Cistanche Deserticola-polysacchariden hebben een neuroprotectief effect

voor meer informatie:Ali.ma@wecistanche.com

Yue Liu, et al

Abstract:

Ischemie beroerte is een ziekte met een hoge morbiditeit en mortaliteit.Cistanchedeserticolapolysachariden(CDP) bezitten een breed scala aan gunstige effecten, waaronder hepatoprotectie en immuunhomeostase. Voor zover we weten, is het beschermende effect van CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)op neuronen die beschadigd zijn door zuurstof-glucose deprivatie/reperfusie (OGD/RP) is niet onderzocht. In deze studie verwondde OGD/RP een PC12-celmodel. In het kort, CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)({{0}},05, 0,5 en 5 ug/ml) werd vóór reperfusie toegediend. Het beschermende effect van CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)werd vervolgens geëvalueerd op basis van cellevensvatbaarheid, lactaatdehydrogenase (LDH) lekkage, [Ca2 plus] I, mitochondriale membraanpotentiaal (MMP) en celapoptose, en de andredoxstatus na reperfusie werd geëvalueerd door reactieve zuurstofspecies (ROS), katalase ( CAT), glutathionperoxidase (GSH-Px) en totale antioxidantcapaciteit. Gebaseerd op het feit dat het met de ziekte van Parkinson geassocieerde eiwit DJ-1 deelneemt aan endogene antioxidatie enneuroprotectiefeffecten na ischemie, onderzochten we de interactie tussen CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)en DJ{{0}}. De expressie van DJ-1 werd gedetecteerd door middel van ELISA en Western-blot-analyse, en de translocatie van DJ-1 werd geëvalueerd door middel van immunofluorescentie. Resultaten toonden aan dat CDP (0.05, 0.5, en 5 ug/ml) PC12-celdood verzwakte, MMP en calciumhomeostase bewaarde; remde oxidatieve stress en verminderde celapoptose. Bovendien stimuleerde CDP (5 ug/ml) de secretie en expressie van DJ-1 aanzienlijk. Over het algemeen suggereerden de resultaten dat CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)oefent eenneuroprotectiefeffect tegen OGD/RP-geïnduceerd letsel door oxidatieve stress te remmen en de DJ-1-route te reguleren

trefwoorden:Cistanche deserticola, Polysacchariden, Neuroprotectief, Zuurstofglucosetekort/reperfusie, Oxidatieve stressDJ-1

Klik om producten van Cistanche UK te bekijken

1. Inleiding

Ischemische beroerte is de tweede belangrijkste doodsoorzaak en de belangrijkste oorzaak van langdurige invaliditeit wereldwijd [1]. Het aantal sterfgevallen door een beroerte zal naar verwachting stijgen tot 7,8 miljoen in 2030 [2]. In China overlijden jaarlijks 58 tot 142 per 100,000 mensen aan een beroerte. Er moeten dus effectieve strategieën worden ontwikkeld om ischemie-reperfusieschade om te keren. Uitgebreid bewijs ondersteunt dat oxidatieve stress een belangrijke factor is die de ontwikkeling en progressie van een herseninfarct tijdens reperfusie bevordert [3,4]. Daarom, het ontdekken van effectieveneuroprotectiefmiddelen die in staat zijn om ROS te verminderen en oxidatieve stress te onderdrukken, hebben veel belangstelling gewekt in onderzoek. Het met de ziekte van Parkinson geassocieerde eiwitDJ-1 medieert neuroprotectie door anti-apoptotische en antioxidatieve genexpressie te stimuleren [4,5]. DJ-1 kan worden verplaatst naar de mitochondriën door oxidatieve stress en mitogeenstimulatie en kan worden uitgescheiden naar de extracellulaire matrix onder pathologische omstandigheden, zoals borstkanker, melanoom en OGD/RP-letsel [6]. Bovendien is DJ-1 nuttig bij therapeutische targeting van ischemische neurodegeneratie vanwege zijn cruciale rol in anti-oxidatie [4,7]. In de afgelopen 10 jaar hebben verschillende groepen bevestigd dat DJ-1neuroprotectiefeffecten op in vivofocale cerebrale ischemiemodellen en in vitro OGD/RP-modellen [6-9]. Ondertussen maken sommige geneesmiddelen, waaronder cyclosporine A en natriumfenylbutyraat, neuronale celdood teniet via DJ-1 opregulatie inischemie beroerte [9,10 ].

Cistanchedeserticola, de integrale gedroogde plant vanCistanchedeserticolaYCMa en Cistanche tubulosa Wight, wordt voornamelijk geproduceerd in de woestijngebieden van Noord- en Noordwest-China [11]. C. deserticola is eetbaar en is geëerd als de 'Ginseng van de woestijnen'. Bij acupuntrecept wordt het gebruikt als een behandeling voor chronische nierziekte, seksuele impotentie, vrouwelijke onvruchtbaarheid, leukorroe, metrorragie en seniele constipatie [12].C. deserticola polysachariden, een belangrijke actieve component geïsoleerd uitCistanche deserticola. CDP, moduleert de immuunfunctie en lipidebalans en biedt bescherming tegen veroudering, oxidatie en leverschade.Bovendien biedt CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)voorkomt ischemie-reperfusieschade in het hart en de lever [13,14]. Recente studies meldden dat CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)zijn niet-toxisch [12,15,16], en andere fytochemicaliën gewonnen uit C. Deserticola, waaronder echinacoside, isoacteoside, acteoside en salidroside, vertonenneuroprotectiefeffecten [11,12]. Het mogelijke gebruik van CDP voor de verbetering van ischemische beroerteschade is tot dusver echter niet gemeld.

In de huidige studie veronderstellen we dat CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)remt oxidatieve stress voor neuroprotectie. De mogelijke beschermende effecten van CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)inischemie-beroerte-schade werd onderzocht met behulp van OGD/RP-gewonde PC12-cellen. Onderliggende interacties in verband met DJ-1 werden vervolgens onderzocht.

2. Methoden:

2.1. Celcultuur en OGD/RP-model

PC12-cellen werden gekweekt in RPMI 1640-medium dat 10% FBS bevat bij 37 graden in een normoxische incubator die 5% C02 bevat. Het medium werd elke 48 uur vervangen. OGD/RP-model werd opgesteld. De PC12-cellen werden gewassen en blootgesteld aan Earle's uitgebalanceerde zoutoplossing. Vervolgens werden de cellen gedurende 4 uur overgebracht naar een anaërobe kamer die 5 procent C02 en 95 procent N2 bevatte bij 37°C en vervolgens liet men ze reoxygenatie ondergaan. Tijdens deze stap werd hetzelfde volume kweekmedium aan de cellen toegevoegd. Na reoxygenatie werden de cellen 24 uur op een normoxische incubator geplaatst.

2.2. Medicijntoediening

CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)werd gekocht bij Yuanye Biological Technology Co., Shanghai, China (C23J7Y18405, > 98 procent zuiverheid). Nimodipine, een eerstelijns preventief medicijn voor ischemie beroerte, werd gebruikt als een positieve controleverbinding [17-19]. Nimodipine-injectie was van Bayer Company. Cellen werden willekeurig verdeeld in zes groepen, namelijk de controle, het voertuig (OGD/RP), Nimo (5 ug/ml), CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)(0.05 ug/ml), CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)(0,5 ug/ml) en CDP (5 ug/ml). Nimodipine en CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)werden toegevoegd vóór reperfusie. De controlegroep werd gekweekt in een normaal medium en geïncubeerd onder normoxische omstandigheden.

2.3. Levensvatbaarheid van cellen: MTT- en NRU-assays

PC12-cellen (6 x 103 per putje) werden gezaaid in een 96-putjescultuurplaat. De cellen werden behandeld in overeenstemming met de vereisten van elke groep. MTT (Solarbio, China) werd aan de cellen toegevoegd in een concentratie van 5 mg/ml en gedurende 4 uur bij 37°C geïncubeerd. Formazan is het reductieproduct van succinaatdehydrogenase in levende cellen [20]. DMSO werd toegevoegd voor het oplossen van gegenereerd blauw formazan. Absorptie bij een golflengte van 490 nm werd gedetecteerd met Microplate Reader (Thermo, VS) nadat de cellen gedurende 10 minuten bij 25°C waren geschud. Resultaten van de levensvatbaarheid van de cellen werden gemanifesteerd als een percentage van de controlegroep [21].

Neutral Red Uptake (NRU) test werd uitgevoerd volgens het eerder gepubliceerde protocol [22]. Toen de reperfusieperioden waren voltooid, werd neutraal rood (Solarbio, China) aan de cellen toegevoegd met een concentratie van 50 ug/ml. Het mengsel werd 3 uur geïncubeerd. Daarna werden de cellen snel afgewassen met een oplossing die 0,5 procent formaldehyde en 1 procent calciumchloride bevatte. De cellen werden vervolgens toegevoegd aan een mengsel dat 1 procent ethylzuur en 50 procent watervrije ethanol bevatte. Platen werden afgelezen bij een absorptie van 540 nm nadat de cellen gedurende 20 minuten bij 37°C waren geschud. De resultaten van cellevensvatbaarheid werden gemanifesteerd als een percentage van de controlegroep.

Cistanche deserticola polysacharidenheb eenNeuroprotectief effect

2.4. Beoordeling van cytotoxiciteit

LDH is een cytoplasmatisch enzym dat de oxidatie van lactaat-topyruvaat katalyseert. LDH komt snel vrij in de extracellulaire vloeistof wanneer het celmembraan beschadigd is. Daarom wordt LDH-detectie meestal uitgevoerd voor evaluatie van cytotoxiciteit. [23]. De experimentele procedure volgde de instructies van de commerciële kit die werden geleverd door de LDH-assaykit (Jiancheng, China). De absorptie van elk monster werd gedetecteerd bij 440 nm met een microplaatlezer. Het percentage celdood werd berekend met behulp van de volgende formule: Levensvatbaarheid (procent)=(OD Behandeling − ODTbehandeling blanco)/(OD Max LDH-activiteit − OD Max LDH-activiteit blanco) × 100 procent.

2.5. Detectie van intracellulaire Ca2 plus-concentratie

De intracellulaire concentratie van Ca2 plus werd gemeten met Fluo-3/AM [15]. De PC12-cellen werden driemaal gewassen met PBS en vervolgens geïncubeerd met 2 M Fluo -3 / AM (Beyotime, China) gedurende 30 minuten bij 37 graden in het donker. De cellen werden vervolgens driemaal gewassen met PBS om de extracellulaire kleurstof te zuiveren. De fluorescentie-intensiteit van de Fluo-3/AM werd bepaald op een laser scanning confocale microscoop (Olympus, Japan). Softwarepakket Olympus FV10-ASW 4.1 Viewer en ImageJ werden gebruikt voor het berekenen van grijswaarden

2.6. Meting van MMP

JC-1 (5,5′,6,6′-tetrachloor-1,1′,3,3′-tetraethyl-imidacarbocyanine; Beyotime, China) is een handige spanningsgevoelige sonde die over het algemeen wordt gebruikt voor kleuring cellen en het evalueren van MMP [24]. De PC12-cellen werden tweemaal gewassen met koude PBS en vervolgens geïncubeerd met een mengsel dat 50% medium en 50% werkvloeistof bevat gedurende 15 minuten bij 37°C in het donker. Daarna werd het mengsel weggegooid en vervangen door een vers medium. Rode en groene fluorescentiebeelden werden vastgelegd door middel van laser scanning confocale microscopie. Het relatieve aandeel van rode en groene fluorescentiesignalen werd gebruikt voor MMP-meting [25]. SoftwarepakketOlympus FV10-ASW 4.1 Viewer en ImageJ werden gebruikt voor het berekenen van grijswaarden.

2.7. Apoptose-detectietest, Hoechest33342, en flowcytometrie-analyse

Hoechst33342, een DNA-bindende kleurstof, werd gebruikt voor het onderzoek van celapoptose [26]. Na reperfusie werden de PC12-cellen driemaal gewassen met PBS en geïncubeerd met Hoechst33342 (Beyotime, China) bij een concentratie van 5 ug/ml gedurende 15 minuten bij 37 graden in het donker. Vervolgens werden de cellen waargenomen onder een confocale laserscanningmicroscoop. Theapoptotische cellen vertoonden intense blauwe fluorescentie en kerncondensatie. Voor elk kleuringsexperiment werden drie willekeurige velden vastgelegd en gekwantificeerd. Olympus FV10-ASW 4.1 Viewer en ImageJ werden gebruikt voor de berekening van grijswaarden. De percentages van de apoptotische cellen werden berekend met de volgende formule: apoptotische hoeveelheid/totale hoeveelheid x 100 procent [27].

2.8. Meting van ROS-generatie

De fluorescerende sonde 2′,7′- dichloorfluoresceïne-diacetaat (DCFH-DA; Jiangcheng, China) kan celmembranen binnendringen en kan worden gehydrolyseerd tot niet-fluorescerende DCFH. DCFH wordt geoxideerd door intracellulaire ROS tot fluorescerende DCF [29]. Na reperfusie werden de cellen tweemaal gewassen met PBS en vervolgens geïncubeerd met DCFH-DA bij een eindconcentratie van 10 M gedurende 45 minuten bij 37 graden in het donker. Fluorescentie werd waargenomen door een fluorescentiespectrofotometer met een excitatiegolflengte van 485 nm en een emissiegolflengte van 535 nm.

Cistanche deserticola polysacharidenheb eenNeuroprotectief effect

2.9. Bepaling van oxidatieve stress-indicatoren: CAT-, GSH-Px- en T-AOC-niveaus

De cellen werden afgeschraapt en opnieuw gesuspendeerd in PBS. De verkregen celsuspensies werden 45 keer op ijs gesoniceerd en gedurende 10 minuten bij 4 graden bij 1000 t/min gecentrifugeerd. De supernatanten werden bewaard en gebruikt voor detectie [24]. Het totale eiwitgehalte van het celsupernatant werd gemeten met een BCA-eiwitassayreagenskit (KeyGEN, China). De activiteiten van CAT-, GSH-Px- en T-AOC-niveaus werden gemeten volgens de instructies van de fabrikant (Jiancheng, China). De absorptie van elk monster werd gedetecteerd met een microplaatlezer.

2.10. Meting van extracellulaire DJ-1-concentratie

PC12-cellen (6 x 103 per putje) werden gezaaid in 96-putjescultuurplaten. Na reperfusie werd het celsupernatant verzameld en geanalyseerd door DJ-1/PARK-7 ELISA Kit (Raybio, VS ) volgens de instructies van de fabrikant [9]. De absorptie van elk monster werd gedetecteerd met Microplate Reader bij een dubbele golflengte van 450 nm of 540 nm.

2.11. Western-blot-analyse

Cellulaire eiwitten werden geëxtraheerd met ijskoude lysisbuffer volgens de instructies van de fabrikant (KeyGEN, China). De eiwitconcentratie werd bepaald met een BCA-eiwitassayreagenskit. Gelijke hoeveelheden eiwitlysaten (20 ug) van elke groep werden opgelost in 12 procent natriumdodecylsulfaat-polyacrylamidegelelektroforese en vervolgens overgebracht op een nitrocellulosemembraan. Het membraan werd gedurende 2 uur bij kamertemperatuur geïncubeerd met PBS dat 5% magere melk bevat en vervolgens overnacht bij 4°C onderzocht met anti-PARK7/DJ-1-antilichamen (ab76008, Abcam; verdunning 1:1000). Vervolgens werd het membraan drie keer gewassen met PBST en 2 uur bij kamertemperatuur geïncubeerd met secundair antilichaam geit anti-konijn IgG (SA00001-2, Proteintech Group; verdunning 1: 5000). Het antilichaam anti- -Tubuline(10759-1-AP, Proteintech Group; verdunning 1:1000) werd als de controle beschouwd. Eiwitbanden werden zichtbaar gemaakt door middel van verbeterde chemiluminescentie (ECL) reactiereagentia. Banddichtheden werden gemeten met QuantityOne Analysis-software v.4.6.9.

2.12. Immunocytochemische analyse

De PC12-cellen werden na de reperfusiebehandeling gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur gefixeerd in 4% paraformaldehyde [9]. Nadat overmatig paraformaldehyde was verwijderd, werden de cellen gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur geïncubeerd in PBS met 0,3 procent Triton X-100. Vervolgens werden de cellen driemaal gewassen met PBS voordat ze gedurende 1 uur werden geïncubeerd met 5% normaal geitenserum. De cellen werden vervolgens geïncubeerd met monoklonale anti-ATP-synthase-keten van konijnenmuis (MABS1304, EMD Millipore, verdunning 1:200) voor de kleuring van mitochondriën en vervolgens geïncubeerd met anti-PARK7/DJ-1-antilichaam (verdunning 1: 100) voor het sonderen van eiwit DJ-1. De cellen werden gewassen en geïncubeerd met geit-anti-konijn IgG-Alexa 488 (groen; A11034, Invitrogen; verdunning 1:1000) en geit-anti-muis IgG-Alexa 594 (rood; A11032; Invitrogen; verdunning 1:1000) gedurende 90 min. Ten slotte werden de cellen drie keer gewassen met PBS en op glasplaatjes gemonteerd met een montagemedium dat DAPI bevat. Immunofluorescentiebeelden werden gevisualiseerd met behulp van een laserscanning confocale microscoop.

Cistanche deserticola polysacharidenheb eenNeuroprotectief effect

2.13. Gegevens/statistische analyse

Alle waarden werden weergegeven als gemiddelde ± SD. De significantie werd bepaald door een One-Way variantieanalyse (ANOVA), gevolgd door Dunnett's multi-vergelijkingstest. p < .05="" werd="" als="" statistische="" significantie="" beschouwd.="" experimentele="" gegevens="" werden="" geanalyseerd="" met="" behulp="" van="" statistische="" software="" spss="">

3. Resultaten

3.1. CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)remde OGD/RP-geïnduceerde celbeschadiging

De aan OGD/RP blootgestelde PC12-cellen vertoonden een significante afname in aantal. De celvorm was veranderd en het celmembraan was gebroken. In de MTT-assay waren de levensvatbaarheid van de cellen in het CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)groepen ({{0}},05, 0,5 en 5 ug/ml) waren respectievelijk 58,91 procent ± 5,40 procent, 61,13 procent ± 3,81 procent en 68,57 procent ± 3,24 procent, p < 0,05="" (fig.="" 1a)="" ,="" en="" dat="" met="" voertuig="" had="" 51,68="" procent="" ±="" 3,89="" procent="" .="" deze="" waarden="" gaven="" aan="" dat="">(Cistanchedeserticolapolysachariden)beschermde de cellen tegen OGD/RP-schade en verminderde celdood. Bovendien was de levensvatbaarheid van de cellen in de Nimo-groep 77,02 procent ± 5,22 procent, wat bijna gelijk is aan die in de 5 ug/ml CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)behandelde groep.

In de NRU-assay waren de levensvatbaarheid van de cellen in de CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)groepen ({{0}},05, 0,5 en 5 ug/ml) respectievelijk 52,03 procent ± 4,72 procent, 58,49 procent ± 2,50 procent en 69,17 procent ± 3,91 procent waren (Fig. 1B) en dat met voertuig had 47,14 procent ± 2,88 procent. De waarden gaven het concentratieafhankelijke beschermende effect van CDP aan.

In tegenstelling tot een voertuig (44,73 procent ± 3,30 procent), was de LDH-afgifte aanzienlijk verminderd in de CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)groepen. In CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)groepen ({{0}},05, 0,5 en 5 ug/ml), waren de LDH-lekpercentages respectievelijk 32,41 procent ± 3,70 procent, 27,13 ± 2,79 procent en 23,13 procent ± 4,59 procent, p < 0,01="" (fig.="" 1c).="" bovendien="" waren="" de="" ldh-lekkagepercentages="" in="" de="" nimo-groep="" 21,99="" procent="" ±="" 4,02="" procent,="" wat="" bijna="" gelijk="" was="" aan="" die="" in="" de="" 5="" ug/ml="" cdp-behandelde="">

3.2. CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)verzwakte OGD/RP-geïnduceerde toename van [Ca2 plus ]i

De intracellulaire Ca2 plus-niveaus in de PC12-cellen waren verhoogd tot 4146,60 ± 195,97 na OGD/RP-beschadiging in tegenstelling tot de controlegroep (373,62 ± 75,69). het CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)groepen ({{0}},05, 0,5 en 5 ug/ml) konden dosisafhankelijk het intracellulaire Ca2 plus-niveau verlagen tot respectievelijk 2921,25 ± 222,19, 2015.85 ± 230,53 en 1768,43 ± 426,12 (Fig. 2A en C ). Bovendien nam het Ca2 plus-gehalte in de met 5 ug/ml CDP behandelde groep af tot een niveau vergelijkbaar met dat in de Nimo-groep (1591,19 ± 213,21).

3.3. CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)verzwakte OGD / RP-geïnduceerde dissipatie van MMP

Vergeleken met de controlegroep (1,67 ± 0,89), vertoonde de vehikelgroep (0,48 ± 0,10) meer groene FL-fluorescentie dan rode FL fluorescentie (Fig. 2B en D). De verhoudingen tussen rode en groene FL-fluorescentie waren verlaagd tot 1,11 ± 0,26 en 1,18 ± 0,16 in de 0,5 en 5 ug/ml CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)respectievelijk behandelde groepen, p < .01.="" groene="" fl-fluorescentie="" was="" significant="">

3.4. CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)voorkwam door OGD/RP geïnduceerde celapoptose

Cellen met gecondenseerde chromatines of gefragmenteerde kernen werden gescoord als apoptotische cellen [30]. Hoechst33342-testresultaten onthulden het verschijnen van gecondenseerde kernen na OGD/RP (Fig. 3A en C). Een hoge FL-fluorescentie-intensiteit werd waargenomen in de kernen in de voertuiggroep. De FL-fluorescentie-intensiteit van kernen was verzwakt in de 5 ug/ml CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)behandelde groep. We analyseerden de apoptotische snelheid in de PC12-cellen door collega-cytometrie met behulp van FITC-Annexin V / PI dubbele kleuring (Fig. 3B en D). De controlegroep had een celapoptotisch percentage van 4,16 procent ± 0,24 procent, terwijl de vehikelgroep 22,98 procent ± 0,66 procent had. In de 5 ug/ml CDP-behandelde groep was de celapoptosesnelheid 7,86 procent ± 1,16 procent.

3.5. CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)verzwakte OGD / RP-geïnduceerde intracellulaire ROS-accumulatie en behouden redox-status

De effecten van CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)op oxidatieve stress werden aangetoond op basis van ROS-generatie, GSH-Px, CAT-activiteiten en T-AOC-niveaus. De ROS-niveaus in de OGD/RP-verwonde PC12-cellen namen toe en werden significant hoger dan die in de controlegroep (p <.01). ondertussen="" zijn="" de="" ros-niveaus="" in="" de="">(Cistanchedeserticolapolysachariden)groepen ({{0}},05, 0,5 en 5 ug/ml) namen dosisafhankelijk af (p < 0,01;="" fig.="" 4a).="" verder="" verhoogde="" cdp="" ook="" significant="" de="" t-aoc="" (p=""><.05; fig.="" 4b),="" cat="" (p=""><.05; fig.="" 4c)="" en="" gsh-px="" (p=""><.05; fig.="" 4d)="" niveaus="" vergeleken="" met="" vehikel="" groep.="" de="" activiteiten="" van="" endogene="" antioxidanten="" in="">(Cistanchedeserticolapolysachariden)groepen toegenomen.

3.6. CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)stimuleerde de afscheiding van DJ-1 en verbeterde de expressie van DJ-1

Veranderingen in de concentratie van DJ-1 in het supernatant van de cel werden gedetecteerd en onthulden de mogelijke relatie tussen DJ-1 en CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden). DJ-1-afgifte werd waargenomen uit de OGD/RP-verwonde PC12-cellen (Fig. 5). DJ-1 was aanzienlijk opgereguleerd in de 5 ug/ml CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)-behandelde groep (38,66 ± 8,44 pg/ml) en werd significant hoger dan die in de dragergroep (18,33 ± 3,80 pg/ml, p < 0,01) en controlegroep (9,67 ± 3,96 pg/ml, p < 0,01) .

De effecten van CDP onderzoeken(Cistanchedeserticolapolysachariden)op de intracellulaire expressie van DJ-1 hebben we de DJ-1-eiwitniveaus gemeten met Western-blotting. De expressieniveaus van DJ-1-eiwitten waren 24 uur na reperfusie significant verhoogd. Daarentegen verhoogde de 5 ug/ml CDP-nabehandeling de overexpressie van DJ-1 significant in vergelijking met de dragergroep (p <.01, fig.="">

3.7. CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)verbeterde DJ-1-translocatie naar de mitochondriën

De PC12-cellen werden gekleurd met anti-PARK7/DJ-1 en anti-ATP-synthaseketen-antilichamen (Fig. 7 en 8). Het anti-ATP-synthase-keten-antilichaam verbindt met mitochondriaal complex I en het bindende antigeen waren gelokaliseerd in het mitochondriale binnenmembraan. De resultaten lieten zien dat DJ-1 zich verplaatste naar het mitochondriale binnenmembraan na OGD/RP-insult (Fig. 8). Ondertussen onthulden de DJ-1 en mitochondria dubbele kleuringsresultaten dat de CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)gefaciliteerde DJ- 1 mitochondriale translocatie en co-lokalisatie (Fig. 8). Deze resultaten wezen op directe interactie tussen DJ-1 enneuroprotectiefeffect van CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)(Afb. 9).

4. Discussie

In deze studie rapporteerden we uit de eerste hand dat CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)vermindert effectief door OGD/RP geïnduceerde schade aan PC12-cellen via de opregulatie van DJ-1-eiwit. CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)verbeterde levensvatbaarheid van de cellen, verminderde celmembraanbeschadiging, handhaafde intracellulaire Ca2 plus homeostase, voorkwam MMP-verlies, verminderde celapoptose, onderdrukte oxidatieve stress, bevorderde de expressie van DJ-1 en verbeterde DJ-1-translocatie naar de mitochondriën. DJ-1 is onlangs betrokken geweest bij de regulering van:neuroprotectiefeffect en mitochondriale integriteit. Deze resultaten leverden overtuigend bewijs van deneuroprotectiefeffecten van CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)tegen ischemie. Verder speelt de interactie tussen CDP en DJ-1 eenneuroprotectiefrol bij OGD / RP-geïnduceerde PC12-celbeschadiging. De bovenstaande resultaten kunnen ons begrip van het gunstige effect van CDP vergroten en kunnen in de toekomst nuttige informatie opleveren voor de behandeling van een beroerte.

Ischemie-beroerte is toegeschreven aan een complexe reeks biochemische en moleculaire mechanismen, waaronder excitotoxiciteit, calciumoverbelasting en oxidatieve stress [31]. OGD/RP wordt veel gebruikt als een in vitro model van ischemie-reperfusie en wordt gebruikt voor de exploratie van neurologische en biochemische veranderingen. De PC12-cellijn is gevoelig voor OGD/RP-letsel [2]. Het vertoont een aantal eigenschappen en kenmerken van sympathische neuronen [32] en dus veel gebruikte neuronale cellijnen voor onderzoek met betrekking tot de mechanismen van neurologische schade als gevolg van een beroerte [33,34]. Talrijke studies hebben aangetoond dat oxidatieve stress een vitale rol speelt bij beroerte en hersenischemieschade [35-37]. Het met de ziekte van Parkinson geassocieerde eiwit DJ-1 kan ischemische neurodegeneratie en gedragsstoornissen remmen door ROS-gemedieerde neuronale schade te verminderen [7]. Daarom hebben we het OGD / RP-verwonding PC12-celmodel gebruikt om deneuroprotectiefeffect van CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden).

De mate van verwonding in PC12-cellen geïnduceerd door OGD/RP werd geëvalueerd met MTT-, NRU- en LDH-afgifteassays. Administratie van CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)({{0}},05, 0,5 en 5 ug/ml) verbeterde celoverleving en verminderde LDH-afgifte. Gunstige effecten van CDP-behandeling omvatten ook een afname van intracellulaire calciumoverbelasting en behoud van MMP. Afwijkingen van de intracellulaire Ca2 plus-concentratie, met name mitochondriale calciumoverbelasting, zijn in verband gebracht met neuronale apoptose en dood veroorzaakt door ischemie-beroerte [38]. MMP kan de efficiëntie van de elektronentransportketen weerspiegelen en is aangegeven als een pathologische stoornis-index van dit systeem [39]. Zowel verhogingen van de intracellulaire Ca2 plus-concentratie als MMP-verlies kunnen leiden tot destabilisatie van de neuronstructuur en uiteindelijk leiden tot celbeschadiging of celdood [21,40]. In deze studie toonden de resultaten aan dat CDP de intracellulaire Ca2 plus-overbelasting significant remde en de MMP-niveaus in OGD/RP-verwonding PC12-cellen verhoogde. Apoptose speelt een vitale rol in de complexe pathofysiologie van cerebrale ischemie-reperfusieschade. Toenemende gegevens suggereerden dat apoptose is betrokken bij mitochondriale disfunctie; de dissipatie van MMP is een vroege gebeurtenis die leidt tot celapoptose [8,39]. Apoptose is een proces van energieafhankelijke geprogrammeerde celdood om overtollige cellen te verwijderen. Veel neuronen in de ischemische beroerte zullen apoptose ondergaan [41]. In deze studie hebben we Hoechst33342 en Annexin V-FITC/PI-kleuring uitgevoerd om het effect van CDP op apoptose te onderzoeken [23,28]. De resultaten toonden aan dat CDP de integriteit van de kern handhaaft en de snelheid van celapoptose verlaagt. Al deze resultaten gaven aan dat de anti-apoptotische activiteit van CDP bijdroeg aan het gunstige effect bij neuronale schade in PC12-cellen.

Cellen die ischemieschade ondergaan veroorzaakt door overmatige ROS-accumulatie, wat kan leiden tot lipideperoxidatie, celmembraanbeschadiging, calciumoverbelasting en mitochondriale disfunctie, wat uiteindelijk resulteert in celapoptose en dood [42]. De consumptie van endogene antioxidanten, zoals SOD, CAT en GSH-Px, duidde ook op het optreden. Fig. 9. Mogelijke mechanismen voor de beschermende effecten van CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)tegen OGD / RP-geïnduceerde PC12-celbeschadiging. Behandeling van CDP onderdrukt oxidatieve stress, stabiliseert Ca2 plus-concentratie en MMP, verbetert de expressie en lokalisatie van DJ-1 in de mitochondriën. Y. Liu et al. Biogeneeskunde en farmacotherapie 99 (2018) 671-680 678van oxidatieve stress tijdens ischemie-reperfusie. In deze studie vertoonde de OGD/RP-groep een significante toename in ROS en een afname in CAT, GSH-Px en T-AOC in vergelijking met de 5 ug/ml CDP-behandelde groep. We hebben echter aanzienlijke dalingen waargenomen in de snelheid van ROS-generatie en consumptie van endogene antioxidanten (CAT, GSH-Px en T-AOC) in de CDP-groepen. De gunstige effecten in de 5 ug/ml CDP-groep lagen dicht bij die in de Nimo-groep. De resultaten suggereerden dat CDP de vorming van ROS remt en de enzymatische antioxidantafweer herstelt.

DJ-1 is een belangrijke redox-reactieveneuroprotectiefeiwit dat betrokken is bij de regulatie van oxidatieve stress bij een beroerte. De gunstige effecten van overexpressie van DJ-1 omvatten celoverleving door ischemie-reperfusie en behoud van mitochondriale functie en morfologie, zoals het versnellen van de poriënopening van de overgang van de mitochondriën permeabiliteit [39,43]. Eerdere studies hebben aangetoond dat het beschermende effect van DJ-1 in cellen die zijn blootgesteld aan OGD/RP gerelateerd is aan de antioxiderende eigenschappen en mitochondriëntranslocatie [43–45]. DJ-1 voert efficiënte endogene neuroprotectie uit bij het verminderen van mitochondriale defecten via translocatie [46]. Verschillende onderzoeken hebben aangetoond dat DJ-1-translocatie een effect kan hebben op mitochondriale beweging, cel-celinteractie kan verbeteren en andere cel-pro-overlevingsprocessen kan bevorderen.

DJ-1 beïnvloedt verschillende processen, zoals celmigratie en adhesie, chemotaxis, proliferatie en apoptose, in zowel in vitro als in vivo modellen [6,9,47,48]. Met behulp van het OGD / RP-gewonde PC12-cellen-slagmodel, hebben we een mogelijke relatie tussen CDP . onderzocht(Cistanchedeserticolapolysachariden)en DJ-1. Overexpressie van DJ- 1 werd geïdentificeerd door ELISA en Western blotting. Naast deze functie toonde een belangrijke bevinding in de experimenten aan dat de significante overexpressie van DJ-1 optrad toen CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)(5 ug/ml) werd vóór reperfusie toegediend. Dit suggereerde een mogelijkeneuroprotectiefeffect in de relatie tussen CDP en DJ-1. Bovendien hebben we waargenomen dat DJ-1 die zich in de mitochondriën bevond onder omstandigheden van OGD/RP en overvloedige expressie van DJ-1 de cellulaire gevoeligheid voor ROS verminderde en oxidatieve stress remde [45]. De resultaten impliceerden dat CDP DJ-1 reguleert en verbetert, dat fungeert als een moleculaire link tussen disfunctie van mitochondriën en oxidatieve stress en zorgt voor een progressie van secundaire celdood die inherent is aan beroerte [5,47,49-51]. Samen met stabilisatie van DJ-1 in de mitochondriën, CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)behandeling verhoogde celoverleving, stabiliseerde Ca2 plus homeostase, verbeterde MMP-dissipatie en voorkomt mitochondriaal-gerelateerde apoptose [43]. Over het algemeen gaven onze resultaten aan dat CDP een nieuweneuroprotectiefmechanisme bij de behandeling van ischemische beroerte.

5. Conclusie

Onze resultaten gaven aan dat CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)beschermt PC12-cellen tegen OGD/RP-geïnduceerd letsel door zijn antioxiderende effecten, die gedeeltelijk worden toegeschreven aan de door DJ-1 gemedieerde route. Deze effecten omvatten een afname van de snelheid van celmembraanbeschadiging, behoud van [Ca2 plus] I-homeostase, verbetering van MMP-dissipatie, remming van celapoptose, verzwakking van intracellulaire ROS en modulatie van DJ-1-niveaus. De resultaten gaven ook aan dat de interacties tussen CDP en DJ-1 de neuroprotectie versterken en de mitochondriale integriteit behouden. Daarom kunnen kwetsbare neuronen worden beschermd door CDP(Cistanchedeserticolapolysachariden)via de verbetering van DJ-1-expressie tijdens ischemie-beroerte.

Dankbetuigingen

Deze studie werd ondersteund door de National Natural Science Foundation of China (subsidie ​​81360649), het National Science and Technology Key Program (subsidie ​​2015BAK45B01) en het Ningxia Hui Autonomous Region Science and Technology Support Program (subsidie ​​2016BZ07).

Cistanche deserticola polysacharidenheb een Neuroprotectief effect

Referenties

[1] HD Tsai, JS Wu, MH Kao, JJ Chen, GY Sun, WY Ong, TN Lin, Clinacanthus nutans beschermen corticale neuronen tegen door hypoxie veroorzaakte toxiciteit door HDAC1/6, Neuromol te verlagen. Med. 18 (2016) 274-282.

[2] J. Zhao, R. Liu, Stroke 1-2-0: een snelreactieprogramma voor beroerte in China, Lancet Neurol. 16 (2017) 27-28.

[3] PM George, GK Steinberg, Nieuwe therapieën voor beroertes: het ontrafelen van de pathofysiologie van een beroerte en de impact ervan op klinische behandelingen, Neuron 87 (2015) 297-309.

[4] H. Yao, T. Ago, T. Kitazono, T. Nabika, NADPH-oxidase-gerelateerde pathofysiologie in experimentele modellen van beroerte, Int. J. Mol. Wetenschap. (2017) 18.

[5] J. Cao, M. Ying, N. Xie, G. Lin, R. Dong, J. Zhang, H. Yan, X. Yang, Q. He, B. Yang, De oxidatietoestanden van DJ{{ 1}} dicteren het lot van de cel als reactie op oxidatieve stress veroorzaakt door 4-hpr: autofagie of apoptose? Antioxid Redox-teken. 21 (2014) 1443-1459.

[6] Y. Kaneko, H. Shojo, J. Burns, M. Staples, N. Tajiri, CV Borlongan, DJ-1 verbetert ischemische celdood in vitro, mogelijk via de mitochondriale route, Neurobiol, Dis. 62 (2014) 56-61.

[7] D. Yanagisawa, Y. Kitamura, M. Indian, K. Takata, T. Taniguchi, S. Morikawa, M. Morita, T. Inubushi, I. Tooyama, T. Taira, et al., DJ{{ 1}} beschermt tegen neurodegeneratie veroorzaakt door focale cerebrale ischemie en reperfusie bij ratten, J. Cereb. Bloedstroom. Leerde kennen. 28 (2008) 563-578.

[8] Y. Kaneko, N. Tajiri, H. Shojo, CV Borlongan, primaire neurale cellen van ratten zonder zuurstofglucose vertonen DJ-1-translocatie naar gezonde mitochondriën: een krachtig therapeutisch doelwit voor beroertes, CNS Neurosci. daar. 20 (2014) 275-281.

[9] N. Tajiri, CV Borlongan, Y. Kaneko, Cyclosporine A-behandeling heft ischemie-geïnduceerde neuronale celdood op door de mitochondriale integriteit te behouden door opregulatie van het met de ziekte van Parkinson geassocieerde eiwit DJ-1, CNS Neurosci. daar. 22 (2016) 602-610.

[10] RX Yang, J. Lei, BD Wang, DY Feng, L. Huang, YQ Li, T. Li, G. Zhu, C. Li, FF Lu, et al., Voorbehandeling met natriumfenylbutyraat Verlicht cerebrale ischemie / reperfusieletsel door opregulatie van DJ-1-eiwit, Front. neurol. 8 (2017) 256.

[11] C. Gu, X. Yang, L. Huang, Cistanches Herba. Een neurofarmacologie review, Front. Pharmacol. 7 (2016) 289.

[12] Z. Li, H. Lin, L. Gu, J. Gao, CM Tzeng, Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): Een van de beste farmaceutische geschenken van de traditionele Chinese geneeskunde, Front. Pharmacol. 7 (2016) 41.

[13] Q. Liu, J. Li, J. Wang, J. Li, JS Janicki, D. Fan, Effecten en mechanismen van Chinese kruidengeneeskunde bij het verbeteren van myocardischemie-reperfusieschade, Evid.-Based Compl. Alt. (2013) (2013) 925625.

[14] HS Wong, KM Ko, Herba Cistanches stimuleert cellulaire glutathion-redoxcycli door reactieve zuurstofsoorten gegenereerd uit mitochondriale ademhaling in H9c2-cardiomyocyten, Pharm. Biol. 51 (2013) 64-73.

[15] T. Wang, X. Zhang, W. Xie,Cistanchedeserticola YC Ma, "Desert ginseng": een recensie, Am. J. Kin. Med. 40 (2012) 1123-1141.

[16] L. Gu, WT Xiong, C. Wang, HX Zon, GF Li, X. Liu,Cistanchedeserticolaafkooksel verlicht de testiculaire toxiciteit die wordt veroorzaakt door hydroxyurea bij mannelijke muizen, Asian J. Androl. 15 (2013) 838-840.

[17] E. Herzfeld, C. Strauss, S. Simmermacher, K. Bork, R. Horstkorte, F. Dehghani, C. Scheller, Onderzoek van deneuroprotectiefimpact van nimodipine op Neuro2a-cellen door middel van een chirurgisch stressmodel, Int. J. Mol. Wetenschap. 15 (2014) 18453-18465.

[18] G. Vahabzadeh, N. Rahbar-Roshandel, SA Ebrahimi, M. Mahmoudian,Neuroprotectiefeffect van noscapine op hersenletsel door zuurstofglucosetekort, Pharmacol. Rep. 67 (2015) 281-288.

[19] CP Wang, LZ Zhang, GC Li, YW Shi, JL Li, XC Zhang, ZW Wang, F. Ding, XM Liang, Mulberroside A beschermt tegen ischemische stoornissen in de primaire kweek van corticale neuronen van de rat na zuurstof-glucose deprivatie gevolgd door reperfusie, J. Neurosci. Onderzoek 92 (2014) 944-954.

[20] X. Qi, R. Zhou, Y. Liu, J. Wang, WN Zhang, HR Tan, Y. Niu, T. Sun, YX Li, JQ Yu, Trans-cinnamaldehyde beschermde PC12-cellen tegen zuurstof- en glucosegebrek /reperfusie (OGD/R)-geïnduceerd letsel via anti-apoptose en anti-oxidatieve stress, Mol. Cel Biochem. 421 (2016) 67-74.

[21] R. Chang, R. Zhou, X. Qi, J. Wang, F. Wu, W. Yang, W. Zhang, T. Sun, Y. Li, J. Yu, Beschermende effecten van aloïne op zuurstof en door glucosedeprivatie geïnduceerd letsel in PC12-cellen, Brain Res. Stier. 121 (2016) 75-83.

[22] M. Agrawal, V. Kumar, AK Singh, MP Kashyap, VK Khanna, MA Siddiqui, AB Pant, Trans-resveratrol beschermt ischemische PC12-cellen door de hypoxie-geassocieerde transcriptiefactoren te remmen en de niveaus van antioxidante verdedigingsenzymen, ACS te verhogen Chem. neurosci. 4 (2013) 285-294.

[23] KW Zeng, LX Liao, MB Zhao, FJ Song, Q. Yu, Y. Jiang, PF Tu, Protosappanin B beschermt PC12-cellen tegen door zuurstofglucosetekort veroorzaakte neuronale dood door mitochondriale homeostase te handhaven via inductie van ubiquitine-afhankelijke p53 eiwitafbraak, Eur. J. Pharmacol. 751 (2015) 13-23.

[24] NT Ma, R. Zhou, RY Chang, YJ Hao, L. Ma, SJ Jin, J. Du, J. Zheng, CJ Zhao, Y. Niu, et al., Beschermende effecten van aloperine op neonatale primaire ratten gekweekte hippocampale neuronen beschadigd door zuurstof-glucose deprivatie en reperfusie, J. Nat. Med. 69 (2015) 575-583.

[25] Y. Wang, W. Ma, A. Jia, Q. Guo, Parecoxib beschermt corticale neuronen van muizen tegen OGD/R-geïnduceerde neurotoxiciteit door Bcl-2, Neurochem. Onderzoek 40 (2015) 1294-1302.

[26] MP Ponnusamy, P. Seshacharyulu, A. Vaz, P. Dey, SK Batra, MUC4 stabiliseert HER2-expressie en handhaaft de kankerstamcelpopulatie in eierstokkankercellen, J. Ovarian Res. 4 (2011) 7.

[27] R. Wang, L. Peng, J. Zhao, L. Zhang, C. Guo, W. Zheng, H. Chen, A. Gardenamide, Beschermt RGC-5-cellen tegen H(2)O( 2)-geïnduceerde oxidatieve stress-aanvallen door activering van PI3K/Akt/eNOS-signaalroute, Int. J. Mol. Wetenschap. 16 (2015) 22350-22367.

[28] LP Sun, X. Xu, HH Hwang, X. Wang, KY Su, YL Chen, dichloormethaan-extracten van propolis beschermen de cel tegen oxidatieve stress veroorzaakt door zuurstof-glucosetekort. Y. Liu et al. Biogeneeskunde en farmacotherapie 99 (2018) 671–680 679via het verminderen van apoptose, Food Nutr. Onderzoek 60 (2016) 30081.

[29] L. Wang, Y. Zhang, T. Asakawa, W. Li, S. Han, Q. Li, B. Xiao, H. Namba, C. Lu, Q. Dong,Neuroprotectiefeffect van neuroserpin in met zuurstof-glucose-deprivatie en reoxygenatie behandelde rattenastrocyten in vitro, PLoS One. 10 (2015) e0123932.

[30] Z. Zhiwen, W. Haitao, S. Fu, Z. Lihua, JL Peter, Q. Remi, Z. Wenhua, lithiumionen verzwakken door serumdeprivatie geïnduceerde apoptose in PC12-cellen door regulatie van de Akt / FoxO1-signalering paden, psychofarmacologie (Berl) 12 (2015) 625-633.

[31] EJB Dariush Mozaffffarian, S. Alan, et al., Samenvatting hartziekten en beroertestatistieken 2016-update. Een rapport van de American Heart Association, Circulation 133 (2016) 447-454.

[32] JE Jumblatt, TA, Regulatie van muscarine-ligandbindingsplaatsen door zenuwgroeifactor in PC12-feochromocytoomcellen, Nature 297 (1982) 152-154.

[33] S. Afrazi, S. Esmaeili-Mahani, V. Sheibani, M. Abbasnejad, Neurosteroid allopregnanolone verzwakt hoge glucose-geïnduceerde apoptose en voorkomt experimentele diabetische neuropathische pijn: in vitro en in vivo studies, J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 139 (2014) 98-103.

[34] X. Liu, X. Zhu, M. Chen, Q. Ge, Y. Shen, S. Pan, Resveratrol beschermt PC12-cellen tegen OGD/R-geïnduceerde apoptose via de mitochondriaal-gemedieerde signaalroute, Acta Biochem Biophys Sin . 48 (2016) 342-353.

[35] PW Kleikers, K. Wingler, JJ Hermans, I. Diebold, S. Altenhofer, KA Radermacher, B. Janssen, A. Gorlach, HH Schmidt, NADPH-oxidasen als bron van oxidatieve stress en moleculair doelwit bij ischemie/reperfusie blessure, J. Mol. Med. (Berl) 90 (2012) 1391-1406.

[36] FC Liu, HI Tsai, HP Yu, Orgaanbeschermende effecten van rode wijnextract, resveratrol, bij oxidatieve stress-gemedieerde reperfusieschade, Oxid. Med. Cel Longev. (2015) 568634.

[37] LK Seidlmayer, VV Juettner, S. Kettlewell, EV Pavlov, LA Blatter, EN Dedkova, verschillende mPTP-activeringsmechanismen bij ischemie-reperfusie: bijdragen van Ca2 plus plus, ROS, pH en anorganisch polyfosfaat, Cardiovasc. Onderzoek 106 (2015) 237-248.

[38] F. Su, AC Guo, WW Li, YL Zhao, ZY Qu, YJ Wang, Q. Wang, YL Zhu, Preconditionering van lage dosis ethanol beschermt tegen zuurstof-glucose-deprivatie / door reoxygenatie geïnduceerd neuronaal letsel door activering van groot geleidingsvermogen , Ca2 plus plus-geactiveerde K plus plus Kanalen In Vitro, Neurosci. Stier. 33 (2017) 28-40.

[39] Y. Li, M. Wang, S. Wang, Effect van remming van mitochondriale splijting op energiemetabolisme in hippocampale neuronen van ratten tijdens ischemie / reperfusiebeschadiging, Neurol. Onderzoek (2016) 1-8.

[40] C. Rui, L. Yuxiang, H. Yinju, Z. Qingluan, W. Yang, Z. Qipeng, W. Hao, M. Lin, L. Juan, Z. Chengjun, et al., Beschermende effecten van Lycium barbarum-polysaccharide op primaire gekweekte hippocampusneuronen van neonatale ratten die zijn beschadigd door zuurstof-glucose-deprivatie en reperfusie, J. Mol. Histolie. 43 (2012) 535-542.

[41] BR Broughton, DC Reutens, CG Sobey, Apoptotische mechanismen na cerebrale ischemie, Stroke 40 (2009) e331-339.

[42] Jordan M. Willcox, AJS Summerlee, Relaxin beschermt astrocyten in vitro tegen hypoxie, PLoS One. 9 (3) (2014) e90864.

[43] X. Zhang, D. Yuan, Q. Sun, L. Xu, E. Lee, AJ Lewis, BS Zuckerbraun, MR Rosengart, Calcium/calmoduline-afhankelijke proteïnekinase reguleert de PINK1/Parkin en DJ{{3} } paden van mitofagie tijdens sepsis, FASEB J. 31 (2017) 4382-4395.

[44] S. Vasseur, S. Afzal, J. Tardivel-Lacombe, DS Park, JL Iovanna, TW Mak, DJ-1/ PARK7 is een belangrijke mediator van door hypoxie geïnduceerde cellulaire reacties, Proc. nat. Acad. Wetenschap. VS 106 (2009) 1111-1116.

[45] Z. Xianghong, Y. Du, S. Qian, X. Li, L. Emma, ​​J. Anthony, Brian Lewis, S. Zuckerbraun, Matthew R. Rosengart, Calcium/calmoduline-afhankelijke proteïnekinase reguleert de PINK1/ Parkin en DJ -1 paden van mitofagie tijdens sepsis, FASEB J. (2017). [

46] MS Choi, T. Nakamura, SJ Cho, X. Han, EA Holland, J. Qu, GA Petsko, JR Yates 3rd, RC Liddington, SA Lipton, Transnitrosylering van DJ-1 naar PTEN verzwakt neuronale celdood in modellen voor de ziekte van Parkinson, J. Neurosci. 34 (2014) 15123-15131.

[47] RK Dongworth, UA Mukherjee, AR Hall, R. Astin, SB Ong, Z. Yao, A. Dyson, G. Szabadkai, SM Davidson, DM Yellon, DJ Hausenloy, DJ-1 beschermt tegen celdood na acute cardiale ischemie-reperfusieschade, Cell Death Dis. 5 (2014) e1082.

[48] ​​A. Di Cello, M. Di Sanzo, FM Perrone, G. Santamaria, E. Rania, E. Angotti, R. Venturella, S. Mancuso, F. Zullo, G. Cuda, F. Costanzo, DJ{ {1}} is een betrouwbare serumbiomarker voor het onderscheiden van hoogrisico endometriumkanker, Tumor Biol. 39 (2017) 1010428317705746.

[49] H. Aleyasin, MW Rousseaux, PC Marcogliese, SJ Hewitt, I. Irrcher, AP Joselin, M. Parsanejad, RH Kim, P. Rizzo, SM Callaghan, et al., DJ-1 beschermt de nigrostriatale as van het neurotoxine MPTP door modulatie van de AKT-route, Proc. nat. Acad. Wetenschap. VS 107 (2010) 3186-3191.

[50] RM Canet-Aviles, MA Wilson, DW Miller, R. Ahmad, C. McLendon, S. Bandyopadhyay, MJ Baptista, D. Ringe, GA Petsko, MR Cookson, The Parkinson's disease protein DJ-1 isneuroprotectiefvanwege cysteïne-sulfinezuur-gedreven mitochondriale lokalisatie, Proc. nat. Acad. Wetenschap. VS 101 (2004) 9103-9108.

[51] M. Liu, B. Zhou, ZY Xia, B. Zhao, SQ Lei, QJ Yang, R. Xue, Y. Leng, JJ Xu, Z. Xia, door hyperglykemie geïnduceerde remming van DJ-1 expressie compromitteerde de effectiviteit van ischemische cardioprotectie na conditionering bij ratten, Oxid. Med. Cel Longev. (2013) (2013) 564902.