Anterieure thalamische kernen: een cruciaal substraat voor niet-ruimtelijk gekoppeld geheugen bij ratten, deel 2

2|MATERIALEN EN METHODES

2.1|Dieren en huisvestingsomstandigheden

Mannelijke Long-Evans-ratten (12 maanden oud; gemiddeld 630 g) werden gehuisvest in groepen van drie of vier in Makrolon-kooien (48,28,22 cm) in een omgekeerde 12-uur licht-donkercyclus (licht aan om 20.00 uur). ).

Gedragstesten vonden plaats in de donkere fase van de lichtcyclus, vijf sessies per week; observaties bevestigden dat ratten relatief actiever waren tijdens de donkere fase. Ratten werden met water ad libitum op 85% van hun lichaamsgewicht gehouden; het voedsel was ad libitum voor en na de operatie voor postoperatief herstel.

Chirurgie is het proces waarbij ziekten worden behandeld en de lichamelijke gezondheid wordt verbeterd. Het herstelproces na een operatie vereist speciale aandacht. Naast lichamelijk herstel vereist een goed gevoel ook aandacht voor geheugenherstel. Er bestaat een sterk verband tussen postoperatief herstel en geheugen.

Tijdens de operatie beïnvloeden factoren zoals de reactie van het lichaam op tegenslagen en de effecten van verdovingsmiddelen vaak de geheugenfunctie van de hersenen. Nadat het lichaam is hersteld, moet u letten op het handhaven van een goed dieet, matige lichaamsbeweging en voldoende slaap. Tijdens de herstelperiode buiten het ziekenhuis moet u overmatige activiteiten blijven vermijden en een comfortabele lichaamstoestand behouden.

Naast leefgewoonten zijn ook redelijke psychologische aanpassingen nuttig bij het herstellen van de gezondheid en het geheugen. Ontspan jezelf, behoud een vredige geest en help jezelf aan te passen aan geheugenherstel. Tegelijkertijd moet u actief deelnemen aan recreatieve activiteiten en communiceren met familie en vrienden om uw hersenen actief te houden en uw cognitieve vaardigheden en geheugen te verbeteren. Deze activiteit kan geleidelijk worden verhoogd en kan in principe één keer per week worden gedaan.

Kortom, het herstelproces na een operatie vereist algemene aandacht. Het handhaven van goede leefgewoonten en psychologische aanpassingen spelen een zeer belangrijke rol bij het bevorderen van lichamelijk herstel en geheugenherstel. Laten we het positief tegemoet treden, met het volste vertrouwen en de hoop. We moeten het geheugen verbeteren, en Cistanche deserticola kan het geheugen aanzienlijk verbeteren, omdat Cistanche deserticola ook de balans van neurotransmitters kan reguleren, zoals het verhogen van de niveaus van acetylcholine en groeifactoren. Deze stoffen zijn erg belangrijk voor het geheugen en het leren. Bovendien kan Vlees ook de bloedstroom verbeteren en de zuurstoftoevoer bevorderen, wat ervoor kan zorgen dat de hersenen voldoende voedingsstoffen en energie ontvangen, waardoor de vitaliteit en het uithoudingsvermogen van de hersenen worden verbeterd.

Klik op manieren kennen om de hersenfunctie te verbeteren

Alle procedures voldeden aan de goedgekeurde richtlijnen van de Animal Ethics Committee van de Universiteit van Canterbury. Vier groepen ratten werden willekeurig ingedeeld nadat ze vóór de operatie vertrouwd waren geraakt met het doolhof met de radiale armen (RAM) en de landingsbaan. De vier groepen waren bilaterale ATN-laesies met of zonder een spoor tussen geur- en objectstimuli wanneer ze werden getraind in de gepaarde taak en de overeenkomstige twee Sham-laesiegroepen.

De uiteindelijke steekproefgroottes waren (1) Sham-No Trace=7 (dwz een Sham-laesiegroep zonder interval tussen geur- en objectstimuli gebruikt in de taak van gepaarde geassocieerden); (2) Sham-Trace=7 (Shamlesion-groep krijgt een 10-s spoor tussen de presentatie van de geur en de objectstimuli); (3) ATN-Geen tracering=8; en (4) ATN-Trace=9. Een extra ATN-laesierat werd uitgesloten omdat deze niet aan de laesiecriteria voldeed (zie hieronder).

2.2|Chirurgie

Ratten werden verdoofd met isofluraan (inductie 4%; onderhoud 2,5%) en in een stereotaxisch apparaat met atraumatische oorstaven geplaatst (Kopf, Tujunga, CA). De snijtandstaaf werd ingesteld op 7,5 mm onder de interaurale lijn om schade aan de fornix tot een minimum te beperken.

Op elk halfrond werden twee infusies gericht op de anteroventrale kern (AV; boven en onder), en één infusie was gericht op de anteromediale kern (AM). Bij elke operatie werd gebruik gemaakt van één vijf anterieure-posterieure (AP) coördinaten ten opzichte van de Bregma-Lambda-afstand van een individuele rat (alle waarden in mm). Voor AV-laesies waren de AP-coördinaten: 2,20 voor B – L 6,9 – 7,2; 2,25 voor B–L 7,3 tot 7,6; 2,30 voor B–L Groter dan of gelijk aan 7,7. De AV-infusies werden uitgevoerd op 5,68 en 5,73 onder de dura en 1,52 lateraal van de middellijn.

De AM-infusie werd {{0}},1 mm meer anterieur gedaan dan de AV-coördinaat, op 5,76 onder de dura en 1,16 lateraal; de eerste AM-laesie werd gemaakt nadat alle AV-infusies waren voltooid en begon contralateraal ten opzichte van de laatste AV-laesieplaats. 0.15 M N-methyl-d-aspartaat (NMDA; Sigma, CastleHill, NSW) in 0.1 M fosfaatbuffer (pH 7,20) werd op elke plaats geïnfundeerd met een snelheid van 0,04 ul per minuut via een 2.5-ulHamilton-spuit (Reno, NV, VS) met behulp van een micro-infusiepomp (Stoelting, Wood Dale, IL).

De AV-sites per halfrond ontvingen respectievelijk {{0}}.12 en 0.10 ul voor de dorsa- en ventrale sites; Voor elke AM-plaats werd 0,06 µl gebruikt. De injectienaald bleef na de infusie 3 minuten per zijde in situ.
Bij schijnlaesieoperaties werd dezelfde procedure toegepast, maar de naald werd verlaagd tot 1 mm boven de bovenste AV- en AM-laesieplaatsen, zonder dat er een infusie werd gegeven.

2.3|Gedragstaken

Een RAM met acht armen bevestigde de verslechtering van het ruimtelijk geheugen bij ratten met ATN-laesie na een operatie. Er werd een landingsbaanapparaat gebruikt om de ratten te trainen in alle niet-ruimtelijke taken, dat wil zeggen eenvoudige geur- en eenvoudige objectdiscriminatie en geur-object en geur-spoor-object gepaarde taken.

Vóór de operatie werden ratten met een voedselbeperking gewend aan de achtarmige RAM, hieronder beschreven, om 0,1 g chocoladestukjes (Foodfirst LTD Auckland, NZ) op te halen en zich aan te passen aan het openen en sluiten van armdeuren. Op een rode perspex landingsbaan (Figuur 1) waren ratten ook zo gevormd dat ze met hun neus een 2- cm ronde witte plastic dop in de neus staken, die zich 10 cm boven het vloerniveau bevond en in het midden van een dunne spons op een doorzichtig perspex inzetstuk dat was vastgemaakt aan de eindmuur.

Ze waren ook zo gevormd dat ze (met behulp van een neus of poot) een voorwerp dat aan de achterkant van de basis scharnierend was, naar de bovenkant van een voedselbak konden duwen die in het midden van een houten blok van 5,8,5,3 cm was verzonken. Het eten bevatte chocoladestukjes (en bevatte ontoegankelijk voedsel onder de uitsparing). Het object dat voor de voortraining werd gebruikt, werd niet opnieuw gebruikt. Na de operatie werden herstelratten opnieuw vertrouwd gemaakt met zowel het RAM als de landingsbaan.

2.4|Ruimtelijk werkgeheugen in het RAM

Na de operatie werd het ruimtelijke werkgeheugen getest met behulp van het RAM-geheugen dat zich in het midden van een raamloze kamer (3,3 m) bevond. Het doolhof had een grijs geschilderde houten centrale hub van 35 cm breed met acht aluminium armen (65 cm lang, 8,6 cm breed, met 4,5 cm hoge randen), 67,5 cm boven de vloer van de kamer. Heldere perspexwanden (19 cm lang en 25 cm hoog) strekten zich uit langs één zijde van elke arm vanaf de naaf om te voorkomen dat ratten tussen de armen springen.

Aan het uiteinde van elke arm werd een zwart houten voedselbakje (5 x 8,5 x 3 cm) geplaatst, met daaronder ontoegankelijk voedsel. Tijdens het testen waren in elk voedselbakje aan het begin van elke arm 2 0,1 g chocoladestukjes aanwezig. proces. Doorzichtige perspex guillotinedeuren, die door een katrolsysteem van onder de naaf omhoog konden worden getild, controleerden de toegang tot de naaf en de armen.

Tien opeenvolgende dagen formele training in het RAM werden gebruikt om het ruimtelijk werkgeheugen te testen. De rat werd in de centrale hub geplaatst en 10 seconden later werden alle acht armen geopend en mocht de rat een keuze maken, gedefinieerd als beide achterpoten over een armdrempel. Zodra de rat een arm was binnengedrongen, werden alle deuren gesloten en werd hij vijftien seconden lang aan de arm vastgehouden, ongeacht of hij een juiste keuze maakte.

De rat werd vervolgens weer in de centrale hub toegelaten en daar tien seconden vastgehouden voordat alle deuren opnieuw werden geopend om een ​​andere armkeuze mogelijk te maken. Het onderzoek eindigde toen de rat alle acht armen had bezocht, twintig armkeuzes waren gemaakt of tien minuten waren verstreken.

2,5|Niet-ruimtelijke taken: eenvoudige discriminatie en gepaard leren

Voor zowel eenvoudige discriminatie- als duo-taken werd dezelfde rode perspex-baan (93 x 26 x 26 cm) gebruikt, geplaatst op een tafel van 75- cm hoog (Figuur 1). De landingsbaan kon worden gedeeld door drie verticaal verwijderbare deuren (rood perspex, 26-26 cm) die werden geselecteerd op basis van de specifieke gedragstaak. Ter kennismaking: de 6,5 x 6 x 8 mm dunne spons met de dop in het midden bevatte een chocoladevoedselbeloning (Figuur 1).

De spons werd bevestigd aan een verwijderbare deur in de landingsbaan (voor de taken van de gekoppelde medewerkers) of aan de eindwand van de landingsbaan (voor de eenvoudige discriminatietaak). Voor elke geur werd een andere Doorplus-spons gebruikt, die naast het recipiënt werd doordrenkt met 5 ml zonnebloemolie gemengd met 20 µl essentiële oliën uit Nieuw-Zeeland.

De geuren waren citroen en kruidnagel voor de taken van de paren, en kaneel en limoen voor de eenvoudige onderscheidingstaken, of omgekeerd in tegengestelde groepen. Lichte en visueel onderscheidende voorwerpen (Figuur 1) werden met een scharnier aan de achterkant van de basis aan de bovenkant van de voedselput vastgemaakt, zodat een rat het voorwerp gemakkelijk naar achteren kon duwen (neus of poot) om de put te doorzoeken op voedselbeloning.

Een houten frame (1,8 m hoog vanaf de vloer 1,3 m breed), gedrapeerd met zwarte gordijnen, omsloten alle zijden van het testgebied om ruimtelijke signalen tijdens het testen te verminderen.

Bij de eenvoudige discriminaties (alleen geur; alleen object) en de gepaarde taken werd gebruik gemaakt van een 'go/no-go'-procedure.

De eerste proef voor elke sessie begon door de rat 120 seconden in het startgebied vast te houden om opnieuw te acclimatiseren en de verwondering te bereiken; daaropvolgende proeven gebruikten 20 seconden in dit startgebied. Allrats ontving twaalf samengevoegde onderzoeken per dagelijkse sessie, met sixgo (beloonde) en zes no-gos (niet-beloonde) onderzoeken in apseudo-gerandomiseerde volgorde. Tijdens een sessie werden niet meer dan drie go- of drie no-go-trials achter elkaar uitgevoerd.

Geen van de vier verschillende paren geur-objectstimuli werd herhaald tijdens opeenvolgende onderzoeken. Correcte items in de eenvoudige discriminatietaken en correcte stimulusparen in de gepaarde taken werden gecompenseerd door de ratten.

Voor de eenvoudige geuronderscheiding werd een reactie gedefinieerd als het steken van de neus in de dop in het midden van de geurige spons; Alleen het snuiven van de spons werd als een no-go-reactie beschouwd. Er was altijd voedsel aanwezig in de dop in het midden van de spons voor de geur-object-geassocieerde taken; het go/no-go-aspect verwijst hier naar de vraag of het object werd geduwd om te onthullen of er een voedselbeloning onder zat, aan het einde van de landingsbaan.

Voor objecten werd een reactie gedefinieerd als elke duw met een neus of poot waardoor het object naar achteren kantelde. De latentie vanaf het moment dat de laatste deur werd opgetild en wanneer de rat interactie had met de geur (neus in de dop steken; voor eenvoudige geuronderscheiding) of met het object (teruggeduwd op het scharnier, voor eenvoudige objectonderscheiding en gepaarde taken) was gemeten met een stille stopwatch (Dick Smith, Nieuw-Zeeland).

De waarnemer zat tussen de gordijnen en naast de landingsbaan om de deuren te bedienen en het gedrag vast te leggen. Een proef werd als 'correct' bestempeld als de rat binnen 8 seconden reageerde op de go-proeven, of niet binnen 8 seconden reageerde op de no-go-proeven.

2.6|Simpele discriminaties

De helft van de ratten kreeg training in de eenvoudige geuronderscheidingstaak, gevolgd door de eenvoudige objectonderscheiding en vice versa voor de andere helft. De latentie tussen Deur X (Figuur 1a) en de interactie met de geur of het object aan het einde van de landingsbaan werd geregistreerd. Ratten werden getraind in de eenvoudige geur- en eenvoudige objectonderscheidingstaak totdat ze het criterium bereikten (80% correct gedurende twee opeenvolgende dagen).

Voor de eenvoudige geuronderscheidingstaak werd bij elke proef één enkele geur gepresenteerd. De rat moest onderscheid maken welke van de twee geuren gepaard ging met een voedselbeloning die in de spons aan het einde van compartiment B werd gepresenteerd (figuur 1a).

Bij de eenvoudige objectdiscriminatietaak werd bij elke proef één enkel object gepresenteerd aan het einde van compartiment B (niet weergegeven in figuur 1). Therat moest leren welke van de twee objecten gepaard ging met een voedselbeloning die onder het object werd gepresenteerd.

2,7|Gekoppelde taken (trace en no-trace) Bij deze taken werd een nieuwe lay-out van verticaal verwijderbare deuren gebruikt (Figuur 1). De ratten leerden welke van twee geur-objectparen beloond zouden worden (bijv. Geur 1 + ObjectA en Geur 2 + Object B) en welke paren niet beloond werden (dat wil zeggen Geur 1 + Object B en Geur 2 + Object A).

Ongeacht de paring ontvingen ratten altijd een beloning voor de presentatie van de geur wanneer ze in het tweede compartiment van de landingsbaan werden toegelaten. Dit was compartiment C voor de 'no-trace'-toestand waarin compartiment A niet werd gebruikt en compartiment B het startcompartiment. De geur bevond zich aan het einde van Compartiment B voor de 'spoor'-toestand, waarbij Compartiment A als startvak werd gebruikt.

Ratten in de toestand van sporen werden onderworpen aan een vertraging van 10- s tussen de presentatie van de geur en objectstimuli, doordat ze in compartiment C werden vastgehouden, terwijl ratten in de toestand zonder sporen onmiddellijk na hun interactie met de geur aan het object werden blootgesteld (na Zowel in omstandigheden met sporen als zonder sporen hebben we de latentie geregistreerd om Compartiment D te doorkruisen, vanaf het moment dat DoorZ werd opgetild totdat de rat interactie had met het object of er gedurende 8 seconden geen interactie mee had.

Twee groepen ratten (Sham-laesie en ATN-laesie) werden getraind op de geur-object-gepaarde-geassocieerde taken (No Trace-groepen), en twee overeenkomstige groepen werden getraind op de geur-spoor-object-gepaarde-geassocieerde taak (Trace-groepen) totdat ze criterium bereikt (80% correcte pogingen over 3 dagen) of maximaal 50 dagen.

2,8|Retentietest na overname

Het vasthouden van de gepaarde geassocieerde taak voor elke rat werd 5 dagen na het bereiken van het criterium of na 50 dagen training uitgevoerd. Deze sessie maakte gebruik van 12 verzamelde, beloonde/niet-beloonde proeven op één enkele dag, op dezelfde manier als eerder voor die rat.

2,9|Histologie

2.9.1|Perfusie en weefselverzameling

Op de drie dagen vóór de retentietest werden afzonderlijke ratten gedurende 90 minuten vertrouwd gemaakt met een lege, schone kooi in een donkere, stille kamer. Onmiddellijk na de laatste proef in de retentietest werd de rat 90 minuten vóór de perfusie in zijn kooi in de bekende donkere, stille kamer geplaatst.

Ratten werden diep verdoofd met natriumpentobarbital (125 mg/kg) en transcardiaal geperfuseerd met zoutoplossing gevolgd door paraformaldehyde [4% PFA in 0.1 M fosfaatbuffer (PB)] om de hersenen te fixeren. Hersenen werden achteraf gefixeerd in 4% PFA, gevolgd door minimaal 48 uur in een langetermijnoplossing (20% glycerol in 0,1 M PB). Coronale 40-μm-coupes werden verzameld met behulp van een vriesmicrotoom (Thermo Fisher, VK) en bewaard in een cryo-beschermende oplossing (30% glycerol, 30% ethyleenglycol in 0,1 M PB) bij 20 C totdat ze werden verwerkt voor immunohistochemie.

De coronale secties werden in twee afzonderlijke series verzameld. In de eerste serie werden opeenvolgende secties vastgelegd in vijf cryovials voor immunohistochemie (dat wil zeggen één op de vijf). Deze serie omvatte een voorste blok met secties van de prefrontale cortex tot het septumgebied (ongeveer {{0}},7 tot 0,6 mm van Bregma) en een posterieur blok van de mediodorsale thalamus (ongeveer 3,5 mm van Bregma) tot de caudale retrospleniale cortex.

De tweede serie legde opeenvolgende secties vast voor laesieverificatie. Deze secties werden verzameld in vier cryovials van onmiddellijk anterieur van de ATN tot de posterieure mediodorsale thalamus (ongeveer 0,6 tot 3,5 mm van Bregma).

2.9.2|Neu-N-kleuring en ATN-laesieverificatie

Vrij zwevende secties door het hele ATN-gebied werden gewassen (3 10 min) in 0.1 M fosfaatgebufferde zoutoplossing met Triton-X (0,2%; PBSTx) vóór incubatie in endogene peroxidase-blokkerende buffer gedurende 30 minuten. min [1% waterstofperoxide (H2O2), 50% methanol (CH3OH) in 2%PBSTx].

Secties werden overnacht geïncubeerd bij 4 C inanti-NeuN primair antilichaam (1:5000; monoklonaal-MouseCat# MAB377; Millipore, Californië, VS) in PBSTx met 1% normaal geitenserum (NGS; Life Technologies, NZ).

Overtollige antilichaambuffer werd verwijderd met PBSTx en gevolgd door incubatie in gebiotinyleerd geit-anti-muis secundair antilichaam (1:1000 Cat# BP-9200-50: VectorLaboratories, Californië, VS) overnacht bij 4°C in PBSTx en 1% NGS. Secties werden gedurende 2 uur bij kamertemperatuur in ExtrAvidin (peroxidase geconjugeerd; 1:1000; Sigma, NSW Australië), PBSTx en 1% NGS geplaatst.

Om overtollig ExtrAvidin en Triton X{{0}} te verwijderen, werden de secties gewassen in PBS, PB en vervolgens Tris-buffer (pH 7,4 in gedestilleerd H20) om de secties voor te bereiden voor visualisatie met vers bereid diaminobenzidine ( DAB 0,05%; Sigma, in 0,01% H2O2 in Tris-buffer).

De DAB-reactie (ongeveer 5 minuten) werd gestopt met behulp van Tris-buffer (1 wasbeurt van 10 minuten), en secties werden een nacht bij 4°C in PB geplaatst voordat ze op gegelatineerde objectglaasjes werden gemonteerd en gedroogd. De objectglaasjes werden gedehydrateerd met behulp van alcohol (70%-100%) voordat ze werden geklaard inxyleen en gemonteerd met DPX (06522; Sigma-Aldrich) en een dekglaasje.

Het aantal Neu-N-positieve cellen in de ATN werd gebruikt om de omvang van de laesie te bepalen. Hierbij werden secties van zowel de linker- als de rechterhersenhelft gebruikt voor elke sectie van vier 40-μm in de hele ATN en het gebied gekwantificeerd met behulp van ImageJ (NIH, VS). NeuN-positieve celkleuring werd gefotografeerd bij 5 doelstellingen op een LeicaDM6 B rechtopstaande microscoop en DFC7000T camera (Leica Microsystems, Duitsland).

Geautomatiseerde tellingen van de cellen werden verkregen via ImageJ (beeldanalysesoftware, National Institute of Health, NIH, VS). Het gebied rondom neuronen in het ATN-gebied werd handmatig geselecteerd en de afbeeldingen werden geconverteerd naar een {{0}}bitgrijstinten, de achtergrond werd afgetrokken (rollend=40), geconverteerd naar masker en de waterscheidingsfunctie werd toegepast, en alle neuronale cellen boven de drempel ('MaxEntropy'-drempel, circulariteit 0.5–1.0) werden geteld.

De detectiedrempel was voor alle secties hetzelfde. Geautomatiseerde NeuN-gekleurde celkernen werden geteld bij negen van de schijnratten (vijf in de Sham-Trace-groep en vier in de Sham-No Trace-groep) om het aantal cellen in de ATN tot expressie te brengen.

Geautomatiseerde tellingen van NeuN-gekleurde kernen van gespaarde cellen bij alle ratten met ATN-laesie werden vergeleken ten opzichte van de gemiddelde telling van NeuN-cellen waargenomen bij de schijnratten. Aanvaardbare laesies werden gedefinieerd als het bereiken van het criterium van 50% celverlies in de ATN, met een minimum van 25% per hersenhelft. Dit komt overeen met ATN-laesiecriteria uit eerdere onderzoeken (Mitchell & Dalrymple-Alford, 2005, 2006; Perry et al., 2018).

2.9.3|Zif268 immunohistochemie

Vrij zwevende secties werden op een vergelijkbare manier verwerkt als voor NeuN, maar geïncubeerd in polyklonaal Zif268-primair antilichaam van konijn (Egr-1; 1:1000 Cat# sc-110; Santa CruzBiotechnology, VS) gedurende 72 uur bij 4 C in PBSTx met 1% NGS, gevolgd door incubatie overnacht in gebiotinyleerd geit-anti-konijn secundair antilichaam (1:1000: Vector LaboratoriesBA-1000) in PBSTx en 1% NGS.

Na DAB-visualisatie (18 min.) werd Zif268-positieve celkleuring in elk interessegebied gefotografeerd met een 10 objectief met een lichtmicroscoop (Leica, Duitsland). Geautomatiseerde tellingen van de cellen werden verkregen via ImageJ ( NIH, VS) op dezelfde manier als NeuNpositieve cellen, behalve dat de circulariteit werd ingesteld op 0.65–1.0.

Tellingen van Zif268-positieve cellen voor alle regio's maakten gebruik van hetzelfde drempelalgoritme, waarbij tussen twee en zes secties per interessegebied in elke gekwantificeerde rat werd berekend. Er werd gebruik gemaakt van het gemiddelde Zif268-positieve celaantal per mm2 over secties (van beide hemisferen) binnen een interessegebied.

2.10|Gegevensanalyse

ANOVA met behulp van Statistica (v13; Dell Inc.) werd uitgevoerd om de gemiddelde verschillen tussen de vier groepen ratten (Sham-No Trace, Sham-Trace, ATN-No Trace en ATNTrace) te testen. Er werden dagenlang factoren voor herhaalde metingen toegevoegd (RAM en eenvoudige discriminatie), blokken van proeven (taken met gepaarde geassocieerde personen) en Zif268-tellingen over gerelateerde regio's of subregio's van belang.

De ANOVA voor zowel de RAM- als de eenvoudige discriminatietaken vergeleek vier groepen om te bevestigen dat de twee Sham-laesie- en twee ATN-laesiegroepen consistent waren met elkaar, maar merk op dat er geen spoorcomponent in de RAM of eenvoudige discriminatietaken zat. Voor zowel eenvoudige discriminatie als gepaarde taken op de startbaan werd een wederzijdse transformatie van latentiegegevens in individuele tests gebruikt om homogeniteit van variantie te garanderen.

Op elke willekeurige testdag genereerden de getransformeerde latenties een gemiddelde latentie voor elk van de zes niet-beloonde proeven en de zes beloonde proeven. Voor de eenvoudige discriminatietaken analyseerden we de gemiddelde latentieverschilscore (het gemiddelde van beloonde onderzoeken minus het gemiddelde van vervolgens niet-beloonde onderzoeken), maar niet de beloonde en niet-beloonde onderzoeken afzonderlijk vanwege een fout in de gegevensopslag.

Alle drie de latentiemetingen waren beschikbaar voor de gepaarde geheugentaken (niet-beloonde proeven, beloonde proeven en latentieverschil). Om rekening te houden met meerdere vergelijkingen en om Type I- en Type II-fouten in evenwicht te brengen, gebruikten we het significantieniveau van p < 0.02 voor gedragsanalyses, aangezien er drie gerelateerde metingen waren in de gepaarde-associate-taak (niet-beloonde onderzoeken, beloonde onderzoeken en gemiddeld latentieverschil).

Er waren zes primaire analyses voor interessegebieden voor Zif268-expressie, dus de significantie in deze analyses werd vastgesteld op p < 0.01. Posthoc Newman-Keuls (NK)-tests beoordeelden paarsgewijze groepsverschillen. Er werd gebruik gemaakt van een eenvoudige hoofdeffectenanalyse als er sprake was van significante interacties waarbij factoren van herhaalde metingen betrokken waren.

3|RESULTATEN

3.1|Verificatie van laesies

Op één na voldeden alle 18 ratten met ATN-laesies aan het aprioricriterium van 50% bilaterale schade aan de ATN en minimaal 25% per hersenhelft. De mediane bilaterale schade bedroeg 76% voor beide ATN-laesiegroepen (bereik: ATN-No Trace, 61%–93%; ATN-Trace, 63%–93%; Figuur 2). De uitgesloten rat had slechts een bevredigende laesie op één hersenhelft (48% totaal, 75% links en 20% rechts).

Figuur 2d laat zien dat de NeuN-tellingen voor ATN-neuronen bij de ratten met ATN-laesie (M=3388, SD=2024) allemaal ruim onder de waarden lagen die werden gevonden bij de ratten met schijnlaesie (M=15, 339, SD=1065; deze telling was vergelijkbaar met die gerapporteerd door Frost et al., 2020). Acht van de 17 laesieratten (vier in de Trace-groep en vier in de No-Trace-groep) hadden geen schade aan de mediodorsale thalamus (MD) of reünies/rhomboïde (Re/Rh) kernen, en er was relatief weinig schade aan de laesieratten. deze structuren bij de overige negen ratten met laesies.

Wanneer MD-schade optrad, was dit in de anterieure aspecten die grenzen aan de ATN. De MD-schade werd dus geschat op ongeveer {{0}},72 tot +2,10 mm vanaf Bregma, waar het celverlies over het geheel genomen varieerde van 0% tot 41%. groep (mediaan=21%). Toen Re/Rh-schade optrad, bevond deze zich ook in de buurt van de ATN-regio, dus werd deze geschat op ongeveer 1,08 tot 2,04 mm van Bregma, waar deze varieerde van 0% tot 33% (mediaan=6%). Merk op dat deze percentages letselwaarden niet de gehele MD- en Re/Rh-regio's vertegenwoordigen, omdat de achterste gebieden van beide kernen intact waren bij alle ratten met ATN-laesie.

For more information:1950477648nn@gmail.com