Remming van Crandell-Rees katachtige niercelproliferatie door röntgenstraling geïnduceerde senescentie
Mar 29, 2022
Contactpersoon: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com
Manabu KOIKE1,2)*, Yasutomo YUTOKU1)en Aki KOIKE1)
ABSTRACT.Radioresistentie en radiotoxiciteit zijn gemeld na kankerbehandelingen bij katten. Het optimaliseren van stralingsdoses om cytotoxische effecten te induceren voor alleen kankercellen en niet voor normale cellen is van cruciaal belang voor het bereiken van effectieve bestralingstherapie; de mechanismen van stralingsresistentie, radiotoxiciteit en DNA-schaderespons (DDR) in kattencellen zijn echter nog niet opgehelderd. Een dubbelstrengs DNA-breuk (DSB) is het meest giftige type vanDNAschade veroorzaakt door röntgenstralen en zware ionenstralen die worden gebruikt bij de behandeling van kankers. Crandell-Rees FelineNier(CRFK) cellen zijn een van de meest gebruikte kattencellen in biowetenschappelijk onderzoek. Hier melden we datDSB- getriggerde senescentie veroorzaakt door röntgenstralen is belangrijk bij het remmen van de proliferatie vanCRFKcellen. We hebben door middel van een celproliferatie-assay aangetoond dat röntgenstralen bij doses van 2 Gy en 10 Gy toxisch zijn voorCRFKcellen die CRFK-cellen bestralen, hun proliferatie remmen. In met röntgenstraling bestraalde CRFK-cellen werd een dosisafhankelijke toename van DSB-getriggerde senescentie gedetecteerd volgens morfologische veranderingen en met behulp van een senescentie-geassocieerde galactosidase-kleuringstest. Bovendien gaven onze gegevens aan dat inCRFKcellen, de belangrijkste DDR-route, die de fosforylering vanH2AXbij Ser139, werd normaal geactiveerd door ATM-kinasen. Onze bevindingen zijn nuttig bij het begrijpen van door röntgenstraling geïnduceerde cellulaire veroudering en bij het ophelderen van de biologische effecten van straling, bijvoorbeeld toxiciteit, in kattencellen. Bovendien suggereren onze bevindingen dat de CRFK-cellijn een uitstekende matrix is voor het ophelderen van radioresistentie en radiotoxiciteit in kattencellen.
SLEUTELWOORDEN:kat, gezelschapsdier, DNA dubbelstrengs breuk, straling, veroudering
Cistanche deserticola-extract: verbetering van het immuunsysteem
Gezelschapsdieren spelen een steeds belangrijkere rol in de menselijke samenleving. Door de verlenging van de levensduur van gezelschapsdieren neemt het aantal oudere honden en katten toe en wordt jaarlijks bij veel honden en katten de diagnose kanker gesteld [26, 27]. Bestralingstherapie, een van de drie belangrijkste behandelingen voor kanker, wordt steeds vaker gebruikt in veterinaire ziekenhuizen als alternatief voor de behandeling van kanker bij honden en katten [24, 26]. Om de meest effectieve bestralingstherapie te bereiken, is het belangrijk om de toxiciteit tussen normale en kankercellen in evenwicht te brengen. Ondertussen, hoewel radioresistentie wordt waargenomen bij katten en kattentumoren na kankerradiotherapie, is het mechanisme van dergelijke resistentie nog niet opgehelderd [24].
Er zijn talloze onderzoeken uitgevoerd naar de effecten van straling op cellen afkomstig van mensen en knaagdieren [6, 10, 23, 28]. Genomisch DNA is het belangrijkste biologische doelwit van therapieën die gebruik maken van straling zoals röntgenstralen en zware-ionenbundels. Dubbelstrengs breuk (DSB) is het meest kritieke type door straling geïnduceerde DNA-schade. Verschillende DNA-schaderespons (DDR)-routes, waaronder DNA-schadedetectie, DDR-signalering en DNA-reparatie, worden geactiveerd wanneer een DSB optreedt. Als gevolg hiervan herstellen de cellen van stralingsschade en wordt het aangetaste DNA nauwkeurig en efficiënt gerepareerd [8, 25]. In honden- en kattencellen kunnen DSB's voornamelijk worden gerepareerd door een niet-homoloog end-joining (NHEJ) reparatiemechanisme, dat de binding van DSB-uiteinden van het Ku-heterodimeer, bestaande uit Ku70 en Ku80 [14-17], induceert; er zijn echter verdere studies nodig om dit te verduidelijken. Bovendien worden in de vroege herstelfase kinasen, zoals DNA-PK- en ATM-kinasen, geactiveerd en deze fosforyleren Ser139 van de histon H2AX in de buurt van DSB-sites [5, 6]. Het is waarschijnlijk dat DSB's geprogrammeerde celdoodmechanismen activeren, waaronder apoptose en senescentie, wanneer de cellen niet kunnen worden gerepareerd [9, 32]. De moleculaire mechanismen van verschillende DDR's, zoals DNA-reparatie, in kattencellen, zijn slecht bestudeerd.
De vereeuwigde Crandell-Rees FelineNier(CRFK) cellijn is een van de meest gebruikte kattencellijnen. De CRFK-cellijn werd voor het eerst opgericht in 1964 uit deniercortex van een 12-week oud poesje [3]. Crandell et al. [3] beschreef dat de CRFK-cellijn nuttig is in onderzoek naar kattenvirussen en diagnostische geneeskunde en dat het van bijzonder belang is geworden in kankeronderzoek. Momenteel is de CRFK-cellijn onmisbaar in life science-onderzoek, waaronder kanker- en virusonderzoek. Het is dus belangrijk om de stralingsgevoeligheid van CRFK-cellen, waarvan de verschillende moleculaire routes zijn geanalyseerd, te begrijpen voor het verkrijgen van primaire onderzoeksinformatie om de moleculaire mechanismen van de biologische effecten van straling bij katten op te helderen. Er zijn momenteel echter geen rapporten over de effecten en mechanismen van straling op de proliferatie van CRFK-cellen.
In deze studie hebben we de biologische effecten van röntgenstralen op de proliferatie van CRFK-cellen onderzocht. Onze bevindingen geven aan dat röntgenstralen de proliferatie van CRFK-cellen duidelijk onderdrukten. Bovendien suggereerden onze resultaten dat de onderdrukking van proliferatie te wijten was aan verhoogde cellulaire senescentie veroorzaakt door de DSB's. Verder hebben we in CRFK-cellen bevestigd dat de belangrijkste DDR-route normaal wordt geactiveerd door ATM-kinasen.
cistanche tubolosa-extract: behandeling van nierziekte
MATERIALEN EN METHODES
Celculturen, chemicaliën en röntgenstralen
CRFK-cellen (HSRRB, Osaka, Japan) werden gekweekt in Dulbecco's gemodificeerde Eagle-medium aangevuld met 10 procent foetaal runderserum zoals eerder beschreven [17]. Aanhechtende cellen werden bestraald met röntgenstralen van 1, 2 of 10 Gy en met een dosistempo van 0.71-0.77 Gy/min (200 kV/20 mA met 0.5-mm Al en 0.5-mm Cu filters) met Pantak HF320S (Shimadzu, Kyoto, Japan) bij kamertemperatuur, zoals beschreven in eerdere studies [17]. KU-55933, een ATM-kinaseremmer, werd gekocht bij Wako Pure Chemical (Osaka, Japan). De KU -55933 werd onmiddellijk voor gebruik verdund in DMSO (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, VS) en verdund in een kweekmedium.
Bepaling van het aantal levensvatbare cellen
Trypan blauw uitsluitingstest werd gebruikt om het aantal levensvatbare cellen te bepalen. Cellen werden gezaaid met een dichtheid van 2,2 x 104 cellen per schaaltje in 60-mm schaaltjes. De volgende dag werden de cellen bestraald met röntgenstralen en 5 dagen na de bestraling geïncubeerd. Vervolgens werden de cellen gewassen met fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS), gesuspendeerd in Trypsine-EDTA-oplossing (T3924, Sigma-Aldrich), verzameld, gecentrifugeerd en gekleurd met 0.4 w/v procent Trypan Blue-oplossing ( Wako Pure Chemical) of 0,4 procent Trypan Blue (Bio-Rad, Hercules, CA, VS), en geteld met behulp van TC10™ Automated Cell Counter (Bio-Rad). Alle bestralingen werden in drievoud uitgevoerd.
Immunoblotting
Totale eiwitextractie en Western-blot-analyse werden uitgevoerd volgens onze eerder beschreven methoden [11, 17] met de volgende wijzigingen. De totale eiwitten werden geëlektroforeerd op Extra PAGE One Precast Gel 5-20 procent (Nacalai Tesque, Kyoto, Japan) of Super Sep ACE Gel 5-20 procent (Wako Pure Chemical). De gefractioneerde producten werden elektroforetisch overgebracht op Hybond-P-membranen (GE Healthcare Bio-Sciences Corp., Piscataway, NJ, VS). Vervolgens werden de membranen gedurende 60 minuten bij kamertemperatuur geblokkeerd in Blocking One (Nacalai Tesque) en geïncubeerd met muis-anti-H2AX monoklonaal antilichaam (JBW301) (Upstate Biotechnology Inc., Charlottesville, VA, VS) of muis-actine monoklonaal antilichaam ( Sigma-Aldrich). Na het wassen werden de membranen 60 minuten bij kamertemperatuur geïncubeerd met het anti-muis IgG HRP-Linked Whole Ab (van schapen) (NA931) (GE Healthcare Bio-Sciences Corp.). Immunoblotting werd uitgevoerd met behulp van Select Western Blotting Detection System (GE Healthcare Bio-Sciences Corp.). Eiwitbanden werden gevisualiseerd met behulp van het ChemiDoc XRS-systeem (Bio-Rad).
Immunocytochemie
Immunokleuring werd uitgevoerd zoals eerder beschreven [12, 17] met de volgende modificaties. In het kort, gekweekte cellen werden gedurende 30 minuten gefixeerd in 4 procent paraformaldehyde, gedurende 5 minuten gepermeabiliseerd met 0,5 procent Triton X-100 in PBS, geblokkeerd met een blokkerende oplossing en geïncubeerd met muis anti-H2AX monoklonaal antilichaam (JBW301) (Upstate Biotechnology Inc.) gedurende 60 minuten bij kamertemperatuur. Na het wassen van de cellen met PBS, werd de detectie uitgevoerd met behulp van een Alexa Fluor 568--geconjugeerd secundair antilichaam (Molecular Probes, Eugene, OR, VS) of een fluoresceïne-isothiocyanaat-geconjugeerd secundair antilichaam (Cappel Laboratories, Durham, NC, VS). ). Vervolgens werden kernen gekleurd met 0,025 µg/ml 4,6-diamino-2-fenylindol (DAPI) fluorescerende kleurstof (Boehringer Mannheim, Mannheim, Duitsland). Afbeeldingen van cellen werden verkregen met behulp van Olympus Fluorescentiemicroscoop BX51 (Olympus, Tokyo, Japan) uitgerust met een digitale camera (Olympus DP50, Olympus).
Senescentie-geassocieerde galactosidase (SA- -gal) kleuringstest
Voor deze test werden cellen (5 x 103) uitgeplaat in 35- mm platen en gekleurd met Senescence -Galactosidase Staining Kit (Cell Signaling Technology Inc., Danvers, MA, VS) 5 dagen na bestraling volgens de instructies van de fabrikant met de volgende wijzigingen. Kernen werden gekleurd met 0,025 µg/ml DAPI-fluorescerende kleurstof. Beelden van de gekleurde cellen na 18 uur werden verkregen met behulp van Olympus CKX41-microscoop uitgerust met een digitale camera (Olympus DP12, Olympus) of met behulp van Olympus fluorescentiemicroscoop BX51 uitgerust met een digitale camera (Olympus DP50). Het percentage positief gekleurde cellen werd bepaald door drie willekeurige velden van elk ten minste 100 cellen te analyseren met behulp van de Image J-software. De grootte van de celkern werd bepaald door drie willekeurige velden van elk 10 cellen te analyseren met behulp van de Image J-software. Alle bestralingen werden in drievoud uitgevoerd.
Annexine V/propidiumjodide (PI) apoptose-assay
Cellen (2,2 x 104) werden uitgeplaat in 60- mm platen en de volgende dag bestraald met röntgenstralen. Vijf dagen na de bestraling werden de cellen geoogst en gekleurd met Annexin V Alexa Fluor 488-PI-oplossing (Tali™ Apoptosis Kit, Invitrogen, Carlsbad, CA, VS) in overeenstemming met de instructies van de fabrikant. Voor de kleuring werd een 200-voudige verdunning van de PI-kleuroplossing gebruikt. Bovendien werden met annexine V gelabelde apoptotische cellen gedetecteerd met behulp van de Tali Image-based Cytometer (Invitrogen). Alle bestralingen werden in drievoud uitgevoerd.
statistische analyse
Statistische resultaten worden weergegeven als gemiddelden ± standaarddeviaties (n{{0}}). Statistische analyse exclusief nucleaire grootte werd uitgevoerd met behulp van ANOVA en Ryan's meervoudige vergelijkingstests (ANOVA4 op het WEB, https://www.hju.ac.jp/~kiriki/anova4/). De nucleaire grootte werd geëvalueerd door Student's t-test. Een P-waarde van minder dan 0,05 werd als statistisch significant beschouwd.
woestijnlevende cistanche
RESULTATEN
Remming van CRFK-celproliferatie door röntgenstralen
Om het effect van röntgenstralen op de proliferatie van CRFK-cellen te onderzoeken, werd bestraling uitgevoerd bij 2 en 10 Gy. Zoals getoond in Fig. 1 werd celproliferatie significant geremd op een dosisafhankelijke manier (P<0.05). these="" findings="" indicate="" that="" the="" proliferation="" was="" inhibited="" by="" x-rays="" at="" both="">
Inductie van DSB's in CRFK-cellen door röntgenstralen
De fosforylering van H2AX op Ser139 is een van de belangrijkste en vroege cellulaire DDR's voor DSB's [8, 20, 28]. H2AX is een gouden standaard biomarker voor DSB's [8, 20, 28]. Eerder bepaalden we met behulp van western blotting de verandering in H2AX-expressie in CRFK-cellen tussen 1 uur tot 24 uur na bestraling met röntgenstralen bij een enkele dosis van 10 Gy [17]. Als gevolg hiervan was het expressieniveau van H2AX het hoogste na 1 uur [17]. Om te onderzoeken of H2AX-fosforylering dosisafhankelijk werd geïnduceerd in de totale extracten van CRFK-cellen 1 uur na bestraling, werd Western-blot-analyse uitgevoerd met het anti-H2AX-antilichaam. Zoals getoond in Fig. 2A, gaf western-blot-analyse aan dat de expressie van H2AX toenam afhankelijk van de dosis röntgenstralen. Vervolgens onderzochten we of de H2AX-focus werd gedetecteerd in bestraalde cellen door middel van een immunokleuringstest met behulp van het anti-H2AX-antilichaam. Onze resultaten gaven aan dat H2AX-foci werden gevormd in de kernen van CRFK-cellen op 1 uur na bestraling (figuur 2B).
ATMkinase-afhankelijke fosforylering van H2AXat Ser139 in CRFK-cellen door stralen
Een van de belangrijke rollen van ATGM-kinase of DNA-PK in DDR veroorzaakt door röntgenstralen is het fosforyleren van H2AX rond de DSB-plaatsen in verschillende menselijke en knaagdiercellen [18, 29]; een dergelijke rol is echter nog niet onderzocht in kattencellen, waaronder CRFK-cellen. Om te bevestigen of ATM-kinase verantwoordelijk is voor door röntgenstraling geïnduceerde H2AX-fosforylering bij Ser139 in CRFK-cellen, werden de cellen geïncubeerd in een medium met de ATM-kinaseremmer KU-55933 (10 µM) of oplosmiddel (DMSO) gedurende 1 uur voor de bestraling (10 Gy). Zoals getoond in Fig. 3, werd de vorming van H2AX-foci geremd in cellen die bestraald waren in aanwezigheid van KU- 55933. Deze resultaten suggereren dat ATM het belangrijkste kinase is voor de fosforylering van H2AX op Ser139, geïnduceerd door bestraling in CRFK-cellen.
Inductie van veroudering in CRFK-cellen door röntgenstralen
Om te onderzoeken of de remming van CRFK-celproliferatie als reactie op bestraling gerelateerd is aan veroudering en apoptose, werden de cellen bestraald met röntgenstralen van 2 en 10 Gy. Eerst werden 5 dagen na de bestraling cellen geanalyseerd met SA- -gal-kleuring, een gouden standaardtest voor veroudering. We observeerden senescentie-specifieke morfologieën zoals een grote en platte cellulaire vorm (Fig. 4A) en abnormale kernen, waaronder vergrote of meerkernige kernen (Fig. 4B), in bestraalde cellen. Bovendien namen SA - -gal-positieve cellen in bestraalde CRFK-cellen aanzienlijk toe op een dosisafhankelijke manier (Fig. 4A-C). We hebben ook kwantitatief de vergroting van de celkern geanalyseerd, wat een andere marker is voor senescente cellen. Zoals getoond in Fig. 4D, was de grootte van de celkern significant groter in bestraalde CRFK-cellen (P<0.05). altogether,="" these="" findings="" indicate="" that="" x-rays="" highly="" induce="" senescence="" in="" crfk="" cells.="" next,="" to="" examine="" whether="" x-rays="" induced="" apoptosis="" in="" the="" irradiated="" crfk="" cells,="" apoptosis="" was="" quantified="" using="" tali™="" image-based="" cytometer.="" dual="" staining="" with="" fluorescent="" annexin="" v="" and="" pi="" was="" performed="" to="" detect="" apoptotic="" cells.="" cells="" stained="" positive="" for="" annexin="" v="" are="" considered="" apoptotic="" cells.="" as="" shown="" in="" fig.="" 5,="" the="" proportion="" of="" apoptotic="" cells="" was="" significantly="" higher="" in="" the="" 10-gy="" group="" than="" in="" the="" non-irradiated="" group="" and="" the="" 2-gy="" group="" but="" was="" lower="" (approximately="" 6%)="" in="" the="" 10-gy="" group.="" in="" addition,="" no="" significant="" increase="" in="" apoptosis="" was="" observed="" in="" the="" 2-gy="" group="" compared="" with="" the="" non-irradiated="">
cistanche gezondheidsvoordelen: anti-kanker
DISCUSSIE
Het begrijpen van het biologische effect van straling op kattencellen is belangrijk bij het ophelderen van radiotoxiciteit en het ontwikkelen van nieuwe therapeutische protocollen voor de behandeling van kanker. In de huidige studie vonden we dat de proliferatie van de katniercellijn CRFK werd significant onderdrukt door röntgenstralen bij doses van 2 en 10 Gy. Deze bevindingen onthullen dat röntgenstralen giftig zijn voor de groei van CRFK-cellen onder de omstandigheden die in dit onderzoek worden gebruikt. Bovendien namen senescente cellen aanzienlijk toe in bestraalde CRFK-cellen. Ondertussen onthulden onze bevindingen in CRFK-cellen dat ATM-kinase de fosforylering van H2AX op Ser139 induceert, wat een van de belangrijkste DDR's voor DSB's is die door röntgenstralen worden geproduceerd. Door straling geïnduceerde DSB's kunnen naar verluidt senescentie en apoptose induceren in menselijke en knaagdiercellen [4, 22]. Onze bevindingen suggereren dat het door DSB's geactiveerde verouderingsmechanisme heeft bijgedragen aan het onderdrukken van de proliferatie van CRFK-cellen door röntgenstralen.
Het mechanisme dat ten grondslag ligt aan het verschil in stralingsgevoeligheid bij mensen, honden en katten en het herstelmechanisme van kattencellen is nog niet opgehelderd. Zoals hierboven vermeld, gaven onze gegevens aan dat de ATM-kinase-afhankelijke DDR wordt geactiveerd door röntgenstralen in CRFK-cellen. Bovendien tonen deze studie en eerdere studies aan dat door röntgenstraling geïnduceerde DSB's in CRFK-cellen kunnen worden gedetecteerd door Western-blot-analyse en immunocytochemie met behulp van het in de handel verkrijgbare anti-H2AX-antilichaam [17]. Deze bevindingen suggereren dat CRFK-cellen nuttig zijn bij het ophelderen van de moleculaire mechanismen van DDR in kattencellen. Moor [24] beschreef dat bestralingstherapie voor katten verschilt van die voor honden in termen van tumorreacties en normale weefseltoxiciteit. Fuji et al. [7] toonde aan dat de fibroblasten bij katten radioresistenter zijn dan die bij mensen in een kolonievormende analyse en dat stralingsgeïnduceerde H2AX-foci sneller en effectiever kunnen worden gerepareerd in feliene fibroblasten. Bovendien suggereerden ze de mogelijkheid dat DNA- en chromosoombeschadiging veroorzaakt door röntgenstralen effectiever wordt gerepareerd in lymfocyten van katten dan in lymfocyten van mensen of honden. Deze bevindingen suggereren dat de verschillen in radioresistentie tussen mensen, honden en katten mogelijk verband houden met het verschil in DNA-herstelbaarheid. Onlangs hebben we met behulp van CRFK-cellen aangetoond dat de kern-NHEJ-reparatie-eiwitten, dwz cat Ku70, Ku80 en XLF, zich ophopen op DSB-plaatsen die worden geïnduceerd door de 405-nm-microlaser [17]. We hebben ook onthuld dat de rekrutering van XLF voor katten, XLF voor mensen of XLF voor honden afhankelijk is van de aanwezigheid van Ku [13, 14, 17]; deze bevindingen ondersteunen sterk dat de spatiotemporele regulatie van kern NHEJ-factoren, waaronder Ku70, Ku80 en XLF, belangrijk is bij de regulatie van NHE-reparatie [10, 19]. Gezamenlijk kunnen CRFK-cellen nuttig zijn bij het blootleggen van de moleculaire mechanismen die niet alleen ten grondslag liggen aan de verschillen in radioresistentie tussen katten-, honden- en menselijke cellen, maar ook aan DDR's, waaronder Ku-afhankelijke NHEJ-reparatie die daarin is geconserveerd.
De epitheliale-mesenchymale overgang (EMT) is een belangrijk mechanisme voor kwaadaardige transformatie, bijvoorbeeld het veranderen van de weerstand van kankercellen tegen bestraling en geneesmiddelen tegen kanker. Onlangs is gemeld dat CRFK-cellen de kenmerken van fibroblast hebben, met name met betrekking tot morfologie, biochemie en moleculaire biologie, hoewel CRFK-cellen zijn vastgesteld als een epitheelcellijn [21]. Bovendien, van Beusekom et al. [31] rapporteerde dat TGF- 1 de morfologie van CRFK-cellen veranderde van een epitheliaal fenotype in een fibroblastisch fenotype en dat het de expressie van sommige EMT-markergenen in CRFK-cellen significant induceerde, wat suggereert dat CRFK-cellen EMT kunnen ondergaan. In de huidige studie leek senescentie belangrijker dan apoptose voor groeionderdrukking in bestraalde CRFK-cellen. Al met al kan de CRFK-cellijn een uitstekende modaliteit zijn om niet alleen de onderlinge relatie tussen of tussen door röntgenstraling geïnduceerde senescentie, radioresistentie en/of radiotoxiciteit bij katten op te helderen.nierepitheelcellen, maar ook voor het ophelderen van de effecten van EMT tegen bestraling en chemotherapeutica.
Pro-senescentietherapie is een nieuwe antikankerstrategie op basis van het induceren van veroudering van kankercellen. Om deze strategie toe te passen op de behandeling van katten, is het noodzakelijk om het moleculaire mechanisme van senescentie-inductie in kattencellen op te helderen. Aan de andere kant, Li et al. [22] hebben beschreven dat senolytische middelen, een klasse van kleine moleculen die selectief verouderde cellen kunnen doden, een groot potentieel hebben om de bijwerkingen veroorzaakt door radiotherapie aanzienlijk te verminderen, terwijl ze redelijk uit de buurt blijven van carcinogenese. Onlangs is aangetoond dat een senolytisch middel ABT-737 door ioniserende straling geïnduceerde verouderingscellen uit de longen van bestraalde muizen elimineert [35]. Zoals hierboven vermeld, toonden onze gegevens aan dat senescente cellen aanzienlijk toenamen in bestraalde CRFK-cellen. Onze bevindingen en verdere studies met CRFK-cellen kunnen beschikbaar zijn voor fundamenteel onderzoek voor de ontwikkeling van niet alleen kattenprosenescentietherapie, maar ook van senolytische middelen om de bijwerkingen veroorzaakt door radiotherapie te verminderen.
CRFKis een van de belangrijkste zoogdiercellijnen en wordt veel gebruikt in experimenten, waaronder die met virussen, zoals het ernstige acute respiratoire syndroom coronavirus (SARS-CoV) of SARS-CoV-2; DNA-reparatie en kankeronderzoek bij katten;chronischnier ziekte; en de productie van vaccins [1, 2, 17, 30, 33, 34]. CRFK-cellen kunnen worden geïnfecteerd met verschillende virussen, waaronder oncovirussen [1-3, 34]. Op basis hiervan speculeren we dat de CRFK-cellijn geschikt kan zijn voor fundamenteel onderzoek naar veranderingen in radiogevoeligheid veroorzaakt door een virale infectie en naar het effect van radiotherapie op tumoren veroorzaakt door virale infectie.CRFKcellen kunnen worden gebruikt om de onderliggende mechanismen van radioresistentie en radiotoxiciteit in epitheelcellen van kattennieren en het effect van virale infectie op stralingsgevoeligheid op te helderen. Concluderend kunnen CRFK-cellen uitstekende cellijnen zijn voor onderzoek naar radiotoxiciteit bij katten en fundamenteel onderzoek voor het ontwikkelen van nieuwe kankerbehandelingsmethoden.
cistanche tubolosa gezondheidsvoordelen
BELANGENVERSTRENGELING.De auteurs verklaren geen belangenverstrengeling.
DANKBETUIGINGEN.Dit werk werd uitgevoerd met de steun van de National Institutes for Quantum and Radiological Science and Technology, en het Department of Regulatory Biology, Faculty of Science, Saitama University.
REFERENTIES
1. Altamura, G., Power, K., Martano, M., Degli Uberti, B., Galiero, G., De Luca, G., Maiolino, P. en Borzacchiello, G. 2018. Felis catus
papillomavirus type-2 E6 bindt aan E6AP, bevordert E6AP/p53-binding en versterkt p53 proteasomale afbraak. Wetenschap. Rep. 8: 17529.
2. Chu, H., Chan, JF, Yuen, TT, Shuai, H., Yuan, S., Wang, Y., Hu, B., Yip, CC, Tsang, JO, Huang, X., Chai, Y., Yang, D., Hou, Y., Chik, KK,
Zhang, X., Fung, AY, Tsoi, HW, Cai, JP, Chan, WM, Ip, JD, Chu, AW, Zhou, J., Lung, DC, Kok, KH, To, KK, Tsang, OT, Chan, KH en Yuen, KY 2020. Vergelijkend tropisme, replicatiekinetiek en celbeschadigingprofilering van SARS-CoV-2 en SARS-CoV met implicaties voor klinische manifestaties, overdraagbaarheid en laboratoriumonderzoeken van COVID-19 : een observatiestudie. Lancet Microbe 1: e14-e23.
3. Crandell, RA, Fabricant, CG en Nelson-Rees, WA 1973. Ontwikkeling, karakterisering en virale gevoeligheid van een katachtige (Felis catus) niercellijn (CRFK). In vitro 9: 176-185.
4. d'Adda di Fagagna, F. 2008. Leven op een pauze: cellulaire veroudering als een reactie op DNA-schade. nat. Rev. Kreeft 8: 512-522.
5. Durocher, D. en Jackson, SP 2001. DNA-PK, ATM en ATR als sensoren van DNA-schade: variaties op een thema? Curr. Opin. Cel Biol. 13: 225-231.
6. Firsanov, DV, Solovjeva, LV en Svetlova, MP 2011. H2AX-fosforylering op de plaatsen van dubbelstrengs DNA-breuken in gekweekte zoogdiercellen en weefsels. clin. Epigenetica 2: 283-297.
7. Fujii, Y., Yurkon, CR, Maeda, J., Genet, SC, Kubota, N., Fujimori, A., Mori, T., Maruo, K. en Kato, TA 2013. Vergelijkende studie van radioresistentie tussen kattencellen en menselijke cellen. Straal. Onderzoek 180: 70-77.
8. Huang, RX en Zhou, PK 2020. Signaalroutes voor DNA-schaderespons en doelen voor sensibilisatie voor radiotherapie bij kanker. Signaal Transduct. Doelwit. daar. 5: 60.
9. Jackson, SP 2002. Detectie en reparatie van dubbelstrengige DNA-breuken. Carcinogenese 23: 687-696.
10. Koike, M. 2002. Dimerisatie, translocatie en lokalisatie van Ku70- en Ku80-eiwitten. J. Stralen. Onderzoek (Tokio) 43: 223-236.
11. Koike, M. en Koike, A. 2008. Accumulatie van Ku80-eiwitten bij dubbelstrengs DNA-breuken in levende cellen. Exp. Cel res. 314: 1061-1070.
12. Koike, M., Shiomi, T. en Koike, A. 2001. Dimerisatie en nucleaire lokalisatie van Ku-eiwitten. J. Biol. Chem. 276: 11167-11173.
13. Koike, M., Yutoku, Y. en Koike, A. 2011. Accumulatie van Ku70 bij dubbelstrengige DNA-breuken in levende epitheelcellen. Exp. Cel res. 317: 2429-2437.
14. Koike, M., Yutoku, Y. en Koike, A. 2017. Klonen, lokalisatie en focusvorming op DNA-beschadigingsplaatsen van honden XLF. J. Vet. Med. Wetenschap. 79: 22-28.
15. Koike, M., Yutoku, Y. en Koike, A. 2017. Klonen, lokalisatie en focusvorming op DNA-beschadigingsplaatsen van honden Ku70. J. Vet. Med. Wetenschap. 79: 554-561.
16. Koike, M., Yutoku, Y. en Koike, A. 2017. Klonen van honden Ku80 en zijn lokalisatie en accumulatie op DNA-schadeplaatsen. FEBS Open Bio 7: 1854-1863.
17. Koike, M., Yutoku, Y. en Koike, A. 2019. Feline XLF hoopt zich op een Ku-afhankelijke manier op op DNA-schadeplaatsen. FEBS Open Bio 9: 1052-1062.
18. Koike, M., Sugasawa, J., Yasuda, M. en Koike, A. 2008. Weefselspecifieke DNA-PK-afhankelijke H2AX-fosforylering en gamma-H2AX-eliminatie na röntgenbestraling in vivo. Biochem. Biofysica. Onderzoek gemeenschappelijk 376: 52-55. [Medline] [CrossRef]
19. Koike, M., Awaji, T., Kataoka, M., Tsujimoto, G., Kartasova, T., Koike, A. en Shiomi, T. 1999. Differentiële subcellulaire lokalisatie van DNA-afhankelijke eiwitkinasecomponenten Ku en DNA-PKcs tijdens mitose. J. Cel Wetenschap. 112: 4031-4039. [Medlijn]
20. Kopp, B., Khoury, L. en Audebert, M. 2019. Validatie van de H2AX-biomarker voor genotoxiciteitsbeoordeling: een overzicht. Boog. Toxicol. 93: 2103–2114. [Medline] [CrossRef]
