Effecten van het waterige extract van Cistanche Tubulosa op de darmmicrobiota van muizen met darmaandoeningen

Xiaowei Bao, Dongwen Bai, Xiaolu Liu, Ying Wang, Lanjun Zeng, Chenye Wei en Weiquan Jin

College of Food Science and Pharmacy, Xinjiang Agricultural University, Urumqi 830052, China

Correspondentie moet worden gericht aan Xiaowei Bao; xiaoweibao0723@xjau.edu.cn

Ontvangen 29 april 2021; Aanvaard 30 juni 2021; Gepubliceerd 14 juli 2021

Dit is een open-access-artikel dat wordt gedistribueerd onder de Creative Commons Attribution-licentie, die onbeperkt gebruik, distributie en reproductie op elk medium toestaat, op voorwaarde dat het originele werk correct wordt geciteerd.

Contact:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Abstract

Aandoeningen van de darmmicrobiota worden in verband gebracht met veel ziekten. Het waterige extract vanCistanchetubulosa(CT), een traditionele Chinese kruidenformule, zou een rol spelen bij de bescherming van de menselijke darm. Er is echter weinig bekend over de effecten ervan op de darmflora. Het huidige onderzoek is uitgevoerd om te bepalen of deCistancheTubulosawaterig extract kan het darmmicrobioom moduleren bij muizen met darmstoornissen. We ontdekten dat de beschadigde darmmorfologie als gevolg van behandeling met cefixime kon worden gered met behulp van deCistancheTubulosawaterig extract. De vergelijking van de microbiële diversiteit tussen muizen behandeld met het Cistanche Tubulosa-extract en controlemuizen gaf ook aan dat de stoornis in de microbioomgemeenschap van modelgroepen hersteld zou kunnen worden door behandeling met hoge en gemiddelde concentraties van deCistancheTubulosawaterig extract. Behandeling met cefixime leidde tot een significante afname van melkzuurbacteriën; echter, de aanvulling van deCistancheTubulosawaterig extract herstelde de groei van deze melkzuurbacteriën. Verder is deCistancheTubulosawaterig extract was in staat om de dramatische veranderingen in de metabole routes van het darmmicrobioom, veroorzaakt door cefixime, te matigen. Deze bevindingen gaven inzicht in de gunstige effecten van het waterige Cistanche Tubulosa-extract op de darmflora, en ze vormden ook een belangrijke referentie voor de ontwikkeling van verwante geneesmiddelen in de toekomst.

Cistanchetubulosaheeft veel effecten, klik hier om meer te weten

1. Inleiding

Intestinale micro-organismen koloniseren voornamelijk het darmlumen en de mucosale laag en mutualiseren met de gastheer door materiaal- en energie-uitwisseling, transformatie en andere processen [1]. *het zijn signaalknooppunten die omgevingsboodschappen, zoals voeding, integreren met genetische en immuunsignalen, waardoor het metabolisme, de immuniteit, het zenuwstelsel en de reactie op infecties van de gastheer worden beïnvloed [2]. Normaal gesproken is er een dynamisch evenwicht tussen de darmflora en gastheren; darmdysbiose kan echter leiden tot veranderingen in de balans tussen gezondheid en ziekte, immuunstoornissen en een groot aantal ziekten [3]. Matige veranderingen in de darmflora zijn acceptabel voor de gastheer; dit kan echter nog steeds kansen bieden om de veranderingen in andere verzwarende factoren, zoals bacteriofagen, bacteriocines en oxidatieve stress, te versterken [4].

Eerdere studies hebben aangetoond dat het ethanolextract van Cistanche tubulosa (CT), een traditionele Chinese kruidenformule, de darmmicrobiële samenstelling bij ratten kan reguleren [5], en de totale glycosiden van Cistanche Tubulosa pasten de verstoorde darmmicrobiota aan [6]. Cistanche-soorten, die voornamelijk parasiteren op de wortels van Tamarix-soorten, worden ook wel "ginseng van de woestijn" genoemd en een tonic bestaande uit de stengels van Cistanche deserticola (CD) en Cistanche tubulosa (CT) wordt gebruikt als kruidengeneesmiddel [7] ]. De belangrijkste chemische componenten van Cistanche Tubulosa fenylethanolglycosiden (PHG's), die antioxidanten zijn [8, 9], bleken de reproductieve disfunctie [10] te verbeteren, hepatische stellaatcelactivatie te onderdrukken, de geleiding van signaalroutes in TGF te blokkeren{{6 }}/SMAD [11], en voorkomen door runderserumalbumine geïnduceerde leverfibrose bij ratten [12]. Van de meer dan 100 componenten in Cistanche Tubulosa is het polysacharide ook een van de belangrijke stoffen met een overvloedig gehalte [13, 14]. Eerdere studies hebben aangetoond dat C. deserticola-polysacchariden melanogenese in melanocyten induceren, oxidatieve stress verminderen [15], cognitieve disfunctie verlichten door antioxiderende en ontstekingsremmende processen bij ratten te reguleren [16], PC12-cellen beschermen tegen OGD / RP-geïnduceerd letsel [17] , verbeteren de absorptie van echinacoside in vivo en beïnvloeden de darmmicrobiota [18].

Probiotica zijn levende niet-pathogene micro-organismen die gezondheidsvoordelen hebben en zorgen voor een microbieel evenwicht in het maagdarmkanaal wanneer ze in voldoende hoeveelheden worden toegediend [19]. * Ze kunnen niet-specifieke cellulaire immuunresponsen versterken die worden gekenmerkt door de activering van macrofagen, natural killer (NK)-cellen en antigeenspecificiteit voor toxische T-lymfocyten en de afgifte van verschillende cytokinen op een stamspecifieke en dosisafhankelijke manier [20] ]. Probiotische stammen verbeteren de eigenschappen van het darmepitheel via TJ-modulatie, en het is aangetoond dat specifieke probiotische stammen de mucine-expressie reguleren, waardoor ze de eigenschappen van de slijmlaag beïnvloeden en indirect het darmimmuunsysteem reguleren [21]. Stammen van melkzuurbacteriën (LAB) en Bifidobacterium zijn belangrijke probiotica die op veel gebieden zijn gebruikt [22–26]. Hun gezondheidsvoordelen zijn talrijk, waarbij hun antioxidantcapaciteit een belangrijke factor is in hun gezondheidsgerelateerde functies [27]. Probiotica kunnen metaalionen cheleren om te voorkomen dat ze oxidatie katalyseren [28, 29]; ze kunnen ook de expressie van antioxidante enzymen [30, 31] verhogen, verschillende metabolieten produceren met antioxiderende activiteit [32, 33], antioxidantsignaleringsroutes bemiddelen [34-36], en de enzymen reguleren die reactieve zuurstofspecies (ROS) produceren en de reactie van darmmicro-organismen op oxidatieve stress [37].

cistanche bloem

Een recente studie toonde aan dat de polysachariden van Cistanche Deserticola de groei van sommige melkzuurbacteriën zouden kunnen stimuleren, wat de menselijke gezondheid ten goede zou kunnen komen [38]. Het gehalte aan polysachariden in de Cistanche Deserticola is echter anders dan in Cistanche Tubulosa [7, 39], en dit verschil kan leiden tot verschillende effecten op darmmicro-organismen. Bovendien, hoewel Cistanche Deserticola-polysachariden oxidatieve stress kunnen verminderen door de NRF2/HO-1-route [15] te activeren, kunnen de effecten van een enkele polysacharide verschillen van het algehele effect van meerdere samenstellingen in Cistanche Tubulosa. Het is dus noodzakelijk om de effecten van waterige Cistanche Tubulosa-extracten op intestinale micro-organismen nauwkeurig te definiëren. Bovendien kunnen PHG's ook oxidatieve stress weerstaan ​​[40] en lipopolysaccharide-gemedieerde ontstekingsreacties onderdrukken door de theKeap1/Nrf2/HO-1-route [41] te activeren. Het bepalen van de werking van het waterige extract van Cistanche Tubulosa is daarom van grote waarde. Bovendien suggereren de effecten van bepaalde bestanddelen van het waterige Cistanche Deserticola-extract op oxidatieve stress en darmflora dat de weerstand tegen oxidatieve stress gecorreleerd kan zijn met veranderingen in de darmflora.

Om de hiaten in de kennis over de bovengenoemde onderwerpen op te vullen, hebben we de effecten van het waterige Cistanche Tubulosa-extract op de darmmicrobiota van muizen met darmflora-stoornissen onderzocht. Deze resultaten zullen waardevolle informatie opleveren over de mogelijke mechanismen waardoor Cistanche Tubulosa de darmflora verandert en de darm weerstand biedt tegen oxidatieve stress.

2. materialen en methoden

2.1. Proefdieren.

Een totaal van 18 SPF-klasse mannelijke C57BL/6J-muizen, met een gewicht van 18-22 g, werden gekocht bij het Experimental Animal Center van Xinjiang Medical University met licentienummer SCXK (nieuw) 2018-0003. Ze werden gehuisvest in kooien onder gestandaardiseerde omstandigheden: 12 uur licht/donker fotoperiode, de temperatuur van 23 ± 2 graden en een vochtigheid van 55 ± 5 procent. *e dieren kregen een commercieel dieet (51 procent stikstofvrij extract, 25 procent ruw eiwit, 4,6 procent ruw vet, 6,5 procent ruwe as, 4,0 procent ruwe celstof en 8,9 procent vocht) en kraanwater . *e dieren zijn behandeld volgens de aanbevelingen beschreven in de Guide for the Care and Use of Laboratory Animals van de National Institutes of Health.

2.2. Extractie van het waterige extract.

Gedroogde plakjes C. tubulosa, geleverd door Hotan Dichen PharmaceuticalBiotechnology Co., Ltd., werden vermalen tot poeder en granules met deeltjesgrootten tussen 20 en 40 mesh werden geselecteerd. De extractieomstandigheden waren als volgt: vast-vloeistofverhouding van 1:19, de temperatuur van 80 graden, microgolftijd van 6 min, ultrasone tijd van 16 min, microgolfvermogen van 400 W, en ultrasoon vermogen van 400 W. De inhoud van de belangrijkste componenten van het waterige extract werd gemeten met HPLC (Agilent 1260 Infinity II, Californië, VS). In het kort werden de standaardstoffen van echinacoside (0,2 mg/ml) en acteoside (0,2 mg/ml) opgelost in 50 procent methanol om als referentiestofoplossing te dienen. Vervolgens werd 1 g van het waterige CT-extract opgelost in 100 ml 50% methanol en 30 minuten met rust gelaten. De extractoplossing werd behandeld met ultrageluid bij 250 W en 35 kHz gedurende 10 min en vervolgens gecentrifugeerd bij 12,000 rpm/min. Het supernatant werd geïnfiltreerd door een microporeus filtermembraan van 0,45 m. De referentiestofoplossing en het filtraat werden vervolgens gedetecteerd met HPLC onder de volgende omstandigheden: octadecylsilaangebonden silicagel als vulmiddel, methanol als mobiele fase A en 0,1 procent mierenzuur als mobiele fase B. De temperatuur van de kolom werd ingesteld op 30 graad, de detectiegolflengte was ingesteld op 330 nm en het injectievolume was 10 L.

2.3. Experimenten.

Na een week aanpassing werden de 18 muizen willekeurig verdeeld in zes groepen: A (normaal met toevoeging van waterig Cistanche Tubulosa-extract in middeldosis), B (normaal zonder waterig Cistanche Tubulosa-extract), C (model zonder waterig extract), D (model met hooggedoseerd waterig Cistanche Tubulosa-extract toegevoegd), E (model met middeldosis waterig Cistanche Tubulosa-extract toegevoegd) en F (model met laaggedoseerd waterig Cistanche Tubulosa-extract toegevoegd). De groepen werden als volgt behandeld: de normale groep werd gedrenkt in een normale zoutoplossing, de modelgroep werd gedrenkt in cefixime (30 mg/kg, Shiyao Group OuyiPharmaceutical Co., Ltd., Shijiazhuang, China) en een normale zoutoplossing, de hoge -dosisgroep werd doordrenkt met cefixime en 221,14 mg/kg van het waterige Cistanche Tubulosa-extract, de groep met de middelste dosis werd doordrenkt met cefixime en 165,54 mg/kg van het waterige extract, en de groep met lage dosis werd doordrenkt met cefixime en 110,57 mg/kg van het waterige extract. De A-groep werd gedrenkt met 165,54 mg/kg waterig extract en er werd geen cefixime toegevoegd. Cefixime werd dagelijks om 12:00 uur toegediend en andere stoffen werden dagelijks om 15:00 uur toegediend. Tijdens de experimenten werden de C-, D-, E- en F-groepen in de modelstaat van darmstoornissen gehouden. *e ontlasting werd om de zeven dagen verzameld op een steriele werktafel en bewaard bij −20 graden.

2.4. Histopathologische observatie van de Muizen Colon.

Aan het einde van het experiment werden de muizen gedood door cervicale dislocatie en de inhoud van hun dikke darm werd verzameld op een steriele opereerbare tafel en bewaard bij -80 graden; tegelijkertijd werden colonweefselmonsters gefixeerd in 10 procent neutrale formaline. Vervolgens werden de monsters gedehydrateerd met behulp van gradiëntconcentratie van ethanol, gehyaliniseerd met behulp van xyleen, ingebed in paraffine, in plakjes gesneden en gekleurd met hematoxyline-eosine. Morfologische veranderingen in het colonmucosa werden waargenomen en vergeleken met behulp van een optische microscoop. De lengte van de villus en de diepte van de crypte in de dikke darm werden gemeten en de verhouding van de lengte van de villus tot de diepte van de crypte (V/C-waarde) werd berekend (51).

2.5. DNA-extractie en bibliotheekconstructie. DNA werd geëxtraheerd uit de ontlasting met behulp van de EZNA ®Soil DNA Kit (Omega Bio-Tek, Norcross, GA, VS) volgens het protocol van de fabrikant. De DNA-kwaliteit werd bepaald met behulp van een fluorometer (QuantiFluor ™ -ST, Promega Corporation, VS). Gepaarde primers in het V3-V4-gebied van 16s-rDNA werden ontworpen om het gebied te amplificeren en DNA-fragmenten van 466 bp te produceren. *e voorwaartse primer was 341F (-5-CCTACGGGNGGCWGCAG-3-), en de omgekeerde primer was 806R (-5-GGACTACHVGGGTATCTAAT-3-). Elk PCR-volume was 25 L en bevatte 2, 5 μL 10 x PCR-buffer, 2 L dNTP's, 1 L van elke primer en 20-30 ng sjabloon-DNA. *nl, de geïndexeerde adapters werden aan het uiteinde van de amplicons bevestigd om sequentiebibliotheken te genereren. De bibliotheken werden gevalideerd met behulp van een QuantiFluor™-fluorometer en gekwantificeerd tot 10 nmol.

acteoside in cistanche kan het immuunsysteem versterken

2.6. 16s rRNA-gensequentiebepaling en microbiële gemeenschapsanalyse.

Het Illumina-platform (Illumina MiSeq) werd gebruikt om 2 × 250 bp gepaarde-end-gegevens te verkrijgen. Operationele taxonomische eenheden (OTU's) werden verkregen met behulp van Uparse-software via standaardclustering met 97 procent gelijkenis. Het naïeve Bayesiaanse toewijzingsalgoritme van de RDP-classificatie werd gebruikt om de OTU's af te stemmen op de Greengene-database Release 13.5 en om soortenannotaties uit te voeren. De alfa-diversiteit van de darmmicrobiota werd berekend met behulp van de Shannon- en Simpson-indices, en de verschillen tussen groepen werden geanalyseerd door lineaire discriminantanalyse Effect Size (LEfSe). De bètadiversiteit werd geanalyseerd door middel van hoofdcoördinaatanalyse (PCoA) van Brady-Curtis-verschillen. PICRUST2 werd gebruikt om de microbiële metabolische capaciteit van het darmmicrobioom te schatten [42].

2.7. Statistische gegevensanalyse.

SPSS 20 werd gebruikt voor eenrichtings-ANOVA en de experimentele gegevens werden uitgedrukt als X ± S; X geeft de gemiddelde waarde aan en S geeft de standaarddeviatie aan.

3. Resultaten

3.1. Het effect van het waterige extract van Cistanche Tubulosa op de morfologie van de dikke darm.

De representatieve verbindingen (echinacoside en acteoside) en hun concentraties van het Cistanche Tubulosa-extract werden gevalideerd door HPLC (Figuur S1). Om het effect van het waterige extract op de darm te bepalen, onderzochten we de lengte van de darmvlokken en de diepte van de uitsparingen na de behandeling met het waterige Cistanche Tubulosa-extract. De dikke darmvlokken in de normale en hooggedoseerde groepen (A, B en D) waren langer en vingerachtig, terwijl de dikke darmvlokken in de model- en laaggedoseerde groepen (C en F) kort waren en de toppen van de dikke darm villi waren gebroken (Figuur 1). Dienovereenkomstig verhoogde een hooggedoseerd waterig Cistanche Tubulosa-extract de lengte van colonvilli en verminderde de diepte van de uitsparing bij muizen met darmstoornissen in vergelijking met de muizen in de modelgroep (P <0.01). daarentegen="" was="" de="" diepte="" van="" de="" uitsparing="" niet="" significant="" verschillend="" tussen="" de="" groep="" met="" een="" hoge="" dosis="" en="" de="" normale="" groep="" (p=""> 0,05) (Tabel S1). Deze resultaten gaven aan dat de hoge dosis van het waterige Cistanche Tubulosa-extract de morfologie in de dikke darm van muizen met darmstoornissen kan verbeteren.

3.2. Het effect van het waterige extract van Cistanche Tubulosa op de diversiteit van de darmmicrobiota.

We hebben 16s rRNA-gensequencing uitgevoerd om de mogelijke oorzaak van de morfologische veranderingen in de dikke darm te onderzoeken en de veranderingen in de darmmicrobiota na behandeling met het waterige CT-extract te onderzoeken. Een gemiddelde van 100.553 effectieve tags, variërend van 77.734 tot 125.144, werd verkregen uit de onbewerkte gegevens (tabel S2). Deze tags waren geclusterd in 4932 OTU's (tabel S3). Vervolgens analyseerden we de diversiteit van de darmmicrobiota op basis van Theseus. De Shannon- en Simpson-indexen toonden geen verschil tussen de A-groep (normaal met het waterige Cistanche Tubulosa-extract) en de B-groep (normaal zonder het waterige CT-extract) (Figuur 2(a)). *aangegeven wordt dat bij de muizen zonder de cefixime-behandeling het waterige CT-extract mogelijk geen bijkomende gunstige of schadelijke effecten had op de diversiteit van de darmmicrobiota. De -diversiteit in de modelgroep (C) vertoonde echter een dalende trend ten opzichte van die in de normale groepen. * De muizen die werden behandeld met waterige CT-extracten met een hoge en middelhoge dosis vertoonden tekenen van herstel van diversiteit, terwijl een dergelijk fenomeen niet werd waargenomen bij muizen die werden behandeld met het waterige CT-extract met een lage dosis (Figuur 2(a)). Ondertussen onthulde de PCoA dat de normale groepen (A en B) en darmstoornis-groep toegediende hoge dosis (D) en middeldosis (E) CTaqueous-extracten de neiging hadden om kortere intersample-afstanden te hebben dan die in de modelgroep en in de laaggedoseerde CTaqueous extract supplement groep (F) (Figuur 2(b)). Deze resultaten gaven aan dat het waterige CT-extract zou kunnen helpen bij het verbeteren van de diversiteit van de darmmicrobiota bij muizen met darmaandoeningen.

3.3. Veranderingen in de samenstelling van de darmmicrobiota Behandeld met het waterige extract van Cistanche Tubulosa.

De profielen van de samenstelling van de microbiota werden vergeleken tussen verschillende groepen. Op phylum-niveau was de relatieve abundantie van Proteobacteria in de modelgroep hoger dan die in de andere groepen (Figuur 3 (a)). De toename van Proteobacteria suggereerde dat het microbioom van modelmuizen werd veranderd door cefixime en dat het waterige CT-extract de darmmicrobiota ten goede zou kunnen komen, aangezien de verhoogde prevalentie van Proteobacteria een hub-marker is van een verstoorde darmflora [43–45]. Bovendien nam op genusniveau de relatieve abundantie van Lactobacillus in de modelgroep af in vergelijking met die in de normale en hooggedoseerde groepen; het nam echter toe in vergelijking met dat in de midden- en lage dosisgroep (Figuur 3(b)). Deze resultaten gaven aan dat het hooggedoseerde CTaqueous-extract de groei van sommige bacteriën van het geslacht Lactobacillus zou kunnen bevorderen.

Differentiële microbiota tussen de bestudeerde groepen werd verder bepaald volgens de LEFSe-analyse. Deze analyse toonde aan dat, na de behandeling met cefixime, de relatieve abundanties van Turicibacter, Alphaproteobacteria, Acidobacteria, Betaproteobacteriën en Chloroflflexi significant toenamen, terwijl de relatieve abundanties van lactobacillus, Eubacterium_nodatum_groep, Pseudono cardiales en Christensenellaceae_R-7_groep significant afgenomen in vergelijking met die in de normale groep (Figuur 4(a)). Opvallend was dat wanneer de modelgroep werd aangevuld met het hooggedoseerde CT-extract in water, de relatieve abundanties van Muribaculaceae, Lactobacillus, Kineosporiaceae, Eubacterium no datum group en Pedobacter significant waren toegenomen in vergelijking met die in de modelgroep. Ondertussen namen de relatieve abundanties van Rhodobacter, Ruminococcaceae UCG_013, Roseburia, Ruminiclostridium_9 en Candidatus Stoquefifichus significant af in vergelijking met die in de modelgroep (Figuur 4(b)).

3.4. Functies van de darmmicrobiota gerelateerd aan de behandeling met het waterige extract van Cistanche Tubulosa.

We gebruikten PICRUST2-software om de metabole routes van de darmmicrobiota te voorspellen, en de normale groep werd gebruikt als referentie om de veranderingen in andere groepen te analyseren. Onder de cefixime-behandeling namen de relatieve overvloed aan ethylbenzeenafbraak, biosynthese van niet-ribosomale peptiden van de siderofoorgroep en metabolisme van xenobiotica door cytochroom P450-routes toe; na de behandeling met waterige Cistanche Tubulosa-extracten met een hoge en middelhoge dosis, keerde hun relatieve overvloed terug naar normale niveaus. Ondertussen nam de relatieve abundantie van de cyano-aminozuurmetabolismeroute af onder de cefixime-behandeling; het nam echter toe na de behandeling met het hooggedoseerde waterige CT-extract. Verder waren in het algemeen de veranderingen in verschillende metabolietroutes na de behandeling met cefixime significant in vergelijking met die in de normale groep; de toevoeging van het waterige extract van Cistanche Tubulosa kon echter overmatige veranderingen voorkomen (Figuur 5).

4. Discussie

De morfologie van de dikke darm kan worden veranderd door groei, spijsvertering en absorptie, immuunregulatie en herstel van darmletsel [46-50]. De V/C-ratio kan de spijsverteringsstatus van het darmkanaal volledig weergeven en is recht evenredig met het spijsverterings- en absorptievermogen van het darmkanaal [51, 52]. In de huidige studie toonden de villi- en recessiebiopsie en statistische gegevens aan dat het hooggedoseerde waterige extract de defecte morfologie in de dikke darm gedeeltelijk zou kunnen verbeteren. Om te onderzoeken hoe het waterige extract de morfologie van de darm verandert en de darmmicrobiota beïnvloedt, werkten we terug van veranderingen in de darmflora. We ontdekten dat de relatieve abundantie van Proteobacteria, een hub-marker van verstoorde darmflora, toenam onder de behandeling met cefixime in vergelijking met die zonder cefixime-behandeling. * De relatieve abundanties van andere hub-markers, Bacteroidetes en Firmicutes, hadden geen significante veranderingen, hoewel deze antioxidantactiviteiten in vitro [56] en kan de groei van sommige melkzuurbacteriën bevorderen, wat de gezondheid van de gastheer ten goede zou kunnen komen [43]. Tegelijkertijd zijn Muribaculaceae probiotische organismen die verband houden met een lang leven [57]. Deze suggereerden dat het mechanisme waarmee het waterige CT-extract de darmflora verbetert, de bevordering of bescherming van de groei van probiotische organismen kan zijn. Een andere noemenswaardige bacterie was de bacterie YE57. Hoewel het hooggedoseerde CTaqueous-extract de relatieve abundantie van bacterie YE57 in de huidige studie bevorderde (Figuur 4), hebben eerdere studies aangetoond dat de abundantie hoger was in de normale darm dan die in de darm die werd behandeld met kruidentheeresidu in hoge concentratie [ 58] en dat de abundantie ervan was verminderd na de interventie met Bacillus licheniformis in combinatie met XOS (xylooligosacchariden) [59]. De rol van deze bacterie in de darmflora verdient dus nader onderzoek. Bovendien kan het relatief kleine aantal monsters in deze studie een mate van fout-positief en fout-negatief veroorzaken, en toekomstig onderzoek op grotere monsters wordt aanbevolen om de geïdentificeerde bacteriële markers te valideren.

De samenstelling van het waterige extract van Cistanche Tubulosa kan belangrijk zijn vanwege de effecten op de samenstelling en functionele veranderingen in de darmmicrobiota van muizen met darmstoornissen. PHG's zijn veelvoorkomende actieve componenten die worden aangetroffen in Cistanche Deserticola en Cistacnche Tubulosa, en echinacoside werd geïdentificeerd als de belangrijkste PNG in Cistache Tubulosa [60]. In de afgelopen decennia is aangetoond dat echinacoside veel farmacologische activiteiten bezit, zoals anti-aging en neuroprotectieve effecten, verbetering van de hartfunctie, vermindering van hyperlipidemie en hyperglykemie, en preventie van door obesitas veroorzaakte diabetes en metabool syndroom [53, 61-65] . In feite hebben we veranderingen gedetecteerd in de metabole routes van de darmmicrobiota. * De behandeling van cefixime leidde tot de verrijking van bacteriën die verband houden met de afbraak van ethylbenzeen en biosynthese van niet-ribosomale peptiden uit de siderofoorgroep, terwijl de behandelingen met de hoge en middelhoge dosis Cistanche Waterig Tubulosa-extract zou deze veranderingen kunnen verlichten, wat aangeeft dat dit extract de bacteriële gemeenschap met betrekking tot deze functies matigde. Bovendien gaven de verhoogde bacteriële verrijking gerelateerd aan de cyanoaminozuurmetabolismeroute onder de behandeling met het hooggedoseerde waterige extract en de verminderde verrijking ervan in modelmuizen aan dat het waterige Cistanche Tubulosa-extract het metabolisme van cyanoaminozuur kan bevorderen. * Veranderingen in relevante metabolieten kunnen dit waterige extract farmacologische activiteiten geven.

cistanche kruid

Hoewel het mechanisme waarmee het waterige extract van Cistanche Tubulosa de samenstelling en functie van de darmmicrobiota verandert complex is, zijn er enkele aanwijzingen om te speculeren over het mogelijke mechanisme. Er is gemeld dat zowel melkzuurbacteriën als waterige extracten van Cistanche Tubulosa oxidatieve stress kunnen tegengaan. Oxidatieve stress die optreedt tijdens ontsteking is een veel voorkomende factor die darmaandoeningen verergert door de microbiële diversiteit in de darm sterk te verminderen en de toename van specifieke bacteriën te bevorderen (4). Integendeel, reactieve zuurstofsoorten bevorderen ook de selectieve groei van bacteriële groepen door middel van nitraat- en tetrathionaatademhaling [66-68]; Zo kunnen bacteriën uit de familie Enterobacteriaceae snel groeien als gevolg van veranderingen in de samenstelling van de darmflora onder oxidatieve omstandigheden tijdens ontstekingen [69, 70]. De meeste levende organismen ontwikkelen enzymatische afweermechanismen, niet-enzymatische antioxidantafweermechanismen en reparatiemechanismen om zuurstofradicalen op te vangen [71]. Deze natieve antioxidantsystemen zijn echter over het algemeen niet voldoende om oxidatieve schade in levende organismen te voorkomen. Verschillende aanvullende synthetische antioxidanten, waaronder gebutyleerd hydroxyanisol en gebutyleerd hydroxytolueen, zijn op grote schaal gebruikt om oxidatie te verminderen, maar hun veiligheid is in twijfel getrokken [72, 73]. Daarom hebben onderzoekers zich gericht op het vinden van veiligere en meer natuurlijke antioxidanten die zijn verkregen uit natuurlijk voorkomende stoffen. Vanwege het vermogen van zowel polysacchariden als melkzuurbacteriën om oxidatieve stress te elimineren, moet in de toekomst het precieze antioxidatieve mechanisme van waterige Cistanche Tubulosa-extracten op de darmmicrobiota worden bepaald.

Concluderend vonden we dat het waterige extract van Cistanche Tubulosa in staat was de darmmicrobiota te verbeteren bij muizen met darmstoornissen door diversiteit te bevorderen, de metabolische veranderingen te matigen en de structuur van de darmmicrobiota te hermodelleren, en deze resultaten kunnen een referentie vormen voor de ontwikkeling van verwante medicijnen in de toekomst.

Beschikbaarheid van data

De statistiek van de operationele taxonomische eenheden onder elke steekproefgegevens die worden gebruikt om de bevindingen van deze studie te ondersteunen, zijn opgenomen in de aanvullende informatiebestanden, en de 16s rRNA-sequencinggegevens die worden gebruikt om de bevindingen van deze studie te ondersteunen, zullen na publicatie worden vrijgegeven.

Belangenverstrengeling

De auteurs verklaren dat ze geen belangenconflicten hebben.

Dankbetuigingen

Deze studie werd financieel ondersteund door subsidies van de National Natural Science Foundation of China (81860766).

Aanvullende materialen

Figuur S1: HPLC-detectie van het waterige extract van Cistanche tubulosa. (a) De piek van echinacoside en acteoside in het referentiemateriaal verschijnt afzonderlijk op 5.066 min en 9.988 min. (b) *e piek van echinacoside en acteoside in het waterige extract verschijnt afzonderlijk bij 5,097 min en 10,076 min, en de concentraties zijn afzonderlijk 236 mg/g en 12,7 mg/g. Tabel S1: de lengte van de darmvlokken en de diepte van de uitsparingen. Tabel S2: statistische informatie van de 16S rRNA-sequencinggegevens. Tabel S3: statistiek van de operationele taxonomische eenheden onder elk monster. (aanvullend materiaal).

Referenties

[1] A. Heintz-Butchart en P. Wilmes, "Menselijk darmmicrobioom: functie is belangrijk", Trends in Microbiology, vol. 26, nee. 7, blz. 563-574, 2018.

[2] CA Thaiss, N. Zmora, M. Levy en E. Elinav, "Het microbioom en aangeboren immuniteit," Nature, vol. 535, nee. 7610, blz. 65-74, 2016.

[3] G. Quaranta, M. Sanguinetti en L. Masucci, "Fecale microbiota-transplantatie: een potentieel hulpmiddel voor de behandeling van ziekten van het vrouwelijke voortplantingsstelsel bij de mens," Frontiers in Immunology, vol. 10, blz. 2653, 2019.

[4] GA Weiss en T. Hennet, "Mechanismen en gevolgen van intestinale dysbiose," Cellular and Molecular Life Sciences, vol. 74, nee. 16, blz. 2959-2977, 2017.

[5] Y. Li, Y. Peng, P. Ma et al., "Antidepressivum-achtige effecten van Cistanche tubulosa-extract op ratten met chronische onvoorspelbare stress door het herstel van de homeostase van de darmmicrobiota," Frontiers in Pharmacology, vol. 9, blz. 967, 2018.

[6] L. Fan, Y. Peng, J. Wang, P. Ma, L. Zhao en X. Li, "Totalglycosiden van stengels van Cistanche tubulosa verlichten depressie-achtig gedrag: bidirectionele interactie van de fytochemicaliën en darmmicrobiota, "Fytogeneeskunde, vol. 83, Artikel-ID 153471, 2021.

[7] Y. Li, Y. Peng, M. Wang, P. Tu en X. Li, "Menselijk gastro-intestinaal metabolisme van het cistanche herba waterextract invitro: opheldering van het metabolische profiel op basis van uitgebreide metabolietidentificatie in maagsap, darmsap, menselijke darmbacteriën en darmmicrosomen," Journal of Agricultural and Food Chemistry, vol. 65, nee. 34, blz. 7447-7456, 2017.

[8] H. Wang, Y. Sun, W.-C. Ye et al., "Antioxidatieve fenylethanoïde en fenolische glycosiden van Picrorhiza Scrophularia flora," Chemical and Pharmaceutical Bulletin, vol. 52, nee. 5, blz. 615-617, 2004.

[9] S.-L. Ji, K.-K. Cao, X.-X. Zhao et al., "Antioxidant activiteit van fenylethanoïde glycosiden op glutamaat-geïnduceerde neurotoxiciteit," Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry, vol. 83, nee. 11, blz. 2016-2026, 2019.

[10] Q. Wang, J. Dong, W. Lu et al., "Fenylethanolglycosiden van Cistanche tubulosa verbeterden reproductieve disfunctie door testiculaire steroïden te reguleren via CYP450-3 -HSDpathway," Journal of Ethnopharmacology, vol. 251, artikel ID112500, 2020.

[11] S.-P. Jij, L. Ma, J. Zhao, S.-L. Zhang en T. Liu, "Fenylethanolglycosiden van Cistanche tubulosa onderdrukken hepatische stellaatcelactivering en blokkeren de geleiding van signaalroutes in TGF- 1/smad als potentiële anti-leverfibrosemiddelen," Molecules, vol. 21, nee. 1, blz. 102, 2016.

[12] S.-P. Jij, J. Zhao, L. Ma, M. Tudimat, S.-L. Zhang en T. Liu, "Preventieve effecten van fenylethanoïde glycosiden van Cistanche tubulosa op door runderserumalbumine geïnduceerde leverfibrose bij ratten," DARU Journal of Pharmaceutical Sciences, vol. 23, nee. 1, blz. 52, 2015.

[13] T. Morikawa, H. Xie, Y. Pan, et al., "Een overzicht van biologisch actieve natuurlijke producten van een woestijnplant Cistanche tubulosa," Chemical and Pharmaceutical Bulletin, vol. 67, nee. 7, blz. 675-689, 2019.

[14] J. Li, J. Li, A. Aspire, et al., "Fenylethanoïde glycosiden van Cistanche tubulosa remmen de groei van B16-F10-cellen zowel in vitro als in vivo door inductie van apoptose via de mitochondriale afhankelijk traject," Journal of Cancer, vol. 7, nee. 13, blz. 1877-1887, 2016.

[15] Y. Hu, J. Huang, Y. Li et al., "Cistanche deserticola-polysaccharide induceert melanogenese in melanocyten en vermindert oxidatieve stress via het activeren van de NRF2/HO-1-route," Journal of Cellular and Molecular Medicine, vol. 24, nee. 7, blz. 4023-4035, 2020.

[16] S. Peng, P. Li, P. Liu, et al., "Cistanches verlicht door sevofluraan geïnduceerde cognitieve disfunctie door PPAR-c-afhankelijke antioxidant en ontstekingsremmer bij ratten te reguleren," Journal of Cellular and Molecular Medicine, vol. 24, nee. 2, blz. 1345-1359, 2020.

[17] Y. Liu, H. Wang, M. Yang, et al., "Cistanche deserticola-polysacchariden beschermen PC12-cellen tegen OGD/RP-geïnduceerd letsel", Biomedicine & Pharmacotherapy, vol. 99, blz. 671-680,2018.

[18] Z. Fu, L. Han, P. Zhang, et al., "Cistanche-polysacchariden verbeteren de absorptie van echinacoside in vivo en beïnvloeden de darmmicrobiota", International Journal of Biological Macromolecules, vol. 149, blz. 732-740, 2020.

[19] NT Williams, "Probiotica", American Journal of Health-System Pharmacy, vol. 67, nee. 6, blz. 449-458, 2010.

[20] R. Ashraf en NP Shah, "Stimulatie van het immuunsysteem door probiotische micro-organismen," Critical Reviews in Food Science and Nutrition, vol. 54, nee. 7, blz. 938-956, 2014.

[21] G. La Fata, P. Weber en MH Mohajeri, "Probiotica en het immuunsysteem van de darm: indirecte regulering," Probiotica en antimicrobiële eiwitten, vol. 10, nee. 1, blz. 11-21, 2018.

[22] MA Zocco, LZ dal Verme, F. Cremonini, et al., "Werkzaamheid van lactobacillus GG bij het handhaven van remissie van colitis ulcerosa", Alimentary Pharmacology en 8erapeutics, vol. 23, nee. 11, blz. 1567-1574, 2006.

[23] MJ Saez-Lara, C. Gomez-Llorente, J. Plaza-Diaz en A. Gil,"*e rol van probiotische melkzuurbacteriën en bifidobacteriën bij de preventie en behandeling van inflammatoire darmaandoeningen en andere gerelateerde ziekten: een systematische review van gerandomiseerde klinische proeven bij mensen," BioMed Research International, vol. 2015, Artikel ID 505878, 15 pagina's, 2015.

[24] MAO Dawood, S. Koshio, M. Ishikawa, et al., "Effecten van voedingssuppletie van Lactobacillus rhamnosus en/of lactococcus lactis op de groei, darmflora en immuunresponsen van zeebrasem, Pagrus major," Fish & Shellfifish Immunology, vol. 49, blz. 275-285, 2016.

[25] A. Sivan, L. Corrales, N. Hubert, et al., "Commensal bifidobacterium bevordert antitumorimmuniteit en vergemakkelijkt de werkzaamheid tegen PD-L1", Science, vol. 350, nee. 6264, blz. 1084-1089,2015.

[26] PJ Whorwell, L. Altringer, J. Morel, et al., "De werkzaamheid van een ingekapseld probiotisch Bifidobacterium-kind is 35624 bij vrouwen met het prikkelbare darm syndroom," 8e American Journal of Gastroenterology, vol. 101, nee. 7, blz. 1581-1590, 2006.

[27] Y. Wang, Y. Wu, Y. Wang et al., "Antioxidant eigenschappen van probiotische bacteriën," Nutrients, vol. 9, nee. 5, blz. 521, 2017.

[28] JMC Gutteridge, R. Richmond en B. Halliwell, "Remming van de door ijzer gekatalyseerde vorming van hydroxylradicalen uit superoxide en van lipideperoxidatie door desferrioxamine," Biochemical Journal, vol. 184, nee. 2, blz. 469-472, 1979.

[29] E. Deriu, JZ Liu, M. Pezeshki, et al., "Probiotische bacteriën verminderen de intestinale kolonisatie van salmonella Typhimurium door te strijden om ijzer," Cell Host & Microbe, vol. 14, nee. 1, blz. 26-37, 2013.

[30] T. Kullisaar, M. Zilmer, M. Mikelsaar, et al., "Twee antioxidatieve lactobacillenstammen als veelbelovende probiotica", International Journal of Food Microbiology, vol. 72, nee. 3, blz. 215-224, 2002.

[31] JG LeBlanc, S. del Carmen, A. Miyoshi, et al., "Gebruik van superoxide dismutase en katalase producerende melkzuurbacteriën in door TNBS geïnduceerde ziekte van Crohn bij muizen," Journal of Biotechnology, vol. 151, nee. 3, blz. 287-293, 2011.

[32] M. Rossi, A. Amaretti en S. Raimondi, "Folaatproductie door probiotische bacteriën," Nutrients, vol. 3, nee. 1, blz. 118-134,2011.

[33] A. Pompei, L. Cordisco, A. Amaretti, et al., "Toediening van folaatproducerende bifidobacteriën verbetert de folaatstatus bij Wistar-ratten", 8e Journal of Nutrition, vol. 137, nee. 12, blz. 2742-2746, 2007.

[34] L.-X. Wang, K. Liu, DW Gao en JK Hao, "Beschermende effecten van twee Lactobacillus Plantarum-stammen bij hyperlipidemische muizen", World Journal of Gastroenterology, vol. 19, nee. 20, blz. 3150-3156, 2013.

[35] EO Petrof, K. Kojima, MJ Ropeleski, et al., "Probiotica remmen nucleaire factor-KB en induceren heat shock-eiwitten in colonepitheelcellen door middel van proteasoomremming," Gastroenterology, vol. 127, nee. 5, blz. 1474-1487, 2004.

[36] A. Seth, F. Yan, DB Polk en RK Rao, "Probiotica verbeteren de door waterstofperoxide geïnduceerde verstoring van de epitheliale barrière door een PKC- en MAP-kinase-afhankelijk mechanisme", American Journal of Physiology-Gastrointestinal and lever Physiology , vol. 294, nee. 4, blz. G1060-G1069, 2008.

[37] M. G´omezGuzm´an, M. Toral, M. Romero, et al., "Antihypertensieve effecten van probiotica Lactobacillus-stammen bij spontaan hypertensieve ratten", Molecular Nutrition & FoodResearch, vol. 59, nee. 11, blz. 2326-2336, 2015.

[38] H. Zeng, L. Huang, L. Zhou, P. Wang, X. Chen en K. Ding, "Een galactoglucan geïsoleerd uit Cistanchedeserticola YC Ma. en zijn biologische activiteit op darmbacteriën," Carbohydrate Polymers, vol. 223, artikelnummer 115038, 2019.

[39] S. Zheng, X. Jiang, L. Wu, Z. Wang en L. Huang, "Chemische en genetische discriminatie van cistanche herba op basis van UPC-QTOF/MS en DNA-barcodering," PLoS One, vol. 9, nee. 5, artikel-ID e98061, 2014.

[40] M. Li, T. Xu, F. Zhou, et al., "Neuroprotectieve effecten van vier fenylethanoïde glycosiden op H2O2-geïnduceerde apoptose op PC12-cellen via de Nrf2/ARE-route," International Journal of Molecular Sciences , vol. 19, nee. 4, blz. 1135, 2018.

[41] A. Wu, Z. Yang, Y. Huang, et al., "Natuurlijke fenylethanoïde glycosiden geïsoleerd uit Callicarpa kwangtungensis onderdrukte lipopolysaccharide-gemedieerde ontstekingsreactie via het activeren van de Keap1/Nrf2/HO-1-route in RAW 264.7 macrofagen cel," Journal of Ethnopharmacology, vol. 258, Artikel-ID 112857, 2020.

[42] GM Douglas, VJ Maffffei, JR Zaneveld, et al., "PICRUSt2for predictie van metagenoomfuncties", Nature Biotechnology, vol. 38, nee. 6, blz. 685-688, 2020.

[43] H.-L. Li, L. Lu, X.-S. Wang et al., "Verandering van darmmicrobiota en inflammatoire cytokine/chemokine-profielen in 5-fluorouracil-geïnduceerde intestinale mucositis," Frontiers in Cellular and infectie Microbiology, vol. 7, blz. 455, 2017.

[44] M. Pammi, J. Cope, PI Tarr, et al., "Intestinale dysbiose bij premature baby's voorafgaand aan necrotiserende enterocolitis: een systematische review en meta-analyse," Microbiome, vol. 5, nee. 1, blz. 31, 2017.

[45] N.-R. Shin, TW When, en J.-W. Bae, "Proteobacteria: microbiële handtekening van dysbiose in darmmicrobiota," Trends in Biotechnology, vol. 33, nee. 9, blz. 496-503, 2015.

[46] M. de Oliveira Bel'em, CP Cirilo, AP de Santi-Rampazzoet al., "Aanpassingen van de darmmorfologie veroorzaakt door dieetbeperkingen verbeteren de voedingsstatus tijdens het verouderingsproces van ratten," Experimental Gerontology, vol. 69, blz. 85-93,2015.

[47] B. Potsic, N. Holliday, P. Lewis, D. Samuelson, V. DeMarco en J. Neu, "Glutaminesuppletie en -ontbering: effect op kunstmatig gekweekte dunne darmmorfologie van ratten," Pediatric Research, vol. 52, nee. 3, blz. 430-436, 2002.

[48] ​​JL Daniels, RJ Bloomer, M. van der Merwe, SL Davis, KK Buddington en RK Buddington, "Intestinale aanpassingen aan een combinatie van verschillende diëten met en zonder duurtraining," Journal of the International Society of Sports Nutrition, vol. 13, nee. 1, blz. 35, 2016.

[49] L. Muñoz, MJ Borrero, M. 'Ubeda et al., "Intestinale immuundysregulatie aangedreven door dysbiose bevordert barrièreverstoring en bacteriële translocatie bij ratten met cirrose," Hepatology, vol. 70, nee. 3, blz. 925-938, 2019.

[50] X. Li, Y. Wu, Z. Xu et al., "Effecten van hetiao Jianping-afkooksel op darmbeschadiging en -herstel bij ratten met antibiotica-geassocieerde diarree", Medical Science Monitor, vol. 26, artikel IDe921745, 2020.

[51] Y. Xie, F. Ding, W. Di et al., "Impact van een vetrijk dieet op intestinale stamcellen en epitheliale barrièrefunctie bij vrouwelijke muizen van middelbare leeftijd," Molecular Medicine Reports, vol. 21, nee. 3, blz. 1133-1144, 2020.

[52] BL Bivolarski en EG Vachkova, "Morfologische en functionele gebeurtenissen die verband houden met het spenen bij konijnen", Journal of Animal Physiology and Animal Nutrition, vol. 98, nee. 1, blz. 9-18, 2014.

[53] H. Shimoda, J. Tanaka, Y. Takahara, K. Takemoto, S.-J. Shan, en M.-H. Su, "*e hypocholesterolemische effecten van cistanchetubulosa-extract, een traditioneel Chinees medicijn, bij muizen," 8e American Journal of Chinese Medicine, vol. 37, nee. 6, blz. 1125-1138, 2009.

[54] RE Ley, PJ Turnbaugh, S. Klein en JI Gordon, "Menselijke darmmicroben geassocieerd met obesitas", Nature, vol. 444, nee. 7122, blz. 1022-1023, 2006.

[55] J.-Y. Kim, YM Kwon, I.-S. Kim et al., "Effecten van suppletie met bruin zeewier laminaria japonica op serumconcentraties van IgG, triglyceriden en cholesterol, en de samenstelling van de darmmicrobiota bij ratten," Frontiers in Nutrition, vol. 5, blz. 23, 2018.

[56] W. Zhang, J. Huang, W. Wang, et al., "Extractie, zuivering, karakterisering en antioxiderende activiteiten van polysachariden uit Cistanche tubulosa", International Journal of BiologicalMacromolecules, vol. 93, blz. 448-458, 2016.

[57] M. Sibai, E. Altuntas¸, B. Yıldırım, G. ¨Ozt¨urk, S. Yıldırım en T. Demircan, "Microbioom en levensduur: een hoge overvloed aan langlevende Muribaculaceae in de darm van het langlevende knaagdier Spalax leucodon," OMICS: A Journal of IntegrativeBiology, vol. 24, nee. 10, blz. 592-601, 2020.

[58] Y. Xie, Z. Chen, D. Wang, et al., "Effecten van gefermenteerde kruidenthee-residuen op de darmmicrobiota-kenmerken van Holstein-vaarzen onder hittestress," Frontiers in Microbiology, vol. 11, blz. 1014, 2020.

[59] Y. Li, M. Liu, H. Liu, et al., "Orale supplementen van gecombineerde Bacillus licheniformis zhengchangsheng en xylooligosacchariden verbeteren vetrijke dieet-geïnduceerde obesitas en moduleren de darmmicrobiota bij ratten," BioMed Research International, vol . 2020, Artikel-ID 9067821, 17 pagina's, 2020.

[60] Y. Jiang en P.-F. Tu, "Analyse van chemische bestanddelen in cistanche soorten," Journal of Chromatography A, vol. 1216, nee. 11, blz. 1970-1979, 2009.

[61] F. Li, Y. Yang, P. Zhu, et al., "Echinacoside bevordert de botregeneratie door de OPG/RANKL-verhouding in MC3T3-E1-cellen te verhogen," Fitoterapia, vol. 83, nee. 8, blz. 1443-1450, 2012.

[62] F. Tang, Y. Hao, X. Zhang en J. Qin, "Effect van echinacoside op nierfibrose door remming van TGF- 1/Smads-signaleringsroute in het DB/DB-muizenmodel van diabetische nefropathie , "Drug Design, Development en 8erapy, vol. 11, blz. 2813-2826, 2017.

[63] W.-T. Xiong, L. Gu, C. Wang, H.-X. Sun en X. Liu, "Antihyperglycemische en hypolipidemische effecten van Cistanche tubulosa bij type 2 diabetische DB / DB-muizen", Journal of Ethnopharmacology, vol. 150, nee. 3, blz. 935-945, 2013.

[64] X.-x. Bao, H.-h. Ma, H. Ding, W.-w. Li en M. Zhu, "Voorlopige optimalisatie van een Chinese kruidengeneesmiddelformule op basis van de neuroprotectieve effecten in een rattenmodel van de door rotenon geïnduceerde ziekte van Parkinson," Journal of IntegrativeMedicine, vol. 16, nee. 4, blz. 290-296, 2018.

[65] Y. Chen, Y.-Q. Li, J.-Y. Fang, P. Li en F. Li, "Opstelling van het gelijktijdige experimentele model van osteoporose gecombineerd met de ziekte van Alzheimer bij ratten en de dubbele effecten van echinacoside en acteoside van Cistanche tubulosa," Journal of Ethnopharmacology, vol. 257, artikel-ID 112834, 2020.

[66] M. Hensel, AP Hinsley, T. Nikolaus, G. Sawers en B. C. Berks, "*e genetische basis van tetrathionaatademhaling in Salmonella Typhimurium," Molecular Microbiology, vol. 32, nee. 2, blz. 275-287, 1999.

[67] SE Winter, P. Thiennimitr, MG Winter, et al., "Darmontsteking verschaft een respiratoire elektronenacceptor voor salmonella," Nature, vol. 467, nee. 7314, blz. 426-429, 2010.

[68] SE Winter, MG Winter, MN Xavier, et al., "van de gastheer afgeleid nitraat stimuleert de groei van E. coli in de ontstoken darm", Science, vol. 339, nee. 6120, blz. 708-711, 2013.

[69] C. Lupp, ML Robertson, ME Wickham, et al., "Host-gemedieerde ontsteking verstoort de darmmicrobiota en bevordert de overgroei van Enterobacteriaceae," Cell Host & Microbe, vol. 2, nee. 2, blz. 119-129, 2007.

[70] B. Stecher, R. Robbiani, AW Walker, et al., "Salmonellaenterica serovar Typhimurium exploiteert ontsteking om te concurreren met de darmmicrobiota," PLoS Biology, vol. 5, nee. 10, blz. e244-2189, 2007.

[71] V. Mishra, C. Shah, N. Mokashe, R. Chavan, H. Yadav en J. Prajapati, "Probiotica als potentiële antioxidanten: een systematische review," Journal of Agricultural and Food Chemistry, vol. 63, nee. 14, blz. 3615-3626, 2015.

[72] JMP Mart´ın, PF Freire, L. Daimiel, et al., "Het antioxidant gebutyleerde hydroxyanisol versterkt de toxische effecten van propylparaben in gekweekte zoogdiercellen," Food andChemical Toxicology, vol. 72, blz. 195-203, 2014.

[73] RS Lanigan en TA Yamarik, "Final report on the safety assessment of BHT", International Journal of Toxicology, vol. 21, nee. 2, blz. 19-94, 2002.