Naringine en hesperidine gaan door diclofenac geïnduceerde hepatotoxiciteit bij mannelijke Wistar-ratten tegen via hun antioxiderende, ontstekingsremmende en anti-apoptotische activiteiten Deel 1
Mar 24, 2022
Neem contact oposcar.xiao@wecistanche.comvoor meer informatie
1. Inleiding
Niet-steroïde anti-inflammatoire geneesmiddelen (NSAID's) hebben verschillende bijwerkingen [1]. Diclofenac, als een van deze geneesmiddelencategorie, is een fenylazijnzuurderivaat dat al lang wordt gebruikt als pijnstiller en ontstekingsremmend middel om bepaalde aandoeningen te behandelen [2]. In zijn werkingsmechanisme remt diclofenac cyclo-oxygenase-(COX- )2 enzymen met een grotere potentie dan op COX-1 [3]. Hoewel diclofenac krachtige therapeutische effecten heeft, gaat langdurig gebruik ervan gepaard met ernstige dosisafhankelijke bijwerkingen [3]. Een toename vanoxidatiefstress en onderdrukking van antioxidante afweersystemen werden gerapporteerd door verschillende publicaties die betrokken waren bij de inductie van toxiciteit en bijwerkingen van het medicijn [4,5]. Het gebruik van antioxidanten zoals citrusflavonoïden in combinatie met diclofenac kan de door diclofenac geïnduceerde oxidatieve stress tegengaan en daardoor bijwerkingen en toxiciteit van geneesmiddelen voorkomen.
Naringin, verantwoordelijk voor de zure smaak en bittere smaak van de vruchten van citrussoorten, heeft farmacologische en therapeutische eigenschappen met een breed spectrum, zoals lipidenverlagende, ontstekingsremmende, vrije radicalen opruimende, antioxidatieve, antihyperlipidemische,
anti-apoptotische en anti-atherogene eigenschappen [6,7. Hesperidine is een andere flavonoïde geïsoleerd uit citrussoorten die verschillende biologische eigenschappen had, met name antioxidant en ontstekingsremmend [8]. Er is gemeld dat hesperidine de door cytochroom geïnduceerde leverweefselbeschadiging, waargenomen doorhistopathologischexamen [9]. Er werd ook onthuld dat hesperidine effectief was in het onderdrukken vanontstekingen allergische symptomen en bij de behandeling van allergische rhinitis [10]. Daarom werd deze studie uitgevoerd om de mogelijke preventieve effecten van naringine en hesperidine op door diclofenac geïnduceerde levertoxiciteit te beoordelen en om de rol van modulatie van ontsteking, oxidatieve stress en apoptose bij de preventieve werking te onderzoeken.
2. materialen en methoden
2.1. Chemicaliën en kits. Diclofenac-natrium werd verkregen van El-Nasr Pharmaceutical Chemical Company, Egypte.
Naringin en hesperidine werden geproduceerd door Sigma-Aldrich Company (St. Louis, MO, VS). Alle andere gebruikte chemicaliën zijn van analytische kwaliteit en zijn verkregen van lokale chemische bedrijven. Alaninetransaminase(ALT)- en aspartaattransaminase(AST)-kits werden verkregen van Spinreact, Ctra Sta Coloma, 7.17176 St., Esteve de Bas, Girona, Spanje. Lactaatdehydrogenase (LDH) en y-glutamyltransferase (GGT) werden verkregen van Spectrum, Egyptian Company for Biotechnology, Obour City Industrial Area, Cairo, Egypte. Alkalische fosfatase (ALP) -kit werd verkregen van Biodiagnostic, 29 Tahrir St., Dokki, Giza, Egypte. Albumine- en bilirubinekits werden verkregen van Diamond, 24 El Mon-matzah St., Heliopolis, Caïro, Egypte.
Cistanche kan de immuniteit verbeteren
2.2.Experimentele dieren. Volwassen mannelijke ratten van de Wistar-stam met een gewicht van 100-130g (9-1l weken) werden gebruikt als proefdieren in het huidige werk.
Ze werden verkregen van het Animal House of Ophthalmology Research Institute, Giza, Egypte. De dieren werden gehuisvest in goed beluchte kooien met 12 uur per dag licht-donker cycli en een temperatuur tussen 20 en 25 graden. Ratten werden dagelijks aangevuld met een standaard gepelleteerd dieet en water ad libitum. De dieren werden gedurende twee weken onder observatie gehouden voordat het experiment werd gestart voor aanpassing en om eventuele bijkomende infectie uit te sluiten. Alle diermethodologieën zijn in overeenstemming met de richtlijnen en instructies van de ethische commissie voor proefdieren van de Faculteit Wetenschappen voor de zorg en het gebruik van de dieren, Beni Suef University, Egypte. Het ethische goedkeuringsnummer is BSU/FS/2015/15. Alles werd in het werk gesteld om het lijden en de angst van dieren te verminderen.
2.3.Dierengroepering. Dertig mannelijke Wistar-ratten werden in dit experiment gebruikt en werden in vijf groepen verdeeld (Figuur 1).
De ratten van groep 1 (normaal) kregen het equivalente volume zoutoplossing (het vehikel waarin diclofenac werd opgelost) door intraperitoneale injectie en kregen ook het equivalente volume van 1 procentcarboxymethylcellulose (CMC; het vehikel waarin naringine en hesperidine werden opgelost) door orale sondevoeding dagelijks gedurende 4 weken. Groep 2 (met diclofenac geïnjecteerde groep) werd geïnjecteerd met diclofenac (opgelost in zoutoplossing) door intraperitoneale toediening in een dosis van 3 mg / kilogram lichaamsgewicht (kgb. wt) / dag [11] en kreeg ook het equivalente volume van 1 procent CMCby orale sondevoeding dagelijks gedurende 4 weken. Groep 3 (met diclofenac geïnjecteerde groep behandeld met naringine) kreeg diclofenac zoals in groep 2 en werd oraal behandeld met naringine (opgelost in 1 procent CMC) in een dosisniveau van 20 mg/kgb. wt/dag door orale sondevoeding [12] gedurende 4 weken. Groep 4 (met diclofenac geïnjecteerde groep behandeld met hesperidine) kreeg diclofenac zoals in groep 2 en werd oraal behandeld met hesperidine (opgelost in 1 procent CMC) in een dosis van 20 mg/kg lichaamsgewicht/dag [13] gedurende 4 weken. Groep 5 (met diclofenac geïnjecteerde groep behandeld met naringine en hesperidine) werd aangevuld met diclofenac zoals in groep 2 en werd oraal behandeld met naringine enhesperidine(opgelost in 1 procent CMC) in een dosis van 20 mg/kg b. wt/dag gedurende 4 weken.
2.4.Bloed- en leverafname.
Aan het einde van het experiment kregen ratten geen voedsel en werden bloedmonsters verzameld uit de halsaderen. Men liet de bloedmonsters bij kamertemperatuur coaguleren en vervolgens 15 minuten bij 3000 rpm gecentrifugeerd. Het serum van elk bloedmonster werd gefractioneerd in drie flesjes die op -30 graad werden bewaard totdat ze werden gebruikt voor biochemische analyse.
Na het nemen van bloedmonsters uit de halsader werden de ratten geëuthanaseerd en ontleed. De lever van elke rat werd snel uitgesneden en gewassen in steriele zoutoplossing ({{0}},9 procent NaCl. Stukjes van de lever werden gefixeerd in 10 procent neutraal gebufferde formaline voor histologisch onderzoek. Andere delen werden bewaard in een diepvriezer op -30 graden in afwachting van homogenisatie in steriele isotone zoutoplossing (0,9 procent NaCl) voor de bepaling van oxidatieve stress en antioxiderende verdedigingsmarkers. Het derde deel van de lever werd op -30 graden gehouden in steriele Eppendorf-buisjes voor reverse transcriptase-polymerase kettingreactie (RT-PCR) analyse.
2.5. Detectie van leverfunctieparameters in serum.
ALT- en AST-activiteiten werden geschat met behulp van de nicotinamide-adenine-dinucleotide-waterstof (NADH)-oxidatiemethode volgens de methoden van respectievelijk Murray [14] en Murray [15], met behulp van reagenskits die waren gekocht bij Spinreact, Spanje. Kortom, ALT katalyseert de omzetting van alanine in pyruvaat, dat door LDH wordt gereduceerd tot lactaat, en NADH wordt geoxideerd tot nicotinamide-adenine-dinucleotide (NAD). De snelheid van afname van de concentratie van NADH, fotometrisch gemeten bij 340 nm, is evenredig met de katalytische concentratie van ALT die in het serummonster aanwezig is. Aan de andere kant katalyseert AST de omzetting van aspartaat in oxaalacetaat, dat wordt gereduceerd tot malaat door malaatdehydrogenase (MDH), en NADH wordt geoxideerd tot NAD. De snelheid van afname van de NADH-concentratie, fotometrisch gemeten bij 340 nm, is evenredig met de katalytische concentratie van AST die in het serummonster aanwezig is. Serum LDH-activiteit werd gedetecteerd volgens de methode van Van der Heiden et al. [16]. Bij deze methode katalyseert LDH de reactie tussen pyruvaat en NADH om NAD* en L-lactaat te produceren. De snelheid van afname van de concentratie van NADH, fotometrisch gemeten bij 340 nm, is evenredig met de katalytische concentratie van LDH die in het monster aanwezig is. Serum ALP-activiteit werd bepaald volgens de methode van Belfield en Goldberg [17] met behulp van kits verkregen van Biodiagnostic, Egypte. Door serummonster toe te voegen aan fenylfosfaat (5 mmol/L) bij pH 10,
ALP leidt tot de vorming van fenol en fosfaat. Het vrijgekomen fenol wordt colorimetrisch gemeten bij 510nm in aanwezigheid van 4-aminofenazon en kaliumferricyanide. GGT-activiteit werd bepaald volgens de methode van Szasz en Persijn [18] met behulp van kits verkregen van Spectrum Diagnostic, Egyptian Company for Biotechnology, Egypte. GGT brengt de zij-glutamylgroep over van het substraat L- -glutamyl-p-nitroanilide, waardoor het chromogeen p-nitroanilide (PNA) vrijkomt dat wordt gemeten bij 418 nm en de vorming ervan evenredig is met de GGT-activiteit. Het serumalbuminegehalte werd bepaald volgens de methode van Doumas et al. [19] met behulp van reagenskits die zijn gekocht bij Diamond, Egypte. De methode werd in het kort uitgevoerd door 10 L serum toe te voegen aan 2 ml bro-more sol green (0,12 mmol/L) in citraatbuffer pH 3,8. het albumine/bromocresolgroen complex, gevormd door de reactie, werd gemeten bij 630 nm. Het serumbilirubinegehalte werd bepaald volgens de methoden van Malloy en Evelyn [20] met behulp van reagenskits die waren gekocht bij Diamond, Egypte. Deze methode voor het schatten van bilirubine is gebaseerd op de van den Bergh-reactie. In deze reactie reageert bilirubine met gediazoteerd sulfanilzuur om azobilirubine te produceren dat paars van kleur is en fotometrisch werd gemeten bij 578 nm. De intensiteit van de kleur is recht evenredig met de hoeveelheid bilirubine in het serum.
2.6. Evaluatie van parameters van leveroxidatieve stress en antioxidantafweersysteem.
Leverlipideperoxidatie (LPO) werd bepaald volgens de methode van Preuss et al. [21]. In het kort, het eiwit werd geprecipiteerd door 0,15 ml 76% trichloorazijnzuur (TCA) toe te voegen aan 1 ml leverhomogenaat. Vervolgens werd 0,35 ml thiobarbituurzuur (TBA) toegevoegd, als een kleurontwikkelend middel, aan het afgescheiden supernatant. De ontwikkelde vage roze kleur werd gemeten bij 532 nm na incubatie in een waterbad van 80 graad gedurende 30 minuten. Standaard werd MDA (malondialdehyde of 1,1,3,3-tetramethoxypropaan) gebruikt. Het verlaagde glutathion(GSH)-gehalte in de lever werd bepaald door toevoeging van 0,5 ml5,5'-dithiobis(2-stikstof-zoëzuur), Ellman's reagens (als kleurontwikkelend middel) en fosfaatbufferoplossing (pH 7 ) om supernatant te homogeniseren na eiwitprecipitatie op basis van de procedure van Beutler et al. [22]. De ontwikkelde gele kleuren in monsters en GSH-standaarden werden gemeten bij 412 nm tegen blanco. De GPx-activiteit van de lever werd gemeten volgens de procedure van Matkovics et al. [23] met enkele aanpassingen. Deze methode is gebaseerd op de detectie van de GSH die door het enzym wordt omgezet in geoxideerd glutathion (GSSG) door detectie van de resterende GSH en deze af te trekken van het totaal. In het kort werd 50 L homogenaatsupernatant toegevoegd aan een Wasserman-buis die 350 μL Tris-buffer （pH 7,6 , 50 L GSH-oplossing （2 mM） en 50 L H, O (3,38 mM) bevatte. Vervolgens werd na 10 minuten incubatie het resterende GSH-gehalte gemeten met de eerder beschreven methode voor GSH-bepaling bij 430 nm. De standaardtest werd bereid door 50 L gedestilleerd water toe te voegen in plaats van 50 L monster en de blanco test werd bereid door 100 μL gedestilleerd water toe te voegen in plaats van 50 L monster en 50 μL GSH-oplossing. Na detectie van resterend GSH-gehalte in het monster, wordt het GSH omgezet in geoxideerde vorm (GSSG) en kan de enzymactiviteit worden berekend. Lever-superoxide-dismutase (SOD)-activiteit werd gedetecteerd volgens de methode van Marklund en Marklund [24]. De reactie is gebaseerd op de remming van auto-oxidatie van pyrogallol door SOD. Het proces is afhankelijk van de aanwezigheid van superoxide-ionen. De hoeveelheid van het enzym die een 50 procent remming van de extinctie veroorzaakt, verandert in 1 minuut in vergelijking met de controle, wordt beschouwd als één eenheid van het enzym.
2.7. Bepaling van serum TNF-, IL-17 en IL-4-niveaus.
Serum TNF-, I-17 en I-4-spiegels werden geschat volgens specifieke enzym-linked immunosorbent assay (ELISA)-kits volgens de instructies van de fabrikant. Rat TNF-alpha ELISA-kit (catalogusnr: MBS355371), IL-17 ELISA-kit (catalogusnr. MBS5203506) en IL-4 ELISA-kit (catalogusnr: MBS494192) werden verkregen van MyBioSource, Inc. , San Diego, CA, VS. Deze ELISA-kits gebruiken sandwich-ELISA. Kortom, de micro-ELISA-platen die in deze kits worden geleverd, zijn vooraf gecoat met een antilichaam dat specifiek is voor het betreffende cytokine. Standaarden of monsters worden toegevoegd aan de juiste micro-ELISA-plaatwells en gecombineerd met de specifieke antilichamen. Vervolgens wordt achtereenvolgens een gebiotinyleerd detectie-antilichaam dat specifiek is voor het betreffende cytokine en avidine-mierikswortelperoxidase (HRP)-conjugaat toegevoegd aan elk putje van de microtiterplaat en geïncubeerd. Vrije componenten worden weggespoeld. De substraatoplossing wordt aan elk putje toegevoegd. Alleen die putjes die cytokine, gebiotinyleerde detectie-antilichamen en avidine-HRP-conjugaat bevatten, zullen blauw van kleur lijken. De enzym-substraatreactie wordt beëindigd door toevoeging van een zwavelzuuroplossing en de kleur wordt geel. De optische dichtheid (OD) wordt spectrofotometrisch gemeten bij een golflengte van 450 nm. De OD-waarde is evenredig met de concentratie van het geteste cytokine en de concentratie ervan in de monsters kan worden bepaald door de OD van de monsters te vergelijken met de standaardcurve.
2.8.Detectie van mRNA-expressie van p53
2.8.1.RNA-isolatie.
Totaal RNA werd geïsoleerd uit het leverweefsel volgens de methode van Chomzynski en Sacchi [25] en Boom et al. [26] met behulp van een Thermo Scientific GeneJET RNA-zuiveringskit verkregen van Thermo Fisher Scientific Inc., Rochester, New York, VS. In het kort worden levermonsters gelyseerd en gehomogeniseerd in lysisbuffer, die guanidinethiocyanaat bevat als een chaotroop zout en -mercapto-ethanol dat RNA kan beschermen tegen endogene RNasen. Het lysaat wordt vervolgens gemengd met ethanol en op een zuiveringskolom geladen. Het chaotrope zout en de ethanol zorgen ervoor dat RNA aan het silicamembraan bindt terwijl het lysaat door de kolom wordt gesponnen. Vervolgens worden onzuiverheden effectief van het membraan verwijderd door de kolom te wassen met wasbuffers. Zuiver RNA wordt vervolgens geëlueerd onder omstandigheden van lage ionsterkte met nuclease-vrij water. De niveaus van geïsoleerd RNA werden bepaald en gekwantificeerd met behulp van een ultraviolet (UV)spectrofotometer en de absorptie bij optische dichtheden (OD) bij 260nm en 280 nm. RNA werd gekwantificeerd en gekwalificeerd op basis van Sambrook en Russell's [27]formule （RNA（ug/μL）=ODat 260nm×verdunning×40ug/mL/1000）. Voor elk geëxtraheerd RNA-monster zorgt de verhouding tussen OD bij 260 nm en OD bij 280 nm en de verhouding tussen 1,7 en 2,0 voor een hoge zuiverheid van geëxtraheerd RNA.
2.8.2. RT-PCR-assay.RT-PCR-assay werd toegepast met behulp van Thermo Scientific Verso 1-Step RT-PCR Reddy Mix Kit (Thermo Fisher Scientific Inc.,
Rochester, New York, VS) voor detectie van de mRNA-expressie van lever p53. Kortom, in een eenstapsreactie werd RNA omgekeerd getranscribeerd in cDNA en werd het geproduceerde cDNA geamplificeerd door Techne 32 Thermocycler. Het reactiemengsel bestaat uit Veso Enzyme Mix（1μL）,2X One-Step PCR ReadyMix（25μL）, RT-enhancer （25μL）, forward primer （10μM; 1μL）, reverse primer（10μM;1μ）, sjabloon RNA（1 ng;1.5μL）, en waternuclease-vrij om het totale volume te voltooien tot 50μL. Het thermische cyclusprogramma omvat cDNA-synthese (temp.50 graden, 15 minuten, 1 cyclus), Verso-inactivatie (temp.95 graden, 2 minuten, 1 cyclus), denaturatie (temp.95 graden, 20 seconden), annealing (temp. 55 graden C, 30 seconden), verlenging (temp. 72 graden, 1 minuut), en laatste verlenging (temp. 72 graden, 5 minuten, 1 cyclus). Het aantal cycli van denaturatie gevolgd door annealing en verlenging is 35 cycli. Na reverse transcriptie en amplificatie werd 10 L PCR-producten geanalyseerd op een 1,5 procent agarosegel gekleurd met ethidiumbromide in 1 x Tris Boraat EDTA-buffer (TBE) pH 8.3-8.5. Het elektroforetische beeld werd gevisualiseerd en geanalyseerd door het geldocumentatiesysteem (GelDocu Advanced) en de waarden werden genormaliseerd naar de hoeveelheid -actine. De primerpaarsequenties p53 waren 5'd CAGCGTGATGATGGTAAGGA 3'(voorwaarts) en 5'd GCGTTGCTCTGATGGTGA 3'(omgekeerd) volgens Asiri [28].
2.9. Histopathologische onderzoeken. Na opoffering en dissectie werd de lever van elke rat snel uitgesneden en vervolgens geperfuseerd in een zoutoplossing.
Stukjes van de lever van elke rat （3 mm²） werden genomen en gefixeerd in 10 procent neutraal gebufferde formaline gedurende vierentwintig uur. De gefixeerde levers werden naar de afdeling Pathologie, Faculteit Diergeneeskunde, Beni Suef University, gestuurd voor verdere verwerking, blokkering in was, coupes en kleuring met hematoxyline en eosine (H&E) [29]. De gekleurde levercoupes werden onderzocht op detectie van de histopathologische scores. In drie willekeurig geselecteerde velden van elke sectie (×100), werden laesies of verwondingen beoordeeld als afwezig (0), mild (I), matig () en ernstig (II) voor veranderingen, 0 procent, respectievelijk minder dan 30 procent ,30-50 procent en meer dan 50 procent [30]. De graduele laesies omvatten hydropische en vacuolaire degeneratie, infiltratie van ontstekingscellen, necrose, apoptose, Kupffer-celproliferatie, vetveranderingen en steatose, verstopte bloedvaten en sinusoïden, en hyperplasie van de epitheliale bekleding van de galwegen.
2.10. Immunohistochemische detectie van caspase-3.
De in paraffine ingebedde levermonsters werden overgebracht naar de afdeling Pathologie, National Cancer Institute, om te worden verdeeld in secties met een dikte van 5 um die op positief geladen objectglaasjes werden gemonteerd (Fisher Scientific, Pittsburgh, PA). Caspase-3-reactiviteit werd verwerkt volgens de methoden van Galaly et al.[31] en Ahmed en Ahmed [32]. In het kort, na het ophalen van antigeen, werd een verdund primair antilichaam voor caspase -3 (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, VS) gedurende 1 uur geïncubeerd met leversecties. Verdund gebiotinyleerd secundair antilichaam (DakoCytomation Kit) werd toegevoegd en incubatie werd gedurende 15 minuten bij 37°C uitgevoerd. Daarna werd mierikswortelperoxidase-geconjugeerd met streptavidine (DakoCytomation Kit) gedurende nog eens 15 minuten incubatie aangebracht. Gebonden antilichaamcomplex werd zichtbaar gemaakt door de reactie van 3,3'-diaminobenzidine(DAB)substraat en tegenkleuring met hematoxyline. Alle levercoupes werden onder dezelfde omstandigheden met dezelfde verdunningen van antilichamen en in dezelfde periode geïncubeerd, dus de immunokleuring was vergelijkbaar tussen de verschillende onderzoeksgroepen. Voor elk preparaat werd een negatieve controle uitgevoerd (een objectglaasje zonder primair antilichaam). De secties werden gevisualiseerd onder een lichtmicroscoop en de mate van celimmunopositiviteit werd beoordeeld. Beelden van delen van de lever werden vastgelegd met behulp van een digitale camera (Leica, DM2500M Leica, Wetzlar, Duitsland). Onderzoek en analyse van etikettering werden uitgevoerd met behulp van de gratis softwareversie ImageJ(1.51d)[33]. De ImageJ-software werd gebruikt om de geïntegreerde intensiteiten (in pixels) van de positieve reactie van caspase-3 te meten.
2.11. Statistische analyse.
Results were represented in tables and graphs as the mean±standarderror(SE). The data were analyzed by LSD analysis to discern the main effects and to compare various groups with each other using PC-STAT, University of Georgia(USA)[34]. Values of p>0.05 werden als statistisch niet-significant verschillend beschouwd, terwijl de waarden van p<0.05 were="" significantly="" and="" highly="" significantly="">
3. Resultaten
3.1. Effect op serumparameters gerelateerd aan de leverfunctie.
De dagelijkse intraperitoneale injectie van diclofenac gedurende 4 weken veroorzaakte een significante verhoging (p<0.05)in serum="" alt,="" ast,="" ldh,="" alp,="" and="" ggt="" activities="" as="" well="" as="" serum="" total="" bilirubin="" level.="" the="" cotreatment="" of="" diclofenac-injected="" ani-mals="" with="" naringin="" and/or="" hesperidin="" induced="" a="" decrease="" in="" these="" elevated="" levels.="" while="" the="" cotreatment="" of="" diclofenac-injected="" rats="" with="" naringin="" induced="" a="" significant="" decrease=""><0.05)in the="" elevated="" serum="" ast,="" ldh,="" alp,="" ggt,="" and="" total="" bilirubin="" levels,="" it="" produced="" a="" nonsignificant="" effect="" (p="">0.05) op de ALT-activiteit. De gelijktijdige behandeling van met diclofenac geïnjecteerde dieren met hesperidine veroorzaakte een significant effect (p<0.05)on the="" elevated="" alt,="" ast,="" ldh,="" ggt,="" and="" total="" bilirubin="" levels="" while="" it="" failed="" to="" produce="" a="" significant="" effect="" in="" serum="" alp=""><0.05). the="" cotreatment="" with="" naringin="" and="" hesperidin="" in="" combination="" successfully="" caused="" a="" significant="" decrease=""><0.05)in all="" elevated="" parameters="" related="" to="" liver="" function="" including="" alt,="" ast,="" ldh,="" alp,="" ggt,="" and="" total="" bilirubin="" levels.="" moreover,="" the="" treatment="" with="" the="" combination="" of="" naringin="" and="" hesperidin="" appeared="" to="" be="" the="" most="" effective="" in="" improving="" the="" elevated="" ast,="" alp,="" and="" ggt="" activities(table="" 1).="" serum="" albumin="" level,="" on="" the="" other="" hand,="" exhibited="" a="" nonsignificant="" change="" (p="">0.05) in alle groepen.
3.2.Effect op leveroxidatieve stress en antioxidantafweersysteem.
De dagelijkse intraperitoneale injectie van diclofenac gedurende 4 weken veroorzaakte een significante verhoging (p<0.05)in liver="" lpo="" and="" a="" significant=""><0.05) in="" liver="" gsh="" con-tent="" and="" gpx="" and="" sod="" activities.="" the="" treatment="" of="" diclofenac-injected="" animals="" with="" naringin="" and/or="" hesperidin="" induced="" a="" significant=""><0.05)in liver="" lpo.="" narin-gin="" and="" its="" combination="" with="" hesperidin="" were="" more="" potent="" than="" hesperidin="" alone="" in="" decreasing="" the="" elevated="" liver="" lpo="" product.="" while="" the="" treatment="" with="" naringin="" and/or="" hesperidin="" produced="" a="" significant="" increase=""><0.05) in="" liver="" gpx="" and="" sod="" activities,="" only="" naringin,="" and="" hesperidin="" in="" combination="" induced="" a="" significant="" increase=""><0.05) in="" liver="" gsh="" content="" (table="">
3.3. Effect op lever-p53-mRNA-expressie.
Zoals aangegeven in figuur 2 nam de expressie van het proapoptotische eiwit p53 mRNA significant toe (p<0.05)in the="" liver="" of="" diclofenac-injected="" rats.="" on="" the="" other="" hand,="" the="" treatment="" with="" naringin,="" hesperidin,="" and="" their="" combination="" produced="" a="" significant=""><0.05)decrease in="" p53="" mrna="" expression="" in="" comparison="" with="" diclofenac-injected="" control.="" there="" is="" no="" significant="" difference="" between="" the="" three="" treatments="" when="" compared="" with="" each="">
3.4.Efect op serum-TNF-, IL-17- en-4niveaus. In tabel 3 induceerde de dagelijkse intraperitoneale injectie van diclofenac gedurende 4 weken een significante toename (p<0.05)in serum="" tnf-αand="" il-17="" levels="" and="" a="" significant="" decrease="" in="" serum="" il-4="">
De gelijktijdige behandeling van met diclofenac geïnjecteerde ratten met naringine en/of hesperidine leidde tot een significante verbetering (p<0.05)of altered="" serum="" tnf-a,="" il-17,="" and="" i-4="" levels.="" the="" treatment="" with="" the="" combination="" of="" both="" flavonoids="" was="" the="" most="" potent="" in="" increasing="" the="" lowered="" il-4level;="" the="" effect="" of="" the="" combination="" was="" more="" significantly="" potent=""><0.05)as compared="" with="" the="" effect="" of="" either="" naringin="" or="">
3.5. Lever histopathologische bevindingen.
Figuur 3 geeft het effect weer van naringine en/of hesperidine op histologische veranderingen in de lever van met diclofenac geïnjecteerde ratten. Figuur 3(a) toont de lever met de normale histologische structuur van de leverkwab. Aan de andere kant vertoonde de lever van met diclofenac geïnjecteerde ratten duidelijke schadelijke histologische veranderingen zoals hydropische degeneratie van hepatocyten, apoptotische cellen en portale infiltratie met mononucleaire cellen (Figuur 3 (b)) naast cytoplasmatische vacuolisatie van hepatocyten en focale levernecrose geassocieerd met infiltratie van focale ontstekingscellen (Figuur 3 (c)). Deze veranderingen werden tot op zekere hoogte gewijzigd bij de met diclofenac geïnjecteerde ratten die werden behandeld met naringine en vertoonden de enige vetverandering van sporadische hepatocyten (Figuur 3(d)). De behandeling van met diclofenac geïnjecteerde ratten met hesperidine leidde tot een verbetering van de histologische veranderingen in de lever in vergelijking met de met diclofenac geïnjecteerde controle, maar vertoonde nog steeds een vetverandering van sporadische hepatocyten, lichte activering van Kupffer-cellen en de aanwezigheid van weinig apoptotische cellen (Figuur). 3(e)). Evenzo verbeterde de behandeling van met diclofenac geïnjecteerde ratten met een combinatie van naringine en hesperidine de histologische veranderingen in de lever in vergelijking met de met diclofenac geïnjecteerde controle. De lever van met diclofenac geïnjecteerde ratten met een combinatie van beide flavonoïden vertoonde echter een lichte Kupffer-celproliferatie en een lichte cytoplasmatische vacuolisatie (Figuur 3(f)). Het leek erop dat het gecombineerde effect van naringine en hesperidine het krachtigst was bij het verbeteren van de histologische architectuur van de lever.
Histopathologische veranderingsscores van alle groepen zijn opgenomen in Tabel 4. De leversectie van de normale controle vertoonde nulscores voor alle histologische laesies. De met leverdiclofenac geïnjecteerde ratten vertoonden verschillende gradaties van histologische laesiescores, variërend van graad III tot graad 0. De toediening van hesperidine en naringine aan met diclofenac geïnjecteerde ratten resulteerde in opmerkelijke verbeteringen in histologische laesies, waaronder hydropische en vacuolaire degeneratie, infiltratie van ontstekingscellen, necrose, apoptose, Kupffer-celproliferatie, vetveranderingen, steatose, verstopte
FcuRE 2: Effect van naringine, hesperidine en hun combinatie op p53-mRNA-expressie in de lever van met diclofenac toegediende ratten. Middelen, die verschillende symbolen delen, zijn significant verschillend bij p<0.05. blood="" vessels="" and="" sinusoids,="" and="" hyperplasia="" of="" the="" epithelial="" lining="" of="" the="" bile="" duct;="" thereby,="" the="" liver="" exhibited="" lower="" grades="" of="" histopathological="" change="" scores="" in="" the="" diclofenac-injected="" groups="" treated="" with="" naringin="" and/or="" hesperidin="" in="" comparison="" with="" diclofenac-injected="" control="" rats.="" the="" combinatory="" effect="" of="" naringin="" and="" hesperidin="" was="" the="" most="" potent="" in="" decreasing="" the="" histopathological="" lesion="">
3.6. Immunohistochemische test.
De immunohistochemisch gekleurde leversecties zijn afgebeeld in figuur 4 en de resultaten van beeldanalyse worden getoond in figuur 5.
De microfoto's in figuur 4 en de gegevens in figuur 5 lieten zien dat de expressie van caspase-3 significant was toegenomen in met diclofenac geïnjecteerde ratten. De behandeling van met diclofenac geïnjecteerde ratten met naringine, hesperidine en hun combinatie resulteerde in een significante afname van de verhoogde caspase-3-expressie in de lever. Het gecombineerde effect van naringine en hesperidine was het krachtigst bij het verlagen van het verhoogde gehalte aan caspase-3. De behandeling met de combinatie normaliseerde de expressie van levercaspase-3.
Dit artikel is afkomstig uit Oxidative Medicine and Cellular Longevity Volume 2021, Article ID 9990091, 14 pagina's https://doi.org/10.1155/2021/9990091
