Effect van waterig extract van Cistanches Herba op botverlies bij ratten die ovariëctomie hebben ondergaan

Contactpersoon: Audrey Huéaudrey.hu@wecistanche.com

Haidong Liang 1,*, Fang Yu 2, Zhihong Tong 1 en Zaiguo Huang 3

1 Hands and feet microsurgery, Dalian Municipal Central Hospital, Dalian 116033, China; E-Mail: tongzhih37@sina.cn

2 School of Medicine, Dalian University, Dalian 116033, China; E-Mail: yufangk7@sina.cn

3 Orthopedics Department, Dalian Municipal Central Hospital, Dalian 116033, China; E-Mail: huangzg41@sina.com

Abstract:Om het vermogen te beoordelen van het traditionele Chinese medicijn Cistanches Herba-extract (CHE) om botverlies te voorkomen bij de rat waarbij de eierstokken zijn verwijderd (OVX), werd Cistanches Herba-extract (CHE) intragastrisch aan de ratten toegediend. Vrouwelijke ratten werden verdoofd met pentobarbital-natrium (40 mg kg-1, ip) en hun eierstokken werden bilateraal verwijderd. De ratten in de schijngeopereerde groep werden verdoofd, laparotomieën ondergaan en gehecht zonder hun eierstokken te verwijderen. Na 1 week herstel van de operatie werden de OVX-ratten willekeurig verdeeld in drie groepen en oraal behandeld met H2O (OVX-groep) of CHE (100 of 200 mg kg-1 per dag) gedurende 3 maanden. De schijngeopereerde groep (n=8) werd oraal behandeld met H2O. Na 3 maanden werden de totale lichaamsbotmineraaldichtheid (BMD), het botmineraalgehalte (BMC), de botbiomechanische index, de bloedmineraalniveaus en de bloed-antioxidant-enzymactiviteiten onderzocht bij schijngeopereerde, ovariëctomie en met Cistanches Herba-extract behandelde ratten. De resultaten toonden aan dat behandeling met Cistanches Herba-extract de botmineraaldichtheid (BMD), het botmineraalgehalte (BMC), maximale belasting, verplaatsing bij maximale belasting, stress bij maximale belasting, belasting bij de automatische pauze, verplaatsing bij de automatische pauze significant dosisafhankelijk verbeterde. , en stress bij auto-break, en bloed antioxidant enzymen activiteiten, verlaagde bloed Ca, Zn en Cu niveaus in vergelijking met de OVX-groep. Dit experiment toont aan dat de toediening van Cistanches Herba-extract aan ratten waarvan de eierstokken zijn verwijderd, botverlies omkeert en osteoporose voorkomt.

trefwoorden:ovariëctomie; Rat; bot; antioxidant; Cistanches Herba

Cistanches Herba

1. Inleiding

Osteoporose is een ouderdomsziekte die gepaard gaat met botverlies en die vaak zonder symptomen optreedt totdat de micro-architecturale verslechtering zo significant wordt dat botbreuken altijd optreden op het punt waar een afname van de botmassa lager is dan wat nodig is voor botintegriteit. Osteoporose is van groot belang in de gezondheidszorg. Hoewel ze in massa zijn verminderd, zijn de botten normaal met betrekking tot mineralisatie, maar histologisch is er een afname in de dikte van de cortex en het aantal en de grootte van trabeculae van het grove poreuze bot [1-3].

Er is de afgelopen jaren veel onderzoek gedaan naar deze ziekte. Accumulerende gegevens hebben aangetoond dat het verlies van oestrogeen tijdens de menopauze een belangrijke bijdrage levert aan de pathogenese van de ziekte, omdat dit hormoon een belangrijke negatieve regulator is van de activiteit van osteoclasten [4-6], en osteoclasten de belangrijkste cellen zijn die verantwoordelijk zijn voor botremodellering bij osteoporose [7].

Postmenopauzale osteoporose is de meest voorkomende metabole botziekte en wordt gekenmerkt door een snel verlies van gemineraliseerd botweefsel, verstoring van de trabeculaire architectuur van het bot en veranderingen in de kristallijne eigenschappen van minerale afzettingen, wat resulteert in het structureel falen (breuk) van plaatsen die rijk zijn aan poreus bot, zoals de wervels, heup en distale onderarm [8-11]. Oestrogeentekort wordt beschouwd als de belangrijkste determinant van botverlies bij postmenopauzale vrouwen. Ovariëctomische ratten en honden zijn uitgebreid gebruikt in osteoporose-modellen. In 1996 werden de effecten van ibandronaat op honden waarvan de eierstokken waren verwijderd [12] gerapporteerd.

Cistanches Herba (CH), holoparasitaire plant van Cistanche deserticola YC Ma, is geclassificeerd als een tonificerend middel in de oosterse traditionele geneeskunde en wordt vaak gebruikt om vergeetachtigheid, gehoorverlies, onvruchtbaarheid en chronische constipatie te behandelen. CH heeft verschillende farmacologische activiteiten, waaronder antinociceptieve, ontstekingsremmende en immuunversterkende effecten [13,14]. Een eerdere studie heeft gemeld dat Cistanches Herba mesenchymale botstamcellen (BMSC's) kan begeleiden om te differentiëren tot osteoblasten, wat een gunstig vooruitzicht belooft voor de behandeling van osteoporose en botbreuken [15]. Chen et al. [16] rapporteerde dat Cistanches Herba-polysacchariden de overgang van de beenmergcelcyclus en het herstel van de hematopoëtische functie in beenmergdepressieve anemische muizen kunnen bevorderen, de hematogenese in rubrum-stam en macronucleus-stam kunnen versnellen.

In deze studie werden de botmineraaldichtheid (BMD), het botmineraalgehalte (BMC), de botbiomechanische index, de bloedmineraalniveaus en de activiteit van antioxidantenzymen in het bloed onderzocht bij schijngeopereerde, ovariëctomie en met Cistanches Herba behandelde ratten om de effecten van de behandeling te bestuderen. met Cistanches Herba-extract op botkwaliteit.

Traditionele Chinese geneeskunde Cistanches Herba-extract (CHE)

2. materialen en methoden

2.1. Bereiding van waterige extracten van Cistanches Herba

Cistanches Herba werd in 2010 verzameld uit de woestijn in de alxa league van de autonome regio Nei Monggol (Binnen-Mongolië).

De gedroogde stengel van Cistanches Herba werd gedurende 2 uur geëxtraheerd met gedestilleerd water op 100 graden. De oplossing werd 10 minuten gecentrifugeerd bij 4000 omw/min. Residuen werden verwijderd door filtratie en het gecombineerde filtraat werd verdampt door verwarming om een ​​gewenste concentratie te verkrijgen (2,1 g droog plantenequivalent extract/ml). De opbrengst van extractie was 13,7% (w/w). Het waterige extract werd bewaard bij 2-8 graden.

2.2. Dieren

Tweeëndertig vrouwelijke Wistar-ratten van 3 maanden oud, die aan het begin van het experiment tussen 240 en 270 g wogen, werden voor het onderzoek gebruikt. Ze werden onder standaard laboratoriumomstandigheden gehouden met een licht- en donkercyclus van 12 uur, met vrije toegang tot standaard laboratoriumrattenvoer en kraanwater.

2.3. Dierproeven.

Vrouwelijke ratten werden verdoofd met pentobarbital-natrium (40 mg kg-1, ip) en hun eierstokken werden bilateraal verwijderd. De ratten in de schijngeopereerde groep werden verdoofd, laparotomieën ondergaan en gehecht zonder hun eierstokken te verwijderen. Na 1 week herstel van de operatie werden de OVX-ratten willekeurig verdeeld in drie groepen (n=8 in elke groep) en intragastrisch behandeld met H2O (OVX-groep), Cistanches Herba-extract (CHE) (100 of 200 mg kg −1 dagelijks) gedurende 3 maanden. De schijngeopereerde groep (n=8) werd oraal behandeld met H2O.

Op de laatste dag van het onderzoek werden de dieren gewogen en opgeofferd en werden gelijktijdig bloedmonsters verzameld. De dijbenen werden ontleed en ontdaan van zacht weefsel voor het meten van biomechanische testen.

Alle experimenten werden uitgevoerd in overeenstemming met onderzoeksprotocollen die zijn opgesteld door de dierenverzorgingscommissie van China.

2.4. Botdensitometrie

Femoraal botmineraalgehalte (BMC) en botmineraaldichtheid (BMD) werden bepaald met behulp van een Hologic QDR{{0}}W DXA. Het instrument is aangepast voor een modus met ultrahoge resolutie met een regelafstand van 0.0254 cm, een resolutie van 0,0127 cm en een collimator met een diameter van 0,9 cm. De botten werden in een petrischaal geplaatst. Om de dichtheid van zacht weefsel rond de botten te simuleren, werd kraanwater rond de botten gegoten om een ​​diepte van 1 cm te bereiken. Resultaten worden gegeven voor BMC en voor het gemeten gebied. BMD van dit gebied wordt berekend als BMC gedeeld door gebied. Naast de resultaten voor het totale dijbeen, werden het distale en middengebied van het dijbeen geanalyseerd als subregio's [17].

2.5. Bot biomechanische testen

Dijbeenbotten werden op 4 graden gehouden tot de bepaling van de breeksterkte met behulp van een 5-kN buigingsarmatuur, geconfigureerd voor driepuntsbuigtests en bevestigd aan een Instron Universal Testing Machine Model 4502 uitgerust met een 10- kN-loadcel (Instron, Canton, MA, VS), zoals eerder beschreven [18]. De kruiskopsnelheid was 50 mm/min en de databemonsteringssnelheid was 10 monsters/s. Maximale belasting, stress bij maximale belasting, belasting bij falen en stress bij falen werden bepaald in dijbenen met behulp van Series IX, v 8.08.00 software (Instron).

2.6. Biochemische analyse

Bloed Ca-, Zn- en Cu-niveaus werden gemeten met atomaire absorptiespectrofotometrie.

Op basis van de methode van King en Armstrong [19] werd de activiteit van alkalische fosfatase (ALP) bepaald met dinatriumfenylfosfaat als substraat. De ontwikkelde kleur werd na 10 min afgelezen bij 510 nm in een UV-vis spectrofotometer. Activiteiten van ALP werden uitgedrukt als IU/L.

De concentratie malondialchehyche (MDA) in het bloed werd bepaald met behulp van de methode beschreven door Jain et al. [20], gebaseerd op TBA-reactiviteit. In het kort, 0,2 ml erytrocytenpellets of supernatant verkregen uit weefsels, 0,8 ml fosfaatbuffer (pH 7,4), 0.025 ml BHT en { {19}},5 ml 30% TCA werd aan de buizen toegevoegd en gemengd. Na 2 uur incubatie bij -20 graden werd het mengsel 15 minuten gecentrifugeerd (4000 x g). Hierna werd 1 ml supernatant genomen en aan elke buis toegevoegd, en vervolgens 0,075 ml 0,1 M EDTA en

0,25 ml 1 procent TBA is toegevoegd. Deze buizen met met Teflon beklede schroefdoppen werden gedurende 15 minuten bij 90 graden in een waterbad geïncubeerd en afgekoeld tot kamertemperatuur. De optische dichtheid werd gemeten bij 532 voor de MDA-concentratie in het bloed.

De activiteit van glutathionperoxidase (GSH-Px) werd bepaald volgens de methode van Lawrence en Burk [21]. Het testmengsel bestond uit 2.0 ml 75 mM fosfaatbuffer (pH 7.0), 50 μL 60 mM glutathion, {{15} },1 ml van 30 eenheden/ml glutathionreductase, 0,1 ml van 15 mM EDTA, 0,1 ml van 3 mM NADPH en de juiste hoeveelheid weefselsupernatant tot een eindvolume van 3,0 ml . De reactie werd gestart door de toevoeging van 0,1 ml 7,5 mM H202. De snelheid van verandering van absorptie tijdens de conversie van NADPH naar NADP plus werd spectrofotometrisch geregistreerd bij 340 nm gedurende 3 minuten. GSH-Px-activiteit voor weefsels werd uitgedrukt als mol NADPH geoxideerd tot NADP plus min-1 mg-1 eiwit.

De activiteit van superoxide dismutase (SOD) werd in het bloed bepaald volgens de methode van Sun et al. [22]. Het principe van de methode is gebaseerd op de remming van de reductie van nitroblauwtetrazolium (NBT) door het xanthine-xanthine-oxidasesysteem als superoxidegenerator te gebruiken. De activiteit werd bepaald in de supernatanten van 10000 g methanol/chloroform (5/3, v/v) extracten van weefselhomogenaten (10 procent). Eén eenheid SOD werd gedefinieerd als de hoeveelheid enzym die 50 procent remming van de NBT-reductiesnelheid veroorzaakt.

De katalase (CAT)-activiteit werd gemeten met behulp van Abei's [23]-methode. Serum werd toegevoegd aan een cuvet die 2,89 ml van een 50 mmol/L fosfaatbuffer (pH 7,0) bevatte. De reactie werd gestart door 0,1 ml vers bereide 30 mmol/L H202 toe te voegen tot een eindvolume van 3,0 ml bij 25°C. De ontledingssnelheid van H202 werd gemeten bij 240 nm gedurende 5 minuten op een spectrofotometer. Eén eenheid (U) CAT werd gedefinieerd als de hoeveelheid enzym die nodig is om 1 nmol H2O2 per minuut af te breken, bij 25 graden en pH 7,8.

2.7. Statistische analyse

De experimentele resultaten werden uitgedrukt als het gemiddelde ± SD voor acht dieren in elke groep. De biochemische parameters werden statistisch geanalyseerd met behulp van een eenrichtingsanalyse van variantie-ANOVA, gevolgd door Dunnett's meervoudige vergelijkingstest (DMCT). P-waarde van<0.05 was="" considered="" statistically="">

3. Resultaten

Twee dieren stierven in de loop van het onderzoek. Bijgevolg waren de aantallen voor de groepen bij de conclusie van het onderzoek: 8 in de schijncontrole; 7 in de OVX-groep; 7 in de CHE-behandelingsgroep (100 mg kg-1 per dag), en 8 in de CHE-behandelingsgroep (200 mg kg-1 per dag). Twee dagen na de operatie waren de voedsel- en wateropnames van ratten iets lager dan die voor de operatie. Geen enkel dier leed aan infectie en anabiose. Er werden geen klinisch duidelijke bijwerkingen waargenomen bij ratten.

Vóór de operatie was er geen significant (p > {{0}}.01) verschil in lichaamsgewicht van ratten tussen de groepen. Het lichaamsgewicht van de OVX-groep was significant (p < 0.01)="" lager="" dan="" dat="" van="" de="" schijngroep="" (tabel="" 1).="" toediening="" van="" cistanches="" herba-extract="" in="" een="" dosis="" van="" 100="" en="" 200="" mg/kg="" per="" dag="" verhoogde="" significant="" het="" lichaamsgewicht="" van="" ratten="" in="" de="" met="" che="" behandelde="" groep="" (100="" en="" 200="" mg/kg="" per="" dag).="" de="" gegevens="" verkregen="" van="" dieren="" toonden="" aan="" dat="" er="" statistisch="" significante="" verschillen="" waren="" tussen="" de="" bmd="" en="" bmc="" van="" de="" ovx-groep="" en="" van="" de="" schijncontrole="" (p="">< 0,01).="" zoals="" verwacht="" leidde="" toediening="" van="" cistanches="" herba-extract="" in="" een="" dosis="" van="" 200="" mg/kg="" tot="" een="" significante="" toename="" van="" de="" bmd="" en="" bmc="" van="" de="" met="" che="" behandelde="" groep="" (p="">< 0,05;="" p=""><>

4. Discussie

Osteoporose is een van de meest voorkomende aandoeningen geassocieerd met oestrogeentekort en veroudering. De menopauze resulteert in een verhoogde botturnover, een disbalans tussen botvorming en botresorptie en netto botverlies. Botverlies veroorzaakt door oestrogeendeficiëntie is voornamelijk te wijten aan een toename van osteoclastische botresorptie bij zowel mensen als proefdieren [24].

Hoewel osteoporose zowel oudere mannen als vrouwen treft, zijn postmenopauzale vrouwen de primaire focus van osteoporose [25,26]. Een dramatisch tekort aan vrouwelijke hormonen is de belangrijkste factor bij postmenopauzale osteoporose bij vrouwen. Het OVX-rattenmodel wordt het meest gebruikt in onderzoek naar postmenopauzale osteoporose [27,28], waarbij ovariëctomie in eerste instantie resulteert in een overmaat aan botresorptie ten opzichte van botvorming en botverlies veroorzaakt. OVX-operatie veroorzaakt een aanzienlijke toename van het lichaamsgewicht, wat een leidraad zou kunnen zijn om het succes van de operatie te evalueren [29]. Aan het einde van de huidige studie waren de lichaamsgewichten van de OVX-groep aanzienlijk verminderd in vergelijking met die van de schijngroep, en behandeling met Cistanches Herba-extract verhinderde deze dalingen volledig. We veronderstellen dat OVX ernstig fysiologisch ongemak veroorzaakte dat de voedselinname van de ratten beïnvloedde. Vervolgens was het lichaamsgewicht van de OVX-groep aanzienlijk verminderd.

Botmineraaldichtheid is beschreven als slechts een surrogaatmaat voor botsterkte [30]; micro-architecturale eigenschappen zijn echter een nieuw opgekomen marker voor de evaluatie van de werkelijke impact van de behandeling op de kwaliteit van trabeculair bot. Hoewel een lage botmassa een belangrijke risicofactor is voor fracturen [31], draagt ​​het behoud van de trabeculaire botarchitectuur aanzienlijk bij aan de botsterkte en kan het het risico op fracturen buiten BMD en BMC verminderen, zoals aangetoond door een aantal onderzoeken die nauwe correlaties hebben gerapporteerd tussen microstructurele eigenschappen en de biomechanische sterkte van botten [32,33]. In dit werk bleken BMD en BMC significant verschillend te zijn tussen de schijn- en ovariëctomiegroepen. Behandeling met Cistanches Herba-extract verhoogde de BMD en BMC aanzienlijk bij OVX-ratten. Bovendien verhoogde toediening van Cistanches Herba-extracten nog steeds significant dosisafhankelijk de maximale belasting, verplaatsing bij maximale belasting, stress bij maximale belasting, belasting bij de autobreak, verplaatsing bij de autobreak en stress bij auto-inbraak CHE-behandelde groepen vergeleken met de OVX-groep. Deze resultaten gaven aan dat dijbeenbotten van ratten die Cistanches Herba-extract kregen, een hogere belasting hadden bij falen en daardoor beter bestand zouden kunnen zijn tegen stressfracturen. Bovendien hadden ratten in de OVX-groep hogere Ca-, Zn- en Cu-waarden in het bloed dan die in de schijngroep. Toediening van Cistanches Herba-extract had de Ca-, Zn- en Cu-spiegels in het bloed bij OVX-ratten verlaagd.

Het idee dat oxidatieve status belangrijk is bij osteoporose is consistent met de sterke epidemiologische associatie tussen osteoporose en atherosclerose, een ziekte waarbij oxidatieve stress een belangrijke rol speelt. Bovendien is onlangs waargenomen dat er bij vrouwen een verband bestaat tussen oxidatieve stress (gemeten aan de hand van een biomarker van oxidatieve stress, 8-iso-PGF2- ) [34], antioxidantniveaus [35] en Bot mineraal dichtheid. Klinische studies die de relatie tussen voedingsascorbaat en/of aanvullend ascorbaat en botmassa bij mensen hebben onderzocht, suggereren ook een verband met verhoogde botmassa [36].

Omdat MDA een hoge reactiviteit heeft ten opzichte van aminogroepen, remt het de synthese van nucleïnezuren en eiwitten en deactiveert het ook de enzymen [37,38]. De afname van antioxidant-enzymen in het dijbeen die na OVX wordt waargenomen, kan dus te wijten zijn aan verhoogde lipideperoxidatie. Antioxidant-enzymen zijn betrokken bij het afweersysteem tegen door vrije radicalen gemedieerde weefsel- of celschade. Ze metaboliseren ofwel vrije radicalen of reactieve zuurstoftussenproducten tot niet-radicale producten. Deze enzymen omvatten een familie van glutathion-afhankelijke enzymen [39]. In deze studie rapporteren we een significante afname van de niveaus van antioxidante enzymen, namelijk. SOD, GSH-Px, CAT in het bloed van ratten waarvan de eierstokken zijn verwijderd. Deze bevindingen suggereren dat een tekort aan ovariumhormonen correleert met het niet bestrijden van oxidatieve stress. Toediening van Cistanches Herba-extracten verhoogde significant dosisafhankelijk de bloed-SOD-, GSH-Px- en CAT-activiteiten bij OVX-ratten. Deze resultaten lijken te wijzen op een beter beschermend effect van Cistanches Herba-extract tegen oxidatieve stress veroorzaakt tijdens OVX.

Samenvattend, Cistanches Herba-extract is effectief in het voorkomen van botverlies veroorzaakt door ovariumhormoondeficiëntie, zoals blijkt uit de femur-BMD, BMC-waarden en Ca-, Zn- en Cu-waarden in het bloed. Aangezien osteoporose in verband wordt gebracht met oxidatieve stress, bevestigen dergelijke studies het belang van de therapeutische waarden van antioxidanten. We veronderstellen dat Cistanches Herba-extract de botkwaliteit verbetert, mogelijk gedeeltelijk door het versterken van de antioxiderende enzymenactiviteiten van OVX-ratten en het verminderen van botmineraalelementen.

Cistanches Herba-extract: botverlies voorkomen

Referenties

1. Canalis, E.; Giustina, A.; Bilezikian, JP Mechanismen van anabole therapieën voor osteoporose. N. Engl. J. Med. 2007, 357, 905-916.

2. Heaney, RP; Recker, RR; Saville, PD Menopauzale veranderingen in botremodellering. J. Lab. clin. Med. 1978, 92, 964-970.

3. McNamara, LM; Ederveen, AGH; Lyon, CG; Prijs, C.; Schaffer, MB; Weinans, H.; Prendergast, PJ Sterkte van trabeculair botweefsel van normale, ovariëctomie en met geneesmiddelen behandelde ratten in de loop van het ouder worden. Bot 2006, 39, 392-400.

4. Compston, JE Hormoonvervangingstherapie. clin. reumatol. 1997, 11, 583-596.

5. Meiner, SE Een groeiende landschapsosteoporose: behandelingsopties vandaag. Adv. Nurse Pract.1999, 7, 26-31.

6. Aubin, JE; Bonnelye, E. Osteoprotegerin en zijn ligand: een nieuw paradigma voor de regulering van osteoclastogenese en botresorptie. osteoporose. Int. 2000, 11, 905-913.

7. Roodman, GD Vooruitgang in de botbiologie: de osteoclast. Endocr. Rev. 1996, 17, 308-332.

8. Kastanje, CH, III. Medicamenteuze therapie: calcitonine, bisfosfonaten en anabole steroïden. Bij osteoporose: etiologie, diagnose en management; Riggs, BL, Melton, LJ, III, red.; Lippincott-Raven: Philadelphia, PA, VS, 1995.

9. Quan, Q.-M.; Wu, W.; Li, Y.-X.; Cai, Q.-R. Variatie in icariin- en flavonoïde-inhoud van Barrenwort-soorten. J. Med. Planten Res. 2010, 4, 1176-1181.

10. Du, XG; Pan, HZ; Zhang, CY; Zhang, HY; Liu, HM; Chen, ZY; Zeng, XY Zingiber officinale extract moduleert door g-stralen geïnduceerde immunosuppressie bij muizen. J. Med. Planten Res. 2010, 4, 1647-1655.

11. Paschalis, EP; Bets, F.; DiCarlo, E.; Mendelsohn, R.; Boskey, AL FTIR microspectroscopische analyse van humane iliacale topbiopten van het onbehandelde osteoporotische bot. calcif. Weefsel Int. 1997, 61, 487-492.

12. Motoie, H.; Kanoh, H.; Ogata, S.; Kawamuki, K.; Shikama, H.; Fujikura, T. Preventie van botverlies door bisfosfonaat YM175 bij ovariëctomie bij honden met calciumbeperking via de voeding. Jpn. J. Pharmacol. 1996, 71, 239-246.

13. Lin, LW; Hsieh, MT; Tsai, FH; Wang, WH; Wu, CR Anti-nociceptieve en ontstekingsremmende activiteit veroorzaakt door Cistanche deserticola bij knaagdieren. J. Ethnopharmacol. 2002, 83, 177-182.

14. Wu, XM; Gao, XM; Tsim, KW; Tu, PF Een arabinogalactan geïsoleerd uit de stengels van Cistanche deserticola induceert de proliferatie van gekweekte lymfocyten. Int. J. Biol. Macromol. 2005, 37, 278-282.

15. Zeng, JC; Ventilator, YG; Liu, Jr; Zeng YR; Yi, CZ; Liang Y. Experimentele studie van directionele differentiatie van mesenchymale botstamcellen (BMSC's) naar osteoblasten geleid door serumbevattende cistanche deserticola. Zhongguo Gu Shang 2010, 23, 606-608.

16. Chen, Z.-W.; Zhu, B.-D.; Xu H.-Y. Experimentele studie van woestijnlevende cistanche-polysacchariden op gereguleerde hematogenese in beenmergdepressieve anemiemuizen. Kin. Boog. traditie. Kin. Med. 2007, 25, 1473-1474.

17. Prakasam, G.; Ja, JK; Chen, M.-M.; Castro-Magana, M.; Liang, CT; Aloia, JF Effecten van groeihormoon en testosteron op corticale botvorming en botdichtheid bij oude ovariëctomie ratten. Bot 1999, 24, 491-497.

18. McClung, JP; Stahl, CH; Marchitelli, LJ; Morales-Martinez, N.; Makin, KM; Jong, AJ; Scrimgeour, AG Effecten van voedingsfytase op lichaamsgewichtstoename, lichaamssamenstelling en botbiomechanica bij groeiende ratten die een zinkarm dieet kregen. J. Nutr. Biochem. 2006, 170, 190-196.

19. Koning, EJ; Armstrong, AR Een handige methode voor het bepalen van serum- en galfosfatase-activiteit. Kan. Med. Assoc. J. 1934, 31, 376-381.

20. Jaïn, SK; McVie, R.; Duett, J.; Herbst, JJ Erytrocytmembraan lipideperoxidatie en geglycosyleerd hemoglobine bij diabetes. Diabetes 1989, 38, 1539-1543.

21. Lawrence, RA; Burk, RF Glutathionperoxidase-activiteit in selenium-deficiënte rattenlever. Biochem. Biofysica. Onderzoek gemeenschappelijk 1976, 71, 952-958.

22. Zon, J.; Oberley, LW; Ying, L. Een eenvoudige methode voor klinische analyse van superoxide-dismutase. clin. Chem. 1988, 34, 497-500.

23. Abei, H. Catalase in vitro. Methoden Enzymol. 1988, 10, 121-126.

24. Mozaffari, Z.; Azarnia, M.; Abdolhamid Angaji, S. Evaluatie van toxische effecten van Trigonella foenum-graecum bladwaterig extract op de ontwikkeling van langbotweefsel bij de rattenfoetus. J. Med. Planten Res. 2010, 4, 1148-1155.

25. Buencamino, MCA; Sikon, AL; Jaïn, A.; Thacker, HL Een observationeel onderzoek naar de naleving van behandelrichtlijnen van osteopenie. J. Vrouwengezondheid 2009, 18, 873-881.

26. Schmitt, MN; Schmitt, J.; Dören, M. De rol van fysieke activiteit bij de preventie van osteoporose bij postmenopauzale vrouwen - een update. Maturitas 2009, 63, 34-38.

27. Lelovas, PP; Xanthos, TT; Thomas, SE; Teksten, huisarts; Dontasi, IA De laboratoriumrat als diermodel voor onderzoek naar osteoporose. Samenstelling Med. 2008, 58, 424-430.

28. Ncango, DM; Pohl, CH; van Wyk, PWJ; Kock, JLF Niet-steroïde anti-inflammatoire geneesmiddelen (NSAID's) remmen de groei van gistpathogenen. Afr. J. Microbiol. Onderzoek 2011, 5, 1123-1125.

29. Fazliana, M.; Nazaimoon, WMW; Gu, HF; Ostenson, CG Labisia pumila-extract reguleert het lichaamsgewicht en de adipokines bij ratten waarvan de eierstokken zijn verwijderd. Maturitas 2009, 62, 91-97.

30. Bourrin, S.; Ammann, P.; Bonjour, JP; Rizzoli, R. Herstel van proximale tibia-botmineraaldichtheid en -sterkte, maar geen poreuze botarchitectuur, na langdurige bisfosfonaat- of selectieve oestrogeenreceptormodulatortherapie bij oude ratten. Bot 2002, 30, 195-200.

31. Borah, B.; Dufresne, TE; Chmielewski, PA; Bruto, GJ; Prenger, MC; Phipps, RJ Risedronaat behoudt de trabeculaire architectuur en verhoogt de botsterkte in de wervel van minivarkens waarbij eierstokken zijn verwijderd, zoals gemeten met driedimensionale microcomputertomografie. J. Botmijnwerker. Onderzoek 2002, 17, 1139-1147.

32. Muller, R.; Hannan, M.; Smith, SY; Bauss, F. Intermitterende ibandronaat behoudt de botkwaliteit en botsterkte in de lumbale wervelkolom na 16 maanden behandeling bij de ovariëctomie cynomolgus-aap. J. Botmijnwerker. Onderzoek 2004, 19, 1787-1796.

33. Lane, NE; Kumer, JL; Majumdar, S.; Khan, M.; Lotz, J.; Stevens, RE; Klein, R.; Phelps, KV De effecten van synthetische geconjugeerde oestrogenen, a (Cenestin) op de trabeculaire botstructuur en sterkte in het ovariëctomie-ratmodel. Osteoporose Int. 2002, 13, 816-823.

34. Basu, S.; Michaelsson, K.; Olofsson, H.; Johansson, S.; Melhus, H. Associatie tussen oxidatieve stress en botmineraaldichtheid. Biochem. Biofysica. Onderzoek gemeenschappelijk 2001, 288, 275-279.

35. Maggio, D.; Barabani, M.; Pierandrei, M.; Cristina Polidori, M.; Catani, M.; Mecocci, P.; Senin, U.; Pacifici, R.; Cherubini, A. Duidelijke afname van plasma-antioxidanten bij oudere osteoporotische vrouwen: resultaten van een cross-sectioneel onderzoek. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2003, 88, 1523-1527.

36. Morton, DJ; Barrett-Connor, EL; Schneider, DL Vitamine C-supplementgebruik en botmineraaldichtheid bij postmenopauzale vrouwen. J. Botmijnwerker. Onderzoek 2001, 16, 135-140.

37. Vogel, RP; Draper, HH Effect van malonaldehyde en acetaldehyde op gekweekte zoogdiercellen: groeimorfologie en synthese van macromoleculen. J. Omgeving. Gezondheid 1980, 6, 811-823.

38. Abdelhalim, MAK De mogelijke invloed van door een hoog cholesterolgehalte veroorzaakte oxidatieve stress op de samenstelling en eigenschappen van rode bloedcellen bij konijnen. Afr. J. Microbiol. Onderzoek 2010, 4, 836-843.

39. Chaaudiere, J.; Ferrari-Illiou, R. Intracellulaire antioxidanten van chemische tot biochemische mechanismen. Voedsel Chem. Toxicol. 1999, 37, 949-962.