Identificatie van waterstofperoxide-responsieve EST's die betrokken zijn bij de biosynthese van fenylethanoïde glycoside in cistanche salsa-celcultuur

Contactpersoon: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

J. CHEN et al

Abstract
Waterstofperoxide is een effectieve abiotische opwekker die de biosynthese van secundaire metabolieten in planten kan induceren. We laten zien dat in de celsuspensiecultuur van een zouttolerante medicinale plantCistanchesalsa, de productie van bioactieve componentenfenylethanoïdeglycosiden(PeG's) was verhoogd na H2O2-behandeling. Om genen te identificeren die verband houden met PeG's(fenylethanoïdeglycosiden)biosynthese beïnvloed door H2O2, hebben we een subtractieve hybridisatiebibliotheek voor onderdrukking van H2O2-responsieve genen geconstrueerd met behulp van eenCistanchesalsacellijn en identificeerde 105 tot expressie gebrachte sequentietags (EST's) en 85 genen. Functionele annotatie van de EST-bibliotheek en analyses van genontologie toonden genen die verband houden met verschillende stressreacties, biosynthese van secundaire metabolieten en transcriptionele regulatie. Onder hen hebben we twee genen geïdentificeerd die verband houden met de PeG's(fenylethanoïdeglycosiden)biosyntheseroute (4-coumaraat-co-enzym A-ligase en cinnamaat 4-hydroxylase), en twee WRKY-type transcriptiefactoren. De expressies van geselecteerde genen na de H2O2-behandeling werden geanalyseerd met RT-qPCR. Vroege verhoogde transcriptie van PeG(fenylethanoïdeglycosiden)biosyntheseroute-genen na de behandeling onthulden dat H2O2 PeGs . induceerde(fenylethanoïdeglycosiden)biosynthese via up-regulatie van de belangrijkste genen.
Aanvullende trefwoorden: cinnamaat-4-hydroxylase, 4-coumaraat-co-enzym A-ligase, onderdrukking van subtractieve hybridisatie.Cistanchesalsa. fenylethanoïdeglycosiden.

Invoering

Cistanchesalsais een meerjarige plantenparasiet op de wortel van Haloxylos ammodendrun en groeit in het woestijngebied van West-China. Eeuwenlang,Cistanchesoort is gebruikt als traditionele kruidengeneeskunde (Wang et al. 2012). Bioactieve componenten zijn:fenylethanoïdeglycosiden(PeG's) die een opmerkelijk effect hebben op de klaring van reactieve zuurstofsoorten (ROS), stralingsbescherming, immuniteitsverbetering en anti-veroudering (Nan et al. 2013). PeG's(fenylethanoïdeglycosiden)biosynthese inCistanchewordt geïnitieerd uit fenylalanine (Fig. 1 Suppl.) en gesynthetiseerd cafeïnezuur wordt verder geglycosyleerd om verschillende PeG's te vormen(fenylethanoïdeglycosiden)(Wang et al. 2012). Drie belangrijkste PeG's(fenylethanoïdeglycosiden), echinacoside, acteoside en 2'-acetylacteoside, worden beschouwd als de meest actieve componenten inCistanche(Kobayashi et al. 1984). Om hun inhoud inCistanchecelcultuur zijn verschillende elicitors getest, waaronder chitosan, putrescine, Ag plus en osmotische stress (Ouyang et al. 2005a, b, Cheng et al. 2005, 2006, Liu et al. 2007, Liu en Cheng 2008). Genen die betrokken zijn bij PeGs(fenylethanoïdeglycosiden)biosynthese inCistanche, voornamelijk genen voor het metabolisme van fenylalanine, zijn zelden geïdentificeerd. Alleen een gen dat codeert voor fenylalanine-ammonia-lyase (PAL) werd recentelijk geïdentificeerd in Cistanche deserticola (Hu et al. 2011). Andere genen die coderen voor bijvoorbeeld cinnamaat-4-hydroxylase (C4H), dat de omzetting van cinnamaat in cumaarzuur zou kunnen katalyseren, en 4-coumaraat-co-enzym A-ligase (4CL), een essentieel gen voor lignine en flavanoïden biosyntheses, zijn niet gevonden inCistanche.
We gebruikten de celcultuur vanCistanchesalsaom PeG's te bestuderen(fenylethanoïdeglycosiden)biosynthese en gerelateerde genenexpressie. We onderzochten ook het effect van een effectieve elicitor H2O2 op PeGs(fenylethanoïdeglycosiden)biosynthese. Bovendien, om vroege responsieve genen te vinden die betrokken zijn bij PeGs(fenylethanoïdeglycosiden)biosynthese hebben we suppressie subtractieve hybridisatie (SSH) uitgevoerd om een ​​cDNA-bibliotheek van H2O2-responsieve genen te construeren.

Fig. 1. Relatieve genexpressie bepaald met RT-qPCR na H2O2-behandeling. CsWRKY1 - WRKY transcriptiefactor (Contig07), CsC4H1 - cinnamaat 4-hydroxylase (Contig09), Cs4CL1 - 4-coumaraat: ligase (Contig03), CsHSP1 - heat shock-eiwit 70 kDa (Contig 01) en CsSOD1 - superoxide-dismutase (Contig16). Cellen werden gedurende 2 uur behandeld met 80 ug dm-3 H202 in een vloeibaar medium en expressies werden vergeleken met een controle die met water was behandeld. Middelen plus - SD van drie biologische herhalingen; * - P < 0,05,="" **="" -="" p=""><>

materialen en methodes

De cellijn CS2001 werd vastgesteld op basis van bloembladen vanCistanchesalsa(CA Mey.) Beck verzameld in de provincie Neimenggu en subcultured. De kweekmethode was vergelijkbaar met een eerder gepubliceerd protocol (Liu et al. 2007). Over het algemeen werd een vast medium van Murashige en Skoog (1962; MS) gebruikt voor subcultuur en een vloeibaar medium voor PeG's(fenylethanoïdeglycosiden)biosynthese (het was het gemodificeerde MS-medium aangevuld met 30 g dm-3 glucose en 2.0 mg dm-3 indol-3-azijnzuur). Voor H2O2-behandeling werd 5,0 ± 0,2 g cellen in een snelle groeiperiode, gewoonlijk 20 tot 30 d nadat ze in het vaste medium waren opgekweekt, geënt in een vloeibaar medium van 50 cm3 in een Erlenmeyer-kolf van 250 cm3 en gekweekt in het donker met of zonder verschillende H2O2-concentraties. De PeG's(fenylethanoïdeglycosiden)gehalte na 10 d inductie door H2O2 werd geanalyseerd volgens een eerder gepubliceerde methode (Liu et al. 2007) op basis van reverse-phase high-performance vloeistofchromatografie met methanolgradiëntelutie.

De cellen werden 2 uur na de H202-behandeling door filtreerpapier met behulp van een Büchner-trechter uit het medium verzameld en vervolgens in vloeibare stikstof ingevroren en tot poeder vermalen. Elke 2 g celpoeder werd gelyseerd met een mengsel van 1 cm3 2-mercaptoethanol, 1 cm3 200 g dm{{10}} sarcosyl, en 8 cm3 van een GTC-buffer (5 M guanidiniumisothiocyanaat, 62,5 mM Tris-HCl, pH 8,0, 6,25 mM EDTA, pH 8,0, 5 mM thioureum en 10 mM dithiothreïtol). De cellen werden vervolgens 15 minuten op ijs geïncubeerd, vervolgens werd 1/3 volume van 8,5 M CH3COOK, pH 6,0, toegevoegd en de cellen werden 15 minuten op ijs geïncubeerd en vervolgens 15 minuten bij 15 000 g gecentrifugeerd. . Het supernatant werd toegevoegd aan een gelijk volume isopropanol om totaal RNA te precipiteren. Het totale RNA werd verder gezuiverd door een RNeasy-minikit (Qiagen, Hilden, VS) volgens de instructies van de fabrikant. Messenger-RNA werd geïsoleerd uit totaal RNA met behulp van een Oligotex mRNA midi-kit (Qiagen).

fenylethanoïdeglycosideninCistancheSalsa

Een SSH-bibliotheek werd gegenereerd uit controle en 30 procent H2O2-opgewekte celmonsters 2 uur na de opwekking met behulp van een PCR-select cDNA-subtractiekit (Clontech, Mountain View, VS). Voor bibliotheekconstructie werden de producten afzonderlijk gezuiverd met behulp van een gelzuiveringskit (Qiagen) en gekloneerd in een pGEM-vector met behulp van een TA-kloneringskit (Tiangen, Beijing, China). Plasmiden van onafhankelijke klonen werden geïsoleerd en gesequenced met behulp van T7-primer. Alle tot expressie gebrachte sequentietag (EST) -sequenties uit de bibliotheek (met de vectorsequenties verwijderd) werden gebruikt voor contig-assemblage met CAP3 (//doua.prabi.fr/software/cap3). De EST's werden gegroepeerd in contigs en singletons; ze werden gebruikt voor het zoeken naar homologie met behulp van het BLASTx-programma van NCBI (//blast.ncbi.nlm.nih.gov). Sequenties werden vervolgens geannoteerd, geanalyseerd en geclassificeerd volgens genontologie (GO) -termen met behulp van Blast2GO (//www.blast2go.com).
Realtime kwantitatieve polymerasekettingreactie (RT-qPCR) werd uitgevoerd volgens Bustin et al. (2009). De cDNA-monsters werden gesynthetiseerd met behulp van een PrimeScript RT-reagenskit (Takara, Dalian, China) van 0, 5 ug totaal RNA. RT-qPCR werd uitgevoerd met behulp van SYBR Premix Ex Taq II en ROX plus kits (Takara) op een ABI 7300 real-time PCR-systeem (Applied Biosystems, Foster City, VS) met drie technische replica's. Primers zijn ontworpen met behulp van de online Primer3-software volgens de instructies van Takara; primers die in deze studie zijn gebruikt, worden vermeld in Tabel 1 Suppl. De genexpressies werden genormaliseerd naar 18S RNA, waarvan de expressie stabiel was in alle monsters.

De resultaten werden geanalyseerd met behulp van R-versie 3.1.1, de significantie van verschillen werd geverifieerd door de Student's t-test.

Resultaten

Waterstofperoxide-geïnduceerde de biosynthese van alle drie de belangrijkste PeG's(fenylethanoïdeglycosiden)inCistanchesalsasuspensiecellen (Tabel 1) maar zonder duidelijk effect op de celgroei (Fig. S2). Het gehalte aan echinacoside nam al toe na de 10 ug dm-3 H2O2-behandeling (P <0.05), een="" hogere="" toename="" werd="" geregistreerd="" na="" de="" 20="" ug="" ds.="" -3="" h2o2-behandeling="" (p="">< 0,01),="" en="" de="" hoogste="" toename="" was="" na="" de="" 40,="" 80="" en="" 160="" ug="" dm-3="" h2o2-behandelingen.="" vergelijkbare="" resultaten="" worden="" getoond="" voor="" acteoside,="" maar="" het="" gehalte="" bereikte="" een="" piek="" na="" de="" 80="" ug="" dm-3="" h2o2-behandeling.="" de="" biosynthese="" van="" 2'-acetylacteoside="" was="" minder="" gevoelig="" voor="" h2o2-behandeling;="" een="" significante="" toename="" van="" het="" gehalte="" (p="">< 0,05)="" was="" bij="" h2o2-concentraties="" van="" meer="" dan="" 40="" ug="" dm-3.="" na="" de="" 80="" ug="" dm-3="" h2o2-behandeling="" is="" de="" hoeveelheid="" van="" alle="" drie="" de="" belangrijkste="">(fenylethanoïdeglycosiden)significant toegenomen (P < 0.01)="" ten="" opzichte="" van="" de="" controle.="" daarom="" werd="" deze="" concentratie="" in="" verdere="" experimenten="">
Om een ​​bibliotheek te genereren die is verrijkt met vroege responsieve genen die worden opgereguleerd door H2O2, gebruikten we cDNA vanCistanchesalsasuspensiecellen behandeld met 80 ug dm-3 H2O2 gedurende 2 uur. Single-pass sequentiebepaling van 129 recombinante klonen in de SSH-bibliotheek leverde 105 schone EST's op na uitsluiting van vectorsequentie. Deze duidelijke EST's werden gebruikt voor assemblage door CAP3 en 18 contigs en 67 singletons werden gegenereerd (tabel 2). Zo werden in deze bibliotheek 85 genen geïsoleerd. De gemiddelde lengte van de schone 105 EST's was 527 bp, wat voldoende is voor een op sequentieovereenkomst gebaseerde functionele classificatie.

fenylethanoïdeglycosideninCistancheSalsa

Alle 85 genen die in de bibliotheek werden verkregen, werden teruggevonden door BLASTx tegen de GenBank niet-overtollige eiwitdatabase voor sequentieovereenkomst (E-waarde kleiner dan of gelijk aan 0.001). Eenentwintig genen vertoonden geen treffers in de database, ze kunnen specifiek zijn voor:Cistanchesalsa. De resultaten met BLASThits werden geïmporteerd in de Blast2GO-software voor verdere GO- en KEGG-pathway-verrijkingsanalyses. Van de 64 genen met BLAST-hits waren er 50 geannoteerd volgens de beschrijving van homologe genen van andere soorten. De geannoteerde genen werden genoemd volgens de beschrijving van BLAST-hits. De GO-analyse (Fig. 3 Suppl.) Laat zien dat van deze 50 genen 14 genen betrokken waren bij reacties op stimuli, en meer dan 30 genen gerelateerd aan metabolische processen (tabellen 1 en 2). Van deze genen werden zoals verwacht twee homologen van de PeG-biosyntheseroute geïsoleerd: 4-coumaraat-co-enzym A-ligase (genaamd Cs4CL1: Contig03) en cinnamaat 4-hydroxylase (genaamd CsC4H1: Contig14). Verder werd RT-qPCR uitgevoerd om geïnduceerde expressies van genen uit de bibliotheek na de H2O2-behandeling te bevestigen.

Om te bevestigen dat essentiële genen geïdentificeerd uit de SSH-bibliotheek reageerden op de H2O2-behandeling, de expressies van twee PeG's(fenylethanoïdeglycosiden)biosynthese-pathway-gerelateerde genen (Cs4CL1, CsC4H1), twee ROS-geïnduceerde genen (CsSOD1: Contig 16, CsHSP1: CISTH099) en één transcriptiefactor-achtig gen van de WRKY-familie (CsWRKY1: Contig 07) werden na de behandeling gemeten met RT-qPCR met H2O2 (afb. 1). CsC4H1-, Cs4CL1-, CsSOD1- en CsWRKY1-expressies werden respectievelijk meer dan 15-voudig, 3-voudig, 45-}voudig en 4-voudig opwaarts gereguleerd 2 uur na de H2O2 behandeling. De expressie van CsHSP1 was slechts 1,8 maal veranderd na de H2O2-behandeling.
Het tijdsverloop van de expressies van CsWRKY1, CsC4H1 en Cs4CL1 na de H2O2-behandeling werd verder geanalyseerd met RT-qPCR (Fig. 2). De expressies van CsC4H1 en Cs4CL1 waren sterk verhoogd (respectievelijk meer dan 80-voudig en 50-voudig) na de 16-h-behandeling en werden vervolgens na 32 uur neerwaarts gereguleerd. De expressie van CsWRKY1 werd na 4 uur meer dan 20--voudig omhoog gereguleerd en nam daarna af vanaf 8 uur daarna (figuur 2).

Fig. 2. De relatieve expressie van CsWRKY1 (A), CsC4H1 (B) en Cs4CL1 (C) op verschillende tijdstippen na behandeling met 80 ug dm-3 H2O2. De expressies werden genormaliseerd naar een controle; (behandeld met water). Middelen plus - SD van drie biologische herhalingen; * - P < 0.05,="" **="" -="" p=""><>

Discussie

Waterstofperoxide is een bekende plantenopwekker die verschillende effecten op planten laat zien. Net als ROS kan het het ROS-scavenging-systeem induceren dat bestaat uit superoxide-dismutase, catalase, peroxidasen, enz., En het dient als het stroomafwaartse signaal van zout, osmotisch en uitdroging

benadrukt (Wi et al. 2006, Kar 2011, Furlan et al. 2013, Sathiyaraj et al. 2014). Er werd gesuggereerd dat de vorming van H2O2 in planten gepaard gaat met geïnduceerde biosynthese van secundaire metabolieten in deCistanchesalsacel cultuur. Zoals verwacht laten onze resultaten zien dat PeGs(fenylethanoïdeglycosiden)biosynthese in deCistanche salsacelkweek werd geïnduceerd na de H202-behandeling (Tabel 1). De inhoud van drie belangrijkste PeG's(fenylethanoïdeglycosiden)nam toe na de H2O2-behandeling, wat wijst op de cruciale rol ervan in de biosynthese van PeG's. Genen verrijkt in de SSH-bibliotheek suggereerden verder het effect ervan op PeG's(fenylethanoïdeglycosiden)biosynthese inductie inCistanche salsa.

Veel bekende H2O2-responsieve genen, zoals ascorbaatperoxidase (CISTH069, Karyotou en Donaldson 2005), h-chinonoxidoreductase (CISTH125, Bello, et al. 2001), CsSOD1, CsHSP1 (Baruah et al. 2014), en ziekteresistentie-responsgenen (Contig10, Nanda, et al. 2010), werden verrijkt in de SSH-bibliotheek (Tabel 3, Tabel 2 Suppl.). Sommige van deze typische ROS-responsieve genen met een geïnduceerde expressie na de H202-behandeling werden verder bevestigd door RT-qPCR (Fig. 1 en 2), wat aangeeft dat hier een gekwalificeerde SSH-bibliotheek werd geconstrueerd. Twee genen voor de PeG-biosyntheseroute, CsC4H1 en Cs4CL1, werden ook in deze bibliotheek gevonden en deze twee genexpressies werden op een tijdsafhankelijke manier geïnduceerd door de H202-behandeling (Fig. 2). Het suggereert dat de H2O2-behandeling PeG's induceerde(fenylethanoïdeglycosiden)biosynthese op genetisch niveau via de regulatie van PAL-pathway-genen. PAL en andere downstream PeGs-biosynthesegenen (Wang et al. 2012) werden echter niet geïdentificeerd in de SSH-bibliotheek; het kan zijn dat de bibliotheek niet voldoende is gesequenced. Een relatie tussen door CsC4H1 en Cs4CL1 geïnduceerde expressies en een verhoogde PeGs-biosynthese na de H2O2-behandeling zou door verdere analyse moeten worden opgehelderd.

Naast de PAL-pathway-genen die werden geïnduceerd door de H2O2-behandeling, werden twee WRKY-familietranscriptiefactoren (CsWRKY1, CsWRKY2) gevonden in de SSH-bibliotheek (Tabel 3 en Tabel 2 Suppl.), en een door CsWRKY1 geïnduceerde expressie werd bevestigd door RT-qPCR . De expressie ervan reageerde eerder op de H202-behandeling dan de expressie van twee PAL-pathway-genen, Cs4CL1 en CsC4H1 (Fig. 2). Uit eerdere studies is co-expressie van sommige WRKY-transcriptiefactoren en PAL-pathway-genen waargenomen in rijst (Gupta et al. 2012). Bovendien wordt PAL-genexpressie opwaarts gereguleerd in een OsWRKY03-overexpressiemutant (Liu et al. 2005). De bovengenoemde twee transcriptiefactoren van de WRKY-familie kunnen ook betrokken zijn bij PeG's(fenylethanoïdeglycosiden)biosynthese inCistanchesalsa. Interessant is dat uitdrogingsgerelateerde EST's (CISTH067, CISTH064) werden gevonden in de SSH-bibliotheek, wat erop kan wijzen dat de H2O2-behandeling verband hield met expressie van genen die reageren op uitdroging inCistanchesalsazoals waargenomen in andere planten (Schmidt et al. 2013, Zhou et al. 2013). Eén gibberelline (GA)-signaleringsgerelateerd gen, gibberelline-receptor gid1b-achtig (CISTH092), werd geïdentificeerd in de SSH-bibliotheek, wat het verband impliceert tussen GA-signalering en H2O2-behandeling inCistanchesalsa, die ook werd gerapporteerd in gerst (Bahin et al. 2011). Er zijn echter meer studies nodig om te bevestigen of deze genen gerelateerd zijn aan PeG's(fenylethanoïdeglycosiden)biosynthese. Afgezien van de hierboven genoemde genen, presenteert de hier geconstrueerde SSH-bibliotheek ook genen met of zonder BLAST-hits. Het verbetert ons begrip van het H2O2-effect op C. salsa en levert ten eerste de informatie van zijn genen die betrokken zijn bij de biosynthese van PeG's.

Concluderend hebben we het effect van H2O2 op PeG's beoordeeld(fenylethanoïdeglycosiden)inductie in deCistanchesalsacel cultuur. De SSH-bibliotheek werd geconstrueerd na de H2O2-behandeling en de expressie van geselecteerde genen werd bevestigd door RT-qPCR. Er werden twee aan de PeG-biosyntheseroute gerelateerde genen en andere H2O2-responsieve genen geïdentificeerd. Deze bevindingen zullen ons begrip van H2O2-geïnduceerde PeG's vergroten(fenylethanoïdeglycosiden)biosynthese inCistanchesalsatot op moleculair niveau, wat de informatie levert voor genmanipulatie vanCistanchesalsacelculturen om PeG's te verbeteren(fenylethanoïdeglycosiden)productie.

Van: 'Identificatie van op waterstofperoxide reagerende EST's die betrokken zijn bij de biosynthese van fenylethanoïde glycoside in de cultuur van Cistanche salsa' doorJ.CHEN et al.

--- BIOLOGIA PLANTARUM 59 (4): 695-700, 2015 J. CHEN et al. DOI: 10.1007/s10535-015-0541-y

Referenties

Bahin, E., Bailly, C., Sotta, B., Kranner, I., Corbineau, F., Leymarie, J.: Overspraak tussen reactieve zuurstofsoorten en hormonale signaalroutes reguleert de kiemrust van granen in gerst. - Plantencelomgeving. 34: 980-993, 2011.
Baruah, K., Norouzitallab, P., Linayati, L., Sorgeloos, P., Bossie,r P.: Reactieve zuurstofspecies gegenereerd door een heat shock-eiwit (Hsp)-inducerend product draagt ​​bij aan Hsp70-productie en Hsp{{1} }gemedieerde beschermende immuniteit bij Artemia franciscana tegen pathogene vibrios. - Ontwikkelaar Samenstelling Immunol. 46: 470-479, 2014.
Bello, RI, Gomez-Diaz, C., Navarro, F., Alcain, FJ, Villalba, JM: Expressie van NAD (P) H: chinonoxidoreductase 1 in HeLa-cellen - rol van waterstofperoxide en groeifase. - J. biol. Chem. 276: 44379-44384, 2001.
Bustin, SA, Vandesompele, J., Pfaffl, MW: Standaardisatie van qPCR en RT-qPCR. - Genet. Ing. Biotechnologie. Nieuws 29: 40-43, 2009.
Cheng, XY, Wei, T., Guo, B., N, IW., Liu, CZ:Cistanchedeserticola celsuspensie culturen:fenylethanoïdeglycosidenbiosynthese en antioxiderende activiteit. - Proces Biochem. 40: 3119-3124, 2005.
Cheng, XY, Zhou, HY, Cui, X., Ni, W., Liu, CZ Verbetering vanfenylethanoïdeglycosidenbiosynthese inCistanchedeserticola celsuspensieculturen door chitosan elicitor. - J. Biotechnologie. 121: 253-260, 2006.
Furlan, A., Llanes, A., Luna, V., Castro, S.: Abscisinezuur medieert de productie van waterstofperoxide in pinda's veroorzaakt door waterstress. - Biol. Plant. 57: 555-558, 2013.
Gupta, SK, Ra,i AK, Kanwar, SS, Chand, D., Singh, NK, Sharma, TR: Het enkele functionele ontploffingsresistentiegen Pi54 activeert een complex afweermechanisme in rijst. - J. exp. Bot. 63: 757-772, 2012.
Hu, GS, Jia, JM, Hur, YJ, Chung, YS, Lee, JH, Yun, DJ, Chung, WS, Yi, GH, Kim, TH, Kim, DH: Moleculaire karakterisering van fenylalanine ammoniak-lyase-gen uitCistanchedeserticola. - Mol. Biol. Rep. 38: 3741-3750, 2011.
Kar, RK: reacties van planten op waterstress: rol van reactieve zuurstofsoorten. - Signaalgedrag van planten 6: 1741-1745, 2011.
Karyotou, K., Donaldson, RP: Ascorbaatperoxidase, een vanger van waterstofperoxide in glyoxysomale membranen. - Boog. Biochem. Biofysica. 434: 248-257, 2005.
Kobayashi, H., Karasawa, H., Miyase, T., Fukushima, S.: Studies over de bestanddelen vancistancheis herba. 4. Isolatie en structuren van 2 nieuwe fenylpropanoïde glycosiden, cistanoside-C en cistanoside-D. - Chem. apotheek Stier. 32: 3880-3885, 1984.

Liu, CZ, Cheng, XY: verbetering vanfenylethanoïdeglycosidenbiosynthese in celculturen vanCistanchedeserticola door osmotische stress. - Plant Cell Rep. 27: 357-362, 2008.
Liu, JY, Guo, ZG, Zeng, ZL: Verbeterde accumulatie vanfenylethanoïdeglycosidendoor voorlopervoeding aan suspensiecultuur vanCistanchesalsa. - Biochem. Ing. J. 33: 88-93, 2007.
Liu, XQ, Bai, XQ, Qian, Q., Wang, XJ, Chen, MS, Chu, CC: OsWRKY03, een rijsttranscriptieactivator die functioneert in de verdedigingssignaleringsroute stroomopwaarts van OsNPR1. - Cel res. 15: 593-603, 2005.
Murashige, T., Skoog, F.: Een herzien medium voor snelle groei en bioassays met tabaksweefselculturen. - Fysio. Plant. 15: 473-497, 1962.
Nan, ZD, Zeng, KW, Shi, SP, Zhao, MB, Jiang, Y., Tu, PF:Fenylethaanglycosidenmet ontstekingsremmende activiteiten uit de stengels vanCistanchedeserticola gekweekt in de Tarim-woestijn. - Fitoterapia 89: 167-174, 2013.
Nanda, AK, Andrio, E., Marino, D., Pauly, N., Dunand, C.: Reactieve zuurstofsoorten tijdens vroege interacties tussen planten en micro-organismen. - J. Integraal. Plant Biol. 52: 195-204, 2010.
Ouyang, J., Wang, XD, Zhao, B., Wang, YC: Verbeterde productie vanfenylethanoïde glycosidendoor precursorvoeding aan de celcultuur vanCistanchedeserticola. - Proces Biochem. 40: 3480-3484, 2005a.
Ouyang, J., Wang, XD, Zhao, B., Wang, YC: Verbeterde productie vanfenylethanoïdeglycosidendoorCistanchedeserticola-cellen gekweekt in een interne lus-airlift-bioreactor met zeefverhoger. - Enzym Microbiol. techniek. 36: 982-988, 2005b.
Salcedo-Morales, G., Jimenez-Aparicio, AR, Cruz-Sosa, F., Trejo-Tapia, G.: Anatomische en histochemische karakterisering van in vitro haustorium van wortels van Castilleja tenuiflora. - Biol. Plant. 58: 164-168, 2014.
Sathiyaraj, G., Srinivasan, S., Kim, YJ, Lee, OR, Parvin, S., Balusamy, SR, Khorolragchaa, A., Yang, DC: Acclimatisering van waterstofperoxide verbetert de zouttolerantie door verdedigingsgerelateerde eiwitten te activeren in Panax ginseng CA Meyer. - Mol. Biol. Nummer 41: 3761-3771, 2014.
Schmidt, R., Mieulet, D., Hubberten, HM, Obata, T., Hoefgen, R., Fernie, AR, Fisahn, J., Segundo, BS, Guiderdoni, E., Schippers, JHM, Mueller-Roeber, B.: SALTRESPONSIVE ERF1 reguleert reactieve zuurstofspeciesafhankelijke signalering tijdens de eerste reactie op zoutstress
bij rijst. - Plantcel 25: 2115-2131, 2013.
Wang, T., Zhang, XY, Xie, WY:Cistanchedeserticola YC Ma, "Desert Ginseng": een recensie. - Amer. J. kin. Med. 40: 1123-1141, 2012.
Wi, SG, Chung, BY, Kim, JH, Lee, KS, Kim, JS Afzettingspatroon van waterstofperoxide in de bladomhulsels van rijst onder zoutstress. - Biol. Plant. 50: 469-472, 2006.
Zhou, XF, Jin, YH, Yoo, CY, Lin, XL, Kim, WY, Yun, DJ, Bressan, RA, Hasegawa, PM, Jin, JB: CYCLIN H1 reguleert droogtestressreacties en door blauw licht geïnduceerde stomatale opening door remming van de accumulatie van reactieve zuurstofsoorten in Arabidopsis. - Plantenfysiol. 162: 1030-1041, 2013.