Effectiviteit van de gecombineerde behandeling van Laminaria Japonica en Cistanche Tubulosa-extracten bij de haargroei

Contactpersoon: emily.li@wecistanche.com

Kyungha Shin1# et al

Aangezien haarverlies op de hoofdhuid de laatste tijd zelfs bij jonge mensen is toegenomen, wat de kwaliteit van leven van individuen ernstig aantast, is dehaargroei-stimulerende effecten van Laminaria japonica extract (LJE) enCistanche tubulosaextract (CTE) onderzocht. Na bevestiging van de anagene fase van follikels onder scheren, werden mannelijke C57BL / 6-muizen dermaal aangebracht met 3 procent Minoxidil of oraal toegediend met de combinaties van LJE en CTE（Cistanche tubulosaextract)gedurende 21 dagen. Minoxidil bevorderde haargroei en verhoogde -glutamyltranspeptidase (-GTP) en alkalische fosfatase (ALP) activiteiten. Bovendien reguleerde Minoxidil de epidermale groeifactor (EGF) en vasculaire endotheliale groeifactor (VEGF) niveaus. Gelijktijdige toediening van LJE en CTE（Cistanche tubulosaextract)bij 54 mg/kg LJE plus 162 mg/kg, CTE (Cistanche tubulosaextract)oefende synergetische bevorderende effecten uit op de haargroei, vergelijkbaar met 3 procent Minoxidil. LJE verbeterde bij voorkeur ALP-activiteit, terwijl CTE（Cistanche tubulosaextract)verhoogde zowel -GTP- als ALP-activiteiten evenals EGF- en VEGF-expressies. In vivo luchtzakontstekingsmodel, carrageen-geïnduceerde vasculaire exsudatie en verhoogde stikstofmonoxide- en prostaglandine E2-concentraties in de exudaten werden synergetisch onderdrukt door gelijktijdige toediening van LJE en CTE（Cistanche tubulosaextract). Bovendien werd de infiltratie van ontstekingscellen aanzienlijk geremd door de combinatiebehandeling. De resultaten suggereren dat gecombineerde orale behandeling met LJE en CTE（Cistanche tubulosaextract)ongepaste doses en verhoudingen voorkomen haaruitval en verbeteren alopecia, wat gedeeltelijk kan worden gemedieerd door hun ontstekingsremmende activiteiten.

Trefwoorden Haargroei, ontsteking, Laminaria japonica,Cistanche tubulosa, combinatiebehandeling

Cistanche tubulosaextract heeft veel functies

De laatste tijd is haarverlies op de hoofdhuid zelfs bij jonge mensen toegenomen, wat de kwaliteit van leven van een persoon ernstig aantast. Hoewel kaalheid niet een van de gezondheidsproblemen is, kan het diepe psychologisch ongemakkelijke sociale stress veroorzaken. Daarom is het van groot belang om nieuwe preventieve en/of therapeutische materialen te ontwikkelen voor haaruitval en hergroei. Ondanks de miljardenmarkt zijn er momenteel enkele effectieve producten beschikbaar [1].
Haarzakjes hermodelleren zichzelf tijdens cyclusperiodes van groei (anagen), regressie (catageen), rust (telogeen) en verlies (exogeen) [2]. Tijdens het katageneren ondergaan veel van de folliculaire cellen geprogrammeerde celdood (apoptose) [3], waardoor de follikel kleiner wordt als de follikels telogen binnenkomen. Activering van zelden cyclische epitheliale stamcellen die zich in het uitstulpingsgebied van de follikels bevinden, zorgt voor folliculaire regeneratie bij het begin van de volgende anagene fase [4]. Nakomelingen van stamcellen vormen een nieuwe folliculaire matrix tijdens het vroege anagene, en de haarschacht en de binnenste wortelschede zijn afgeleid van deze relatief ongedifferentieerde matrixcellen [5]. Het is algemeen bekend dat de grootte van de haarfollikel en de duur van de anagene fase respectievelijk de grootte (diameter) en lengte van de haarschacht bepalen. Deze cyclische haargroei wordt gereguleerd door diverse groeifactoren.

Minoxidil, finasteride en Propecia zijn in de handel verkrijgbaar om haaruitval te vertragen en haargroei te vergemakkelijken. Minoxidil is een vasodilatator die een bijwerking uitoefende omhaargroei[6] wat mogelijk te wijten is aan de voedingsstoffen leverende en kaliumkanaalopenende activiteiten [7,8]. Minoxidil is effectief bij androgene alopecia, naast andere behandelingen tegen kaalheid, hoewel de effectiviteit ervan binnen enkele maanden na stopzetting van de behandeling verdwijnt. Ter vergelijking: finasteride en Propecia, geneesmiddelen voor goedaardige prostaathyperplasie en prostaatkanker, zijn in veel landen geregistreerd voor alopecia androgenetica (kaalheid volgens mannelijk patroon). Finasteride en Propecia zijn synthetische anti-androgenen die type II 5--reductase remmen, een enzym dat testosteron omzet in dihydrotestosteron (DHT) in de papilcellen aan de onderkant van de haarzakjes [9].

Laminaria japonica, Undaria pinnatifida en Cladosiphon okamuranus, wijdverbreid in veel landen, worden gedurende een lange periode als therapieën in de oosterse geneeskunde gebruikt. In eerdere studies was fucoidan, een sulfaatpolysacharidecomplex, geëxtraheerd en geïdentificeerd uit de zeewieren en bevestigde dat het antioxidatieve, anticoagulerende, antikanker- en ontstekingsremmende activiteiten bezit [10,11]. Daarna zijn gunstige effecten van fucoidan op ontstekingsziekten, ischemie, immuundisfunctie en tumoren aangetoond [12,13]. Aan de andere kant,Cistanche tubulosaextract (CTE) is ook veel gebruikt voor traditionele medicatie in China. CTE（Cistanche tubulosaextract)verbetert de bloedstroom door het cholesterolgehalte in het bloed te verlagen [14]. Onlangs werd gemeld dat CTE de productie van tumornecrosefactor- (TNF-) en interleukine-4 (IL-4) verminderde, die belangrijke factoren zijn voor de productie van stikstofmonoxide (NO) in de ontstekingsroute [15]. We hebben ook aangetoond dat fucoidan uit Laminaria japonica-extract (LJE) en CTE（Cistanche tubulosaextract)synergetisch verzwakte ontsteking in vitro en in vivo [16]. Er is met name aangetoond dat er een nauw verband was tussen huidontsteking (vooral de traanklier) en alopecia [17]. Zo komen ontstekingsremmende aspecten van de behandeling van alopecia naar voren [18].
Op basis van de verbeteringsactiviteiten op de bloedstroom en ontsteking onderzoeken we de gecombineerde werkzaamheid van LJE en CTE（Cistanche tubulosa extract)Aanhaargroeien onderliggende mechanisme(n), in vergelijking met 3 procent Minoxidil (Hyundai Pharmaceutical, Seoul, Korea), een bekendehaargroeiVersterker.

Cistanche tubulosaextract is goed voorHaargroei

Materialen en methodes

Materialen

LJE en CTE (Cistanche tubulosaextract)werden verkregen van Misuba RTech Co., Ltd. (Asan, Korea). Gedroogd poeder van Laminaria japonica werd gedurende 24 uur geëxtraheerd in gezuiverd water van 60oC, gefiltreerd door een membraan van 0,45 m, gedesinfecteerd en gesproeidroogd.Cistanche tubulosawerd geëxtraheerd in 80 procent ethanol, gedesinfecteerd, geconcentreerd en gedroogd. LJE en CTE (Cistanche tubulosaextract)werden bij 4oC gehouden, gemengd (1:3) en voor gebruik opgelost in gezuiverd water en oraal toegediend in een volume van 5 ml/kg.
Dieren
Mannelijke C57BL/6 muizen voorhaargroeistudie en mannelijke ICR-muizen voor ontstekingsonderzoek werden gekocht bij de Daehan Biolink (Eumseong, Korea) en gehuisvest in een kamer met constante omgevingscondities (23±2ºC; 45-65 procent relatieve vochtigheid; 12-uur licht -donkercyclus; 150-300 lux helderheid). Pelletvoeding en gezuiverd water waren ad libitum beschikbaar. Alle dierproeven werden goedgekeurd door het Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) van de Chungbuk National University (CBNU), Korea, en uitgevoerd volgens de Standard Operation Procedures (SOP) van het Laboratory Animal Research Center, CBNU.

Behandeling voor haargroei

Na bevestiging van de anagene fase door het observeren van homogeen roze huidskleur in de rughuid van C57BL/6 muizen (6 weken oud, n=8/groep) na het knippen in de telogene fase, werd het haar geschoren [1,19 ,20]. Vanaf de volgende dag werden muizen zonder zichtbare krassen geselecteerd en oraal
behandeld met LJE (18 of 54 mg/kg), CTE (54 of 162 mg/kg), of hun mengsel (18 plus 54 of 54 plus 162 mg/kg) eenmaal per dag gedurende 21 dagen. Lage doses LJE (18 mg/kg) en CTE (54 mg/kg) waren afkomstig van geschatte humane doses van 100 mg/lichaam (70 kg) en 300 mg/lichaam na translatie van het lichaamsoppervlak van het lichaamsgewicht (Km{{14} } voor mens/Km=3 voor muis), respectievelijk. Hoge doses LJE en CTE（Cistanche tubulosaextract)werden ingesteld op 3-voudig, alleen of in combinatie, om maximale synergetische effecten te beoordelen [16]. Minoxidil (3 procent, 0,2 ml) werd eenmaal per dag topisch aangebracht op de geschoren huid volgens hetzelfde schema als de LJE/CTE-behandeling.

Bruto observatie van haargroei

Op dagen met tussenpozen van 3-dag na het scheren en tijdens de behandeling werden de muizen licht verdoofd met diethylether en werden er foto's op hun achterkant genomen. De verhouding van haargroei (hergroeid gebied / geschoren gebied) op de foto's werd geanalyseerd met behulp van een geautomatiseerd beeldanalysesysteem (Imageinside, Daejeon, Korea).

Microscopisch onderzoek van haarzakjes

Op dag 14 en 21 werden de muizen gedood door diepe anesthesie met diethylether en werd hun dorsale huid verwijderd [1]. De dorsale huid werd in twee delen gesneden. In formaline gefixeerde, in paraffine ingebedde weefselcoupes (5 m in diameter) van één deel werden gekleurd met hematoxyline-eosine om het aantal haarzakjes en de histologische bevindingen te onderzoeken. Het andere deel van het weefsel werd ingevroren in vloeibare stikstof voor enzymtest en immunoassay.

Bepaling van enzymactiviteit

Huidweefsel werd gehomogeniseerd in 4 volumes fosfaatbuffer (pH 7,4). Het homogenaat werd gedurende 20 minuten bij 3 000 rpm gecentrifugeerd en het supernatant werd gebruikt voor het testen van -glutamyltranspeptidase (-GTP) en alkalische fosfatase (ALP) activiteiten met behulp van p-nitrofenylfosfaat (PNPP)-DEAV als substraat [1,21].

Cistanche tubulosa

Kwantificering van groeifactoren

Epidermale groeifactor (EGF) en vasculaire endotheliale groeifactor (VEGF) werden gekwantificeerd met behulp van enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) kits (R&D Systems, Minneapolis, VS) volgens de instructies van de fabrikant [1,22].

Behandeling voor ontsteking

ICR-muizen (7 weken oud, n=8/groep) werden oraal behandeld met LJE (18 of 54 mg/kg), CTE（Cistanche tubulosaextract)(54 of 162 mg/kg), of hun mengsel (18 plus 54 of 54 plus 162 mg/kg) eenmaal per dag gedurende 7 dagen [16]. Op de 1e dag van LJE en CTE（Cistanche tubulosaextract)behandeling, werden de muizen subcutaan geïnjecteerd met 10 ml steriele lucht in de achterkant om een ​​zakje te vormen [16,23,24]. Na 2 en 5 dagen werd het zakje opnieuw geïnjecteerd met 5 ml lucht. Een uur na de laatste LJE en CTE（Cistanche tubulosaextract)behandeling werd 1 ml carrageen (1 procent in zoutoplossing; Sigma-Aldrich, St. Louis, VS) of het vehikel (zoutoplossing) in de zak geïnjecteerd.

Analyse van de exsudaten

De luchtzak werd 6 uur na injectie van carrageenan gewassen met 1 ml koude zoutoplossing en het nettovolume lavagevloeistof werd geregistreerd [16]. Het totale aantal ontstekingscellen, waaronder neutrofielen, monocyten en lymfocyten, werd bepaald met behulp van een colterteller.

De concentraties NO en prostaglandine E2 (PGE2) werden bepaald door respectievelijk Griess-reagens (Sigma-Aldrich) en enzymimmunoassay (EIA) met behulp van een Correlate-EIA-kit (Assay Designs, Ann Arbor, VS), respectievelijk [16].

statistische analyse

Gegevens worden weergegeven als gemiddelde ± standaardfout. De statistische significantie werd bepaald door eenrichtingsanalyse van variantie, gevolgd door de meervoudige vergelijkingstest van Tukey. P-waarden<0.05 were="" considered="" to="" be="" statistically="">

Resultaten

Toepassing van Minoxidil (3 procent), een referentiemateriaal, vergemakkelijkte dehaargroeivan C57BL/6-muizen, met een bijna volledige dekking (92,4 procent) van het geschoren gebied (Figuur 1, 2B) vergeleken met de 29,2 procent bij normale groei (Figuur 1, 2A) op dag 21. Hoewel minder effectief dan Minoxidil-toepassing , orale behandeling van LJE vergemakkelijkte ook dehaargroei, wat leidt tot een dekking van 33,5 en 69,1 procent bij respectievelijk 18 en 54 mg/kg (figuren 1, 2C, 2D). CTE（Cistanche tubulosaextract)was ook effectief in het verbeteren vanhaargroei, met een dekking van 73,6 en 80,4 procent bij respectievelijk 54 en 162 mg/kg (figuren 1, 2E, 2F). Met name combinatietherapie met hoge doses LJE (54 mg/kg) en CTE（Cistanche tubulosaextract)(162 mg/kg) opmerkelijk verbeterde dehaargroeivanaf dag 12, vergelijkbaar met het effect van Minoxidil (Figuur 1, 2H), hoewel lage doses LJE (18 mg/kg) en CTE（Cistanche tubulosaextract)(54 mg/kg) hebben alleen in de vroege fase een synergetisch effect (Figuur 1, 2G).

Figuur 1. Tijdsverloop van haargroei van muizen behandeld met Minoxidil, of Laminaria japonica extract (LJE) en/ofCistanche tubulosauittreksel (CTE). ,

○normaal; , Minoxidil (3 procent) applicatie; , 18 mg/kg LJE; , 54 mg/kg LJE; , 54 mg/kg CTE; , 162 mg/kg CTE; ◇, 18 mg/kg LJE plus 54 mg/kg CTE; ◆, 54 mg/kg LJE plus 162 mg/kg CTE（Cistanche tubulosaextract).

Figuur 2. Representatieve grove bevindingen van haargroei van muizen die zijn behandeld met Minoxidil of Laminaria japonica-extract (LJE) en/ofCistanche tubulosaextract (CTE) op dag 21.

een, normaal; B, Minoxidil (3 procent) applicatie; C, 18 mg/kg LJE; D, 54 mg/kg LJE; E, 54 mg/kg CTE（Cistanche tubulosaextract); F, 162 mg/kg CTE; G, 18 mg/kg LJE plus 54 mg/kg CTE; H, 54 mg/kg LJE plus 162 mg/kg CTE（Cistanche tubulosaextract).

Vergeleken met normale haarzakjes (Figuur 3A), verbeterde de toepassing van Minoxidil de integriteit van haarzakjes, met grotere follikels en dikkere haarschachten (Figuur 3B). Dergelijke effecten werden ook gevonden in de huid van muizen die werden behandeld met LJE en/of CTE（Cistanche tubulosaextract)(Figuur 3C-3H). Vooral de haarfollikelversterkende werkzaamheid van een combinatiebehandeling van LJE en CTE (Cistanche tubulosaextract)was vergelijkbaar met die van Minoxidil.

Figuur 3. Representatieve microscopische bevindingen van haargroei van muizen die zijn behandeld met Minoxidil of Laminaria japonica-extract (LJE) en/ofCistanche tubulosaextract (CTE) op dag 21.

een, normaal; B, Minoxidil (3 procent) applicatie; C, 18 mg/kg LJE; D, 54 mg/kg LJE; E, 54 mg/kg CTE（Cistanche tubulosaextract); F, 162 mg/kg CTE（Cistanche tubulosaextract); G, 18 mg/kg LJE plus 54 mg/kg CTE; H, 54 mg/kg LJE plus 162 mg/kg CTE

Het aanbrengen van minoxidil verhoogde de activiteit van -GTP die de haarzakjes naar de anagene fase induceert met 90-120 procent op dag 14 en 21, vergeleken met het niveau van de normale huid (Figuur 4). LJE (54 mg/kg) verhoogde ook de enzymactiviteit, hoewel er grote variaties waren. CTE oefende vergelijkbare effecten uit, waardoor de -GTP-activiteit op dag 14 aanzienlijk werd verbeterd. Interessant is dat combinatiebehandeling van LJE en CTE（Cistanche tubulosaextract)verder verhoogde de enzymactiviteit hoger dan die wanneer de extracten alleen werden gebruikt.
ALP-activiteit, een marker voor botgroei en angiogenese, nam significant toe in de huid op dag 14 en 21 na plaatselijke toediening van Minoxidil (Figuur 5). LJE en CTE（Cistanche tubulosaextract)verhoogde ook de ALP-activiteit na orale toediening op een dosisafhankelijke manier. Met name de enzymactiviteit werd synergetisch versterkt door een combinatiebehandeling met LJE en CTE.

Figuur 4. Effecten van Minoxidil (MXD, 3 procent), of Laminaria japonica-extract (LJE) en/ofCistanche tubulosaextract (CTE) (in mg/kg) op -glutamyl transpeptidase (-GTP) activiteit op dag 14 (A) en 21 (B) van de behandeling.

* Aanzienlijk verschillend van normale (noch) controle (P<>

Figuur 5. Effecten van Minoxidil (MXD, 3 procent), of Laminaria japonica-extract (LJE) en/ofCistanche tubulosaextract (CTE) (in mg/kg) op de activiteit van alkalische fosfatase (ALP) op dag 14 (A) en 21 (B) van de behandeling.

* Aanzienlijk verschillend van normale (noch) controle (P<>

Bij de analyse van EGF is een bekendehaargroeifactor verhoogde de toediening van Minoxidil het niveau van EGF 3,5 maal de normale controle op beide dagen 14 en 21 (Figuur 6). LJE (18 mg/kg) verhoogde de EGF alleen op dag 21, terwijl CTE (162 mg/kg) de productie ervan sterk opvoerde op dag 14 en 21. Het is van belang op te merken dat de combinatiebehandeling van LJE en CTE（Cistanche tubulosaextract)zelfs bij lage doses vertoonden duidelijke synergetische effecten.

Behandeling met minoxidil verhoogde ook het niveau van VEGF met 50-80 procent boven de controlewaarde (Figuur 7). Hoewel LJE niet effectief was, bleek CTE (Cistanche tubulosaextract)opmerkelijke versterkende effecten uitgeoefend. Daarnaast combinatietherapie van LJE en CTE（Cistanche tubulosaextract)vertoonde een synergetische activiteit in de vroege fase op dag 14.

Figuur 6. Effecten van Minoxidil (MXD, 3 procent), of Laminaria japonica-extract (LJE) en/ofCistanche tubulosaextract (CTE) (in mg/kg) op het gehalte aan epidermale groeifactor (EGF) op dag 14 (A) en 21 (B) van de behandeling.

* Aanzienlijk verschillend van normale (noch) controle (P<>

Figuur 7. Effecten van Minoxidil (MXD, 3 procent), of Laminaria japonica-extract (LJE) en/ofCistanche tubulosaextract (CTE) (in mg/kg) op het gehalte aan vasculaire endotheliale groeifactor (VEGF) op dag 14 (A) en 21 (B) van de behandeling.

* Aanzienlijk verschillend van normale (noch) controle (P<>

Injectie van carrageen in de luchtzak van de ICR-muis verhoogde het exsudaatvolume in de zak met 6 keer het controleniveau (tabel 1). Een dergelijke verhoogde exsudatie werd significant verminderd door behandeling met LJE (18 en 54 mg/kg) of CTE（Cistanche tubulosaextract)(54 en 162 mg/kg). Met name de combinatiebehandeling met LJE en CTE verminderde het exsudaatvolume verder, vergeleken met de individuele effecten. Het aantal ontstekingscellen werd drastisch verhoogd door carrageeninjectie: 34,6, 4,2 en 24,9 maal de controleniveaus voor respectievelijk neutrofielen, monocyten en lymfocyten (Tabel 1). Echter, LJE en CTE（Cistanche tubulosaextract)verminderde de ontstekingscellen significant op dosisafhankelijke manieren, waarbij LJE enigszins superieur was aan CTE（Cistanche tubulosaextract). Naar verwachting werden synergetische effecten bij de infiltratie van ontstekingscellen bereikt door gelijktijdige toediening van LJE en CTE（Cistanche tubulosaextract).
Parallel met de infiltratie van ontstekingscellen in de buidel, nam de NO- en PGE2-inhoud in de buidel ook drastisch toe na injectie met carrageenan (Tabel 1). In vergelijking met het milde effect van LJE, CTE（Cistanche tubulosaextract)de NO-concentratie aanzienlijk verlaagd. Combinatiebehandeling van LJE en CTE（Cistanche tubulosaextract)verlaagde het NO-niveau verder op een dosisafhankelijke manier. Op een vergelijkbare manier werd het verhoogde PGE2-niveau synergetisch onderdrukt door de combinatietherapie van LJE en CTE (tabel 1).

Discussie

Het menselijk hoofd heeft gemiddeld 100,000 haarzakjes. Tijdens een mensenleven groeit en valt elke follikel ongeveer 20 keer, wat een dagelijkse haaruitval van 100 strengen laat zien [25]. Haaruitval, waaronder alopecia en kaalheid, is een schrijnende aandoening voor mannen en vrouwen, vooral in de moderne samenleving. Daarom is het van groot belang om nieuwe therapieën te ontwikkelen die haaruitval voorkomen en haargroei bevorderen. In dit opzicht heeft de alternatieve geneeskunde de belangstelling van onderzoekers gewekt.

Verouderingsgerelateerde morfologische, histochemische en biochemische aspecten van mannelijke kaalheid zijn onthuld door een reeks studies over stompstaartmakaken. In de mannelijke kaalheid was de telogene fase verlengd, terwijl de anagene fase was verkort. Daarom wordt aangenomen dat voor de verbetering van haaruitval het behoud van de verlenging van de haarzakjes die optreedt van vroeg anageen tot midden anageen zeer belangrijk is [26]. In de huidige studie hebben we aangetoond dathaargroei-faciliterende activiteit van een combinatiebehandeling LJE en CTE（Cistanche tubulosaextract). Het belangrijkste was dat het combinatievoorschrift van LJE (54 mg/kg) en CTE (162 mg/kg) een uitstekende haargroeiactiviteit vertoonde, ondanks orale toediening van de extracten. Met name het effect van combinatietherapie was vergelijkbaar met dat van dermale toediening van een hoge concentratie (3 procent) van een gezuiverde verbinding Minoxidil, hoewel de concentraties van actieve ingrediënten van LJE en CTE（Cistanche tubulosaextract)in de huid na orale toediening werd niet bevestigd.
In de huid van fietsende muizen is de -GTP-activiteit uitgesproken tijdens anagene, maar sterk verminderd tijdens telogene [27]. In de huid komt het enzym uitsluitend voor in de buitenste en binnenste wortelscheden van haarzakjes onder het niveau van de talgklieren waarin -GTP afwezig is [27]. Ter vergelijking: ALP komt prominent tot expressie in de pilosebaceous eenheden, en de activiteit neemt toe op het gebied van haargroei. ALP als angiogene factor verbetert de voedingstoevoer naar dermale papillen en induceert daardoor dikte tijdens anagen [28]. Er werd echter bevestigd dat de ALP-activiteit in de alopecische huid afnam [21]. In de mechanistische studie verhoogde de referentieverbinding Minoxidil de activiteit van -GTP en ALP aanzienlijk, wat impliceert dat Minoxidil dehaargroeiniet alleen door haarzakjes te induceren
naar de anagene fase, maar ook door de bloedstroom via angiogenese te verbeteren. Aangezien LJE de ALP-activiteit verhoogde, wordt voorgesteld dat LJE een gunstig effect heeft op:haargroeidoor zijn angiogene potentieel, zoals afgeleid uit een eerdere studie dat fucoidan, een actief ingrediënt van LJE, een bloedstroomverbeterende activiteit heeft [29]. Ter vergelijking: CTE（Cistanche tubulosaextract)verbeterde zowel de -GTP- als ALP-activiteiten, wat wijst op de effecten ervan op de inductie van de anagene fase en de verbetering van de bloedstroom. Volgens de synergetische werking op -GTP- en ALP-enzymen, wordt aangenomen dat een hogere haargroei kan worden bereikt door gelijktijdige toediening van LJE en CTE（Cistanche tubulosaextract).
Het is algemeen bekend dat diverse cytokinen en groeifactoren, waaronder EGF en VEGF, betrokken zijn bij de regulatie van haarmorfogenese en -groei [30,31]. Het is van belang op te merken dat van dermale papillacellen afgeleide factoren chemotactische activiteiten hebben op de omringende cellen, die op hun beurt leiden tot de bevordering vanhaargroei[32]. EGF wordt uitgedrukt in associatie met de ontwikkeling van haarzakjes [33,34]. Hoewel de expressie van zowel EGF als zijn receptor (EGFR) in de buitenste wortelschede naar beneden wordt gereguleerd met de voltooiing van de folliculaire groei, herstelt hun expressie wanneer de folliculaire cellen de anagene fase binnengaan. VEGF speelt een belangrijke rol bij angiogenese tijdens de ontstekingsreactie en tumorontwikkeling [35]. Vooral het vasculaire netwerk is nauw verbonden met de haargroeicyclus [36-38]. Daarom werd bevestigd dat de genexpressie van VEGF varieert volgens de menselijke haarcyclus [39].

Uit de resultaten in de huidige studie blijkt dat dehaargroeiHet bevorderende effect van Minoxidil kan te wijten zijn aan zijn potentieel opwaarts regulerende EGF en VEGF die de follikelgroei en angiogenese vergemakkelijken. Hoewel LJE de VEGF-expressie niet beïnvloedde, verhoogde het het EGF-gehalte in de huid na orale toediening. Ter vergelijking: CTE（Cistanche tubulosaextract)was effectief in de expressie van zowel EGF als VEGF. Met name LJE en CTE（Cistanche tubulosaextract)oefende additieve effecten uit op de expressie van de groeifactoren.

Naast de verlenging van de haren, werd de integriteit van de haarzakjes opmerkelijk verbeterd na behandeling met Minoxidil, LJE en/of CTE（Cistanche tubulosaextract)bij het microscopisch onderzoek. In de vroege fase van haarverlies en kaalheid bij menselijke patiënten en diermodellen, was de integriteit van de follikels aangetast en de dikte van de haarschacht verminderd, terwijl de folliculaire integriteit en schachtdikte herstelden in regenererende haren. Interessant is dat dergelijke positieve effecten op de integriteit en hergroei van haarcomponenten werden bereikt met orale toediening van LJE plus CTE（Cistanche tubulosaextract), waarbij het effect vergelijkbaar was met dat van plaatselijke toepassing van een hoge concentratie Minoxidil. Daarom wordt verwacht dat de combinatie voor orale inname van LJE plus CTE（Cistanche tubulosaextract)zou een recept relatief handig kunnen zijn in vergelijking met het dermale gebruik van Minoxidil.
In het muisalopecia-model is steroïde-gevoelige lymfocytinfiltratie rond de haarzakjes gebruikelijk, met een patroon dat vergelijkbaar is met de immunotherapie van menselijke alopecia met traanklierontsteking [17,40]. In de huidige studie werd door carrageen geïnduceerde huidontsteking aanzienlijk verzwakt door LJE en CTE（Cistanche tubulosaextract)behandeling; dat wil zeggen, de vasculaire exsudatie en infiltratie van ontstekingscellen werden synergetisch onderdrukt. In kwantitatieve analyse waren de belangrijkste ontstekingsmediatoren NO en PGE 2 grotendeels onder controle na orale gelijktijdige toediening van LJE en CTE (Cistanche tubulosaextract). Interessant is dat, aangezien LJE ontstekingsremmende activiteit vertoonde die hoger was dan die van semi-gezuiverd fucoidan [16], wordt aangenomen dat er naast fucoidan nog een (een) extra actieve ingrediënt(en) in de LJE zitten.

Alles bij elkaar genomen geven de resultaten aan dat een combinatiebehandeling met LJE en CTE（Cistanche tubulosaextract)verbetert haaruitval door groeifactoren en gerelateerde enzymactiviteiten te verhogen en gedeeltelijk door ontstekingsremmend vermogen. Daarom wordt gesuggereerd dat een combinatie met LJE en CTE（Cistanche tubulosaextract)ongepaste klinische doses en verhoudingen kunnen een kandidaatrecept zijn voor patiënten met haarverlies.

Cistanche tubulosaextract producten

Dankbetuigingen

Dit onderzoek werd financieel ondersteund door de Leading Industry Development for Economic Region van het Chungcheong Leading Industry Office, Korea Institute for Advancement of Technology (KIAT) en Ministry of Knowledge Economy (MKE), en gedeeltelijk door High Value-added Food Technology Development Program , Ministerie van Landbouw, Voedselvoorziening en Plattelandszaken (MAFRA; subsidienummer 113034-3).

Belangenverstrengeling

De auteurs verklaren dat er geen financiële belangenverstrengeling is om deze resultaten te publiceren.

Uit: 'Effectiviteit van de combinatiebehandeling van extracten van Laminaria japonica en Cistanche tubulosa bij de haargroei' doorKyungha Shin1# et al

--- Lab Anim Res 2015: 31(1), 24-32http://dx.doi.org/10.5625/lar.2015.31.1.24

REFERENTIES

1. Kim JS, Kang BS, Park HJ, Kim DY, Hwang SY, Nam SY, Yun YW, Lee BJ. Bevorderen van het effect van mengsels van kruidenextracten op haargroei bij C3H/HeJ-muizen. J Biomed Onderzoek 2009; 10(3): 99-108.
2. Paus R, Cotsarelis G. De biologie van haarzakjes. N Engl J Med 1999; 341(7); 491-497.
3. Cotsarelis G. Het haarzakje: snakkend naar aandacht. Ben J Pathol 1997; 151(6): 1505-1509.
4. Cotsarelis G, Sun TT, Lavker RM. Label-vasthoudende cellen bevinden zich in het uitstulpingsgebied van de pilosebaceous-eenheid: implicaties voor folliculaire stamcellen, haarcyclus en huidcarcinogenese. Cel 1990; 61(7): 1329-1337.
5. Oshima H, Rochat A, Kedzia C, Kobayashi K, Barrandon Y. Morfogenese en vernieuwing van haarzakjes van volwassen multipotente stamcellen. cel 2001; 104(2): 233-245.
6. Burton JL, Marshall A. Hypertrichose door minoxidil. BrJ Dermatol 1979; 101(5): 593-595.
7. Meisheri KD, Cipkus LA, Taylor CJ. Werkingsmechanisme van door minoxidilsulfaat geïnduceerde vasodilatatie: een rol voor verhoogde K plus permeabiliteit. J Pharmacol Exp Ther 1988; 245(3): 751-760.
8. Buhl AE, Waldon DJ, Baker CA, Johnson GA. Minoxidilsulfaat is de actieve metaboliet die de haarzakjes stimuleert. J Invest Dermatol 1990; 95(5): 553-557.
9. Kaufman KD, Dawber RP. Finasteride, een type 2 5alfa-reductaseremmer, bij de behandeling van mannen met alopecia androgenetica. Expert Opin Onderzoek Drugs 1999; 8(4): 403-415.
10. Feldman SC, Reynaldi S, Stortz CA, Cerezo AS, Damont EB. Antivirale eigenschappen van fucoidan-fracties van Leathesia difformis. Fytogeneeskunde 1999; 6(5): 335-340.
11. Wang J, Zhang Q, Zhang Z, Song H, Li P. Potentiële antioxidant- en anticoagulanscapaciteit van fucoidanfracties met laag molecuulgewicht geëxtraheerd uit Laminaria japonica. Int J Biol Macromol 2010; 46(1): 6-12.
12. Bojakowski K, Abramczyk P, Bojakowska M, Zwoliñska A, Przybylski J, Gaciong Z. Fucoidan verbetert de renale bloedstroom in het vroege stadium van renale ischemie/reperfusieschade bij de rat. J Fysiol Pharmacol 2001; 52(1): 137-143.
13. Li N, Zhang Q, Song J. Toxicologische evaluatie van fucoidan geëxtraheerd uit Laminaria japonica bij Wistar-ratten. Voedsel Chem Toxicol 2005; 43(3): 421-426.
14. Shimoda H, Tanaka J, Takahara Y, Takemoto K, Shan SJ, Su MH. De hypocholesterolemische effecten van Cistanche tubulosa-extract, een traditioneel Chinees geneesmiddel, bij muizen. Ben J Chin Med 2009; 37(6): 1125-1138.
15. Yamada P, Iijima R, Han J, Shigemori H, Yokota S, Isoda H. Remmend effect van acteoside geïsoleerd uit Cistanche tubulosa op de afgifte van chemische mediatoren en inflammatoire cytokineproductie door RBL-2H3- en KU812-cellen. Planta Med 2010; 76(14): 1512-1518.
16. Kyung J, Kim D, Park D, Yang YH, Choi EK, Lee SP, Kim TS, Lee YB, Kim YB. Synergetische ontstekingsremmende effecten van Laminaria japonica fucoidan en Cistanche tubulosa-extract. Lab Anim Res 2012; 28(2): 91-97.
17. Chee E, Fong KS, Al Jajeh I, Nassiri N, Rootman J. De associatie van traanklierontsteking met alopecia areata. Baan 2015; 34(1): 45-50.
18. Brzezinska-Wcislo L, Bergler-Czop B, Wcislo-Dziadecka D, LisSwiety A. Nieuwe aspecten van de behandeling van alopecia areata. Postepy Dermatol Alergol 2014; 31(4): 262-265.
19. Hattori M, Ogawa H. Biochemische analyse vanhaargroeivan de aspecten van veroudering en enzymactiviteiten. J Dermatol 1983; 10(1): 45-54.
20. Lee SH, Lee HJ, Baek IJ, Yon JM, Nam SY, Lee BJ, Yun YW, Kim YB, Hwang SY, Hong JT. Effect van DREAMMO® hoofdhuidlotion ophaargroeipromotie in een alopecia-model van C57BL/6-muizen. Lab Anim Res 2006; 22(1): 91-96.
21. Handjiski BK, Eichmüller S, Hofmann U, Czarnetzki BM, Paus R. Alkalische fosfatase-activiteit en lokalisatie tijdens de muizenhaarcyclus. BrJ Dermatol 1994; 131(3): 303-310.
22. Cross MJ, Dixelius J, Matsumoto T, Claesson-Welsh L. VEGF-receptorsignaaltransductie. Trends Biochem Sci 2003; 28(9): 488-494.
23. Shin S, Jeon JH, Park D, Jang JY, Joo SS, Hwang BY, Choe SY, Kim YB. Ontstekingsremmende effecten van een ethanolextract van Angelica gigas in een carrageen-luchtzakje-ontstekingsmodel. Exp Anim 2009; 58(4): 431-436.
24. Kim D, Park D, Kyung J, Yang YH, Choi EK, Lee YB, Kim HK, Hwang BY, Kim YB. Ontstekingsremmende effecten van superkritisch extract van Houttuynia cordata in carrageen-luchtzakje-ontstekingsmodel. Lab Anim Res 2012; 28(2): 137-140.
25. Rebora A. Pathogenese van alopecia androgenetica. J Am Acad Dermatol 2004; 50(5): 777-779.
26. Shirai A, Ikeda J, Kawashima S, Tamaoki T, Kamiya T. KF19418, een nieuwe verbinding voorhaargroeipromotie in vitro en in vivo muismodellen. J Dermatol Sci 2001; 25(3): 213-218.
27. Kawabe TT, Kubicek MF, Johnson GA, Buhl AE. Gebruik van gamma-glutamyltranspeptidase-activiteit als een marker van haarcyclus en anagene inductie in haarzakjes van muizen. J Invest Dermatol 1994; 103(1): 122-126.
28. Hamada K, Suzuki K. Evaluatie van biochemische indices als een haarcyclusmarker in C3H-muizen. Exp Anim 1996; 45(3): 251-256.
29. Park SJ, Lee KW, Lim DS, Lee S. Het gesulfateerde polysacharide fucoidan stimuleert osteogene differentiatie van menselijke vet-afgeleide stamcellen. Stamcellen Dev 2012; 21(12): 2204-2211.

30. Danilenko DM, Ring BD, Pierce GF. Groeifactoren en cytokines in de ontwikkeling en cyclus van haarzakjes: recente inzichten uit diermodellen en de mogelijkheden voor klinische therapie. Mol Med Vandaag 1996; 2(11): 460-467.
31. Ozeki M, Tabata Y. In vivo bevorderde de groei van de haarzakjes van muizen door de gecontroleerde afgifte van groeifactoren. Biomaterialen 2003; 24(13): 2387-2394.
32. Fujie T, Katoh S, Oura H, Urano Y, Arase S. Het chemotactische effect van een dermale papillacel-afgeleide factor op buitenste wortelschedecellen. J Dermatol Sci 2001; 25(3): 206-212.
33. Stenn KS, Paus R. Controles van haarzakjes fietsen. Fysiol Rev 2001; 81(1): 449-494.
34. Chapman RE, Hardy MH Effecten van intradermaal geïnjecteerde en topisch aangebrachte muis epidermale groeifactor op wolgroei, huid en wolfollikels van merinoschapen. Aust J Biol Sci 1988; 41(2): 261-268.
35. Dvorak HF, Bruin LF, Detmar M, Dvorak AM. Vasculaire permeabiliteitsfactor / vasculaire endotheliale groeifactor, microvasculaire hyperpermeabiliteit en angiogenese. Ben J Pathol 1995; 146(5): 1029-1039.
36. Ellis RA, Moretti G. Vasculaire patronen geassocieerd met catagene haarzakjes in de menselijke hoofdhuid. Ann NY Acad Sci 1959; 83: 448-457.
37. Stenn KS, Fernandez LA, Tirrell SJ. De angiogene eigenschappen van de vibrissa-haarzakjes van de rat zijn geassocieerd met de bol. J Invest Dermatol 1988; 90(3): 409-411.
38. Yano K, Brown LF, Detmar M. Controle vanhaargroeien follikelgrootte door VEGF-gemedieerde angiogenese. J Clin Invest 2001; 107(4): 409-417.
39. Lachgar S, Charveron M, Ceruti I. Verdeling van VEGF-mRNA-indifferente haarzakjesstadia door fluorescentie in situ hybridisatie gecombineerd met confocale lasermicroscopie. In: Haaronderzoek voor het volgende millennium (Van Neste DJJ, ed.), Elsevier, Amsterdam, 1996; pp 407-12.
40. Freyschmidt-Paul P, Sundberg JP, Happle R, McElwee KJ, Metz S, Boggess D, Hoffmann R. Succesvolle behandeling van alopecia areata-achtig haarverlies met de contactsensibilisator squarinezuur dibutylester (SADBE) in C3H/HeJ-muizen . J Invest Dermatol 1999; 113(1): 61-68.