Detectie van humorale en cellulaire immuunrespons op het anti-SARS-CoV-2 BNT162b2-vaccin bij vrouwen die borstvoeding geven en naïeve en eerder geïnfecteerde personen

Deze studie onderzocht de humorale en cellulaire reacties op het anti-SARS-CoV-2 BNT162b2 mRNA-vaccin bij vrouwen die borstvoeding geven en naïeve en seropositieve personen in de eerste zes maanden na vaccinatie. Eenenzestig vrijwilligers die waren gevaccineerd met twee doses van het BNT162b2-mRNA-vaccin, namen deel aan het onderzoek. Voor de kwantificering van SARS-CoV-2 RBD-specifieke antilichamen werd een intern ontwikkelde ELISA gebruikt. Expressie van celoppervlakmarkers en intracellulaire IFN-analyse werden uitgevoerd met behulp van flowcytometrie. De concentraties van IFN-, IL-6 en TNF werden bepaald met ELISA. Er werd 14 dagen na de eerste vaccindosis een significante stijging van de anti-RBD IgG-antilichaamspiegels waargenomen (p< 0.0001) in serum and milk. The expression of CD28 on CD4+ T cells was significantly higher compared to baseline (p< 0.05). There was a significant increase (p≤ 0.05) in the B cell lymphocyte subset after revaccination and an increased percentage of CD80+ B cells. The expression of IFN-γ in peripheral blood lymphocytes, CD3+ T cells, and serum was significantly increased (p< 0.05). No significant difference in immune response was observed between breastfeeding women and other study participants. The anti-SARS CoV-2 BNT162b2 mRNA vaccine induced measurable and durable immune response in breastfeeding women and naïve and previously infected individuals. 

cistanche voordelen voor mannen versterken het immuunsysteem

Klik hier om de producten van Cistanche Enhance Immunity te bekijken

【Vraag om meer】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats-app: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

1. Inleiding 

De wereldwijde verspreiding van het SARS-CoV-2-virus nadat het eerste speciale geval werd geregistreerd op 31 december 2019 in Wuhan, China, leidde tot een wereldwijde pandemie van de coronavirusziekte-19 (COVID{{ 5}}), met ongeveer 648 miljoen gevallen en 6,6 miljoen sterfgevallen tot 18 december 20221. Sterfte bij COVID-19 is in verband gebracht met overmatige productie van pro-inflammatoire cytokines zoals IL-6, TNF- en IL-1, de zogenaamde "cytokinestorm", die kan leiden tot acuut ademnoodsyndroom en uitgebreide weefselschade resulterend in falen van meerdere organen2. Verwacht werd echter dat snelle verbeteringen in de diagnostiek, de behandeling en de introductie van vaccinatie zouden bijdragen aan een gestage daling van het aantal geïnfecteerde personen, de noodzaak van ziekenhuisopnames en uiteindelijk een verlaging van het sterftecijfer. In Servië vond het eerste officieel geregistreerde geval plaats op 6 maart 2020 en de vaccinatie werd gestart op 24 december 2020. Momenteel zijn er vier vaccins beschikbaar voor de algemene bevolking: Vero Cell–Inactivated (Sinopharm), Vaxzevria (ChAdOx{{ 22}}S [recombinant], AstraZeneca), Spoetnik V (Gam-COVID-Vac, Gamaleya) en Comirnaty (BNT162b2, BioNTech-Pfizer). Naast de productie van specifieke antilichamen vereist de effectieve immuunrespons tegen SARS-CoV-2 de activering van cellulaire immuniteit. De componenten van de cellulaire immuniteit, waaronder helper-CD4+ en cytotoxische CD8+ T-cellen, natural killer (NK)-cellen en B-cellen, zullen naar verwachting binnen de eerste uren en dagen na blootstelling aan dit virus ziektesymptomen verminderen en ziekteprogressie, ziekenhuisopname en overlijden voorkomen. Geactiveerde T-helper (T)-cellen kunnen geïnfecteerde cellen indirect doden en de B-celfunctie en antilichaamrespons ondersteunen door interferon-(IFN-) te produceren3,4. Er is aangetoond dat het T1-fenotype geassocieerd is met een lagere ernst van de ziekte van COVID-19. Daarom moeten strategieën voor de ontwikkeling van COVID-19-vaccins ook rekening houden met de mogelijkheid van activering van T-cellen voor IFN-productie. Er wordt gerapporteerd dat cellulaire immuniteit tegen SARS-CoV-2 bij meer dan 90% van de personen tot zes maanden na infectie detecteerbaar is6. Er werd dus verwacht dat vaccinatie aanleiding zou geven tot een meetbare cellulaire immuniteit die zou bijdragen aan de strijd tegen de pandemie. Nieuwe resultaten hebben aangetoond dat anti-SARS-CoV-2 mRNA-vaccins niet alleen B-cellen in kiemcentra7 activeren, maar ook spike-eiwitspecifieke CD4+ en CD8+ T-celreacties zouden moeten genereren8. Hoewel de antilichaamtiter gewoonlijk correleert met de werkzaamheid van het vaccin, zijn B- en T-cellen belangrijk bij de bescherming bij hernieuwde blootstelling aan virusantigenen. Deze geheugen-B- en T-cellen zullen naar verwachting worden gegenereerd door SARS-CoV-2 mRNA-vaccins en zouden een rol moeten spelen bij het beheersen van de replicatie van het virus, waardoor de virale verspreiding wordt beperkt9. Hoewel er geen ernstige bijwerkingen zijn gemeld, wordt de specifieke respons op anti-SARS-CoV-2-vaccinatie bij zwangere vrouwen en vrouwen die borstvoeding geven en zuigelingen van wie de moeder het vaccin tijdens de borstvoeding heeft gekregen nog steeds geëvalueerd en blijft een controversieel onderwerp10,11. Dit onderzoek was bedoeld om voor het eerst de maandelijkse humorale en cellulaire reacties op het anti-SARS-CoV-2 BNT162b2 mRNA-vaccin te onderzoeken bij vrouwen die borstvoeding geven en bij naïeve en seropositieve individuen, in de eerste zes maanden na vaccinatie in Servië, en een twee jaar durende zelfgerapporteerde follow-up van de veiligheid op lange termijn.

Materiaal en methoden

Studieontwerp en monsterverzameling en -verwerking.

Een totaal van 61 vrijwilligers (45 SARS-CoV-2 naïef, 16 SARS-CoV-2 hersteld volgens door PCR bevestigde rapporten) namen deel aan het onderzoek en werden gevolgd in de periode van januari tot 2 november{ {11}}21. De gemiddelde tijd tussen natuurlijke infectie en vaccinatie bij eerder geïnfecteerde personen was 3,18 ± 0,98 maanden, met een bereik van 2 tot 5 maanden. Alle deelnemers waren ouder dan 18 jaar en vertoonden op het moment van vaccinatie geen tekenen van luchtweginfecties. De meeste deelnemers waren gezondheidswerkers van het Instituut voor Oncologie en Radiologie van Servië (44; 72%). Deelnemers werden gevaccineerd met twee doses van het BNT162b2-mRNA-vaccin (met een tussenpoos van 3 weken). Alle bloedafnames werden uitgevoerd in goedgekeurde medische centra onder strikte protocollen en observatie. Vier deelnemers waren moeders die borstvoeding gaven en boden vrijwillig bijpassende bloed- en melkmonsters aan. Er werden monsters verzameld op 6-tijdspunten: punt 1 – vóór de vaccinatie (basislijn), punt 2–14 dagen na de primaire immunisatie, punt 3–1 maand na de primaire immunisatie, punt 4–2 maanden na de primaire immunisatie, punt 5–3 maanden na de primaire immunisatie, en punt 6–6 maanden na de primaire immunisatie. Voor elk tijdstip werd 10-20 ml perifeer bloed afgenomen, evenals 1 ml melk van 4 deelnemende vrouwen die borstvoeding gaven. Serum werd onmiddellijk na bloedafname door centrifugeren uit perifeer bloed verkregen en bij -20 graden bewaard. Mononucleaire cellen uit perifeer bloed (PBMC) werden geïsoleerd uit gehepariniseerd bloed met behulp van Lymphoprep (Nypacon, Oslo, Noorwegen) dichtheidsgradiënt, 40 minuten gecentrifugeerd bij 500 g en driemaal gewassen in RPMI 1640 kweekmedium (CM) (Sigma, St. Louis , MO) aangevuld met 10% foetaal kalfsserum (FCS) (Sigma, St. Louis, MO). Na wassen werd PBMC onmiddellijk gebruikt voor immunofenotypische analyse. De studie werd goedgekeurd door de ethische commissie van het Instituut voor Oncologie en Radiologie van Servië (nr. 899–01 van 1 april 2021) en alle deelnemers ondertekenden een geïnformeerde toestemming. Alle deelnemers werden geïnterviewd door ervaren medisch personeel. Zelfgerapporteerde langetermijnfollow-up van bijwerkingen na vaccinatie werd uitgevoerd gedurende twee jaar na de eerste vaccindosis.

cistanche tubulosa-verbetering van het immuunsysteem

Detectie en kwantificering van SARS-CoV-2 RBD-specifieke antilichamen.

Expressie van RBD van SARS-CoV-2-spike-eiwit (NCBI: YP_009724390, AA319-541) werd uitgevoerd in de HEK-293 T-cellijn volgens een eerder gepubliceerde procedure12 . Het recombinante eiwit werd gezuiverd tot homogeniteit en de verkregen opbrengst was 5{{20}}0 mg per liter celkweek. In het kort werd het recombinante RBD-eiwit gebruikt om platen met vetbodem 96-putjes te coaten (Thermo Scientific NUNC-MaxiSorp, VS) bij een eindconcentratie van 10 ug/ml (50 μl/putje) in coatingbuffer (15 mM Na2CO3/35 mM NaHCO3, pH 9,5) bij 4 graden gedurende de nacht. De platen werden gewassen met TBS dat 0,05% Tween 20 (TBST) bevatte en gedurende 2 uur bij 37 graden geblokkeerd met 1% BSA in TBST. Verdunde sera werden gedurende 1 uur bij 37 graden geïncubeerd in TBST dat 0,1% BSA bevatte, en vervolgens werden de platen gewassen met TBST. Voor de bepaling van totaal specifiek IgG werd geit-anti-humaan-IgG-AP-geconjugeerd antilichaam (Novus Biologicals, VS) 1/1000 verdund in blokkerende oplossing en aan de putjes toegevoegd. Na 1 uur incubatie bij 37 graden werden de platen vijf keer gewassen met TBST en gedurende 1 uur ontwikkeld met 4-nitrofenylfosfaat bij 37 graden. De absorptie werd gemeten bij 450 nm (A450).

Flowcytometrische analyse.

Het celoppervlak-immunofenotype van mononucleaire cellen uit perifeer bloed (PBMC's) werd geïdentificeerd met behulp van de volgende combinaties van direct gelabelde monoklonale antilichamen (mAbs): CD3FITC/CD28PE/CD4PerCP, CD80PE/CD19PerCP, CD80PE/CD14PerCP (Becton Dickinson, San Jose, VS). De monsters werden bereid zoals eerder beschreven met behulp van 1 x 105 vers geïsoleerde PBMC's in 100 μl RPMI 1640 aangevuld met 10% foetaal kalfsserum (FCS, Sigma), 30 minuten bij 4 graden geïncubeerd met 20 μl geschikte mAb-combinatie, tweemaal gewassen met ijskoude fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) en gefixeerd met 1% paraformaldehyde vóór FACS-analyses. Expressie van oppervlaktemarkers werd gekwantificeerd op de FACSCalibur-flowcytometer (Becton – Dickinson, San Jose, VS). Een totaal van 10,000–50,000 gated events, geverifieerd als perifere bloedlymfocyten (PBL's) en monocyten, op basis van hun fysieke kenmerken, voorwaartse verstrooiingskenmerken (FSC) en zijwaartse verstrooiingskenmerken (SSC) ), werden per monster verzameld en geanalyseerd met behulp van CellQUEST-software. De celsubsets werden uitgedrukt als het percentage in perifeer bloed.

Intracellulaire IFN-analyse.

Voor intracellulaire kleuring van IFN 1x werden 106 PBMC's gedurende 4 uur bij 37 graden en 37 graden geïncubeerd met Phorbol 12-myristaat 13-acetaat (PMA) (50 ng/ml) plus ionomycine (500 ng/ml). met Brefeldin A (10 ug/ml) gedurende de laatste 3 uur, zoals eerder beschreven14. Cellen werden eerst gekleurd op oppervlakteantigeen met CD3 PerCP-antilichaam, gefixeerd en na permeabilisatie met BD FACS permeabiliserende oplossing 2 (BD Biosciences) gekleurd op anti-IFN-PE (Becton Dickinson). Intracellulair IFN wordt uitgedrukt als het percentage in PBL's, evenals in CD3 T-lymfocyten.

ELISA.

De concentraties van IFN-, IL-6 en TNF in de sera van de onderzochte deelnemers werden bepaald door commerciële ongecoate ELISA-kits, volgens de instructies van de fabrikant (Invitrogen). De concentraties cytokinen werden bepaald op punt 1 (vóór vaccinatie), punt 3 (1 maand na de primaire immunisatie) en punt 4 (2 maanden na de primaire immunisatie). In het kort werden ELISA-platen gecoat met geschikte vangantilichamen in coatingbuffer en overnacht bij 4 graden geïncubeerd. Eerst werden de platen gewassen en geblokkeerd met ELISA/ELISAASPOT-verdunningsmiddel. Na 1 uur incubatie werden de platen gewassen en werden serummonsters en standaarden aan de putjes toegevoegd. Na incubatie, wassen en aspiratie werd, volgens de instructies van de fabrikant, de detectie-antilichaamoplossing aan elk putje toegevoegd. Vervolgens werden de platen gewassen en afgezogen; de avidine-HRP-oplossing werd aan de putjes toegevoegd en gedurende 30 minuten geïncubeerd. Vervolgens werden de platen gewassen en werd (3,3',5,5'-tetramethylbenzidine) TMB-oplossing aan elk putje toegevoegd. De platen werden 15 minuten bij kamertemperatuur geïncubeerd en de enzymatische reactie werd beëindigd door het toevoegen van een stopoplossing. De absorptie werd gemeten bij 450/520 nm met behulp van de Multiskan EX Termo Labsystems plaatlezer. Statistische analyse. De resultaten worden gepresenteerd als individuele waarden met standaardfout van het gemiddelde (SEM). Verschillen tussen waarden werden vergeleken met behulp van een ongepaarde t-test en een Wilcoxon Signed-rank-test en de resultaten werden als statistisch significant beschouwd als p<0.05. The analysis was performed using GraphPad Prism 9.0 (GraphPad, La Jolla, CA, USA).

cistanche tubulosa-verbetering van het immuunsysteem

Resultaten

3.1 Onderzoeksdeelnemers en serum-/melkverwerking.

Kenmerken van de studiedeelnemers zijn weergegeven in Tabel 1. Van 61 vrijwilligers die het anti-SARS-CoV-2 BNT162b2 mRNA-vaccin kregen, werden in totaal 344 serummonsters verzameld op 6 tijdstippen, beginnend bij de uitgangswaarde vóór de vaccinatie. tot 6 maanden na het eerste vaccinatiepunt. De meeste deelnemers aan de studie (97%) meldden lokale bijwerkingen van de vaccinatie in de vorm van milde arm-/schouderpijn en vermoeidheid, die 1 à 2 dagen aanhielden. Slechts drie deelnemers kregen de tweede vaccindosis met vertraging, twee vanwege bijwerkingen bij de primaire vaccinatie (huiduitslag, allergie) en één vanwege een zwangerschap na de eerste dosis. Tussen de twee vaccindoses werd geen infectie gemeld. Na zes maanden monitoring waren slechts drie (5%) van de deelnemers besmet met SARS-CoV-2 en werd er geen ernstige vorm van ziekte ontdekt waarvoor ziekenhuisopname nodig was. Zeven deelnemers raakten zwanger na vaccinatie, één twee weken na de eerste dosis, één vier maanden na de eerste dosis en vijf meer dan 12 maanden na de eerste dosis. Zelfgerapporteerde follow-up op lange termijn bracht geen vaccinatiegerelateerde bijwerkingen aan het licht tot twee jaar na de eerste dosis, bij vrouwen die borstvoeding geven of bij andere deelnemers aan het onderzoek.

Kwantificering van SARS-CoV-2 RBD-specifieke antilichamen in het serum en de melk van studiedeelnemers.

Bij analyse van de niveaus van post-vaccinatie anti-RBD IgG-antilichamen in serum werd zelfs 14 dagen na de eerste vaccindosis in de gehele geanalyseerde groep een significante stijging van de anti-RBD IgG-waarden waargenomen, vergeleken met de IgG-waarden vóór vaccinatie (17,47 ± 51,49 AU /ml versus 7828,28 ± 24.157,29 AU/ml, p<0.0001) (Fig. 1a). Te serum levels of anti-RBD IgG continued to rise to 2 months post-vaccination, when a decrease was detected, which lasted up to 6 months, steadily. The levels of anti-RBD IgG antibodies were compared at each time point between naïve and previously infected individuals (Fig. 1b-c), and it was determined that the difference was statistically significant at baseline (point 1), as previously infected individuals had a higher level of antibodies before vaccination (7.23±0.77 AU/mL vs. 54.47±101.40 AU/mL, p<0.01). The difference was statistically significant also in points 2 (3979.48±3277.27 AU/mL vs. 22,581.99±49,570.63 AU/mL, p<0.05), 5 (2369.16±1934.31 AU/ mL vs. 6366.83±6875.85 AU/mL, p<0.01), and 6 (461.96±375.41 AU/mL vs. 766.04±317.35 AU/mL, p<0.05). The decline in antibody levels had the same dynamics in both groups but remained at higher levels in previously infected individuals for up to 6 months. No other analyzed parameters were correlated with a significantly different level of antibodies in serum (age, gender, smoking status). When comparing levels of anti-RBD IgG antibodies in other participants and breastfeeding women (Fig. 1d-e), no significant differences in serum antibody levels were observed in any of the comparisons. Anti-RBD IgG antibodies were also detected in the milk of 4 breastfeeding women (Fig. 1f). In lower levels, they presented with the same dynamics of rising and decline as detected in the serum. Comparing the levels of anti-RBD IgG antibodies in milk at each time point to baseline, (Fig. 1f), it was determined that the difference was statistically significant at points 2 (6.57±0.77 AU/mL vs. 152.13±35.83 AU/ mL, p<0.01) and 6 (6.57±0.77 AU/mL vs. 117.31±25.64 AU/mL, p<0.01).

Tabel 1. Kenmerken van studiedeelnemers.

Figuur 1. Serum anti-RBD IgG-antilichaamniveaus in de (a) hele geanalyseerde groep, (b naïef, c) eerder geïnfecteerde individuen, (d) de hele groep zonder vrouwen die borstvoeding geven, (e) vrouwen die borstvoeding geven, en (f) in de melk van vrouwen die borstvoeding geven. De resultaten worden gepresenteerd als individuele waarden met standaardfout van het gemiddelde (SEM) van drie onafhankelijke replicaties. Verschillen tussen waarden werden vergeleken met behulp van een ongepaarde t-test en de resultaten werden als statistisch significant beschouwd als p<0.05. * p<0.05; **p<0.01; *** p<0.0001.

Flowcytometrische en intracellulaire IFN-analyses.

Gegevens verkregen door middel van cytometrische analyse toonden aan dat de expressie van CD28 op CD4+ T-cellen in perifeer bloed 2 maanden na de tweede vaccindosis significant hoger was vergeleken met de waarden vóór vaccinatie (42,84±5,37% versus 37,75%). ±5,96%, p<0.05, Wilcoxon signed-rank test) (Fig. 2a). Tere was a signifcant increase (p≤0.05, Wilcoxon signed rank test) in the prevalence of B cell lymphocyte subset (CD19+) from 6.87±1.17% to 8.73±1.54%, two months afer revaccination, as well as an increased percentage of CD80+ B cells from 1.72±0.28% to 1.99±0.28% (Fig. 2b). Furthermore, fve weeks afer revaccination, a signifcant (p≤0.05, Wilcoxon signed rank test) increase in the percentage of CD14+CD80+ cells from 1.15±0.38% to 5.87±0.95% was detected in the monocyte gate (Fig. 2c). Te expression of IFN-γ in PBLs, as well as in CD3+ T cells was signifcantly (p < 0.05, Wilcoxon signed rank test) increased at 1 week afer the second vaccine dose (1.84 ± 0.13% in PBL and 1.32 ± 0.10% in CD3+ T cells) compared to pre-vaccination baseline values (0.88 ± 0.13% in PBL and 0.72 ± 0.12% in CD3+ T cells) (Fig. 3a). Furthermore, serum levels of IFN-γ were signifcantly increased in all participants from the initial value of 16.69±0.29 pg/mL to 17.72±0.41 pg/mL (p<0.05, Wilcoxon signed rank test) (Fig. 3b), as well as in naive from 16.55±1.77 pg/mL to 17.26±2.53 pg/mL and in a group and previously infected individuals, from 15.93±2.01 pg/mL to 19.90±4.32 pg/mL at 1 week afer revaccination (Fig. 3c). Tere was no signifcant (p>0.05, Wilcoxon Signed Rank Test) verschil in de serumspiegels van IL-6 en TNF- 1 week en vijf weken na de tweede vaccindosis vergeleken met pre-vaccinatiewaarden in het geheel groep, evenals bij naïeve of eerder geïnfecteerde individuen (aanvullende figuren 1a – d).

Discussie

De uitbraak van SARS-CoV-2 luchtweginfecties had een diepgaand negatief effect op verschillende aspecten van het dagelijks leven, waaronder maatschappelijke, educatieve en gezondheidsgerelateerde kwesties die niet in direct verband stonden met de ziekte COVID-19 zelf16–18 . Een mondiale vaccinatieaanpak was nodig als aanvulling op de afstandsmaatregelen bij de bestrijding van de ziekte, en veel onderzoeken onderzochten de efficiëntie en effectiviteit van verschillende vaccintypen die in 2021 wereldwijd werden verspreid. In Servië zijn momenteel alleen tussentijdse rapporten over humorale immuniteit 2 en 3 maanden na vaccinatie beschikbaar19 ,20 en zijn in overeenstemming met de gegevens gerapporteerd in dit onderzoek. In ons geanalyseerde cohort van maximaal 6 maanden na vaccinatie werd na de eerste vaccindosis een seroconversiepercentage van 100% gedetecteerd. Slechts 5% van de deelnemers moest de tweede vaccindosis met vertraging krijgen. Er waren geen meldingen van SARS-CoV-2-infectie tussen twee vaccindoses. Tot zes maanden monitoring was slechts 5% van de deelnemers besmet, zonder dat ziekenhuisopname nodig was. De titers van anti-RBD SARS-CoV-2 IgG-antilichamen waren significant hoger vergeleken met de uitgangswaarde, zelfs na de eerste vaccindosis, wat bijdraagt ​​aan het idee dat het gebruik van het BNT162b2-mRNA-vaccin een efficiënte aanpak is voor snelle humorale reacties tegen de oorspronkelijke dosis. virusstammen. De IgG-serumspiegels bleven stijgen tot 2 maanden na de vaccinatie, terwijl een gestage daling werd waargenomen tot aan de geanalyseerde periode van 6 maanden. Eerder geïnfecteerde individuen bleken hogere IgG-titers te hebben vergeleken met naïeve individuen tot 6 maanden oud, wat de enige factor was die bijdroeg aan verschillende antilichaamniveaus. In onze en enkele eerdere onderzoeken werden ook anti-RBD IgG-antilichamen gedetecteerd in de melk van vrouwen die borstvoeding gaven21, met een overeenkomstige titerdynamiek als in het serum. Soortgelijke rapporten zijn gepubliceerd voor IgA-antilichamen na natuurlijke infectie22. Omdat er momenteel beperkte gegevens beschikbaar zijn over de risico's en voordelen van vaccinatie van vrouwen die borstvoeding geven, zijn deze resultaten veelbelovend in het licht van een mogelijke passieve immunisatie van zuigelingen die borstvoeding krijgen, zelfs na zes maanden na vaccinatie van moeders. Er werden geen significante verschillen in de serumantilichaamniveaus waargenomen tussen naïeve of eerder geïnfecteerde personen en vrouwen die borstvoeding geven, wat de waarnemingen versterkt dat de respons op anti-SARS-CoV-2-vaccins niet wordt beïnvloed door borstvoeding. De huidige aanbevelingen stellen dat vaccinatie moet worden overwogen voor alle personen van zes maanden en ouder, inclusief degenen die zwanger zijn of nu of in de toekomst zwanger willen worden en borstvoeding geven, ongeacht hun eerdere COVID-19 infectiestatus23. Ons onderzoek draagt ​​bij aan de bewijslast24 die erop wijst dat er geen onmiddellijke schade is ontstaan ​​voor vrouwen die borstvoeding geven en hun kinderen die borstvoeding krijgen. Ook werden zeven studiedeelnemers zwanger na vaccinatie, één twee weken na de eerste dosis, één vier maanden na de eerste dosis en vijf meer dan 12 maanden na de eerste dosis. Onlangs uitgevoerde langetermijnfollow-up-interviews met deelnemers aan de studie bevestigden dat er twee jaar na ontvangst van het anti-SARS-CoV-2-vaccin ook geen onvoorziene schade was voor vrouwen die borstvoeding geven of hun kinderen die borstvoeding krijgen, of voor welke andere deelnemer dan ook.

Figuur 2. Percentage van (a) CD3+CD28+ en CD4+CD28+ T-lymfocyten, (b) CD19+ en CD{{6 }}CD80+ B-lymfocyten, (c) CD14+CD80+ monocyten in perifeer bloed. De resultaten worden gepresenteerd als individuele waarden met gemiddelde ± standaardfout van het gemiddelde (SEM). Verschillen tussen waarden werden vergeleken met behulp van de Wilcoxon-test met ondertekende rang en de resultaten werden als statistisch significant beschouwd als p<0.05. * p<0.05.

De opkomst van nieuwe zorgwekkende varianten en het bestaan ​​van berichten over een snelle daling van de anti-SARS CoV-2 antilichaamniveaus na natuurlijke infectie en vaccinatie25 hebben onzekerheid doen ontstaan ​​over de rol van de componenten van de cellulaire immuniteit. Een paar onderzoeken naar de immunologische respons van gevaccineerde individuen in Servië hebben alleen humorale immuniteit gerapporteerd19,20. In deze studie werd twee maanden na de toediening van de tweede vaccindosis een verhoogde expressie van co-stimulerende receptoren CD28 op CD4+ T-cellen en CD80 op B-cellen gedetecteerd. Bovendien nam de expressie van CD80 op monocyten toe 1-maand na volledige vaccinatie.

De proliferatie en differentiatie van T-cellen in efector- of geheugencellen vereisen antigeenpresentatie, co-stimulatie en cytokinen. De best verdedigde co-stimulatoren van T-cellen zijn paren van moleculen, B7-1 (CD80) en B7-2 (CD86). Ze worden doorgaans tot expressie gebracht op antigeenpresenterende cellen (APC's), zoals dendritische cellen, B-cellen, macrofagen, monocyten en T-cellen. Hun expressie op monocyten is ook belangrijk voor het activeren van lymfocyten en adaptieve immuniteit26. De twee belangrijkste receptoren op het oppervlak van T-lymfocyten die CD80 en CD86 binden, zijn CD28 en het cytotoxische T-lymfocyt-geassocieerde eiwit 4 (CTLA-4). Binding aan CD28 activeert lymfocyten en verbetert bijgevolg de immuunrespons27. De in dit onderzoek verkregen resultaten laten zien dat CD4+ T-cellen twee maanden na de tweede dosis van het vaccin worden geactiveerd door de van S-antigeen afkomstige epitopen die op geactiveerde B-cellen en monocyten aanwezig zijn. Verschillende gegevens suggereerden dat CD4 T-cellen voornamelijk werden geactiveerd na mRNA-vaccin, terwijl in sommige onderzoeken wordt gerapporteerd dat zowel CD4- als CD8 T-cellen in gelijke mate worden gepresenteerd en geactiveerd30. Tan et al. heeft onlangs waargenomen dat drie maanden na vaccinatie de gemiddelde hoeveelheid Spike-specifieke T-cellen gelijk was aan wat werd gedetecteerd bij herstellende patiënten op een vergelijkbaar tijdstip na SARS-CoV-2-infectie31. Bovendien lijken de componenten van adaptieve immuniteit (zowel bij eerder geïnfecteerde als gevaccineerde mensen) onafhankelijk te worden gereguleerd6,32,33 en is er een gebrek aan correlatie tussen de productie van antivirale antilichamen en de frequentie van T-cellen. Bovendien wekken de huidige mRNA-vaccins immuunreacties op die beperkt zijn tot het Spike-eiwit. De potentieel beschermende rol van T-cellen die specifiek zijn voor andere structurele en niet-structurele eiwitten zal echter ook moeten worden geëvalueerd34. Het idee dat poly-antigene vaccins een grotere controle zouden kunnen uitoefenen tegen virale varianten dan mono-antigene vaccins, zoals vaccins op basis van Spike-eiwitten, zou een goede reden kunnen hebben35,36.

Figuur 3. (a) Expressie van IFN- in alle en CD3+ T perifere bloedlymfocyten. Serumniveau van IFN- in de (b) gehele geanalyseerde groep, (c) naïeve en eerder geïnfecteerde individuen. De resultaten worden gepresenteerd als individuele waarden met standaardfout van het gemiddelde (SEM). Verschillen tussen waarden werden vergeleken met behulp van de Wilcoxon-test met ondertekende rang en de resultaten werden als statistisch significant beschouwd als p<0.05. * p<0.05.

In deze studie werden verhoogde niveaus van IFN- gedetecteerd in alle lymfocyten en in CD3+ T-cellen 7 dagen na volledige vaccinatie. Ook werd een verhoogd IFN-gehalte in het serum van alle gevaccineerde personen waargenomen, zowel bij SARS-CoV-2 naïeve als eerder geïnfecteerde personen 7 dagen na volledige vaccinatie. Dus de op mRNA gebaseerde vaccin-geïnduceerde Spike-specifieke T-cellen die overvloedig IFN- produceren. IFN- is een belangrijk cytokine met antivirale eigenschappen en er is aangetoond dat het de replicatie van SARS-CoV remt-28. De snelle opwekking van IFN- door het BNT162b2-vaccin, aangetoond in dit onderzoek, duidt op een gunstige T-cel-immuunrespons tegen het SARS-CoV-2-virus. De immunologische reactie veroorzaakt door SARS-CoV-2 omvat ook de productie van talrijke pro-inflammatoire cytokines, voornamelijk IL-6 en TNF- en veranderingen in hun niveaus kunnen in verband worden gebracht met de prognose van de ziekte. Er zijn ernstige en fatale gevallen van COVID-19 gemeld bij personen met verhoogde cytokineniveaus37. In dit onderzoek werd echter geen significant verschil in serumspiegels van IL-6 en TNF- gedetecteerd 7 dagen en tot 1 maand na volledige vaccinatie, wat het gevolg zou kunnen zijn van specifieke cohortkenmerken en het tijdstip van de bemonstering.

Deze gegevens vertegenwoordigen de eerste gepubliceerde rapporten over duurzame immuniteit, waarbij rekening wordt gehouden met zowel de humorale als de cellulaire component, die zich richt op vrouwen die borstvoeding geven. Dit zou vooral nuttig kunnen zijn voor toekomstige meta-analyses van deze en andere gevoelige subgroepen van de bevolking, aangezien gegevens uit het Balkangebied over de Slavische bevolking doorgaans ontbreken bij grotere multinationale inspanningen.

cistanche tubulosa-verbetering van het immuunsysteem

Conclusies

Het anti-SARS-CoV-2 BNT162b2 mRNA-vaccin induceerde meetbare en duurzame humorale en cellulaire reacties bij vrouwen die borstvoeding geven en zowel naïeve als eerder geïnfecteerde personen in de eerste zes maanden na vaccinatie in Servië. Er werden geen ernstige nadelige effecten van vaccinatie gemeld en slechts 5% van de deelnemers raakte in de eerste zes maanden na vaccinatie besmet met het SARS-CoV-2, zonder dat ziekenhuisopname nodig was. Er werd twee jaar na ontvangst van het anti-SARS-CoV-vaccin geen onvoorziene schade gemeld voor vrouwen die borstvoeding geven of hun kinderen die borstvoeding krijgen. Volgende studies op dit gebied zouden zich moeten richten op onderzoeks- en ontwikkelingsstrategieën voor vaccins die COVID-19 en mogelijke soortgelijke pandemieën sneller en langduriger onder controle kunnen houden. Er moeten ook inspanningen worden geleverd om op kennis gebaseerde richtlijnen te bieden, desinformatie op de juiste manier aan te pakken, vooral rond gevoelige subpopulaties zoals vrouwen die borstvoeding geven, de toegang tot vaccins te vergemakkelijken in tijden van grote behoefte, en het algemene vertrouwen in de wetenschap te versterken.

cistanche voordelen-versterken het immuunsysteem

Referenties

1. Dashboard van de WHO, WHO Wereldgezondheidsorganisatie Coronavirus (COVID-19). https://covid19.who.int/ (2022).

2. Hojyo, S. et al. Hoe COVID-19 een cytokinestorm veroorzaakt met hoge sterfte. Infamm. Regen. 40, (2020).

3. van Eeden, C., Khan, L., Osman, MS & Tervaert, JWC Disfunctie van natuurlijke killercellen en de rol ervan bij COVID-19. Int. J. Mol. Wetenschap 21, 6351 (2020).

4. Sette, A. & Crotty, S. Adaptieve immuniteit voor SARS-CoV-2 en COVID-19. Cel 184, 861–880 (2021).

5. Chen, G. et al. Klinische en immunologische kenmerken van ernstige en matige coronavirusziekte 2019. J. Clin. Investeren. 130, 2620–2629 (2020).

6. Dan, JM et al. Immunologisch geheugen voor SARS-CoV-2 beoordeeld tot 8 maanden na infectie. Wetenschap 80, 371 (2021).

7. Turner, JS et al. SARS-CoV-2 mRNA-vaccins veroorzaken aanhoudende reacties in het menselijke kiemcentrum. Nat. 596, 109–113 (2021).

8. Schilder, MM et al. Snelle inductie van antigeenspecifieke CD4+ T-cellen wordt geassocieerd met gecoördineerde humorale en cellulaire immuniteit tegen SARS-CoV-2 mRNA-vaccinatie. Immuniteit 54, 2133-2142.e3 (2021).

9. Goel, RR et al. mRNA-vaccinatie induceert een duurzaam immuungeheugen tegen SARS-CoV-2 met voortdurende evolutie naar zorgwekkende varianten. bioRxiv Prepr. Bediend. Biol. https://doi.org/10.1101/2021.08.23.457229, (2021)

10. Muyldermans, J., De Weerdt, L., De Brabandere, L., Maertens, K. & Tommelein, E. De effecten van covid-19 vaccinatie op vrouwen die borstvoeding geven: een systematisch overzicht van de literatuur. Voorkant. Immunol. 13, 1498 (2022).

11. Golan, Y. et al. Covid-19 mRNA-vaccinatie tijdens borstvoeding: beoordeling van bijwerkingen en vaccingerelateerde antilichamen bij moeder-kind-duades. Voorkant. Immunol. 12, 777103 (2021).

12. Arbeitman, CR et al. Structurele en functionele vergelijking van SARS-CoV-2-spike-receptorbindend domein geproduceerd in Pichia pastoris en zoogdiercellen. Wetenschap Rep. 10, 21779 (2020).

13. Konjevic, G. et al. Evaluatie van de functionele capaciteit van NK-cellen van melanoompatiënten in een in vitro model van NK-celcontact met K562- en femx-tumorcellijnen. J. Lid Biol. 250, 507-516 (2017).

14. Konjević, G. et al. Een verminderde CD161-activerende en verhoogde CD158a-remmende receptorexpressie op NK-cellen ligt ten grondslag aan verminderde cytotoxiciteit van NK-cellen bij patiënten met multipel myeloom. J. Clin. Pathol. https://doi.org/10.1136/jclinpath-2016-203614 (2016).

15. Stanojković, TP et al. Evaluatie van cytokine-expressie en circulerende subsets van immuuncellen als potentiële parameters van acute stralingstoxiciteit bij prostaatkankerpatiënten. Wetenschap Rep.10, 19002 (2020).

16. Cavic, M. et al. Onderzoek naar het reële effect van de SARS-CoV-2 pandemie op de moleculaire diagnostiek voor kankerpatiënten en personen met een hoog risico. Deskundige ds. Mol. Diagnose. 21, 101–107 (2021).

17. Hassan, I., Mukaigawara, M., King, L., Fernandes, G. & Sridhar, D. Is het achteraf gezien 2020? Lessen in mondiaal gezondheidsbeheer, één jaar na de pandemie. Nat. Med. 27, 396–400 (2021).

18. Cavic, M., Grahovac, J., Zec, R., Stefanovic, M. & Aleksic, E. Overzicht van het eerste jaar van de SARS-CoV-2 pandemie in Servië en de provincie Pirot. Pirot. Zb. 46, 1–23 (2021).

19. Lijeskić, O. et al. Een prospectieve cohortstudie naar de kinetiek van specifieke antilichamen tegen sars-cov-2-infectie en tegen vier SARS-CoV-2-vaccins die beschikbaar zijn in Servië, en de effectiviteit van vaccins: een tussentijds rapport van 3- maanden. Vaccins 9, (2021).

20. Petrović, V., Vuković, V., Patić, A., Marković, M. & Ristić, M. Immunogeniciteit van BNT162b2-, BBIBP-CorV- en Gam-COVID-Vac-vaccins en immuniteit na natuurlijke SARS-CoV{{7 }} infectie-Een vergelijkende studie van Novi Sad. Servië. PLoS One 17, e0263468 (2022).

21. Yeo, KT et al. Neutraliserende activiteit en mRNA van het SARS-CoV-2-vaccin Persistentie in serum en moedermelk na BNT162b2-vaccinatie bij vrouwen die borstvoeding geven. Voorkant. Immunol. 12, (2022).

22. Pace, RM et al. Melk van vrouwen bij wie COVID-19 is vastgesteld, bevat geen SARS-CoV-2 RNA, maar heeft aanhoudende niveaus van SARS-CoV-2-specifieke IgA-antilichamen. Voorkant. Immunol. 12, 5566 (2021).

23. CDC, C. voor DC- en P. COVID-19-vaccins tijdens zwangerschap of borstvoeding. https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/vacci nes/recommendations/pregnancy.html (2022).

24. Bethesda (MD), NI van CH en HD Drugs and lactation database (LactMed). COVID-19-vaccins. (2022).

25. Jo, DH et al. Snel afnemende SARS-CoV-2 antilichaamtiters binnen 4 maanden na BNT162b2-vaccinatie. Vaccins 9, (2021).

26. Carreno, BM & Collins, M. Te B7-familie van liganden en zijn receptoren: nieuwe routes voor costimulatie en remming van immuunreacties. Jaar. Ds. Immunol. 20, 29-53 (2002).

27. Esensten, JH, Helou, YA, Chopra, G., Weiss, A. & Bluestone, JA CD28-costimulatie: van mechanisme tot therapie. Immuniteit 44, 973–988 (2016).

28. Geers, D. et al. SARS-CoV-2 zorgwekkende varianten ontsnappen gedeeltelijk aan humorale, maar niet aan T-celreacties bij COVID-19 herstellende donoren en gevaccineerden. Wetenschap Immunol. 6, (2021).

29. Tarke, A. et al. Impact van SARS-CoV-2-varianten op de totale CD4 +- en CD8 + T-celreactiviteit bij geïnfecteerde of gevaccineerde individuen. Celrapporten. Med. 2, (2021).

30. Sahin, U. et al. Het BNT162b2-vaccin induceert neutraliserende antilichamen en polyspecifieke T-cellen bij mensen. Nat. 2021 5957868 595, 572–577 (2021).

31. Tan, AT et al. Snelle meting van SARS-CoV-2 piek-T-cellen in volbloed van gevaccineerde en natuurlijk geïnfecteerde personen. J. Clin. Investeren. 131, (2021).

32. Chia, WN et al. Dynamiek van SARS-CoV-2 neutraliserende antilichaamreacties en duur van de immuniteit: een longitudinaal onderzoek. Te Lancet Microbe 2, e240-e249 (2021).

33. Reynolds, CJ et al. Discordante neutraliserende antilichaam- en T-celreacties bij asymptomatische en milde SARS-CoV-2-infectie. Wetenschap Immunol. 5, (2020).

34. Lopandić, Z. et al. IgM- en IgG-immunoreactiviteit van SARS-CoV-2 recombinant m-eiwit. Int. J. Mol. Wetenschap 22, (2021).

35. Altmann, DM, Boyton, RJ & Beale, R. Immuniteit voor SARS-CoV-2 zorgwekkende varianten. Wetenschap 371, 1103–1104 (2021).

36. Matchett, WE et al. Baanbrekend: Nucleocapside-vaccin wekt piek-onafhankelijke SARS-CoV-2 beschermende immuniteit op. J. Immunol. 207, 376–379 (2021).

37. Costela-Ruiz, VJ, Illescas-Montes, R., Puerta-Puerta, JM, Ruiz, C. & Melguizo-Rodríguez, L. SARS-CoV-2 infectie: de rol van cytokines bij COVID{{ 7}} ziekte. Cytokinegroeifactor Rev. 54, 62 (2020).