Menselijke vruchtwatermesenchymale stamcellen verlichten AGVHD na Allo-HSCT door interacties tussen darmmicrobiota en darmimmuniteit te reguleren

Abstract

Acute graft-versus-hostziekte (aGVHD) na allogene hematopoëtische stamceltransplantatie vormt een van de meest lastige uitdagingen. Dysbiose van de darmmicrobiota kan voortschrijden met aGVHD en mesenchymale stamcellen (MSC's) hebben veelbelovend therapeutisch potentieel voor aGVHD. Het blijft echter onbekend of hAMSC's de darmmicrobiota beïnvloeden tijdens aGVHD-mitigatie. Dienovereenkomstig hebben we geprobeerd de effecten en onderliggende mechanismen te definiëren van menselijke vruchtwatermembraan-afgeleide MSC's (hAMSC's) die de darmmicrobiota en de darmimmuniteit bij aGVHD reguleren. Door gehumaniseerde aGVHD-muismodellen en hAMSCs-behandeling op te zetten, ontdekten we dat hAMSCs de aGVHD-symptomen aanzienlijk verbeterden, de immuunonbalans van T-celsubsets en cytokines omkeerden en de darmbarrière herstelden. Bovendien werden de diversiteit en samenstelling van de darmmicrobiota verbeterd na behandeling met hAMSCs. Spearmans correlatieanalyse toonde aan dat er een correlatie bestond tussen de darmmicrobiota en tight-junction-eiwitten, ook immuuncellen en cytokines. Ons onderzoek suggereerde dat hAMSC's aGVHD verlichtten door de normalisatie van de darmmicrobiota te bevorderen en de interacties tussen de darmmicrobiota en de darmbarrière, immuniteit, te reguleren.

cistanche voordelen voor mannen versterken het immuunsysteem

Trefwoorden

Acute graft-versus-hostziekte · Vruchtwatermesenchymale stamcellen · Darmmicrobiota · Darmbarrière · Darmimmuniteit

Invoering

Het belangrijkste voordeel van allogene hematopoëtische stamceltransplantatie (allo-HSCT) is de krachtige antitumorrespons als gevolg van een graft-versus-leukemie (GVL)-effect dat wordt veroorzaakt door de herkenning van peptiden die voortkomen uit verschillen in genomische polymorfismen tussen patiënt en patiënt. donor. Acute graft-versus-hostziekte (aGVHD) draait echter om de ontwikkeling van weefselbeschadiging bij de ontvanger als gevolg van de aanval door de allo-reactieve donor-T-cellen en vertegenwoordigt een levensbedreigende belangrijke complicatie bij alloHSCT [1, 2]. Er is gerapporteerd dat de darmmicrobiële stoornis ontstekingsreacties induceert en correleert met ontstekingsgerelateerde ziekten [3, 4]. Talrijke onderzoeken hebben aangetoond dat verstoringen in de darmmicrobiota een essentiële factor zijn die aGVHD na allo-HSCT veroorzaakt, en een nieuw doelwit voor behandeling worden [5, 6]. Specifiek wordt de darmmicrobiota-dysbiose bij aGVHD meestal gekenmerkt door het verlies van de bacteriële diversiteit in de darmen en de uitgroei van opportunistische pathogenen [6]. Bij gastro-intestinale GVHD initieert de aangetaste mucosale barrière de activering van gastheerantigeenpresenterende cellen en donor-T-cellen, culminerend in T-celdifferentiatie langs pathogene type-1 en type-17 paradigma's ten koste van tolerogene regulerende T-cellen. celpatronen [7]. Voornamelijk op basis van 16S ribosomaal RNA (16S rRNA) gaf sequencing aan dat meerdere soorten darmmicrobiota in verband zijn gebracht met GVHD, en bijvoorbeeld dat butyraatproducerende clostridia geassocieerd zijn met het behoud van de epitheliale barrièrefunctie en verzwakking van acute GVHD [8 ]. Mesenchymale stamcellen (MSC’s) hebben de afgelopen tien jaar veel aandacht gekregen vanwege hun zelfvernieuwings- en multilineaire differentiatiepotentieel, evenals hun immuunmodulerende eigenschappen [9]. Er wordt aangenomen dat MSC's beschadigde weefsels mogelijk maken uit een evenwichtige inflammatoire en regeneratieve micro-omgeving in de aanwezigheid van krachtige ontstekingen en worden op grote schaal gebruikt voor de behandeling van op het immuunsysteem gebaseerde aandoeningen, waarbij de meest succesvolle klinische toepassing betrokken is bij de behandeling van GVHD [10]. Menselijke vruchtwater-mesenchymale stamcellen (hAMSC's) zijn perinatale stamcellen die embryonaal stamcelachtig differentiatievermogen en volwassen stamcelachtige immuunmodulerende eigenschappen bezitten. Door fenotypes te delen die vergelijkbaar zijn met typische MSC's, zijn hAMSC's een veelbelovende bron van stamcellen geworden dankzij het gemak, de niet-invasieve en veiligheid van weefselverwerving, de overvloedige celopbrengst en de zeer lage ethische en morele geschillen vergeleken met stamcellen uit andere bronnen. Menselijke AMSC's hebben de voordelen van een lage immunogeniciteit en geen tumorigeniciteit, waardoor ze de ideale celbron zijn voor celtherapie [11, 12]. In vitro-experimenten hebben bevestigd dat hAMSC's een hoger proliferatief vermogen en een groter groeivermogen op de lange termijn vertoonden dan uit beenmerg afkomstige MSC's [13, 14]. Talrijke onderzoeken hebben aangetoond dat hAMSC’s het potentieel hebben om veel ontstekingsziekten te verbeteren, waaronder inflammatoire darmziekten, artrose en auto-immuunziekten [11]. Onze recente studie heeft aangetoond dat hAMSC's aGVHD verbeterden door de balans van T-effector- en Treg-cellen te reguleren [15]. Het effect en het mechanisme van hAMSC's op de darmmicrobiële stoornis bij GVHD zijn echter onbekend. Hier willen we de potentiële impact van hAMSCs op aGVHD en het darmmicro-ecosysteem onderzoeken. Het zou de eerste studie zijn die de darmmicrobiota en de correlatie ervan met de darmimmuniteit onthult na hAMSC-behandeling van aGVHD.

Materialen en methodes

Isolatie, cultuur en identificatie van hAMSC's

De hAMSC's werden geëxtraheerd zoals eerder beschreven [15]. Derde-passage (P3) cellen werden geoogst door fenotype-identificatie door kleuring met antilichamen tegen CD34 (581, BD Pharmingen, VS), CD45 (HI30, BD Pharmingen, VS), HLA-DR (G46-6, BD Pharmingen , VS), CD11b (ICRF44, BD Pharmingen, VS), CD90 (5E10, BD Pharmingen, VS), CD73 (AD2, BD Pharmingen, VS) en CD105 (SN6, biowetenschappen, VS), en vervolgens geanalyseerd met een flowcytometer ( BD FACS Canto II). De cellen werden gecontroleerd op hun multilineaire differentiatie met behulp van een specifiek inductiemedium (BGscience, China) en gekleurd met Oil Red-O en Alizarin Red voor respectievelijk adipogenese en osteogene differentiatie. hAMSC's in passages 3 tot en met 6 werden voor de experimenten gebruikt.

cistanche tubulosa-verbetering van het immuunsysteem

Menselijke PBMC's-collectie

Plasmamonsters werden verkregen van gezonde vrijwilligers met schriftelijke geïnformeerde toestemming. Menselijke mononucleaire cellen uit perifeer bloed (PBMC's) werden geïsoleerd uit perifeer bloed door Ficoll-Hypaque (Tianjin Haoyang, China) dichtheidscentrifugatie, gewassen met PBS, gesuspendeerd in rood bloedlysisbuffer (Solarbio, China) bij 4 graden gedurende 15 minuten. Was opnieuw en suspendeer vervolgens in PBS voor injectie in de staartader in NPG-muizen.

Muizen

Mannelijke en vrouwelijke NPG-muizen met een leeftijd van 8-10 weken en 25-30 g werden gekocht bij Beijing Vitalstar Biotechnology Co., Ltd. en gekweekt onder SPF-omstandigheden in een licht-donkercyclus van 12 uur met constante temperatuur en vochtigheid. Alle dierprocedures werden goedgekeurd door het Institutional Animal Care and Use Committee van de Southern Medical University (nr. L2019132) in overeenstemming met de richtlijnen voor dierproeven van de National Health and Medical Research Council of China.

Acuut GVHD-diermodel en behandeling

Het aGVHD-muismodel werd opgesteld zoals eerder beschreven [15]. Voor de behandeling werden op de derde dag na de transplantatie 5 x 105 hAMSC's per muis (hier hAMSCs-groep) en PBS (hier aGVHD-groep) via de staartader in elke muis geïnjecteerd. In alle muismodellen werden de muizen elke twee dagen gecontroleerd op morbiditeit en gewichtsveranderingen. Elke muis werd gescoord op pathologische kenmerken, waaronder gewichtsverlies, gebogen houding, gegolfde vacht, huidlaesies, verminderde mobiliteit en diarree, en vervolgens beoordeeld volgens het klinische aGVHD-scoresysteem, aangepast van het systeem dat oorspronkelijk door Cooke werd beschreven [16]. In sommige gevallen leden muizen in de aGVHD-groep aan ernstige aGVHD, en de muizen in de hAMSCs-groep werden op de derde dag na de behandeling opgeofferd om het perifere bloed en de doelorganen, waaronder levers, milten, longen en darmen, te oogsten. De uitwerpselen van deze muizen werden vóór het doden verzameld.

GFP-gelabelde hAMSC's en in vivo tracering

GFP-gelabelde hAMSC's werden vastgesteld en geïdentificeerd zoals eerder beschreven [15]. Kortom, we hebben het groene fluorescentie-eiwit (GFP) -gen getransfecteerd in hAMSC's met lentivirus als vector. 5 x 105 GFP-gelabelde hAMSC's gesuspendeerd in 500 μl PBS werden via de staartader in aGVHD-muizen geïnjecteerd. Na 24 uur en 72 uur werden de muizen geëuthanaseerd om de darmen te oogsten en vervolgens bevroren secties te genereren. DAPI-tegenkleuring werd gebruikt om de ontvangende cellen te onderscheiden.

Histopathologische evaluatie

De aGVHD-doelorganen werden verzameld op het moment van necropsie en vervolgens verwerkt tot in paraffine ingebedde blokken om 5- μm dikke secties te genereren voor hematoxyline- en eosinekleuring (H&E). Histologische scores werden beoordeeld op basis van vernietiging van de weefselstructuur en infiltratie van lymfocyten [17]. Voor immunohistochemie werden de secties van paraffine ontdaan, gerehydrateerd en gedurende 20 minuten behandeld met 3% H2O2 in methanol om de endogene peroxidase-activiteit te inactiveren. Vervolgens werden secties onderworpen aan antigeenwinning en gedurende 1 uur behandeld met serumalbumine. Vervolgens werden de secties gedurende 1 uur bij 37 graden geïncubeerd met anti-menselijke CD45-antilichamen van konijnen (EP322Y, Abcam, Engeland) of ZO-1-antilichamen ((EPR19945-296, Abcam, Engeland). antilichamen werden gedetecteerd met HRP-geconjugeerd secundair antilichaam (Genentech, VS) en gevisualiseerd met DAB. Het positieve gebied werd geanalyseerd door afbeelding J.

cistanche plantverhogend immuunsysteem

16S rRNA-sequencing van fecale microbiota

Fecaal genomisch DNA werd geëxtraheerd uit 0,1 g bevroren fecale monsters met behulp van een EZNA® ontlasting-DNA-kit (Omega BioTek, Norcross, GA, VS) volgens het protocol van de fabrikant. Met behulp van genomisch DNA als sjabloon werden specifieke primers (338F: 5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3', en 806R: 5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3') met streepjescodes en PremixTaq (TaKaRa, China) gebruikt om te amplificeren de V3-V4 hypervariabele gebieden van het bacteriële 16S rRNA-gen. Na amplificatie en zuivering werd het volledige genoom van het monster gesequenced op het Illumina Hiseq of Miseq high-throughput sequencing-platform door Magigene Technology Co., Ltd. (Guangzhou, China) om onbewerkte gegevens in FASTQ-formaat te verkrijgen. Sequentiedata-analyses werden voornamelijk uitgevoerd met behulp van het Magichand-platform.

Flowcytometrische analyse

De aGVHD-doelorganen en perifeer bloed van muizen werden verkregen en bereid in eencellige suspensie. Cellen werden gekleurd met monoklonale antilichamen tegen CD3 (UCHT1, Biolegend, VS), CD4 (RPA-T4, Invitrogen, VS), CD8 (RPA-T8, Biolegend, VS), CD25 (BC96, Biolegend, VS) of isotype-gematcht controle IgG (eBioscience, VS) gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur in het donker. Vervolgens werden de cellen gedurende 15 minuten bij 4 graden in het donker verwerkt met Lysing Buffer (BD Pharm LyseTM). Intracellulaire Foxp3-kleuring (236A/E7, Invitrogen, VS) werd uitgevoerd volgens de aanbevelingen van de fabrikant (Fixation/Permeabilization Solution Kit; eBioscience). Vervolgens werden polychromatische flowcytometrische analyses uitgevoerd op een flowcytometer.

Cytokinen kwantificering

De niveaus van cytokinen in het serum en de weefselsupernatant van muizen werden bepaald met behulp van de Cytometric Bead Array (CBA) Human Th1/Th2/Th17 cytokinekit (BD Pharmingen, VS) volgens de instructies van de fabrikant. In het kort werd 50 μl van elk van de supernatantmonsters bij kamertemperatuur in het donker geïncubeerd met 50 μl van de gemengde menselijke Th1/Th2/Th17 cytokine-vangkorrels en 50 μl van het menselijke Th1/Th2/Th17 PE-detectiereagens, en vervolgens gesuspendeerd voor flowcytometrieanalyse 3 uur later.

Kwantitatieve realtime PCR

Totaal RNA werd na isolatie met behulp van Trizol Reagent (TaKaRa, China) uit het colonweefsel van muizen geëxtraheerd. Totaal RNA werd gebruikt als matrijs voor het reverse-trancriberen van cDNA. -actine werd gebruikt als interne referentie. De mRNA-expressie werd gemeten met qPCR met behulp van de volgende primers: ZO-1-F, 5'-ACCACCAACCCGAGAAGAC-3' en ZO- 1-R, 5'-CAGGAGTCATGGACGCACA-3 '; Occludin-F, 5'-TTGAAAGTCCACCTCCTTACAGA-3', en OccludinR, 5'-CCGGATAAAAAAGAGTACGCTGG-3'; -actine-F, 5'-GGCTGTATTCCCCTCCATCG-3', en -actine-R, 5'-CCAGTTGGTAACAATGCCATGT-3'. De 2-ct-methode werd gebruikt om de RNA-expressieniveaus te meten.

Enzym-gekoppelde immunosorbenttest (ELISA)

De niveaus van D-LA en DAO in plasma's werden gemeten met behulp van ELISA-kits (Jingmei, China) volgens de instructies van de fabrikant. In het kort werden de verzamelde plasmasupernatanten in respectievelijk 96-well-specifieke met antilichaam gecoate platen geplaatst. De absorptie werd geregistreerd bij 450 nm met behulp van een microplaatlezer (Multiskan MK3, Thermo Fisher Scientific).

Statistische analyse

Gegevens werden gepresenteerd als gemiddelde ± SD. De t-test van onafhankelijke monsters werd uitgevoerd en gevisualiseerd met behulp van GraphPad Prism8.0. 16S rRNA-sequencing-gegevensanalyses werden uitgevoerd met behulp van het Magichand-platform (http://cloud.magigenecom/). Correlatieanalyse tussen darmmicrobiota en immuniteit werd uitgevoerd door R-pakketten (v3.6.3) om een ​​correlatiematrix weer te geven. P-waarden<0.05 were considered statistically significant. * p<0.05, ** p<0.01, *** p<0.001, **** p<0.0001, n.s. not signifcant.

Resultaten

Identificatie van hAMSC's

De hAMSC's vertoonden een polygoon- of fibroblastachtige morfologie in kweek (Fig. 1A) en waren sterk positief voor oppervlakte-expressie van MSC-specifieke markers CD90, CD105 en CD73, maar negatief voor CD34, CD45, HLA-DR en CD11b (Fig. .1C). Wat multilineaire differentiatie betreft, toonden onze resultaten aan dat hAMSC's adipocytische en osteoblastische differentiatie vertoonden (Fig. 1B).

hAMSC's verlichtten de aGVHD-symptomen bij muizen aanzienlijk

We evalueerden eerst het therapeutische effect van hAMSC's op aGVHD. Vergeleken met de aGVHD-groep verbeterden hAMSC's de aGVHD aanzienlijk, zoals blijkt uit het aanzienlijk verminderde gewichtsverlies (Fig. 2B) en de verlaagde klinische aGVHD-score (Fig. 2C). Bovendien had de hAMSCs-groep een significant hoger overlevingspercentage in vergelijking met aGVHD-muizen (Fig. 2D). De pathologische histologische analyse toonde aan dat aGVHD ernstige weefselschade en leukocytinfiltratie veroorzaakte. hAMSC's verzwakten, zoals aangetoond door H&E, weefselverstoring en infiltratie van exogene T-cellen in aGVHD-doelorganen (Fig. 2E). Consequent bevestigden de resultaten van IHC ook dat hAMSC's abnormale pathologische manifestaties verbeterden (Fig. 2F). Deze resultaten suggereerden dat hAMSC's het potentieel hadden om aGVHD-symptomen bij aGVHD-muizen te verbeteren.

hAMSC's beïnvloedden de gastheerimmuniteit bij aGVHD-muizen

Om de onderliggende immuunmodulerende mechanismen te begrijpen waarmee hAMSC's aGVHD verminderen, hebben we de activering en expansie van T-cellen in perifeer bloed en doelorganen gemeten. Uit een flowcytometrietest bleek dat hAMSC's op opmerkelijke wijze het aantal CD3+CD4+T- en CD3+CD8+T-cellen in het bloed en de doelorganen remden (Fig. 3A, B). Bovendien was het aandeel CD4+CD25+Foxp3+Tregs in het bloed en de doelorganen van muizen in de hAMSCs-groep aanzienlijk hoger dan dat in de aGVHD-groep (Fig. 3C). . Vervolgens onderzochten we het effect van hAMSC's op het cytokineprofiel (Fig. 4). De toediening van hAMSCs resulteerde in een duidelijke afname van de IL-17A-, IFN-, TNF-, IL-6- en IL-2-niveaus in de doelorganen en het bloed vergeleken met die van de aGVHD-groep, behalve het TNF-niveau in de milt. In de tussentijd vertoonden hAMSCs-behandelingsmuizen, naast de IL-10-niveaus in de lever, aanzienlijk verhoogde niveaus van IL-10 en IL-4 in de doelorganen en het bloed. Alles bij elkaar speelden hAMSC's een beschermende rol bij aGVHD door de immuunonbalans van T-celsubsets en cytokinestorm om te keren.

Voordelen van cistanche tubulosa-versterk het immuunsysteem

Klik hier om de producten van Cistanche Enhance Immunity te bekijken

【Vraag om meer】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats-app: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

hAMSC's verbeterden de schade aan de darmbarrière bij aGVHD-muizen

Om te onderzoeken of hAMSCs de darmbarrière bij aGVHD zouden kunnen herstellen, hebben we eerst waargenomen of hAMSCs naar de darmen konden migreren. Zoals getoond in Fig. 5A werden GFP-gelabelde hAMSC's gedetecteerd in de darmen na injectie in hAMSC's en konden ze in de darmen implanteren en infiltreren. Vervolgens ontwierpen we een histopathologische evaluatie van weefsel in de dunne darm. In de aGVHD-groep was de darm geërodeerd en necrotisch, de darmvlokken waren duidelijk vernietigd, de villi waren gebroken en enorme leukocyten infiltreerden in het darmslijmvlies, de submucosa en de lamina propria. De darmvlokken waren regelmatig gerangschikt en er was geen breuk van de darmvlokken of loslating van het villi-epitheel na behandeling met hAMSCs (Fig. 5B). Infiltratie van menselijke lymfocyten werd ook waargenomen door immunohistochemie in de darmen in de aGVHD-groep, terwijl behandeling met hAMSC's hun infiltratie zou kunnen verminderen (Fig. 5C). Om het beschermende effect van hAMSC's op de integriteit van het darmslijmvlies te beoordelen, hebben we immunohistochemie uitgevoerd om het effect op ZO-1 te detecteren. In de hAMSCs-behandelingsgroep was het expressieniveau van het tight-junction-eiwit ZO-1 significant verhoogd vergeleken met de aGVHD-groep (Fig. 5D). We onderzochten ook de mRNA-expressieniveaus van intestinale tight-junction-eiwitten (TJ's) en plasmaniveaus van D-melkzuur (D-LA) en diamineoxidase (DAO) om de darmbarrièrefunctie en de darmpermeabiliteit te bepalen. Wanneer ze intraveneus worden toegediend, kunnen hMASC's de mRNA-expressieniveaus van ZO-1 en Occludin, de belangrijkste eiwitten van TJ's, aanzienlijk verhogen (Fig. 5E, F), terwijl de niveaus van D-LA en DAO worden verlaagd (Fig. 5G, H). Wanneer aGVHD optrad, werd de darmbarrière dus beschadigd, waardoor de intestinale tight-junction-eiwitten werden verminderd en de darmpermeabiliteit toenam. Ondertussen zouden hAMCSs de verstoring van de darmbarrière aanzienlijk kunnen omkeren.

Fig. 1 Fenotypische en functionele karakterisering van hAMSC's. (A) Representatieve microfoto's van hAMSC's van passage 0 tot 3 (geen kleuring, 100×). (B) Multilineage differentiatievermogen van hAM SC's. Adipogene differentiatie van hAMSC's (links) werd gekleurd met Oil Red-O, en osteoblastische differentiatie van hAMSC's (rechts) werd gekleurd met Alizarin Red (kleuring, 100x). (C) Flowcytometrische analyse die aangeeft dat hAMSC's positief zijn voor CD90, CD105 en CD73, terwijl negatief voor CD34, CD45, CD11b en HLA-DR

Fig. 2 hAMSC's verlichtten aGVHD in NPG-muizen. (A) Een schematisch diagram dat het toedieningsschema van hAMSC's in aGVHD-muismodellen illustreert. (B) Veranderingen in lichaamsgewicht in verschillende groepen (n=10). (C) klinische aGVHD-score (gebaseerd op gewichtsverlies, gebogen houding, geplooide vacht, huidlaesies, verminderde mobiliteit en diarree) in verschillende groepen (n=10). (D) Overleving tussen verschillende groepen (n=10). (E) Representatieve microscopische beelden van H&E-kleuring (400×) en histologiescore (gebaseerd op de vernietiging van de weefselstructuur en de infiltratie van lymfocyten) (n=4). (F) Representatieve microscopische foto's van immunohistochemie (400×) en het aandeel van het CD45-positieve gebied (n=4). Waarden werden gepresenteerd als gemiddelde ± SD

Fig. 3 hAMSC's remden de expansie van donor-T-cellen terwijl ze de vorming of expansie van Tregs in vivo verbeterden. (A) Flowcytometrieanalyse van CD3+CD4+T-cellen (n=6), (B) Flowcytometrieanalyse van CD3+CD8+ T-cellen (n=6), (C) Flowcytometrie-analyse van CD4+CD25+Foxp3+Tregs (n=6). Waarden werden gepresenteerd als gemiddelde ± SD

Fig. 4 hAMSC's downreguleerden de pro-inflammatoire cytokines IL-17A, IFN-, TNF, IL-6, IL-2, en verhoogden de anti-inflammatoire cytokines IL-10 en IL -4 in vivo (n=5). Waarden werden gepresenteerd als gemiddelde ± SD

Darmmicrobiota-veranderingen na hAMSCs-behandeling bij aGVHD-muizen

De 16S-rRNA-sequencing werd uitgevoerd in fecaal bacterie-DNA geïsoleerd uit verschillende groepen muizen. De -diversiteitsindexen, waaronder de OUT-, Chao1- en Shannon-indexen, vertoonden vergelijkbare tendensen, en hAMSCs-behandelingsmuizen herbergden een microbiota met een significant hogere diversiteit vergeleken met die van de aGVHD-groep (Fig. 6A). Hoofdcoördinatenanalyse (PCoA) op basis van Un-gewogen unifrac-afstand, Manhattan-afstand en Bray-Curtis-metrische afstand leverde verspreide gegevenspunten op de grafieken van de twee groepen op, ondanks dat het verschil niet significant was (Fig. 6B). Vervolgens hebben we het landschap van de darmmicrobiota beoordeeld om het potentiële samenstellingsverschil tussen de twee groepen verder te onderzoeken. Er werden in totaal 773 OTU's berekend en de hAMSCs-groep had hogere OTU's vergeleken met de aGVHD-groep (Fig. 6C). In termen van bacteriële samenstelling op phylum-niveau waren Firmicutes en Bacteroidetes de twee meest overheersende phylum (Fig. 6D). We hebben ook een vergelijkende heatmap georganiseerd voor de analyse van de darmmicrobiota tussen de twee groepen (Fig. 6E). Het geslacht Odoribacter en Ruminococcus_1 vertoonde een relatief hoge overvloed in de hAMSCs-groep, die belangrijke microben zijn voor het handhaven van de darmhomeostase (Fig. 6F, G). Om te bevestigen welke bacterie werd veranderd door de behandeling met hAMSCs en op zijn beurt de ziekteprogressie tegen aGVHD beïnvloedde, voerden we hoogdimensionale klassenvergelijkingen uit met behulp van de lineaire discriminantanalyse (LDA) van effectgrootte (LEfSe) die duidelijke verschillen in de overheersing van bacteriële gemeenschappen tussen de twee groepen. Zoals getoond in (Fig. 6H, I) waren Streptococcaceae (de familie en het geslacht Streptococcus), Paludibacteraceae, F0058 en Delftia de belangrijkste soorten bacteriën die bijdroegen aan de dysbiose van de darmmicrobiota in de aGVHD-groep. Niettemin vertoonden de nuttige bacteriën Lachnospiraceae, Roseburia, Ruminococcaceae, Ruminiclostridium, Oscillibacter en Clostridia (de klasse en orde Clostridiales) een relatieve verrijking in de hAMSCs-groep, die mogelijk geassocieerd is met de hAMSCs-gemedieerde verlichting van aGVHD. Gezamenlijk werden de diversiteit en samenstelling van de darmmicrobiota verbeterd na toediening van hAMSC's en bewoog zich in een algemene trend die gunstig was voor het lichaam.

cistanche tubulosa-verbetering van het immuunsysteem

hAMSC's reguleerden de interacties tussen darmmicrobiota en darmimmuniteit

Om de potentiële relatie tussen de darmmicrobiota en de darmslijmvliesbarrière te begrijpen, werden de correlaties tussen de TJ's en de darmmicrobiota op geslachtsniveau geanalyseerd door Spearman's correlatieanalyse. Zoals getoond in Fig. 7 was er een positieve relatie tussen ZO-1 en nuttige bacteriën, Ruminococcaceae_UCG.014, Muribaculum, Ruminococcus_1 en Ruminiclostridium_9. De relatieve overvloed van de nuttige bacteriën Roseburia, Odoribacter, Ruminococcus_1 en Ruminococcaceae_UCG.014 vertoonden dramatisch positieve correlaties met Occludin. Vervolgens voerden we een correlatieanalyse uit tussen de darmmicrobiota en de darmimmuunbarrière volgens de rangcorrelatiemethode van Spearman (Fig. 7). We hebben waargenomen dat de toename van Roseburia, Muribaculum en Ruminococcus _1 negatief gecorreleerd was met het percentage CD3 +CD4+T-cellen. Bovendien was de toename van nuttige bacteriën, Ruminococcus_1 en Ruminiclostridium _9, positief gecorreleerd met het percentage Tregs, terwijl deze negatief gecorreleerd was met IL-17. De overvloed aan Lactobacillus en Candidatus_Arthromitus was negatief gecorreleerd met IFN-. Er was een negatieve correlatie tussen de overvloed aan Muribaculum en IL-2. De toename van de overvloed aan Candidatus_Saccharimonas en de afname van Escherichia. De overvloed aan Shigella was positief gecorreleerd met het IL-10-niveau (Fig. 7). De resultaten van de correlatieanalyse gaven aan dat hAMSC's de ontstekingsomgeving van de gastheer verbeterden en de darmhomeostase reguleerden, wat mogelijk geassocieerd is met de modulatie van de darmmicrobiota, en bijgevolg aGVHD voorkwamen.

Fig. 5 hAMSC's verbeterden de disfunctie van de darmbarrière bij aGVHD-muizen. (A) GFP-gelabelde hAMSC's geïnfiltreerd in de darmen. (B) Representatieve microscopische foto's van H&E-kleuring van darmen (400×) en histologiescore (gebaseerd op de vernietiging van de weefselstructuur en infiltratie van lymfocyten) (n=4). (C) Representatieve microscopische foto's van immunohistochemie (400×) van darmen en het aandeel van het CD45-positieve gebied (n=4). (D) Representatieve microscopische foto's van immunohistochemie (400×) van darmen en het aandeel van ZO-1 positief gebied (n=4). (E) mRNA-expressieniveaus van ZO-1 en Occludin (n=3). (F) Plasmaniveaus van D-LA en DAO (n=4).Waarden werden gepresenteerd als gemiddelde ± SD

Discussie

Geavanceerde microbiële analyse heeft nieuwe inzichten opgeleverd in de complexe interacties tussen de gastheer- en darmmicrobiota [18]. De darmmicrobiota zou kunnen veranderen na allo-HSCT en is nauw verbonden met aGVHD, wat suggereert dat de darmmicrobiota een nieuw doelwit kan zijn voor aGVHD-behandeling [5]. Talrijke onderzoeken, waaronder onze recente studie, hebben het therapeutische effect van MSC's op aGVHD onderzocht en bevestigd [15, 19, 20]. Het effect op de darmmicrobiota tijdens deze periode blijft echter onduidelijk. In deze studie onderzochten we de impact van hAMSC's op aGVHD en de mogelijke mechanismen daarin in vivo. In overeenstemming met eerdere onderzoeken [15, 21-23] gaven onze resultaten aan dat hAMSC's een gunstig beschermend effect hebben op aGVHD bij muizen, zoals blijkt uit verzwakte aGVHD-symptomen en verlengde overleving. We hebben ook aangetoond dat hAMSC's een immunosuppressief effect vertoonden door de expansie van donor-T-cellen te verminderen en tegelijkertijd de vorming van Tregs in aGVHD te verbeteren. Ondertussen zouden hAMSC's pro-inflammatoire cytokines kunnen downreguleren en ontstekingsremmende cytokines in vivo kunnen opreguleren, om zo ontstekingsreacties te remmen. De darmbarrière, een dichte structuur bestaande uit een monolaag van darmepitheelcellen, behoudt zijn integriteit en voorkomt de translocatie van luminale microbiota in een gezonde toestand [24]. Tijdens allo-HSCT beschadigen conditioneringsregimenten de darmbarrière, wat de eerste stap is in de ontwikkeling van aGVHD, omdat het de translocatie van bacteriën over de barrière mogelijk maakt en leidt tot verstoring van de darmimmuunhomeostase [24, 25]. Steeds meer bewijsmateriaal toont aan dat MSC's het vermogen bezitten tot weefselherstel, waarvan bewezen is dat ze de integriteit van de darmbarrière bij colitismuizen herstellen [26]. Tight-junction-eiwitten, waaronder ZO-1 en Occludin, spelen een essentiële rol in de darmbarrièrefunctie en translocatie van de darmmicrobiota over de beschadigde darmbarrière veroorzaakt ontstekingen [27]. D-LA is afkomstig van darmbacteriën en DAO concentreert zich vooral in het darmslijmvlies. Hoge concentraties D-LA en DAO in plasma kunnen dus gedeeltelijk veranderingen in de darmpermeabiliteit en de darmbarrièrefunctie weerspiegelen [28]. Op dit moment hebben we ontdekt dat de expressieniveaus van TJ's dramatisch toenamen na toediening van hAMSC's, terwijl de plasmaniveaus van D-LA en DAO significant afnamen, wat aangeeft dat hAMSC's de disfunctie van de darmbarrière en het herstel van de darmpermeabiliteit zouden kunnen verbeteren. De darmen zijn een van de organen die het zwaarst worden getroffen door aGVHD en onderzoek heeft aangetoond dat bacteriën, en met name de darmmicrobiota, een centrale rol spelen in de pathogenese en ontwikkeling van aGVHD [5, 6]. Zoals gerapporteerd in eerdere onderzoeken, was het verlies aan bacteriële diversiteit bij allo-HSCT-patiënten geassocieerd met een verhoogde mortaliteit door aGVHD [29, 30]. Fecale dominantie door opportunistische pathogenen Enterococcus en Proteobacteria is ook in verband gebracht met verhoogde GVHD [6, 31]. De afgelopen decennia is er steeds meer aandacht besteed aan de correlatie tussen de darmmicrobiota en de behandeling van MSC’s bij ontstekingsziekten. Het is bewezen dat MSC’s de dysbiose van de darmmicrobiota bij reumatoïde artritis, sepsis en inflammatoire darmziekten verbeteren [32-34]. Om het mechanisme waarmee hAMSC's aGVHD verbeteren verder te onderzoeken, hebben we de impact van hAMSC's op de darmmicrobiota onderzocht. In de huidige studie vertoonde de toediening van hAMSC's een aanzienlijk effect op de diversiteit van de microbiële gemeenschappen vergeleken met geen transplantatie, wat aangeeft dat de overvloed aan darmmicrobiota zou kunnen worden veranderd na behandeling met hAMSC's. Er was echter geen significant verschil in de diversiteitsmetingen, mogelijk vanwege de kleine steekproefomvang van beide groepen of de onvoldoende behandelingscyclus van hAMSC's. De analyse met behulp van een vergelijkende heatmap op geslachtsniveaus gaf aan dat de toediening van hAMSC's de overvloed aan nuttige bacteriën, Odoribacter en Ruminococcus_1 in de darmflora verhoogde, die producenten van korte keten vetzuren (SCFA's) waren met ontstekingsremmende eigenschappen [35] , 36]. Om de onderliggende dominante bacteriën te identificeren die via hAMSCs-transplantatie worden gemedieerd, werd LEfSe-analyse tussen de twee groepen uitgevoerd. Vergeleken met de aGVHD-groep verhoogde de behandeling met hAMSCs aanzienlijk de overvloed aan enkele nuttige microben die verband houden met ontstekingsremmende effecten, zoals Lachnospiraceae, Roseburia, Ruminococcaceae, Ruminiclostridium, Oscillibacter, Clostridia, waarvan allemaal werd beschreven dat ze gunstig zijn voor de productie van SCFA's met de metabolieten van de darmmicrobiota. 37–42]. Daarom gaven onze waarnemingen aan dat na toediening van hAMSC de dysbiose van de darmmicrobiota was verbeterd, wat zich manifesteert door de verbeterde diversiteit en de toegenomen relatieve overvloed aan nuttige bacteriën.

Fig. 6 Veranderingen in de darmmicrobiota bij aGVHD-muizen. (A) vergelijking van -diversiteit. (B) vergelijking van -diversiteit. (C) Venn-diagram van OTU's. (D) Relatieve bacteriële overvloed op fylumniveau. (E) Heatmap van de overvloed aan soorten op geslachtsniveau. (F) Relatieve hoeveelheden Odoribacter op geslachtsniveau. (G) Relatieve hoeveelheden Ruminococcus_1 op geslachtsniveau. (H) Cladogram gebaseerd op LEfSe-analyse. (I) LDA-score berekend op basis van kenmerken die differentieel overvloedig voorkomen tussen aGVHD- en hAMSCs-groepen. (AI) n=3 muizen per groep. Waarden werden gepresenteerd als gemiddelde ± SD

aGVHD is een gecompliceerd ontstekingsproces dat wordt geïnitieerd door de vernietiging van de integriteit van de darmbarrière, gevolgd door de translocatie van de darmmicrobiota en hun componenten. De herkenning van met schade geassocieerde moleculaire patronen en pathogeen-geassocieerde moleculaire patronen door antigeenpresenterende cellen induceert een pro-inflammatoire respons, waaronder activering van T-cellen en cytokinestorm om de schade aan de darmbarrière te verergeren en de ontwikkeling van aGVHD te bevorderen [24, 43]. Aan de andere kant spelen de darmmicrobiota en van microbiota afgeleide metabolieten zoals SCFA’s een belangrijke rol bij het handhaven van de integriteit van de darmbarrière en de darmhomeostase, evenals bij het vormgeven van het slijmvliesimmuunsysteem en het balanceren van de verdediging van de gastheer met microbiële componenten en metabolieten [24, 44]. . Intercommunicatie tussen de gastheer- en darmmicrobiota ter hoogte van de darmbarrière reguleert de mucosale en systemische immuunresponsen en kan, in pathologische toestanden, resulteren in een GVHD [6, 45, 46]. Het suggereerde dat de darmmicrobiota nauw verwant is aan de expressie van tight-junction-eiwitten [47]. De huidige studie toonde aan dat de mRNA-expressie van TJ's ZO-1 en Occludin negatief correleerde met de relatieve overvloed aan schadelijke bacteriën, terwijl deze een positieve correlatie had met nuttige bacteriën, wat aangeeft dat de darmmicrobiota belangrijk was om de integriteit van de darmen te behouden. darmbarrière. Bovendien is de darmmicrobiota ook erg belangrijk bij het in stand houden van de darmimmuunbarrière [47]. We hebben waargenomen dat sommige nuttige bacteriën negatief gecorreleerd waren met het percentage CD3+CD4+T-cellen, maar positief gecorreleerd met het percentage Tregs. Hier onthulden we dat nuttige bacteriën, voornamelijk SCFA-producenten, negatief gecorreleerd waren met pro-inflammatoire cytokines, maar positief gecorreleerd met ontstekingsremmende cytokines, terwijl schadelijke bacteriën omgekeerd gecorreleerd zijn. Samenvattend suggereerde het significante verschil in darmmicrobiota tussen behandelingen een volledig beeld van de interacties tussen de darmmicrobiota en de darmbarrière, immuniteit. Er waren nog steeds verschillende beperkingen die het bespreken waard waren in onze experimenten. Ten eerste moet, hoewel onze studie de effecten van hAMSCs op de immuniteit, de darmbarrière en de darmmicrobiota bij aGVHD heeft onderzocht, het onderliggende mechanisme nog steeds worden geverifieerd in verder onderzoek. Ten tweede zijn uitputting van de darmmicrobiota en transplantatie van fecale microbiota nodig om de causale correlaties tussen de darmmicrobiota, de darmbarrière en de immuniteit aan te pakken. Ten derde is verder onderzoek naar de impact van hAMSC's op uit de microbiota afkomstige SCFA's en andere metabolieten gerechtvaardigd. Concluderend suggereerde ons onderzoek dat hAMSC's aGVHD verlichtten door de normalisatie van de darmmicrobiota te bevorderen en de interacties tussen de darmmicrobiota en de darmbarrière, immuniteit, te reguleren. Onze studie is de eerste die systematisch de effecten en onderliggende mechanismen definieert van hAMSC's die de darmmicrobiota en de darmimmuniteit bij aGVHD reguleren.

Fig. 7 Correlatieanalyse tussen darmmicrobiota en darmimmuniteit. De correlatieanalyse van Spearman werd uitgevoerd tussen de relatieve overvloed van 15 verschillende darmmicrobiota (op geslachtsniveau) en het mRNA-expressieniveau van TJ's, het percentage immuuncellen en de concentratie van cytokines in de darmen van de twee groepen. Spearman r-waarden variëren van -0.5 (blauw) tot 0.5 (rood)

Referenties

1. Schmid, C. (2021). Een stap dichter bij GVL zonder GVHD. Bloed, 137(19), 2565-2566. https://doi.org/10.1182/blood.2020010132

2. Chang, Y., Zhao, X., en Huang, X. (2018). Strategieën voor het versterken en behouden van anti-leukemie-effecten zonder de graft-versus-host-ziekte te verergeren. Frontiers in Immunology, 9, 3041. https://doi.org/10.3389/fmmu.2018.03041

3. Zhu, W., Winter, MG, Byndloss, MX, Spiga, L., Duerkop, BA, Hughes, ER, Büttner, L., de Lima Romão, E., Behrendt, CL, Lopez, CA, Sifuentes- Dominguez, L., Huf-Hardy, K., Wilson, RP, Gillis, CC, Tükel, Ç., Koh, AY, Burstein, E., Hooper, LV, Bäumler, AJ, & Winter, SE (2018). Nauwkeurig bewerken van de darmmicrobiota verbetert colitis. Natuur, 553(7687), 208–211. https://doi.org/10.1038/nature25172

4. Zhao, L., Zhang, F., Ding, X., Wu, G., Lam, YY, Wang, X., Fu, H., Xue, X., Lu, C., Ma, J. , Yu, L., Xu, C., Ren, Z., Xu, Y., Xu, S., Shen, H., Zhu, X., Shi, Y., Shen, Q., … Zhang, C (2018). Darmbacteriën die selectief worden bevorderd door voedingsvezels verlichten diabetes type 2. Wetenschap (New York, NY), 359 (6380), 1151–1156. https://doi.org/10.1126/science.aao5774

5. Shono, Y., & van den Brink, MRM (2018). Darmmicrobiota-beschadiging bij allogene hematopoietische stamceltransplantatie. Natuur beoordelingen. Kreeft, 18(5), 283–295. https://doi.org/10.1038/ nrc.2018.10

6. Stafas, A., Burgos da Silva, M., & van den Brink, MRM (2017). De darmmicrobiota bij allogene hematopoëtische celtransplantatie en graft-versus-host-ziekte. Bloed, 129(8), 927–933. https://doi.org/10.1182/blood-2016-09-691394

7. Wu, K., Yuan, Y., Yu, H., Dai, X., Wang, S., Sun, Z., Wang, F., Fei, H., Lin, Q., Jiang, H ., & Chen, T. (2020). De darmmicrobiële metaboliet trimethylamine N-oxide verergert GVHD door M1-macrofaagpolarisatie bij muizen te induceren. Bloed, 136(4), 501–515. https://doi.org/10.1182/blood.2019003990

8. Mathewson, ND, Jenq, R., Mathew, AV, Koenigsknecht, M., Hanash, A., Toubai, T., Oravecz-Wilson, K., Wu, S., Sun, Y., Rossi, C ., Fujiwara, H., Byun, J., Shono, Y., Lindemans, C., Calafore, M., Schmidt, TM, Honda, K., Young, VB, Pennathur, S., … Reddy, P. (2016). Van het darmmicrobioom afkomstige metabolieten moduleren schade aan darmepitheelcellen en verminderen graft-versus-host-ziekte. Natuurimmunologie, 17(5), 505–513. https://doi.org/10.1038/ni.3400

9. Dave, JR, Chandekar, SS, Behera, S., Desai, KU, Salve, PM, Sapkal, NB, Mhaske, ST, Dewle, AM, Pokare, PS, Page, M., Jog, A., Chivte , PA, Srivastava, RK, & Tomar, GB (2022). Menselijke gingivale mesenchymale stamcellen behouden hun groei- en immuunmodulerende kenmerken, ongeacht de leeftijd van de donor. Wetenschappelijke vooruitgang, 8(25), m6504. https://doi.org/10. 1126/sciadv.abm6504

10. Zhao, K., en Liu, Q. (2016). De klinische toepassing van mesenchymale stromacellen bij hematopoietische stamceltransplantatie. Journal of Hematology & Oncology, 9(1), 46. https://doi.org/ 10.1186/s13045-016-0276-z

11. Liu, Q., Huang, Q., Wu, H., Zuo, G., Gu, H., Deng, K., & Xin, H. (2021). Kenmerken en therapeutisch potentieel van menselijke amnion-afgeleide stamcellen. International Journal of Molecular Sciences, 22(2), 970. https://doi.org/10.3390/ijms22020970

12. Li, J., Zhou, Z., Wen, J., Jiang, F., en Xia, Y. (2020). Menselijke vruchtwater-mesenchymale stamcellen bevorderen endogene botregeneratie. Grenzen in de endocrinologie, 11, 543623. https://doi.org/10.3389/fendo.2020.543623

13. Díaz-Prado, S., Muiños-López, E., Hermida-Gómez, T., Cicione, C., Rendal-Vázquez, ME, Fuentes-Boquete, I., de Toro, FJ, Blanco, FJ ( 2011). Menselijk vruchtwatermembraan als alternatieve bron van stamcellen voor regeneratieve geneeskunde. Differentiatie; Onderzoek naar biologische diversiteit, 81(3), 162–171. https://doi.org/10.1016/j.dif.2011.01.005

14. Hong, J., Gao, Y., Song, J., Zhuo, W., Zon, H., & Ping, B. (2016). Vergelijking van biologische kenmerken en immunosuppressieve activiteit tussen menselijke vruchtwater-mesenchymale stamcellen en menselijke mesenchymale stamcellen uit beenmerg. Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi, 24(3), 858–864. https://doi.org/10.7534/j.issn.1009-2137.2016.03.041

15. Gao, Y., Li, W., Bu, X., Xu, Y., Cai, S., Zhong, J., Du, M., Zon, H., Huang, L., Hij, Y ., Hu, X., Liu, Q., Jin, H., Wang, Q., & Ping, B. (2021). Menselijke vruchtwater-mesenchymale stamcellen remmen aGVHD door de balans van Treg- en T-efectorcellen te reguleren. Journal of Inflammation Research, 14, 3985–3999. https://doi.org/10.2147/JIR.S323054

16. Cooke, KR, Kobzik, L., Martin, TR, Brewer, J., Delmonte, JJ, Crawford, JM, & Ferrara, JL (1996). Een experimenteel model van idiopathisch pneumoniesyndroom na beenmergtransplantatie: I. De rol van kleine H-antigenen en endotoxine. Bloed, 88(8), 3230–3239.

17. Yañez, R., Lamana, ML, García-Castro, J., Colmenero, I., Ramírez, M., & Bueren, JA (2006). Van vetweefsel afkomstige mesenchymale stamcellen hebben in vivo immunosuppressieve eigenschappen die toepasbaar zijn voor de bestrijding van graft-versus-host-ziekte. Stamcellen (Dayton, Ohio), 24(11), 2582-2591.

18 Hooper, LV, Littman, DR, & Macpherson, AJ (2012). Interacties tussen de microbiota en het immuunsysteem. Wetenschap (New York, NY), 336 (6086), 1268–1273. https://doi.org/10.1126/science.1223490

19. Kelly, K., & Rasko, JEJ (2021). Mesenchymale stromale cellen voor de behandeling van graft-versus-host-ziekte. Frontiers in Immunology, 12, 761616. https://doi.org/10.3389/fmmu.2021.761616

20. Macías-Sánchez, MDM, Morata-Tarifa, C., Cuende, N., Cardesa-Gil, A., Cuesta-Casas, M. Á., Pascual-Cascon, MJ, Pascual, A., Martín-Calvo , C., Jurado, M., Perez-Simón, JA, Espigado, I., Garzón López, S., Carmona Sánchez, G., Mata-Alcázar-Caballero, R., & Sánchez-Pernaute, R. (2022 ). Mesenchymale stromale cellen voor de behandeling van steroïde-resistente acute en chronische graft-versus-host-ziekte: een multicenter compassievolle gebruikservaring. Stamcellen translationele geneeskunde, 11(4), 343–355. https://doi.org/10.1093/stcltm/szac003

21. Tago, Y., Kobayashi, C., Ogura, M., Wada, J., Yamaguchi, S., Yamaguchi, T., Hayashi, M., Nakaishi, T., Kubo, H., & Ueda, Y. (2021). Menselijke amnion-afgeleide mesenchymale stamcellen verzwakken xenogene graft-versus-host-ziekte door activering en proliferatie van T-cellen te voorkomen. Wetenschappelijke rapporten, 11(1), 2406. https://doi. org/10.1038/s41598-021-81916-y

22. Yamahara, K., Harada, K., Ohshima, M., Ishikane, S., Ohnishi, S., Tsuda, H., Otani, K., Taguchi, A., Soma, T., Ogawa, H ., Katsuragi, S., Yoshimatsu, J., Harada-Shiba, M., Kangawa, K., en Ikeda, T. (2014). Vergelijking van angiogene, cytoprotectieve en immunosuppressieve eigenschappen van menselijke amnion- en chorion-afgeleide mesenchymale stamcellen. PLoS Eén, 9(2), e88319. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0088319

23. Yamahara, K., Hamada, A., Soma, T., Okamoto, R., Okada, M., Yoshihara, S., Yoshihara, K., Ikegame, K., Tamaki, H., Kaida, K ., Inoue, T., Ohsugi, Y., Nishikawa, H., Hayashi, H., Ito, YM, Iijima, H., Ohnishi, S., Hashimoto, D., Isoe, T., … Fujimori, Y (2019). Veiligheid en werkzaamheid van van amnion afkomstige mesenchymale stamcellen (AM01) bij patiënten met steroïde-refractaire acute graft-versus-host-ziekte na allogene hematopoietische stamceltransplantatie: een onderzoeksprotocol voor een fase I/II Japanse studie. BMJ Open, 9(7), e26403. https://doi.org/10.1136/bmjop nl-2018-026403

24. Lin, D., Hu, B., Li, P., Zhao, Y., Xu, Y., en Wu, D. (2021). Rollen van de darmmicrobiota en microbiële metabolieten bij acute GVHD. Experimentele Hematologie en Oncologie, 10(1), 49. https://doi.org/10.1186/s40164-021-00240-3

25. Ghimire, S., Weber, D., Mavin, E., Wang, XN, Dickinson, AM, & Holler, E. (2017). Pathofysiologie van GvHD en andere HSCT-gerelateerde ernstige complicaties. Grenzen in de immunologie, 8, 79. https://doi.org/10.3389/fmmu.2017.00079

26. Xu, J., Wang, X., Chen, J., Chen, S., Li, Z., Liu, H., Bai, Y., & Zhi, F. (2020). Van embryonale stamcellen afkomstige mesenchymale stamcellen bevorderen de integriteit en regeneratie van het colonepitheel door de circulerende IGF-1 bij colitismuizen te verhogen. Theranostics, 10(26), 12204–12222. https://doi.org/10.7150/thno.47683

27. Zhao, Y., Huang, J., Li, T., Zhang, S., Wen, C., en Wang, L. (2022). Berberine verbetert aGVHD door hermodellering van de darmmicrobiota, onderdrukking van TLR4-signalering en herstel van de darmbarrière voor NLRP3-inflammasoomremming. Journal of Cellular and Molecular Medicine, 26(4), 1060–1070. https://doi.org/10. 1111/jcmm.17158

28. Yuan, M., Lin, L., Cao, H., Zheng, W., Wu, L., Zuo, H., Tian, ​​X., en Song, H. (2022). De darmmicrobiota neemt deel aan het beschermende effect van HO-1/BMMSC's op levertransplantatie met steatotische levertransplantaten bij ratten. Frontiers in Microbiology, 13, 905567. https://doi.org/10.3389/fmicb.2022.905567

29. Taur, Y., Jenq, RR, Perales, M., Littmann, ER, Morjaria, S., Ling, L., Nee, D., Gobourne, A., Viale, A., Dahi, PB, Ponce , DM, Barker, JN, Giralt, S., van den Brink, M., & Pamer, EG (2014). De effecten van bacteriële diversiteit in het darmkanaal op de mortaliteit na allogene hematopoietische stamceltransplantatie. Bloed, 124(7), 1174–1182. https://doi.org/10.1182/ bloed-2014-02-554725

30. Jenq, RR, Taur, Y., Devlin, SM, Ponce, DM, Goldberg, JD, Ahr, KF, Littmann, ER, Ling, L., Gobourne, AC, Miller, LC, Docampo, MD, Peled, JU, Arpaia, N., Cross, JR, Peets, TK, Lumish, MA, Shono, Y., Dudakov, JA, Poeck, H., … van den Brink, MRM (2015). Intestinale Blautia wordt in verband gebracht met een verminderde sterfte door graft-versus-host-ziekte. Biologie van bloed- en beenmergtransplantatie: Journal of the American Society for Blood and Marrow Transplantation, 21 (8), 1373–1383. https://doi.org/10.1016/j.bbmt.2015.04.016

31. Le Bastard, Q., Chevallier, P., & Montassier, E. (2021). Darmmicrobioom bij allogene hematopoëtische stamceltransplantatie en specifieke veranderingen geassocieerd met acute graft vs host-ziekte. World Journal of Gastroenterology, 27(45), 7792–7800. https://doi.org/10.3748/wjg.v27.i45.7792

32. Li, X., Lu, C., Fan, D., Lu, X., Xia, Y., Zhao, H., Xu, H., Zhu, Y., Li, J., Liu, H ., & Xiao, C. (2020). Menselijke navelstreng-mesenchymale stamcellen vertonen therapeutisch potentieel bij reumatoïde artritis door de interacties tussen immuniteit en darmmicrobiota te reguleren via de Aryl-koolwaterstofreceptor. Grenzen in de cel- en ontwikkelingsbiologie, 8, 131. https://doi.org/10.3389/fcell.2020.00131

33. Zon, J., Ding, X., Liu, S., Duan, X., Liang, H., & Zon, T. (2020). Van vetweefsel afkomstige mesenchymale stamcellen verzwakken acute longbeschadiging en verbeteren de darmmicrobiota bij septische ratten. Stamcelonderzoek en -therapie, 11(1), 384. https://doi.org/10.1186/s13287-020-01902-5

34. Soontararak, S., Chow, L., Johnson, V., Coy, J., Tarwe, W., Regan, D., & Dow, S. (2018). Mesenchymale stamcellen (MSC) afgeleid van geïnduceerde pluripotente stamcellen (iPSC) gelijkwaardig aan uit vetweefsel afkomstige MSC bij het bevorderen van darmgenezing en normalisatie van het microbioom in het model van inflammatoire darmziekten bij muizen. Stamcellen translationele geneeskunde, 7(6), 456–467. https://doi.org/10.1002/sctm.17-0305

35. Li, J., Zou, C., en Liu, Y. (2022). Verbetering van door ovalbumine geïnduceerde voedselallergie bij muizen door gerichte rectale en colonafgifte van Cyanidine-3-O-Glucoside. Voedingsmiddelen (Bazel, Zwitserland), 11(11), 1542. https://doi.org/10.3390/foods11111542

36. Maruyama, S., Matsuoka, T., Hosomi, K., Park, J., Nishimura, M., Murakami, H., Konishi, K., Miyachi, M., Kawashima, H., Mizuguchi, K ., Kobayashi, T., Ooka, T., Yamagata, Z., & Kunisawa, J. (2022). Classificatie van het optreden van dyslipidemie op basis van darmbacteriën gerelateerd aan de inname van gerst. Frontiers in Nutrition, 9, 812469. https://doi.org/10.3389/fnut.2022.812469

37. Lee, SH, Park, H., Kang, CD, Choi, DH, Park, SC, Park, JM, Nam, S., Chae, GB, Lee, KY, Cho, H., & Lee, SJ ( 2022). Hoge dosis intramusculaire vitamine D3-suppletie heeft invloed op de darmmicrobiota van patiënten met een clostridioides diffile-infectie. Frontiers in Cellular and Infection Microbiology, 12, 904987. https://doi.org/10.3389/fcimb.2022.904987

38. Meyer, RK, Lane, AI, Weninger, SN, Martinez, TM, Kangath, A., Laubitz, D., & Duca, FA (2022). Oligofructose herstelt de postprandiale vetzuurniveaus met een korte keten tijdens vetrijke voeding. Obesitas (Silver Spring, Maryland), 30(7), 1442-1452. https://doi.org/10.1002/oby.23456

39. Sang, J, Zhuang, D, Zhang, T, Wu, Q, Yu, J, Zhang, Z (2022) Convergente en uiteenlopende leeftijdspatronen van de diversiteit van de darmmicrobiota bij mensen en niet-menselijke primaten. M-systemen: e151221. https://doi.org/10.1128/msystems.01512-21

40. Ge, X., He, X., Liu, J., Zeng, F., Chen, L., Xu, W., Shao, R., Huang, Y., Farag, MA, Capanoglu, E. , El-Seedi, HR, Zhao, C., en Liu, B. (2022). Verbetering van diabetes type 2 door de nieuwe 6, 8-guanidylluteoline-chinon-chroom-coördinatie via biochemische mechanismen en interactie met de darmmicrobiota. Journal of Advanced Research, S2090–1232(22), 121–129. https://doi.org/10.1016/j.jare.2022.06.003

41. Ding, Q., Cao, F., Lai, S., Zhuge, H., Chang, K., Valencak, TG, Liu, J., Li, S., & Ren, D. (2022). Lactobacillus plantarum ZY08 verlicht chronische door alcohol geïnduceerde leversteatose en leverbeschadiging bij muizen door het herstellen van de homeostase van de darmfora. Food Research International (Ottawa, Ont.), 157, 111259. https://doi.org/10. 1016/j.foodres.2022.111259

42. Rees, NP, Shaheen, W., Quince, C., Tselepis, C., Horniblow, RD, Sharma, N., Beggs, AD, Iqbal, TH, & Quraishi, MN (2022). Een systematische review van voorspellende biomarkers van donor en ontvanger voor de respons op fecale microbiota-transplantatie bij patiënten met colitis ulcerosa. EBioMedicine, 81, 104088. https://doi.org/10.1016/j.ebiom.2022.104088

43. Li, A., Abraham, C., Wang, Y., en Zhang, Y. (2020). Nieuwe inzichten in de basisbiologie van acute graft-versus-host-ziekte. Haematologica, 105(11), 2540–2549. https://doi.org/10.3324/haematol. 2019.240291 44. Kayama, H., Okumura, R., en Takeda, K. (2020). Interactie tussen de microbiota, epitheel en immuuncellen in de darm. Jaaroverzicht van immunologie, 38, 23–48. https://doi.org/ 10.1146/Annu rev-immunol-070119-115104

45. Schluter, J., Peled, JU, Taylor, BP, Markey, KA, Smith, M., Taur, Y., Niehus, R., Stafas, A., Dai, A., Fontana, E., Amoretti , LA, Wright, RJ, Morjaria, S., Fenelus, M., Pessin, MS, Chao, NJ, Lew, M., Bohannon, L., Bush, A., … Xavier, JB (2020). De darmmicrobiota wordt geassocieerd met de dynamiek van immuuncellen bij mensen. Natuur, 588(7837), 303–307. https://doi.org/10.1038/ s41586-020-2971-8

46. ​​Yang, J, Yang, H, Li, Y (2022) De drievoudige interacties tussen darmmicrobiota, mycobiota en gastheerimmuniteit. Kritische recensies in voedingswetenschappen en voeding: 1–21. https://doi.org/10.1080/10408 398.2022.2094888

47. An, J., Liu, Y., Wang, Y., Fan, R., Hu, X., Zhang, F., Yang, J., & Chen, J. (2022). De rol van de darmslijmvliesbarrière bij auto-immuunziekten: een potentieel doelwit. Frontiers in Immunology, 13, 871713. https://doi.org/10.3389/fmmu.2022.871713