Uitputting van macrofagen vermindert ziektepathologie bij factor H-afhankelijke immuuncomplex-gemedieerde glomerulonefritis Ⅱ

3. Resultaten

We induceerden CSS bij muizen door herhaalde immunisatie met apoferritine uit de paardenmilt. Dieren genereren een actief antiapoferritine IgG humoraal immuunsysteemreactie en deponeert IgG in glomeruli. Uit onze eerdere onderzoeken is gebleken dat er sprake is van een verhoogde Mϕinfiltratie in de nierenin deze instelling.

3.1. De genexpressie van macrofagen is verhoogd in FH-afhankelijke ICGN-nieren. Om de aanwezigheid van Mϕs in FH-afhankelijke ICGN-nieren te evalueren, werd qRT-PCR uitgevoerd met M2-macrofaagmarkers, CD204 (Mϕ-scavenger-receptor 1) en CD206 (Mϕ-mannose-receptor 1) [21-24]. De expressie van beide genen in de nier werd significant opgereguleerd na behandeling met apoferritine bij FHKO-muizen (Figuur 1), wat wijst op eenverhoogde aanwezigheid van macrofagen in de nier.

KLIK HIER VOOR NATUURLIJK BIOLOGISCH CISTANCHE-EXTRACT MET 25% ECHINACOSIDE EN 9% ACTEOSIDE VOOR DE NIERFUNCTIE

Ondersteunende service van Wecistanche, de grootste cistanche-exporteur in China:

E-mail:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/tel:+86 15292862950

Winkel voor meer specificaties:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

3.2. Veranderingen in de tijd door behandeling met chloordronaat bij infiltratie van niermacrofagen bij met Apoferritine behandelde FHKO-muizen. Om de effectieve methode te bepalen voor het verminderen van Mϕs in FH-afhankelijke ICGN, hebben we Mϕs in fh-/- muizen uitgeput

Figuur 3: Aanvullende gegevens. Gegeven zijn de flowcytometrieprofielen van F4/80+ monocyten van de controlemuizen en de met clodronaat behandelde muizen. F4/80+-cellen worden aanzienlijk verminderd, tot minder dan 10% door behandeling met clodronaat. Elk tijdstip n=6.

3.4. Uitputting van macrofagen vermindert glomerulair

Pathologie bij FH-gemedieerde ICGN. Aan het einde van het experiment werden immuuncomplexafzettingen in de nier en histopathologische kenmerken van ICGN geëvalueerd. Immunofluorescentiekleuring voor C3 en IgG onthulde dat Mϕ-uitputting de immuuncomplexen in deze setting niet moduleerde. Representatieve immunofluorescentiekleuring en histopathologie worden getoond in Figuur 5. Het primaire histopathologische kenmerk was de diffuse hypercellulairheid van de glomerulaire bosjes bij fh-/- muizen waarbij CSS significant werd verminderd bij uitputting van Mϕs.

3.5. Macrofagen moduleren cytokinen in FH-afhankelijke ICGN.

Zodra Mϕsinfiltreren in de nieren worden blootgesteld aan ontstekingsstimuli, maken ze cytokinen vrij. We evalueerden, door middel van ELISA, plasma circulerende niveaus van TNF en IL-6 en de nier-mCSF bij FHKO-muizen behandeld met zoutoplossing, apoferritine of apoferritine en clodronaat. De circulerende niveaus van IL-6 waren zeer laag bij wildtype muizen en namen toe bij FHKO-muizen en waren verlaagd bij FHKO-muizen behandeld met clodronaat (Figuur 6). De drie cytokinen, TNF, IL-6 en mCSF waren significant verhoogd bij muizen behandeld met apoferritine vergeleken met met zoutoplossing behandelde controles. Mϕ-uitputting door clodronaat beperkte de stijging van cytokines in deze setting aanzienlijk

3.6. Macrofagen moduleren Profibrotic

Moleculen en laminine in FH-afhankelijke ICGN. Zodra denieren ontwikkelen een ziektehebben ze de neiging fibrotisch te worden. Mϕs nemen deel aan het fibrotische proces door profibrotische moleculen te overproduceren. Real-time PCR onthulde een toename van 75% in de mRNA-expressie van transformerende groeifactor-beta1 (TGFbeta1), een toename van 100% in de expressie van metalloproteïnase-9 (MMP9) en een toename van 230% in laminine-mRNA. In overeenstemming met de mRNA-expressie is de expressie van laminine-eiwit significant verhoogd in de fh-/- muizen met CSS, wat verlaagd was in de afwezigheid van Mϕs (Figuur 7).

4. Discussie

Onze recente onderzoeken hebben aangetoond dat muizen zich bij afwezigheid van FH diffuus ontwikkelenproliferatieve glomerulonefritis(GN) met F4/80+ Mϕs rond locaties van IC's [10]. Bovendien tonen onze onderzoeken aan dat Cd11b−/− fh−/− muizen de kenmerken van glomerulonefritis hebben verergerd [26]. Gegeven dat de aanwezigheid van verhoogde inflammatoire M1-macrofagen en hun aanhoudende activering weefselpathologie zouden kunnen veroorzaken, en hun repolarisatie naar het ontstekingsremmende fenotype zou helpen bij het oplossen van ziektepathologie, werd de huidige studie uitgevoerd om de rol van Mϕs in fh verder te begrijpen. -/- muizen met ICGN. De verhoogde aanwezigheid van Mϕs in de nier en het oplossen van ziektepathologie door uitputting van macrofagen tijdens FH-gemedieerde ICGN tonen de cruciale rol van Mϕs in deze setting aan, en daarom zouden ze in deze setting als belangrijke therapeutische doelen kunnen dienen.

Figuur 5: Mϕs-depletie vermindert glomerulaire pathologie in FH-afhankelijke ICGN. Gegeven zijn representatieve afbeeldingen van glomeruli van met zoutoplossing behandelde (a), met apoferritine behandelde (b) en met apoferritine + clodronaat behandelde FH-deficiënte muizen. In (A) zijn de secties gekleurd met C3 (groen) en IgG (rood), terwijl (B) secties toont die zijn gekleurd met PAS. IgG-afzettingen die waren toegenomen bij behandeling met apoferritine bleven onveranderd, terwijl de glomeruli er dichter bij normaal uitzagen bij uitputting van macrofagen.

De afwezigheid van FH leidt tot een verhoogde C5a-productie. C5a bindt zich aan C5aR1 en signaleert Mos aan de nier, waar ze bijdragen aan het ontstekingsmilieu. Bovendien hebben onze onderzoeken ook aangetoond dat in deze setting van overmatige C5a-generatie de inactivatie van C5a de ziekte lijkt te beperken [10]. Activering van Mos zorgt ervoor dat ze gepolariseerd raken, maar ze blijven in een staat van continuüm [27]. Onze resultaten in deze studie laten zien dat glomerulaire ziekte bij CSS verminderd was bij fh−/− muizen waarin Mϕs uitgeput waren, vergeleken met fh-/- muizen zonder macrofaaguitputting. Het elimineren van door Mϕs veroorzaakte ICGN in fh−/− muizen vermindert dus de ziektepathologie. Mϕs zijn echter ook noodzakelijk voor het herstelproces, en aangezien Mϕs van toestand veranderen van pro- naar ontstekingsremmende toestanden en vice versa, zal het onze toekomstige poging zijn om te begrijpen of het veranderen van het Mϕs-landschap zonder ze uit te putten de ziektepathologie zou kunnen veranderen.

Mϕs spelen een belangrijke rol bij het ontstaan ​​en in stand houden van fibrose en zijn ook betrokken bij de onderdrukking, oplossing en omkering van fibrose [28]. Onze resultaten laten een verhoogde expressie van CD204+- en CD206+ Mϕ-markers zien, wat hun verhoogde aanwezigheid in deze setting suggereert. Omdat deze Mϕs een belangrijke bron van profibrotische moleculen zijn, suggereren onze resultaten die een toename in TGF -1 en MMP9 laten zien dat deze Mϕs zowel direct als indirect zouden kunnen bijdragen aan fibrotische processen in FH-gemedieerde ICGN via verschillende mechanismen ( 1,3,8,44). TGF -1 kan fibrose veranderen door cytokineregulatie. Bovendien moduleert TGF -1 de biosynthese en expressie van C3 en factor B in monocyten [29], en verandering van het complement in de immuuncellen en niercellen kan weefselfibrose bevorderen [30]. De exacte interacties tussen macrofagen en complement, de betrokken mechanismen, hun rol en de weefselcompartimentalisatie moeten echter worden ontcijferd [31]. Onze onderzoeken toonden een verminderde expressie van laminine aan bij Mϕs-verarmde muizen vergeleken met Mϕ-voldoende muizen. Om beter te begrijpen hoe FH het fibrotische proces reguleert, moeten we de specifieke Mϕ-subsets identificeren die aanwezig zijn in FH-gemedieerde ICGN en de bijdragen van elke subsetpopulatie ophelderen. Deze onderzoeken zijn belangrijk omdat complementaire therapieën een klinische realiteit zijn geworden. Er zijn en worden nog steeds remmers ontwikkeld tegen verschillende doelen in de complementcascade die de stroomafwaartse stappen in de activeringsroute(s) zullen blokkeren. Momenteel is een van de complementremmers die klinisch worden gebruikt het anti-C5-antilichaam, Eculizumab [32]. Daarom is het identificeren van de pathogene complementcomponenten in de ziekte en het aanvullen daarvan met de regulering van de Mϕs-populatie geen triviaal punt.

Figuur 7: Laminine-afzetting inFH-deficiënte nierenmet ICGN wordt verminderd door de uitputting van Mϕs. (a) qRT-PCR voor TGFB, MMP9 en laminine uit denier-mRNAgeïsoleerd uit muizen na 5 weken zoutoplossing en apoferritine en 3 weken clodronaat. De expressie is genormaliseerd naar GAPDH (n=6/groep). (b) Representatieve IF-microfoto's voor lamininekleuring in de nieren van dezelfde groepen muizen. ∗P < 0:01.

Samenvattend hebben we hier de rol van Mϕs in het FH-afhankelijke ICGN-model bestudeerd. De resultaten kunnen ook worden toegepast in omgevingen van ongereguleerde complementactivatie met immuuncomplexen, zoals die worden waargenomen bij verschillende ziekten, waaronder lupus nefritis, IgA-nefropathie en membraneuze nefropathie. We laten het belang zien van zowel complementregulatie door FH als de Mϕs-status bij de ziekte. Farmacologische targeting van de complementcascade en de Mϕs-status in IC-gemedieerde GN heeft dus potentiële klinische relevantie.

Referenties

[1] T. Mijovic, A. Zeitouni en I. Colmegna,"Auto-immuun sensorineuraal gehoorverlies: het raakvlak van otologie en reumatologie," Reumatologie, vol. 52, nee. 5, blz. 780–789, 2013. [2] M. Abongwa, KE Baber, RJ Martin en AP Robertson,"De cholinomimetische morantel als open kanaalblokker van de Ascaris suum ACR-16 nAChR," Ongewervelde neurowetenschappen, vol. 16, nee. 4, 2016.

[3] AS De Vriese, S. Sethi, J. Van Praet, KA Nath en FC Fer venza,"Nierziekte veroorzaakt door ontregeling van de complementaire alternatieve route: een etiologische benadering," Tijdschrift van de American Society of Nephrology, vol. 26, nee. 12, blz. 2917– 2929, 2015. [4] RJ Quigg,"Complement- en auto-immuunglomerulaire ziekten," Huidige richtingen in auto-immuniteit, vol. 7, blz. 165– 180, 2003. 

[5] MC Caroll,"Het complementsysteem bij de regulatie van adaptieve immuniteit," Natuurimmunologie, vol. 5, nee. 10, blz. 981– 986, 2004. [6] MV Carroll en RB Sim,"Complement in gezondheid en ziekte," Geavanceerde beoordelingen van medicijnafgiftes, vol. 63, nee. 12, blz. 965–975, 2011. 

[7] M. Noris en G. Remuzzi,"Overzicht van complementactivatie en -regulatie," Seminars in Nefrologie, vol. 33, nee. 6, blz. 479–492, 2013. 

[8] VP Ferreira, AP Herbert, C. Cortes et al.,"De binding van factor H aan een complex van fysiologische polyanionen en C3b op cellen is verstoord bij atypisch hemolytisch-uremisch syndroom." Tijdschrift voor Immunologie, vol. 182, nee. 11, blz. 7009–7018, 2009.

[9] JJ Alexander, MC Pickering, M. Haas, I. Osawe en RJ Quigg,"Complementfactor h beperkt de afzetting van immuuncomplexen en voorkomt inFlammatie en littekenvorming in glomeruli van muizen met chronische serumziekte," Tijdschrift van de American Society of Nephrology, vol. 16, nee. 1, blz. 52–57, 2005.

[10] JJ Alexander, L. Chaves, A. Chang en RJ Quigg,"De C5a-receptor speelt een sleutelrol bij immuuncomplexglomerulonefritis in complementfactor H-deFioude muizen," Nier Internationaal, vol. 82, nee. 9, blz. 961–968, 2012. 

[11] CV Jakubzick, GJ Randolph en premier Henson,"Monocyt differentiatie en antigeenpresenterende functies," Natuur beoordelingen. Immunologie, vol. 17, nee. 6, blz. 349–362, 2017. 

[12] Q. Cao, Y. Wang en DC Harris,"Heterogeniteit van macrofagen, fenotypes en rollen in de nierenFiBrosis," Nier Internationaal. Supplement, vol. 4, nee. 1, blz. 16–19, 2014.

[13] Q. Cao, Y. Wang, XM Wang et al.,"Nier F4/80+ CD11c+ mononucleaire fagocyten vertonen fenotypische en functionele kenmerken van macrofagen in de gezondheid en bij adriamycine-nefropathie," Tijdschrift van de American Society of Nephrology, vol. 26, nee. 2, blz. 349–363, 2015.