Glochidion Littorale-bladextract vertoont neuroprotectieve effecten bij Caenorhabditis Elegans via DAF-16-activering

Voor meer informatie e-mail bereikentina.xiang@wecistanche.com 
Abstract:Een aantal planten die in de volksgeneeskunde in Thailand en Oost-Azië worden gebruikt, trekken belangstelling vanwege de hoge biologische activiteit van hun extracten. Het doel van deze studie was om de eetbare bladextracten van 20 planten gevonden in Thailand te screenen en de mogelijke neuroprotectieve effecten van het meest bioactieve monster te onderzoeken. Het totale fenol- en flavonoïdegehalte en de 2,2-difenyl-1-picrylhydrazylradicalen-wegvangende activiteit werden bepaald voor alle 20 bladextracten. Op basis van deze tests werd Glochidionlittorale-bladextract (GLE), dat een hoge waarde vertoonde in alle geteste parameters, in verdere experimenten gebruikt om de effecten ervan op neurodegeneratie inCaenorhabditis elegans. GLE-behandeling verbeterde door H2O2-geïnduceerde oxidatieve stress door de ophoping van reactieve zuurstofsoorten te verminderen en de wormen te beschermen tegen door 1-methyl-4-fenylpyridinium-geïnduceerde neurodegeneratie. De waargenomen neuroprotectieve effecten kunnen verband houden met de activering van de transcriptiefactor DAF-16. De karakterisering van dit extract door LC-MS identificeerde verschillende fenolische verbindingen, waaronder myricetine, coumestrine, chlorogeenzuur en hesperidine, die een sleutelrol kunnen spelen bijneuroprotectie. Deze studie rapporteert de nieuwe neuroprotectieve activiteit van GLE, die kan worden gebruikt om behandelingen voor neurodegeneratieve ziekten zoals het syndroom van Parkinson te ontwikkelen.

trefwoorden: Caenorhabditis elegans; blad extract;neuroprotectie; antioxidante werking; DAF-16

1. Inleiding 

Neurodegeneratieve aandoeningen, waaronder de ziekte van Alzheimer en de ziekte van Parkinson (PD) vormen grote gezondheids- en financiële zorgen voor wereldwijde gezondheidsorganisaties [1]. Hoewel de levensduur van de mens in de geïndustrialiseerde landen de afgelopen decennia is toegenomen, is ook de prevalentie van ouderdomsziekten toegenomen. Verwacht wordt dat de incidentie van laat optredende aandoeningen, zoals neurologische verstoringen, de komende decennia snel zal toenemen. Daarom is het van cruciaal belang om studies aan te moedigen en klinische proeven uit te voeren met verbindingen die mogelijk het begin van neurodegeneratieve ziekten kunnen genezen, voorkomen of op zijn minst vertragen [2]. Een van de karakteristieke kenmerken van PD is het progressieve verlies van dopaminerge (DA) neuronen in de substantia nigra [3]. Bij PD-pathogenese speelt verhoogde productie van reactieve zuurstofspecies (ROS) een sleutelrol bij het verlies van DA-cellen [4]. Daarom wordt de vermindering van oxidatieve stress beschouwd als een veelbelovende therapeutische benadering in de behandeling van PD [5]. Het 1-methyl-4-fenylpyridinium (MPP plus), dat de activiteit van mitochondriaal complex I remt, kan PD-achtige symptomen veroorzaken bij mensen en diermodellen [6].

Het gebruik vanCaenorhabditis elegansomdat een in vivo model bepaalde voordelen biedt bij de studie van PD [7]. Het aaltje is eenvoudig, goedkoop en heeft een korte levenscyclus. Het ondersteunt studies met grootschalige analyses. Bovendien is het neuronale netwerk van C. elegans volledig in kaart gebracht. Het bevat 8 DA-neuronen en PD-gerelateerde homologe genen [8]. Neurodegeneratie, die de symptomen van Parkinson nabootst, kan bij C. elegans worden geïnduceerd via behandeling met neurotoxinen zoals MPP plus [9].
Natuurlijke antioxidantverbindingen vormen aantrekkelijke bronnen voor het ontwikkelen van medicijnen voor de behandeling van neurodegeneratieve ziekten vanwege hun neuroprotectieve effecten in diermodellen en lage toxiciteit [3]. Van polyfenolen is bekend dat ze behoren tot de meest voorkomende antioxidanten in de menselijke voeding [10]. Er is ook vastgesteld dat oxidatieve processen betrokken zijn bij veel pathologieën, waaronder neurodegeneratie, kanker, diabetes, cardiovasculaire en ontstekingsremmende ziekten. Daarom zou het vinden van polyfenolen met antioxiderende eigenschappen uit natuurlijke bronnen kunnen bijdragen aan het voorkomen of behandelen van die pathologieën. Deze studie richtte zich op extracten van de eetbare bladeren van planten uit Thailand. De meeste soorten die op grote schaal in Noord- en Zuid-Thailand worden gekweekt, zijn gebruikt als volksgeneesmiddel tegen algemene verwondingen en ziekten; er zijn echter weinig meldingen over hun neuroprotectieve effecten.
In deze studie hebben we eerst de extracten van eetbare bladeren van 20 in Thailand gekweekte planten gescreend en hun fenol- en flflavonoïde-gehalte en hun 2,2-difenyl-1- picrylhydrazyl (DPPH) radicaalvangende activiteit beoordeeld. De effecten van Glochidion littorale leaf extract (GLE), die een hoge waarde vertoonden in alle geteste parameters, werden geëvalueerd op C. elegans met neurodegeneratie. Verder werden de mogelijke routes die betrokken zijn bij het neuroprotectieve effect van GLE onderzocht, samen met de identificatie van de belangrijkste componenten in GLE.
Aangezien bekend is dat de transcriptiefactor DAF-16 een sleutelrol speelt bij het reguleren van oxidatieve stress [11], werd de hypothese geopperd dat GLE zich zou kunnen richten op DAF-16. De C. elegans-stam CF1038, een DAF-16-verlies-van-functie mutante stam, werd gebruikt om het overlevingspercentage te bepalen van wormen die met en zonder GLE werden behandeld. Bij H2O2-geïnduceerde oxidatieve stress verhoogde GLE-behandeling de overlevingskans van transgene wormen niet (Figuur 1C).

2. Resultaten

2.1. Screening van Thaise plantenbladeren

Ruwe extracten van eetbare bladeren van in Thailand gekweekte planten werden bereid door ultrasone trillingen. De bladextracten van 20 planten werden gescreend op hun fenol- en flavonoïdegehalte en antioxiderende activiteit door middel van een DPPH-radicaalafvangende test. Weinig van de geteste monsters, zoals Glochidion sphaerogynum en Mentha piperita, bleken een hoge radicaalafvangende activiteit te hebben met een laag fenol- en flflavonoïdegehalte, terwijl bepaalde monsters, zoals Clinacanthus nutans en Ocimum × citriodorum, de tegenovergestelde trend vertoonden (tabel 1 ). Het bladextract van G. littorale vertoonde een hoge DPPH-radicalenafvangende activiteit en een hoog gehalte aan fenolen en flflavonoïden. Daarom werden de biologische activiteiten geassocieerd met G. littorale verder onderzocht.

2.2. GLE verbeterde weerstand tegen oxidatieve stress via DAF-16 in C. Elegans

Het effect van GLE op de overleving van N2-wormen onder oxidatieve stress werd onderzocht. Behandeling met H2O2 (5 mM) veroorzaakte 75 procent sterfte in de controlegroep, terwijl gelijktijdige behandeling met 50 µg/mL en hogere concentraties GLE geassocieerd was met een hoog overlevingspercentage (Figuur 1A). Van de geteste concentraties van GLE waren 100 µg/ml en 200 µg/ml geassocieerd met de hoogste overlevingspercentages (respectievelijk 82,0 procent en 88,2 procent). Daarom werden deze twee concentraties in volgende experimenten gebruikt. Om het antioxiderende effect van GLE in vivo te evalueren, werden de intracellulaire ROS-niveaus gemeten in wildtype nematoden met behulp van 2',7'-dichloordihydroflfluoresceïnediacetaat (H2DCF-DA), een bekende fluorescentiesonde voor het detecteren van intracellulaire ROS-productie. Aanzienlijke dalingen van de fluorescentie-intensiteiten in de met GLE behandelde groepen werden waargenomen in vergelijking met die in de onbehandelde groep (Figuur 1B), wat de antioxiderende eigenschap van GLE bevestigt.

2.3. GLE-behandeling verminderde de letaliteit van MPP plus-geïnduceerde DA-neurotoxiciteit via DAF-16 in C. Elegans C. elegans bezit 8 DA-neuronen [8]. Selectieve degeneratie van deze DA-neuronen werd geëvalueerd na blootstelling aan MPP plus. De behandeling van wildtype N2-wormen met 0,75 mM MPP plus resulteerde in een opmerkelijke afname in overleving (Figuur 2). Gelijktijdige behandeling met GLE verhoogde echter de overleving van de wormen aanzienlijk. Het effect van GLE-behandeling op daf-16 mutante wormen werd onderzocht. Zoals getoond in Figuur 3 en Tabel 2, verhoogde GLE-behandeling de overleving van deze wormen niet na blootstelling aan MPP plus in vergelijking met die in de controlegroep. Deze resultaten suggereren dat DAF-16 nodig kan zijn voor het mediëren van het neuroprotectieve effect van GLE bij C. elegans. Vervolgens werd een DAF-2 loss-of-function mutante stam, CB1370, gebruikt om te bepalen of DAF-2 betrokken was bij de waargenomen neuroprotectieve effecten. Zoals getoond in Figuur 4 en Tabel 3, namen de mediane en maximale overleving significant toe bij daf-2 mutante wormen die werden behandeld met GLE.

2.4. Effecten van GLE op DAF-16 Lokalisatie

Er is aangetoond dat de activering van DAF-16 wordt gereguleerd door zijn nucleaire accumulatie [12]. Vervolgens hebben we onderzocht of GLE de nucleaire accumulatie van DAF-16 zou kunnen induceren in een transgene stam TJ356 die een DAF-16::GFP-fusie-eiwit tot expressie brengt. De resultaten toonden aan dat na 48 uur incubatie met 100 µg/mL GLE, de groene fluorescentie-intensiteit van DAF-16 in de kern significant toenam in vergelijking met die in de onbehandelde groep (Figuur 5).

2.5. Fytochemische karakterisering in GLE

LC-MS werd uitgevoerd voor het profileren van de fytochemicaliën in GLE, en de resultaten worden weergegeven in figuur6. De chromatografische pieken werden geïdentificeerd door de MS-gegevens te vergelijken met databases op basis van het zoeken naar m/z-waarden van moleculaire ionenpieken in de positieve modus [M plus H]plus. Bijgevolg werden myricetine, coumestrine, chlorogeenzuur en hesperidine gedetecteerd als de belangrijkste verbindingen (tabel4).

3. Discussie

Plantenextracten zijn een rijke bron van natuurlijke bioactieve stoffen. Veel studies hebben plantenextracten geëvalueerd die worden gebruikt in Zuidoost-Aziatische landen, waaronder Thailand, waar deze extracten componenten zijn van de volksgeneeskunde [13,14]. In deze studie werden de extracten van 20 eetbare plantenbladeren uit Thailand gescreend en G. littorale werd geselecteerd voor verder onderzoek omdat het een hoog fenolgehalte, flflavonoïdengehalte en radicaalafvangende activiteit vertoonde. Verschillende studies hebben verschillende soorten van het geslacht Glochidion [15-19] onderzocht; er zijn echter weinig studies over de functionele eigenschappen en bestanddelen van G. littorale. Onze gegevens toonden aan dat GLE C. elegans beschermde tegen H2O2-geïnduceerde oxidatieve stress door intracellulaire ROS-accumulatie te verminderen. Dit kan te wijten zijn aan het hoge gehalte aan fenolische verbindingen zoals flavonoïden, waarvan bekend is dat ze een sterke antioxiderende activiteit hebben [20]. Deze bevindingen zijn vergelijkbaar met die van Duangjan et al. (2019), die aantoonden dat bladextracten van G. zeylanicum C. elegans kunnen beschermen tegen oxidatieve stress [21]. De insuline/insuline-achtige signaleringsroute (IIS) reguleert de groei, het reactievermogen op stress en de levensduur bij C. elegans [22,23]. We ontdekten dat daf-16 null-mutant C. elegans behandeld met GLE gevoelig was voor oxidatieve stress. Dit resultaat suggereert dat het antioxiderende effect van GLE bij het verminderen van oxidatieve stress bij nematoden mogelijk niet alleen betrokken is bij de activiteit van radicalen, maar ook bij de regulatie van de DAF-16-transcriptiefactor.

De beschermende effecten van GLE tegen MPP plus-geïnduceerde toxiciteit bij C. elegans werden onderzocht. DA-neuronen in nematoden nemen MPP plus voornamelijk op via DA-transporters met hoge affiniteit, wat op dezelfde manier wordt waargenomen bij zoogdieren. De accumulatie van MPP plus in de neuronen inactiveert het mitochondriale complex I van de ademhalingsketen en induceert celdood [24-27]. GLE-behandeling bleek de letaliteit die gepaard gaat met MPP plus-behandeling bij wildtype wormen aanzienlijk te verminderen. De IIS-route wordt gemoduleerd door insuline-achtige peptiden via de DAF-2-receptor in C. elegans [28]. Onder normale omstandigheden remt de IIS-route de fosforylering van DAF-16 en voorkomt de nucleaire translocatie ervan. In daf-2 null-mutanten overleefde de met GLE behandelde groep langer dan de controlegroep. Daarentegen werd geen verschil in overleving waargenomen tussen de controlegroep en de met GLE behandelde groep die daf-16 null-mutante wormen bevatte. Het is bekend dat gedownreguleerde DAF-2-signalering de binnenkomst van DAF-16 in de kern vergemakkelijkt, waar het de expressie van doelgenen kan opreguleren en stressresistentie en levensduur kan regelen [29]. Dit zou kunnen verklaren waarom daf-2 mutante wormen behandeld met GLE een relatief hogere overleving lieten zien. Verder werd een verhoogde nucleaire accumulatie van DAF-16 waargenomen in wormen die werden behandeld met GLE met behulp van transgene TJ356 DAF-16::GFPC. elegantie. Cumulatief gaven deze resultaten aan dat GLE zijn neuroprotectieve effecten zou kunnen hebben vertoond via activering van DAF-16.

4.3. Totaal fenolgehalte De Folin-Ciocalteu-methode werd gebruikt om het totale fenolgehalte te bepalen. In het kort werd 11,4 µL van het extract (1 mg/ml) gemengd met 227,3 µL 2 procent (w/v) Na2C03-oplossing, en vervolgens liet men het mengsel 2 minuten bij kamertemperatuur staan. Na toevoeging van 11,4 µL van 10 procent (v/v) Folin-Ciocalteu-reagens. De incubatie in het donker werd gedurende 30 minuten uitgevoerd. Vervolgens werd de absorptie gemeten bij 750 nm met behulp van een microplaatlezer (Nivo 3F Multimode Plate Reader, PerkinElmer, Waltham, MA, VS). Galluszuur werd gebruikt als standaard voor de ijkcurve. Het totale fenolgehalte werd uitgedrukt als galluszuurequivalenten (mg galluszuurequivalent/g plantenextract).

4.4. Totaal flavonoïdegehalte De colorimetrische aluminiumchloridemethode werd gebruikt om het totale flavonoïdegehalte te meten. In het kort werd 25 µL van het extract (2 mg/ml) gemengd met 7,5 µL 5 procent (w/v) NaNO2-oplossing en 152,5 µL gedestilleerd water. Na 6 min werd 15 µl 10% (w/v) A1C13-oplossing toegevoegd en men liet dit 5 min staan. Vervolgens werd 50 µl 1 M NaOH-oplossing aan het mengsel toegevoegd. Vervolgens werd het mengsel 15 minuten in het donker geïncubeerd en werd de absorptie gemeten bij 510 nm met behulp van een microplaatlezer. Het totale flavonoïdegehalte werd berekend door een ijkcurve te genereren met quercetine als standaard en de resultaten werden uitgedrukt als quercetine-equivalent (mg quercetine-equivalent/g plantenextract).4.5. Vrije radicalen wegvangende activiteit Het vermogen om vrije radicalen op te vangen werd beoordeeld met behulp van DPPH-assays [32]. In het kort werd 100 µL van het extract (1 mg/ml) gemengd met 100 µL DPPH-oplossing. Na 30 minuten werd de absorptie gemeten bij 517 nm met behulp van een microplaatlezer. De resultaten werden uitgedrukt als een percentage remming van de DPPH-radicalen.

4.10. Nucleaire lokalisatie van DAF-16Transgene C. elegans TJ356, dat een DAF-16-GFP-fusie-eiwit tot expressie brengt, werd gebruikt om de intracellulaire distributie van DAF-16 te onderzoeken. L1-stadium nematoden werden 48 uur behandeld met GLE bij 2{{30}} ◦C. De wormen werden vervolgens overgebracht naar een 2 procent agarosekussentje op een glasplaatje en verdoofd door één druppel (ongeveer 20 µL) 25 µM natriumazide aan het agarosekussentje toe te voegen. De expressie van GFP werd onderzocht via fluorescentiemicroscopie (EVOSflfl; Advanced Microscopy Group, Bothell, WA, VS). De gemiddelde fluorescentie-intensiteit van DAF -16 in de kernen werd geanalyseerd met behulp van Image J-software (National Institutes of Health, Bethesda, MD, VS). 4.11. Fytochemische profilering met behulp van LC-MS Het bladextract werd geanalyseerd met behulp van de LCMS-8040 (Shimadzu). Massaspectra werden verkregen over een bereik van m/z 50–1000 met behulp van de Q3-scanmodus. De oplossing werd geïnjecteerd op een Inertsil ODS-3 (250 × 2,1 mm, 5 µm, GL Sciences, Tokyo Japan) bij een kolomtemperatuur van 40 ◦C met een gradiënt van (A) 0,1 procent mierenzuur en (B ) acetonitril/water (80/20) dat 0,1 procent mierenzuur bevat. De volgende gradiënt met een stroomsnelheid van 0, 2 ml / min werd gebruikt: 0-100 procent B (0-45 min), 100 procent B (45-50 min) en 0 procent B (50-60 min). Verbindingen werden vermoedelijk geïdentificeerd door de experimentele m/z-waarden te matchen met de bibliotheek van theoretisch berekende m/z-waarden in databases, waaronder de Human Metabolome Database en de METLIN-database. 4.12. Statistische analysegegevens werden uitgedrukt als het gemiddelde ± standaarddeviatie voor elke groep. Het significante verschil tussen de twee groepen werd beoordeeld met behulp van de t-test, terwijl het verschil tussen drie en meer groepen werd beoordeeld met behulp van one-way ANOVA, gevolgd door Tukey's post-hoc vergelijkingstest. Statistische significantie werd vastgesteld op p < 0,001="" en="" p="">< 0,0001.="" voor="" levensduurtesten="" werd="" de="" overleving="" van="" c.="" elegans="" uitgezet="" met="" behulp="" van="" kaplan-meier-overlevingscurven="" en="" geanalyseerd="" via="" log-rank-tests="" met="" graphpad="" prism-software="" (versie="" 9.01;="" graphpad="" software,="" san="" diego,="" ca,="">

Abdel Fawaz Bagoudou 1, Yifeng Zheng 2, Masahiro Nakabayashi 2, Saroat Rawdkuen 3, Hyun-Young Park 4, Dhiraj A. Vattem 4,5, Kenji Sato 6, Soichiro Nakamura 1 en Shigeru Katayama 1,2,*

1 Graduate School of Medicine, Science and Technology, Shinshu University, 8304 Minamiminowa, Kamiina, Nagano 399-4598, Japan;

2Instituut voor Biomedische Wetenschappen, Shinshu University, 8304 Minamiminowa, Kamiina,Nagano 399-4598, Japan;

3 School of Agro-Industry, Mae Fah Luang University, 333 Moo 1, Thasud, Muang, Chiang Rai 57100, Thailand;saroat@mfu.ac.th

4 Edison Biotechnology Institute, Konneker Research Laboratories, Ohio University, Athene, OH 45701, VS;

5 College of Health Sciences & Professions, Ohio University, Athene, OH 45701, VS

6 Graduate School of Agriculture, Universiteit van Kyoto, Kyoto 606-8502, Japan;

Auteursbijdragen:

Bijdragen van auteurs: Conceptualisering, SR, DAV en SK; onderzoek, AFB, YZ, MN, SR, H.-YP, DAV en KS; schrijven-originele ontwerpvoorbereiding, AFB; schrijven-recensie en redactie, SK; supervisie, SN Alle auteurs hebben de gepubliceerde versie van het manuscript gelezen en ermee ingestemd.
Financiering: Dit onderzoek heeft geen externe financiering gekregen.
Verklaring van de Institutionele Review Board: Niet van toepassing.
Verklaring van geïnformeerde toestemming: niet van toepassing.
Verklaring van beschikbaarheid van gegevens: De gegevens zijn op redelijk verzoek beschikbaar bij de corresponderende auteur.
Belangenverstrengeling: De auteurs verklaren geen belangenverstrengeling.
Beschikbaarheid van monsters: Monsters van de verbindingen zijn niet verkrijgbaar bij de auteurs

Referenties

1 Pohl, F.; Lin, PKT Het potentiële gebruik van natuurlijke plantenproducten en plantenextracten met antioxiderende eigenschappen voor de preventie/behandeling van neurodegeneratieve ziekten: in vitro, in vivo en klinische proeven. Moleculen 2018, 23, 3283. [CrossRef] [PubMed]

2. Kim, GH; Kim, JE; Rhie, SJ; Yoon, S. De rol van oxidatieve stress bij neurodegeneratieve ziekten. Exp. neurobiol. 2015, 24, 325-340. [CrossRef] [PubMed]

3. Lu, X.-l.; Yao, X.-l.; Liu, Z.; Zhang, H.; Li, W.; Li, Z.; Wang, G.-L.; Pang, J.; Lin, Y.; Xu, Z. Beschermende effecten van xyloketal B tegen door MPP plus geïnduceerde neurotoxiciteit in Caenorhabditis elegans en PC12-cellen. Hersenonderzoek. 2010, 1332, 110-119. [Kruisref]

4. Trimmer, PA; Bennett, JP, Jr. Het cybride model van de sporadische ziekte van Parkinson. Exp. neurol. 2009, 218, 320-325. [Kruisref]

5. Cheon, S.-M.; Jang, ik.; Lee, MH; Kim, DK; Jeon, H.; Cha, DS Sorbus alnifolia beschermt dopaminerge neurodegeneratie bij Caenorhabditis elegans. apotheek Biol. 2016, 55, 481-486. [Kruisref]

6. Schmidt, N.; Ferger, B. Neurochemische bevindingen in het MPTP-model van de ziekte van Parkinson. J. Neurale Transm. 2001, 108, 1263-1282. [CrossRef] [PubMed]

7. Harrington, A.; Yacoubian, TA; Slon, SR; Caldwell, K.; Caldwell, G. Functionele analyse van VPS41-gemedieerde neuroprotectie bij Caenorhabditis elegans en zoogdiermodellen van de ziekte van Parkinson. J. Neurosci. 2012, 32, 2142-2153. [CrossRef] [PubMed]

8. Fu, R.-H.; Harn, H.-J.; Liu, S.-P.; Chen, C.-S.; Chang, W.-L.; Chen, Y.-M.; Huang, J.-E.; Li, R.-J.; Tsai, S.-Y.; Hung, H.-S.; et al. n-Butylidenephthalide Beschermt tegen dopaminerge neuronendegeneratie en -synucleïneaccumulatie in Caenorhabditis elegans-modellen van de ziekte van Parkinson. PLOS EEN 2014, 9, e85305. [Kruisref]

9. Jadiya, P.; Khan, A.; Sammi, SR; Kaur, S.; Mir, SS; Nazir, A. Anti-Parkinson-effecten van Bacopa monnieri: inzichten uit transgene en farmacologische Caenorhabditis elegans-modellen van de ziekte van Parkinson. Biochem. Biofysica. Onderzoek gemeenschappelijk 2011, 413, 605-610. [CrossRef] 10. Andrade, JMDM; Fasolo, D. Polyfenol-antioxidanten uit natuurlijke bronnen en bijdrage aan gezondheidsbevordering. In polyfenolen bij menselijke gezondheid en ziekte; Elsevier BV: Amsterdam, Nederland, 2014; blz. 253-265.

11. Hsu, A.-L.; Murphy, CT; Kenyon, C. Regulering van veroudering en leeftijdsgerelateerde ziekten door DAF-16 en Heat-Shock Factor. Wetenschap 2003, 300, 1142-1145. [Kruisref]

12. Henderson, ST; Johnson, TE daf-16 integreert ontwikkelings- en omgevingsfactoren om veroudering bij de nematode Caenorhabditis elegans te mediëren. Curr. Biol. 2001, 11, 1975-1980. [Kruisref]

13. Hutadilok-Towatana, N.; Chaiyamutti, P.; Panthong, K.; Mahabusarakam, W.; Rukachaisirikul, V. Antioxidatieve en vrije radicalen opruimactiviteiten van sommige planten die worden gebruikt in de Thaise volksgeneeskunde. apotheek Biol. 2006, 44, 221-1228. [Kruisref]

14. Stewart, P.; Boonsiri, P.; Puthong, S.; Rojpibulstit, P. Antioxiderende activiteit en ultrastructurele veranderingen in maagkankercellijnen veroorzaakt door Noordoost-Thaise eetbare volksplantenextracten. BMC-complement. alternatief. Med. 2013, 13, 60. [CrossRef]

15. Hui, W.; Lee, W.; Ng, K.; Chan, C. Het voorkomen van triterpenoïden en steroïden in drie Glochidion-soorten. Fytochemie 1970, 9, 1099-1102. [Kruisref]

16. Takeda, Y.; Mima, C.; Masuda, T.; Hirata, E.; Takushi, A.; Otsuka, H. Glochidioboside, een glucoside van (7S,8R)-dihydrodeh ydrodiconiferylalcohol uit bladeren van glochidia obovatum. Fytochemie 1998, 49, 2137-2139. [Kruisref]

17. Zhang, X.; Chen, J.; Gao, K. Chemische bestanddelen van Glochidion wrightii Benth. Biochem. Syst. Ecol. 2012, 45, 7-11. [Kruisref]

18. Tian, ​​J.-M.; Fu, X.-Y.; Zhang, Q.; Hij, H.-P.; Gao, J.-M.; Hao, X.-J. Chemische bestanddelen van Glochidion assamicum. Biochem. Syst. Ecol. 2013, 48, 288-292. [Kruisref]

19. Kongkachuichai, R.; Charoensiri, R.; Yakoh, K.; Kringkasemsee, A.; Insung, P. Nutriëntenwaarde en antioxidantgehalte van inheemse groenten uit Zuid-Thailand. Voedsel Chem. 2015, 173, 838-846. [Kruisref]

20. Pietta, P.-G. Flavonoïden als antioxidanten. J. Nat. Prod. 2000, 63, 1035-1042. [CrossRef] [PubMed]

21. Duangjan, C.; Rangsinth, P.; Gu, X.; Zhang, S.; Knipoog, M.; Tencomnao, T. Glochidion zeylanicum-bladextracten vertonen levensduurverlengende en oxidatieve stressresistentie-eigenschappen in Caenorhabditis elegans via DAF-16/FoxO- en SKN-1/Nrf-2-signaalroutes. Fytogeneeskunde 2019, 64, 153061. [CrossRef]

22. Jensen, VL; Gallo, M.; Riddle, DL Doelen van DAF-16 die betrokken zijn bij Caenorhabditis elegans de levensduur van volwassenen en de vorming van dauer. Exp. Gerontol. 2006, 41, 922-927. [CrossRef] [PubMed]

23. Daitoku, H.; Fukamizu, A. FOXO Transcriptiefactoren in de regulerende netwerken van een lang leven. J. Biochem. 2007, 141, 769-774. [Kruisref]

24. Lakso, M.; Vartiainen, S.; Moilanen, A.-M.; Sirviö, J.; Thomas, JH; Nass, R.; Blakely, RD; Wong, G. Dopaminerge neuronaal verlies en motorische tekorten bij Caenorhabditis elegans die humaan synucleïne tot overexpressie brengen. J. Neurochem. 2004, 86, 165–172. [CrossRef] [PubMed]

25. Nass, R.; Hall, DH; Miller, DM; Blakely, RD Neurotoxine-geïnduceerde degeneratie van dopamine-neuronen in Caenorhabditis elegans. Proc. nat. Acad. Wetenschap. VS 2002, 99, 3264-3269. [Kruisref]

26. Wang, Y.-M.; Pu, P.; Le, W.-D. ATP-depletie is de belangrijkste oorzaak van door MPP plus geïnduceerde neuronale dood van dopamine en letaliteit van wormen in -synucleïne-transgene C. elegans. neurosci. Stier. 2007, 23, 329-335. [Kruisref]

27. Braungart, E.; Gerlach, M.; Riederer, P.; Baumeister, R.; Hoener, M. Caenorhabditis elegans MPP plus Model van de ziekte van Parkinson voor screening van geneesmiddelen met hoge doorvoer. Neurodegener. Dis. 2004, 1, 175-183. [Kruisref]

28. Panowski, SH; Dillin, A. Signalen van jeugd: endocriene regulatie van veroudering bij Caenorhabditis elegans. Trends Endocrinol. Metab. 2009, 20, 259-264. [Kruisref]