Weet u dat oxidatieve stress nierletsel kan veroorzaken?

Voor meer informatie:ali.ma@wecistanche.com

Deel Ⅰ: Oxidatieve stress na acuut nierletsel veroorzaakt verstoring van longcelcilia en hun vrijlating in de bronchoalveolaire spoelvloeistof en longletsel, die worden verergerd door Idh2-deletie

Yong Kwon Hana, Ji Su Kim, Gwan Beom Leea, Jae Hang Lim, Kwon Moo Park

1. Inleiding

Acuut nierletsel(AKI) komt voor in verschillende klinische settings, waaronder shock, sepsis, orgaantransplantatie en vaatchirurgie [1-3]. AKI (Acuut nierletsel) veroorzaakt schade aan verre organen, waaronder de longen, lever, hart en hersenen [4-9]. Dit verre orgaanletsel na AKI (Acuut nierletsel)wordt erkend als een belangrijke risicofactor voor slechte resultaten [5,9]; daarom is een passende behandeling van orgaanletsel op afstand belangrijk om de uitkomst van patiënten met AKI . te verbeteren (Acuut nierletsel). De precieze mechanismen die betrokken zijn bij AKI (Acuut nierletsel)-gerelateerd orgaanletsel op afstand moet nog worden gedefinieerd.

Klik om Cistanche voor acute nierziekte en cistanche bijwerkingen

Cilia zijn uit centriolen afgeleide uitsteeksels van het celoppervlak die een op microtubuli gebaseerd cytoskelet (axoneme) bevatten, omgeven door een ciliair membraan. Cilia worden gekenmerkt door hun structuur en beweeglijkheid en worden gedefinieerd als immotile cilia (primaire cilia) of motile cilia. Primaire trilhaartjes zijn solitaire, niet-beweeglijke, op microtubuli gebaseerde 9 plus 0 axonemale antenne-achtige organellen die uitsteken uit het celmembraan en extracellulaire signalen in de cel omzetten via de coördinatie van verschillende signaalroutes [10-12 ]. Beweeglijke trilhaartjes, met een meervoudige, 9 plus 2 axonemale structuur, worden voornamelijk aangetroffen in de luchtwegen en eileiders en hebben een functie om materialen te transporteren [10,13]. Toenemend bewijs heeft aangetoond dat defecten in de vorming en functie van trilhaartjes geassocieerd zijn met diverse menselijke ziekten, waaronder:polycysteus nierziektenen primaire ciliaire dyskinesie [14-20]. Verder hebben recente studies aangetoond dat de verstoring van trilhaartjes optreedt onder invloed van pathologische omstandigheden en dat deze verstoring betrokken is bij het mediëren van celbeschadiging en disfunctie [15-20].

Steeds meer bewijs heeft aangetoond dat:nierischemie-reperfusie (IR), een oorzaak van AKI (Acuut nierletsel), veroorzaakt orgaanschade op afstand [6-8,21]. Verwonding van organen op afstand is geassocieerd met ontstekingsreacties, veranderingen in signaalroutes geassocieerd met celdood en overleving, enoxidatieve stress [8,22-24]. Oxidatieve stressis direct gekoppeld aan de disfunctie van cellulaire componenten, wat kan leiden tot orgaanstoornissen, en wordt erkend als een van de belangrijkste oorzaken vannierIR-geïnduceerd orgaanletsel op afstand [21,25,26]. We hebben eerder aangetoond datnierIR- en cisplatine-geïnduceerde AKI (Acuut nierletsel)verandert de lengte van de primaire trilhaartjes innierepitheelcellen via assemblage, demontage en verstoring (deciliatie, uitscheiding of fragmentatie) van cilia [17-19]. Deze processen worden geassocieerd met reactieve zuurstofsoorten (ROS) enoxidatieve stress. afhankelijk van de concentratie waterstofperoxide en de mate vanoxidatiefspanning; lage H2O2-concentratie induceert de verlenging van de lengte van de primaire cilia, terwijl hoge H,O-concentratie verstoring induceert [17-20]. Bovendien vonden we dat verstoorde primaire trilharen van gewondenniertubulaire epitheelcellen worden uitgescheiden in de urine en dat deze verstoring en uitscheiding kan worden voorkomen door een behandeling met antioxidanten [17-20]. Rodriguez-Ribera et al. meldde ook dat reactieve carbonylverbindingen zoals malondialdehyde, een product vanoxidatieve stress, induceren het verlies van primaire trilhaartjes bij de mensnierproximale tubuluscellen [27]. Daarom veronderstelden we dat AKI (Acuut nierletsel)-geïnduceerde acute longbeschadiging (ALD) en celbeschadiging zijn geassocieerd met trilhaartjes en longcellenoxidatiefspanningen dat het voorkomen vanoxidatiefspanningvermindert AKI (Acuut nierletsel)-geïnduceerde longbeschadiging. In de huidige studie hebben we onderzocht ofnierIR-geïnduceerde AKI (Acuut nierletsel)veroorzaakt de verstoring van trilhaartjes en cellen van de longen, en zo ja, of deze verstoringen verband houden met?oxidatiefB. Hiertoe hebben we farmacologische en genetische benaderingen gebruikt, waaronder het gebruik van muizen met isocitraatdehydrogenase 2 (Idh2). IDH2 is een enzym gelokaliseerd in de mitochondriën [28]. In de mitochondriën katalyseert IDH2 de oxidatieve decarboxylering van isocitraat tot -ketoglutaraat, vergezeld van de reductie van NADP tot NADPH, wat een kritische factor is in het thioredoxine- en glutathion-antioxidantsysteem [29-32]. Daarnaast hebben we onderzocht of de aanwezigheid van ciliaire eiwitten en fragmenten in bronchoalveolaire spoelvloeistof (BALF) indicatief is voor longbeschadiging. We melden hier voor het eerst dat AKI (Acuut nierletsel)veroorzaakt verstoring van longcelcilia en hun vrijlating in de BALF, evenals longbeschadiging, die wordt verergerd door IDH2-deletie.

oxidatieve stress veroorzaakt nierbeschadiging

2. Materialen & methoden

Dierlijke voorbereiding.

Alle experimenten werden uitgevoerd met 8-10-week-oude mannelijke C57BL/6-muizen (Koatech, Pyeongtaek, Gyeonggi-do, Korea), vrouwelijke Idh2-gen-verwijderde (Idh2~/) muizen en wildtype (dh2 plus / ) muizen [28]. De muizen kregen vrije toegang tot water en standaard muizenvoer. De dierstudie werd goedgekeurd door het Institutional Animal Care and Use Committee van de Kyungpook National University, Republiek Korea. Om bilaterale nierischemie te induceren,nierenwerden blootgesteld via flankincisies onder verdoving met pentobarbital-natrium (60 mg/kg LG), en vervolgens werden de steeltjes van denierenwerden gedurende 35 minuten volledig geklemd met behulp van microaneurysma-klemmen. Dezelfde procedure, exclusiefnierpedikelklemming, werd uitgevoerd in de schijnoperatie. Lichaamstemperatuur werd tijdens chirurgische procedures op 36,5 graden -37 graden C gehouden met behulp van een temperatuurgecontroleerd verwarmingsapparaat (FHC, Bowdoin, ME, VS). Aan sommige muizen werd {{4 }}(2,2,6,6-Tetramethylpiperidine-1-ox-yl-4-arylamino)-2-oxoethyltrifenylfosfoniumchloride (Mito--TEMPO,{{14 }},7 mg/kg LG;Sigma, St.Louis, MO,VS) op 17 en 1 uur voor operatie (voorbehandeling) of 6 uur na operatie (nabehandeling).

Aan het einde van de experimenten waren de longen ennierweefsels werden snel ingevroren in vloeibare stikstof of perfusie gefixeerd met PLP (4 procent paraformaldehyde, 75 mM L-lysine, 10 mM natriumperjodaat: Sigma) oplossing voor respectievelijk biochemische en histologische studies. Bevroren weefsels werden bewaard bij -70 graden totdat ze nodig waren.

Collectie van BALF.

BALF werd verzameld na het euthanaseren van de muizen door een overdosis-injectie van pentobarbital-natrium. Longlekkage werd geëvalueerd door de eiwitconcentratie en het aantal cellen in de BALF te bepalen. Om BALF te verzamelen, werd de bronchus van de linkerlong volledig afgeklemd met behulp van microaneurysma-klemmen. Een naald werd in de luchtpijp ingebracht en 0,8 ml koude fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) werd langzaam in de rechter longkwabben geïnjecteerd. BALF werd verzameld door de zuiger van de spuit eenmaal terug te trekken. Het totale aantal cellen en de eiwitconcentratie in BALF werden onmiddellijk geanalyseerd met respectievelijk een hematocytometer en BCA-assaykit (Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, VS). BALF werd op -70 graad gehouden totdat het nodig was voor western blotting-analyse.

Nierfunctie. Bloed werd verzameld van muizen met behulp van een gehepariniseerde injectiespuit. De concentratie van bloedureumstikstof (BUN) in plasma werd bepaald met behulp van een Vitros 250 Chemistry Analyzer (Johnson & Johnson, New Brunswick, NJ, VS).

Perjoodzuur-Schiff (PAS) en hematoxyline en eosine (H&E) kleuring.

PLP-vastnieren longweefsels werden in paraffine ingebed, in 3- μm dikke secties gesneden met behulp van een microtoom （Leica, Bensheim, Duitsland) en op glasplaatjes gemonteerd.Nieren longsecties werden gekleurd met PAS en H&E. Denierschadescore werd blind geëvalueerd door onderzoekers zoals eerder beschreven [3,19].

Western-blot-analyse.

Western blotting werd uitgevoerd zoals eerder beschreven [3]. De antilichamen die werden gebruikt voor western blotting waren als volgt: anti-4-hydroxy nominaal (4-HNE; Abcam, Cambridge, MA, VS), anti- -tubuline (Santa Cruz, CA, VS) , anti-geacetyleerd -tubuline (ac- -tubuline, Sigma), anti-mangaan-afhankelijk superoxide dismutase (MnSOD; Calbiochem, San Diego, CA, VS), anti-catalase (Fitzgerald, Concord, MA, VS) , anti-ADP-ribosyleringsfactor-achtig eiwit 13B (Arl13B, Proteintech, Chicago, IL, VS), anti-isocitraatdehydrogenase 2 (IDH2; Santa Cruz), anti-optische atrofie 1 (Opal; BD Bioscience, San Diego, CA ), anti-splijting 1 (Fis1; Sigma), anti-dynamine-gerelateerd eiwit 1 (Drpl; Cell Signaling Technology, Danvers, MA, VS) en anti-glyceraldehyde 3- fosfaatdehydrogenase (GAPDH; NOVUS, Littleton, CO, VS).

Immunofluorescentiekleuring.

Na deparaffinisatie werden coupes gedurende 1 minuut geïncubeerd in PBS met {{0}},2 procent Triton X-100(Sigma) en vervolgens 10 minuten gewassen in PBS. Om het antigeenepitoop bloot te leggen, werden secties gedurende 10 minuten gekookt in 10 mm natriumcitraatbuffer (pH 6,0), 20 minuten gekoeld en vervolgens driemaal gewassen met PBS gedurende 5 minuten bij elke wasbeurt. De coupes werden gedurende 30 minuten geblokkeerd met 3 procent runderserumalbumine in PBS (blokkerende buffer) en vervolgens overnacht bij 4°C geïncubeerd met anti-Arll3b-antilichaam. Na het wassen werden de secties gedurende 60 minuten geïncubeerd met FITC-geconjugeerd geit-anti-konijnen-IgG (Vector Laboratories, Burlingame, CA, VS) en vervolgens 3 keer gewassen met PBS gedurende elk 5 minuten. Celkernen werden gekleurd met 4'-6-diamidino-2-fenylindol (DAPI; Sigma).

Meting van superoxide in longweefsel.

Superoxideniveaus werden gemeten met behulp van dihydroethidium (DHE; Sigma) zoals eerder beschreven 【33,34】. In het kort werd 10 M DHE in 1 ml voorverwarmde -37 graden ）PBS toegevoegd aan een 96-well-plaat die 20 ul longweefsellysaat bevatte. De plaat werd elke 10 min gedurende in totaal 30 min afgelezen bij excitatie/emissiefilters van 530 nm/620 nm.

Meting van IL-6.

IL-6-niveaus in plasma en BALF werden bepaald via ELISA-assay met behulp van ELISA-assaykit volgens de instructies van de fabrikant (BD Bioscience).

Statistieken.

Alle gegevens werden geanalyseerd met behulp van GraphPad Prism 7-software (San Diego, CA, VS). De resultaten worden uitgedrukt als de gemiddelde ± standaardfout van het gemiddelde (SEM). Statistische analyse werd uitgevoerd met behulp van Student's t-test en eenrichtingsanalyse van variantie met Tukey's post hoc procedure. Verschillen werden als statistisch significant beschouwd wanneer p-waarden<>

3. Resultaten

1. Nier-IR veroorzaakt longbeschadiging.

Zoals verwacht, aanzienlijke morfologische schade aan denieren(Fig.1A en B) en verhogingen in plasma BUN (Fig.1C) werden waargenomen 4 en 24 uur na 35 minuten bilateraalnierischemie. In de long werd een toename van neutrofielen en alveolaire wandverdikking waargenomen 4 en 24 uur nanierischemie (Fig. 1D). Bovendien werd de toename van de expressie van lymfocytantigeen 6-complex locus G6D (Ly6G, een marker voor monocyten, granulocyten en neutrofielen) in longweefsel waargenomen op een reperfusietijdafhankelijke manier (Fig. 1E en F). Interleukine-6 (IL-6)concentratie in plasma nam toe nanierIR, met een piek op 4 uur na ischemie (Fig. 1G). De I-6- en eiwitconcentraties evenals het totale aantal cellen in BALF namen geleidelijk toe 4 en 24 uur na nierischemie (Fig.1H-J). Het overlevingspercentage na 24 uur na 35 minnierIR was ongeveer 92 procent (gegevens niet getoond).

Wanneernierischemische tijd werd verlengd tot 45 min, post-ischemische verhogingen in BUN-concentratie in plasma en totale eiwitconcentratie en celaantal in BALF waren groter dan die na 35 min ischemie (Fig.1K-M). Deze gegevens geven aan dat longbeschadiging veroorzaakt doornierIR-letsel is afhankelijk van de mate vannierblessure.

Fig. 1. Histologische en functionele schade van de long na nier-IR. C57BL/6 mannelijke muizen werden onderworpen aan 35 (AM) en 45 (K-M) minuten bilaterale nierischemie of schijnoperatie. Nier, long, bloed en BALF werden 4 en 24 uur na de operatie verzameld. BALF werd verzameld zoals beschreven in de materialen en methoden. (A-J) Muizen werden 4 of 24 uur na 35 minuten ischemie opgeofferd. (A,B)Niersecties (3 m) werden gekleurd met PAS, ennierbuisvormige schade werd gescoord. (C, K) BUN-concentraties werden gemeten in plasma. (D) Longsecties (3 m) werden gekleurd met H & E. (E, F) Ly6G-expressie in longweefsel werd geanalyseerd door western blotting. GAPDH werd gebruikt als laadcontrole. De dichtheden van de banden werden gemeten met behulp van de ImageJ-software. (G, H) De IL-6-concentratie werd gemeten in plasma en BALF. (I, J, L, M) De eiwitconcentratie en het totale aantal cellen werden gemeten in BALF. (K-M) Muizen werden 4 uur na 35 of 45 minuten ischemie opgeofferd. Resultaten worden uitgedrukt als de gemiddelden ± SEM (n=3–6). *p < 0.05="" vs.="" schijnvertoning.="" †p="">< 0,05="" vs.="" 4="" uur="" na="" ischemie="" of="" ischemie="" gedurende="" 35="">

2. Nier-IRveroorzaakt verstoring van de trilhaartjes van longepitheelcellen en deze fragmenten komen vrij in BALF.

Longweefselcoupes en met BALF geladen objectglaasjes werden immunologisch gekleurd met anti-ADP-ribosyleringsfactor-achtig eiwit 13B (Arl13B, een marker van cilia) antilichaam. Positieve signalen van Arll3B werden waargenomen op het luminale deel van de longblaasjes en de terminale bronchiolen van de long (Fig. 2A). Verlies van Arl13B-positief signaal werd waargenomen in de long vannierIR-onderworpen muizen (Fig.2A). Dit verlies van Arll13B-positief signaal nam geleidelijk toe nanierischemie in de loop van de tijd (Fig. 2A). In BALF werden verschillende lengtes van Arl13B-positieve deeltjes waargenomen na nierischemie, en het aantal Arl13B-positieve deeltjes in BALF nam geleidelijk toe in de tijd na ischemie (Fig. 2B en C). De expressie van Arl13B, geacetyleerd -tubuline (ac- -tubuline, granulocyten en neutrofielen) in longweefsel werd waargenomen op een reperfusietijdafhankelijke manier (Fig. 1E en F). Interleukine-6 (IL-6)concentratie in plasma nam toe nanierIR, met een piek op 4 uur na ischemie (Fig. 1G). De I-6- en eiwitconcentraties evenals het totale aantal cellen in BALF namen geleidelijk toe 4 en 24 uur na nierischemie (Fig.1H-J). Het overlevingspercentage na 24 uur na 35 minuten nier-IR was ongeveer 92 procent (gegevens niet getoond).

Wanneernierischemische tijd werd verlengd tot 45 min, post-ischemische verhogingen in BUN-concentratie in plasma en totale eiwitconcentratie en celaantal in BALF waren groter dan die na 35 min ischemie (Fig.1K-M). Deze gegevens geven aan dat longbeschadiging veroorzaakt doornierIR-letsel is afhankelijk van de mate vannierblessure.

Fig. 2. Verstoring in longcelcilia en hun fragmenten en eiwitten die vrijkomen in BALF na nier-IR.C57BL/6 mannelijke muizen werden onderworpen aan ofwel 35 minuten bilaterale nierischemie of schijnoperatie. Longweefsel en BALF werden verzameld 4 en 24 uur na de operatie zoals beschreven in de materialen en methoden. (A) Longsecties (5 m) werden onderworpen aan immunofluorescentiekleuring met behulp van een anti-Arl13B-antilichaam; groen geeft Arl13B-positief aan. DAPI-kleuring (4′,6-diamidino-2-fenylindol; blauw) werd gebruikt om de kernen van cellen te visualiseren. Pijlpunten geven trilhaartjes aan. (B) BALF (10 ul) werd op een glasplaatje geplaatst dat immunofluorescerend werd gekleurd met behulp van een anti-Arl13B-antilichaam; groen geeft Arl13B-positief aan (n=3). (C) Het aantal Arl13B-positieve deeltjes werd geteld onder een fluorescentiemicroscoop (n=3). (D-G) Arl13B, geacetyleerde - -tubuline (ac- -tub) en -tubuline (-tub) expressies in BALF werden geanalyseerd door western blotting. De dichtheden van de banden werden gemeten met behulp van de ImageJ-software. Resultaten worden uitgedrukt als de gemiddelden ± SEM (n=3). *p < 0.05="" vs.="" schijnvertoning.="" †p="">< 0,05="" vs.="" 4="" uur="" na="" ischemie.="" a:="" alveoli,="" tb:="">

3. Nier-IR verhoogt de niveaus van superoxide en oxidatieve stress in zowel longweefsel als BALF.

NierIR verhoogde het superoxideniveau in longweefsel (Fig. 3A), terwijl het de expressie van IDH2 (Fig. 3B en C) verminderde, maar niet MnSOD en catalase (Fig. 3B.DE). Deze bevindingen geven aan dat nier-IR-geïnduceerde longbeschadiging geassocieerd is met verhogingen van ROS-niveaus enoxidatieve stressin de longen. Ter ondersteuning hiervan nam het niveau van 4-hydroxy nominale (4-HNE), een product van lipideperoxidatie, in het longweefsel significant toe 4 en 24 uur nanierischemie(Fig. 3F-D). 4-HNE werd waargenomen in bijna alle gebieden in longweefsel, inclusief de longblaasjes en bronchiolen (Fig. 3H en D. Verder werd de expressie van 8-hydroxy-2'-deoxyguanosine ({{ 7}}OhdG), een bekende marker van DNA-oxidatie als een geoxideerd derivaat van deoxyguanosine, nam toe in zowel het cytosol als de kernen in longepitheelcellen nanierischemie (Fig. 3J en K. In BALF nam 4-HNE-expressie ook toe nanierischemieop een reperfusietijdafhankelijke manier (Fig. 3L, M). Bovendien, toen de nierischemische tijd werd verlengd tot 45 min, was de post-ischemische toename van 4-HNE-expressie in de longen groter dan die na 35 min.nierischemie (Fig. 3N, O). Deze resultaten geven aan dat zowel mitochondriaal DNA als nucleair DNA oxidatief beschadigd zijn door verhoogde ROS-vorming en stoornissen in verwijderingssystemen, wat suggereert dat de schade aan pulmonale epitheelcelcilia geassocieerd is metoxidatieve stress.

Fig. 3. Oxidatieve stress in longweefsel na nier-IR. C57BL/6 mannelijke muizen werden onderworpen aan 35 (A-O) en 45 (N, O) min bilaterale renale ischemie of schijnoperatie.Long ennierwerden 4 en 24 uur na 35 minuten of 45 minuten ischemie geoogst. (AM) Muizen werden ofwel 4 of 24 uur na 35 minuten ischemie opgeofferd. (A) Het superoxidegehalte in het longweefsel werd gemeten zoals beschreven in de materialen en methoden (n=3-5). (B-E) IDH2-, catalase- en MnSOD-expressie in het longweefsel werden geanalyseerd door western blotting (n {{10}}). GAPDH werd gebruikt als de laadcontrole. (C-E) De dichtheden van de banden werden gemeten met behulp van ImageJ-software. (F, G) 4-HNE-expressie in de longen werd geanalyseerd door western blotting en de banddichtheid werd gemeten met ImageJ (n=4). (H-K) Longsecties (3 m) werden immunohistochemisch gekleurd met behulp van anti-4-HNE- en 8-OHdG-antilichamen en tegengekleurd met behulp van hematoxyline; bruin geeft 4-HNE- en 8-OHdG-positief aan (n {{20}}). (I, K) De intensiteiten van 4-HNE- en 8-OHdG-positieve signalen werden gemeten met behulp van het i-Solution-programma (n=3). (L, M) 4-HNE-expressie in BALF werd geanalyseerd met Western-blotting en de banddichtheid werd gemeten met ImageJ (n=3). (N, O) Muizen werden 4 uur na 35 min of 45 min ischemie opgeofferd. 4-HNE-expressie in de longen werd geanalyseerd met Western-blotting en de banddichtheid werd gemeten met ImageJ (n=3). Resultaten worden uitgedrukt als de gemiddelden ± SEM (n =3–5). *p < 0,05="" versus="" schijn.="" †p="">< 0,05="" vs.="" 4="" uur="" na="" ischemie="" of="" 35="" min="" ischemie.="" (voor="" interpretatie="" van="" de="" verwijzingen="" naar="" kleur="" in="" deze="" figuurlegenda="" wordt="" de="" lezer="" verwezen="" naar="" de="" webversie="" van="" dit="">

In cellen, mitochondriën. een belangrijk ROS-producerend intracellulair organel ondergaat normaal gesproken fusie en splitsing om zich aan te passen aan fysiologische en pathologische omstandigheden. Verslechtering van deze fusie- en splijtingsprocessen kan celdisfunctie en -beschadiging veroorzaken [36]. Eerdere studies hebben aangetoond datoxidatiefspanningschaadt de normale dynamiek van mitochondriale fusie en splijting, wat resulteert in mitochondriale disfunctie en celbeschadiging [32,36-38]. We hebben geprobeerd de mitochondriale dynamiek te evalueren door mitochondriale splitsings- en fusieregulerende eiwitexpressies te bepalen. De expressies van Fis1 en Drp1, die mitochondriale splijting reguleren, waren significant verhoogd in de longen van muizen metnierischemie(Fig. 4A-C). De expressie van OPA1, die mitochondriale fusie reguleert, werd echter niet significant veranderd door nier-IR (Fig. 4A, D). Deze gegevens geven aan dat de balans van mitochondriale fusie en splitsing in longcellen wordt verstoord als gevolg van AKI (Acuut nierletsel).

Fig. 4. Verandering in mitochondriale dynamiek in de long na nier-IR. C57BL/6 mannelijke muizen werden onderworpen aan ofwel 35 min bilaterale renale ischemie of schijnoperatie.De longen werden 4 en 24 uur na ischemie geoogst. (A–D) Drp1-, Fis1- en OPA1-expressies in longweefsels werden geanalyseerd door western blotting. GAPDH werd gebruikt als de laadcontrole. De dichtheden van de banden werden gemeten met behulp van de ImageJ-software. Resultaten worden uitgedrukt als de gemiddelden ± SEM (n=4). *p < 0.05="" vs.="" schijnvertoning.="" †p="">< 0,05="" vs.="" 4="" uur="" na="">

4. Mitochondria-specifieke antioxidantbehandeling vermindert nier-IR-geïnduceerde longbeschadiging en verstoring van de longcilia.

Om de rol van mitochondriaal te bevestigenoxidatiefspanningAannierIR-geïnduceerde longbeschadiging en verstoring van de cilia van de longepitheelcellen, we hebben getest of voorbehandeling (Fig. 5A-D of nabehandeling (Fig. 5J-L) met Mito-TEMPO, een mitochondria-specifieke antioxidant, nier IR-geïnduceerde remtoxidatiefspanning, I-6 productie en deciliatie in de longen van C57BL/6 mannelijke muizen. Voorbehandeling (Fig. 5A-D), maar niet nabehandeling (Fig. 5J-L), met Mito-TEMPO, remde significant verhogingen in BUN- en IL-6-concentraties in plasma (Fig. 5A en B) als evenals IL-6-concentratie, totale eiwitconcentratie en totaal aantal cellen in BALF (Fig, 5C-E). De expressies van Arl13B, ac- -tubuline en -tubuline in de BALF van met Mito-TEMPO voorbehandelde muizen waren minder dan die in met vehikel behandelde muizen (Fig. 5F-I). 6-u na de behandeling beschermde de longen niet tegen:nierIR (Fig. 5J-L). Deze resultaten geven aan dat vroege ROS-productie, de accumulatie ervan enoxidatiefspanningkan belangrijk bijdragen aan AKI (Acuut nierletsel)-geïnduceerde longbeschadiging. Superoxideniveaus en 4-HNE-expressie in longweefsel (Fig. 6A-C) en in BALF (Fig. 6D en E) waren minder in Mito-TEMPO-voorbehandelde muizen dan in met drager behandelde muizen. Deze resultaten geven aan datnierIR-geïnduceerde longbeschadiging en longepitheelceldeciliatie zijn geassocieerd met mitochondrialeoxidatiefspanning.

Fig. 5. Preventie van nier-IR-geïnduceerde longbeschadiging en trilhaarverstoring door Mito-TEMPO, een op mitochondriën gerichte antioxidant. C57BL/6 mannelijke muizen werden onderworpen aan 35 min bilaterale renale ischemie.Sommige muizen kregen Mito-TEMPO (Mito-T, 0,7 mg/kg lichaamsgewicht, ip) ofwel 17 en 1 uur vóór ischemie, tweemaal (A–I) of 6 uur na ischemie (J– L). Long, BALF en bloed werden 24 uur na ischemie verzameld. (A, J) De BUN-concentratie in plasma werd gemeten. (B, C) IL-6-concentraties in plasma en BALF werden gemeten met behulp van de ELISA-assaykit. (D, E, K, L) De eiwitconcentratie en het aantal cellen in BALF werden gemeten. (F–I) Arl13B, geacetyleerde {{10}}tubuline (ac- -tub) en -tubuline (-tub) expressies in BALF werden geanalyseerd door western blotting. De dichtheden van de banden werden gemeten met behulp van de ImageJ-software. Resultaten worden uitgedrukt als de gemiddelden ± SEM (n=4). *p < 0,05="" vs.="">

KLIK HIER OM DEEL TE NEMEN