische angstgeheugenneuronale ensembles op de lange termijn in de aBLA.

Met name echter was de omvang van een BLA-neuronenensemble, ongeacht of deze werd geactiveerd tijdens conditionering of herinnering op afstand of beide, niet gecorreleerd met angstgedrag, wat erop wijst dat de aard van met angst leren geassocieerde plasticiteit en de uiteindelijke impact ervan op herinnering aan angst op afstand geassocieerd zijn met elektrofysiologische reacties van ensemble-neuronen. , en niet de omvang van de ensemblepopulatie, drijft in de eerste plaats angst-herinneringsgedrag op afstand.

materialen en methodes

Ethische goedkeuring

Experimentele procedures werden goedgekeurd door het Institutional Animal Care and Use Committee van de University of Texas Health San Antonio en conform aan de National Research Council Guide for the Care and Use of Laboratory Animals.

Dieren

Fokparen van homozygote Fos2A-iCreER/2A-iCreER knockin (TRAP2, #030323) en R26Ai14/+ (Ai14, #007914) muizen (Jackson Laboratories) werden gekruist om mannelijke hemizygote TRP2:Ai14-nakomelingen te produceren (Figuur 1A). Na het spenen werden de muizen gegroepeerd en gehuisvest in plastic kooien (29 x 18 x 13 cm) met daarin knaagdierstrooisel (Sani-chips; Harlan Teklad, Madison, WI, VS). Het vivarium werd op temperatuur gehouden (24◦C) met een temperatuur van 14 °C. :10 licht-donkercyclus (licht aan om 06.00 uur). Voedsel en water waren ad libitum beschikbaar. Experimenten werden gestart toen muizen drie maanden oud waren.

Gedragsgewenning

Net als in eerder gepubliceerde onderzoeken (DeNardo et al., 2019) ondergingen muizen vijf opeenvolgende dagen gewenningstraining onmiddellijk vóór contextuele angstconditionering om cfos-inductie te minimaliseren als reactie op experimentele omstandigheden die niet te weinig werden onderzocht (bijv. hanteren, nieuwe contextverkenning, enz.)( Figuur 1B).

Elke dagelijkse gewenningssessie duurde 3 minuten en bestond uit blootstelling aan de conditioneringskamer (HabitestModular System, Coulbourn Instruments). Kamersensorische signalen bestonden uit (1) 70% ethanol (olfactorische signaal), (2) metalen roostervloer (haptische signaal), (3) achtergrond met patroon (visueel signaal) en (4) zichtbaar licht (visueel signaal).

Bovendien werden alle muizen gedurende één minuut in de hand gehouden voordat ze in de conditioneringskamer werden geplaatst en werden ze gedurende 10 seconden zachtjes "geschrobd" bij het verlaten van de kamer. Gewenningssessies werden ontworpen om de behandeling na te bootsen die muizen zouden ervaren op de dag van conditionering, behalve dat er geen intraperitoneale (IP) injecties werden uitgevoerd.

Contextuele angstconditionering

Muizen werden vervolgens willekeurig toegewezen aan door angst geconditioneerde (shock) en contextgeconditioneerde (geen shock/alleen context) groepen. De conditionering begon op dag 0 en bestond uit het plaatsen van muizen in de conditioneringskamer en mochten ze gedurende 2 maanden verkennen. min. Gedurende de daaropvolgende vier minuten ontvingen door angst geconditioneerde muizen een reeks schokken van anderhalve meter met een duur van 1 seconde en een intensiteit van 0.75 mA.

Schokken werden toegediend met tussenpozen die voor de muizen onvoorspelbaar waren, maar toch consistent tussen muizen. Contextgeconditioneerde muizen ondergingen een identiek protocol met uitzondering van voetschokken (Figuur 1C). Na beëindiging van de taak ontving elke muis een injectie van 4-hydroxytamoxifen (4-OHT, 100 mg/kg, IP) opgelost in een 4:1 cocktail van zonnebloem- en ricinusolie, bereid zoals eerder beschreven (DeNardo et al., 2019).

De muizen werden vervolgens teruggebracht naar hun thuiskooien, waar ze ten minste 72 uur ongestoord in de kamer naast de gedragsruimte werden gelaten voordat ze hun normale huisvesting hervatten.

Drie weken na angstconditionering (dag 21) ondergingen muizen geheugenherinneringstests op afstand (Figuur 1D), bestaande uit hernieuwde blootstelling aan de testkamer met sensorische signalen die identiek waren aan die aanwezig tijdens conditionering. Muizen mochten de kamer gedurende 5 minuten verkennen, waarbij angstgedrag (posturale bevriezing) werd gescoord met behulp van FreezeFrame 4 videotrackingsoftware (ActiMetrics, Wilmette IL, VS).

Hersenfixatie en histologie

Negentig minuten na het testen van het geheugen werden de muizen diep verdoofd met isofluraan (5% in zuurstof) en ondergingen vervolgens transcardiale perfusie met 30 ml gehepariniseerde (100 U/ml) isotone zoutoplossing gevolgd door 100 ml 4% paraformaldehyde (PFA). )in 0,1 M fosfaatbuffer.

Hersenen werden verwijderd, nagefixeerd in 4% PFA gedurende 6 uur bij kamertemperatuur (~22◦C) en gecryoprotecteerd in 30% sucrose-0.01 M fosfaatbufferzoutoplossing (PBS) gedurende ten minste 2 dagen.

Hersenen werden vervolgens in 30 µm dikke coronale secties gesneden op een ijskoude microtoom (Leica Microsystems, Wetzlar, Duitsland) en secties die de aBLA bevatten (Paxinos en Franklin, 2019), werden opgeslagen in polyvinylpyrrolidon (PVP) cryoprotectant bij −20◦C.

Immunohistochemie

Immunokleuring werd uitgevoerd zoals eerder beschreven (Mitchell et al., 2018; Maruyama et al., 2019).

In het kort werden de secties gewassen in PBS om PVP-cryoprotectant te verwijderen en gedurende 30 minuten geïncubeerd in PBS dat natriumboorhydride bevat (0,5%) om tijdens de fixatie gegenereerde auto-fluorescerende aldehyden te verwijderen. Na aanvullende wasbehandelingen met PBS werden de secties gedurende 2 uur bij ~22◦C geïncubeerd in blokkeerbuffer (3% geitenserum, 0,05% Triton-X-100 in PBS), gevolgd door incubatie bij 4◦C in blokkeerbuffer die apolyklonaal konijn bevat. -Fos primair antilichaam (Ab) gedurende 72 uur (1:1.500, synaptische systemen #226 003) of monoklonaal CaMKII primair Ab van muis gedurende 24 uur (1:500, Enzo Life Sciences, #ADI-KAM-CA002).

Na verder wassen werden de Fos- en CaMKII-coupes afzonderlijk gedurende 2 uur bij ~22◦C geïncubeerd in gebiotinyleerd anti-konijn-IgG secundair Ab van geit (1:250 EMD Millipore #AP132B), gevolgd door serieel wassen in 0. 05 M tris-gebufferde zoutoplossing (TBS) en 0,1 Mnatriumacetaat, vervolgens blootgesteld aan streptavidine-Alexa Fluor 488 (1:250, Invitrogen #S11223) gedurende 1 uur in op TBS gebaseerde blokkeeroplossing.

Tenslotte werden de secties gewassen in Tris-buffer en op objectglaasjes gemonteerd met Fluoromount-G (Invitrogen, #00-4958-02).

Beeldvorming en analyse

Een A{0}}-bit fotomultiplierbuis gekoppeld aan een Zeiss LSM710laser scanning confocale microscoop, uitgerust met geschikte laserlijnen, werd gebruikt om aBLA-beelden vast te leggen met behulp van een 20× objectief (NA 0,8) en een pinhole-grootte van de scankop 47,5 µm. Voor elke afbeelding werd ImageJ-software (NIH, Bethesda, MD) gebruikt om afzonderlijke pixelkaarten van tdTomato (dwz TRAPed, rood) en Alexa-488 (Fos, groen) fluorescentie te genereren.

Pixeldrempelintensiteit en detectie van golflengte-overlapping voor dubbele labeling werden bepaald door weefselsecties te vergelijken die zijn verwerkt met en zonder Fo's primaire Ab zoals eerder beschreven (Mitchell et al., 2018; Maruyama et al., 2019). Gegevens over het tellen van cellen en co-lokalisatie werden verkregen met behulp van de semi-autonome ImageJ-plug-in EzColocalization (Stauffer et al.,2018).

Afbeeldingen van de aBLA werden verdeeld in drie rostr-caudale subregio's van vrijwel gelijke grootte, waarbij elke subregio werd gedefinieerd door een aspecifiek bereik van rostraal-caudale stereotaxische coördinaten ten opzichte van tobregma: rostraal, −0.8 tot −1,1 mm; midden, −1,2 tot −1,5 mm; andcaudaal, −1,6 tot −1,9 mm (Paxinos en Franklin, 2019). De Region of Interest (ROI)-manager in ImageJ werd vervolgens gebruikt om de aBLA te verdelen langs de dorsaal-ventrale en mediaal-laterale kwadranten ten opzichte van de omtrek. Dit sjabloon werd vervolgens toegepast op alle afbeeldingen binnen elke gespecificeerde rostraal-caudale subregio.

De aBLAperimeter-afbakening werd gebruikt met de ImageJ EzColocalizationplug-in om een ​​2-D ruimtelijke grafiek van alle neuronale tellingen in elke afbeelding te genereren. Ruimtelijke plots binnen de rostrale, middelste en caudale subregio's werden vervolgens afzonderlijk over elkaar heen gelegd. Dit resulteerde in 10 angst- en 10 contextplots voor de rostrale subregio, 10 angst- en 13 contextplots voor de middelste subregio, en 12 angst- en 13 contextplots voor de caudale subregio.

Om te corrigeren voor een groter aantal subregio-afbeeldingplots in de contextgroep, gebruikt u correctiefactoren van 1.0(10/10), 0,77 (10/13) en 0,92 (12/13) werden respectievelijk toegepast op de rostrale, middelste en caudale subregiografieken van de contextgroep. Om vertekening van de topografische verdeling van tellingen in de contextgegevens te voorkomen, werd een generator voor willekeurige getallen in MS Excel gebruikt om te identificeren welke specifieke tellingen uit elke aBLA-subregio moesten worden uitgesloten.

Vervolgens hebben we de aBLA-subregio's verder onderverdeeld in kwadranten, aangeduid met 1-4 (zie figuur 2D). Om dit te doen werd de snijpuntcoördinaat (0,0) in MS-Excel bepaald als het punt in het2-D-vlak waarop de oppervlakte van elk kwadrant ongeveer gelijk was aan een vierde van de totale oppervlakte van elke rostraal-caudale subregio. De kwadrantassen en de xy-coördinaten van elke telling werden bepaald en 30◦ met de klok mee geroteerd, waardoor ze werden uitgelijnd met de anatomische as van de aBLA.

Om rekening te houden met kleine variaties in de grootte van subregio's en hun kwadranten, werden de telgegevens genormaliseerd naar het oppervlak (tellingen/mm2), zodat de gerapporteerde waarden de dichtheid van tellingen per subregio of kwadrant vertegenwoordigen.

Om het exciterende fenotype van neuronen gevangen door ons TRAP2-systeem te beoordelen, werd co-lokalisatie van conditionerende TRAPed tdTomato-expressie met calcium-calmoduline-afhankelijke proteïnekinase II (CaMKII), een gevestigde marker van glutamatergische neuronen (McDonald et al., 2002), gekwantificeerd op basis van afbeeldingen van ten minste drie BLA-secties per muis met behulp van de ImageJ-celtellerplug-in.

Statistieken

Statistische tests werden uitgevoerd met Prism 9.5.1-software (GraphPad, San Diego, CA, VS) en omvatten tests voor de normale verdeling van alle datasets met behulp van een Shapiro-Wilk-test. Groepsvergelijkingen voor continue gegevens werden gemaakt met tweezijdige ongepaarde studenten t-tests of door twee- of drieweg-ANOVA gevolgd door respectievelijk de meervoudige vergelijkingstest van Sidak en Tukey, voor paarsgewijze vergelijkingen na significante ANOVA-interacties.

Er werd een correlatieanalyse binnen de groep uitgevoerd om de r-coëfficiënt van Pearson en de bijbehorende P-waarde te bepalen. Correlaties werden tussen groepen vergeleken met behulp van Fisher'sZ-transformatie (aanvullende tabel 1). Groepsgegevens worden uitgedrukt als gemiddelde ± SEM. De statistische significantie werd vastgesteld op P < 0.05.

Resultaten

Angstconditionering induceert een angst-geheugen-engram op afstand

Om vast te stellen in welke mate aBLA-neuronen die worden geactiveerd tijdens de vorming van angstgeheugen, worden gereactiveerd tijdens het oproepen van herinneringen op afstand, ondergingen muizen angst- (n=5) of context- (n=5) conditionering, gevolgd door injectie van 4-OHT (Figuren 1A – C).

Bij onderzoek naar de vorming van angstgeheugen (dwz het leren van angst), werd een significante interactie tussen behandeling (shock vs. geen shock) en tijdsinterval (interval van 30 s na elke schok) op bevriezingsgedrag waargenomen [tweeweg-ANOVA, F(5, 40)=6.733, P=0.0001]. Met angst geconditioneerde muizen vertoonden een langere bevriezingstijd ten opzichte van de basislijn na shock 3 (275 ± 68% van BL, P=0.0203), 4 (486 ± 76% van BL, P < 0,0001) en 5 (402 ± 26 % van BL, P <0,0001), en ten opzichte van contextgeconditioneerde muizen na shock 4 (251 ± 38% van context, p <0,0001) en 5 (375 ± 25% van context, p <0,0001).

Zoals verwacht bleek uit hernieuwde blootstelling aan de conditioneringskamer voor het ophalen van herinneringen op afstand op dag 21 na conditionering dat met angst geconditioneerde muizen aanzienlijk meer tijd doorbrachten met bevriezen vergeleken met contextcontroles [346 ± 18%, ongepaarde t-test, t(8) {{7} }.16, P < 0.0001] (Figuur 1D).
Gezamenlijk geven de gegevens in Figuur 1 aan dat ons angstconditioneringsprotocol een robuuste vorming van angstherinneringen en het oproepen van angstherinneringen op afstand veroorzaakte.

Angstleren induceert een robuuste subregiospecifieke aBLA voor ensemble

Analyse van TRAPed-tellingen (tdTomato +) bracht een significant grotere fos-geactiveerde aBLA-populatie aan het licht bij door angst geconditioneerde (110 ± 6,2) dan bij contextgeconditioneerde (77 ± 3,1) muizen [ongepaarde t-test, t(8)=4 .782, P=0.0014] (Tabel 1). Zoals verwacht was ~70% van de context- en ~80% van de door angst TRAPed neuronen (n=6 aBLAsecties/groep) CaMKII + (aanvullende figuren 1A, B), wat aangeeft dat het voornamelijk glutamatergische projectie-neuronen waren.

Net als bij eerdere rapporten (Kim et al., 2016) hebben we theaBLA verdeeld in drie rostrrocaudale subregio's: rostraal, midden en caudaal (figuren 2A-C) en vergeleken we TRAPed-tellingsdichtheden (tellingen/mm2) over subregio's binnen en tussen behandelingsgroepen (Figuur 2D). Tweeweg-ANOVA onthulde een significante interactie tussen subregio en behandeling [F(2,24)=7.7099,P=0.0038].

Uit analyses binnen de groep bleek dat de TRAPed-tellingsdichtheid groter was in de middelste aBLA-subregio in angst- (239 ± 9) en context- (144 ± 12) groepen ten opzichte van de rostrale (angst: 86 ± 6, P < { {8}}.0001; context: 81 ± 9, P=0.0035) en caudaal (angst: 123 ± 15, P < 0,0001; context: 90 ± 12, P {{20 }}.0132) subregio's.

Uit analyse tussen groepen bleek dat de TRAPed-tellingsdichtheid significant groter was in de middelste subregio van door angst geconditioneerde muizen (P < 0.0001).

Om de locatie van TRAPed-neuronen verder af te bakenen, hebben we de rostrale, middelste en caudale aBLA-subregio's elk in vier kwadranten onderverdeeld (Figuur 2E). In de middelste subregio werd een belangrijk behandelingseffect op de tellingsdichtheid waargenomen [drieweg-ANOVA, F(1,32)=17.44, P=0.0002] met hogere TRAPedcount-dichtheid in de angstgroep dan in de contextgroep in kwadranten 3 (218 ± 29 versus 107 ± 17, P=0.0031) en 4 (240 ± 16 versus 101 ± 12, P < 0,0001).

We evalueerden verder de TRAPed-tellingsdichtheden binnen de groep en binnen het kwadrant in aBLA-subregio's (Figuur 2E en aanvullende tabel 2). Met name vergeleken met de rostrale subregio (59 ± 8) had kwadrant 2 van de angstgroep een hogere TRAPed-dichtheid in zowel het midden (245 ± 21, P < 0.0001) als caudale (172 ± 23, P=0.0040) subregio.

Vervolgens evalueerden we de relatie tussen bevriezingsgedrag en de grootte van het TRAPed neuronale ensemble in de gehele aBLA, in de middelste subregio ervan, en in kwadranten van de middelste en caudale subregio's waar de dichtheid van het ensembleaantal verschilde tussen context- en angstgeconditioneerde groepen. Er werden geen significante correlaties waargenomen in de angst- of contextgroep (Figuur 2F), wat suggereert dat angstgedrag niet de omvang weerspiegelt van het angstlerende ensemble in een BLA-subregio.

Gezamenlijk geven de bevindingen in Figuur 2 aan dat angstconditionering resulteerde in een groter fos-ensemble in de aBLA dan contextconditionering. Ensemble-neuronen waren het dichtst gelokaliseerd in de middelste aBLA-subregio, maar angstgedrag correleerde niet met de omvang van de ensemble-populatie.

For more information:1950477648nn@gmail.com