DEEL 2 Echinacoside remt de afgifte van glutamaat door spanningsafhankelijke Ca2 plus invoer en proteïnekinase C in cerebrocorticale zenuwuiteinden van ratten te onderdrukken

Voor meer informatie kunt u contact opnemen met:Joanna.jia@wecistanche.com

KLIK HIER VOOR DEEL 1

3. Discussie

In deze studie is echinacoside, een actieve stof inHerba Cistanche, remde de door 4-aminopyridine opgewekte glutamaatafgifte in de zenuwuiteinden van de hersenschors van de rat. De mogelijke onderliggende mechanismen voor de door echinacoside gemedieerde remming van glutamaatafgifte worden hier verder onderzocht en besproken.

Cistanche deserticola heeft veel effecten, klik hier voor meer informatie

3.1. Mechanismen die ten grondslag liggen aan Echinacoside-gemedieerde remming van glutamaatafgifte Glutamaatafgifte

opgewekt door 4-aminopyridine bestaat uit twee componenten: een fysiologisch relevante Ca2 plus-afhankelijke component, die wordt geproduceerd door exocytose van synaptische blaasjes die glutamaat bevatten; en een Ca2 plus-onafhankelijke component, die afkomstig is van langdurige depolarisatie, waardoor een membraanpotentiaal-gemedieerde verschuiving van de glutamaattransporteur-steady-state naar de buitenwaartse richting wordt veroorzaakt, waardoor de cytosolische glutamaat-efflux [31] wordt beïnvloed. Hier hebben we geconstateerd datechinacosideremde de door 4-aminopyridine opgewekte glutamaatafgifte niet significant in aanwezigheid van een Ca2plus-vrij medium (Ca2plus-onafhankelijke afgifte). Verder is de waargenomenechinacoside-gemedieerde remming van door 4-aminopyridine opgewekte glutamaatafgifte werd effectief voorkomen door bafilomycine A1 (dat het glutamaatgehalte van synaptische blaasjes uitput), maar niet door DL-TBOA (dat niet-selectief alle exciterende aminozuurtransportersubtypen remt). Deze resultaten suggereren datechinacosidebeïnvloedt de Ca2 plus-afhankelijke exocytose van glutamaatafgifte zonder de Ca2 plus-onafhankelijke cytosolische efflux van glutamaat door de omkering van de glutamaattransporteur van het zenuwuiteinde van het plasmamembraan te beïnvloeden. In synaptische terminals stabiliseert Na-plus-kanaalremming of K-plus-kanaalactivering de prikkelbaarheid van het membraan en vermindert bijgevolg de opgewekte Ca2 plus-invoer en neurotransmitterafgifte [32,33]. Daarom is het mogelijke onderliggende mechanisme:echinacoside-gemedieerde remming van glutamaatafgifte houdt een vermindering van synaptosomale prikkelbaarheid in. Deze mogelijkheid is echter onhoudbaar op basis van twee observaties: (1) 4-aminopyridine-opgewekte membraanpotentiaaldepolarisatie, gemeten met de membraanpotentiaalgevoelige kleurstof DiSC3(5) werd niet beïnvloed door de toevoeging vanechinacoside; en (2) echinacoside had geen invloed op de door 4-aminopyridine opgewekte Ca2 plus-onafhankelijke glutamaatafgifte, een afgiftecomponent die alleen afhangt van de membraanpotentiaal [31]. Als het effect niet wordt veroorzaakt door onderdrukking van de synaptosomale prikkelbaarheid, kan het zich manifesteren door een vermindering van de activiteit van Cav2.2 (N-type) en Cav2.1 (P/Q-type) Ca2 plus-kanalen in combinatie met glutamaatexocytose in de zenuwuiteinden [34–36]. Door fura-2 te gebruiken, laten we zien dat:echinacosidevermindert de door 4-aminopyridine opgewekte verhoging van de Ca2plus-concentratie aanzienlijk. Bovendien laten onze gegevens zien dat het remmende effect vanechinacosideop 4-aminopyridine-opgewekte glutamaatafgifte daalde van 42,4 procent ˘ 2,3 procent naar 12,1 procent ˘ 3,9 procent na blootstelling aan een blokker van Cav2.2 (N-type) en Cav2.1 (P/Q-type) Ca2 plus kanalen. Verder hebben we geconstateerd datechinacosidebleef de door 4-aminopyridine opgewekte glutamaatafgifte significant remmen in aanwezigheid van intracellulaire Ca2 plus-afgifteremmers. Deze resultaten geven aan dat de gelijktijdige onderdrukking van Cav2.2 (N-type) en Cav2.1 (P/Q-type) Ca2 plus kanaalactiviteit het potentiële onderliggende mechanisme is.echinacoside-gemedieerde remming van de glutamaatafgifte. De gecombineerde activering van Cav2.2 (N-type) en Cav2.1 (P/Q-type) Ca2 plus kanaalactiviteit kon de werking vanechinacosidevolledig. Daarom kunnen andere niet-geïdentificeerde typen Ca2 plus-kanalen of andere presynaptische routes bij de remming betrokken zijn. GABAA-receptoren zijn bijvoorbeeld aanwezig op het presynaptische niveau en het is aangetoond dat hun activering de instroom van Ca2 plus en de afgifte van glutamaat remt [37]. In de huidige studie blokkeerden de GABAA-receptorantagonisten SR95531 en bicuculline de door echinacoside gemedieerde remming van glutamaatafgifte niet, wat suggereert dat GABAA-receptoren niet betrokken zijn bij de vermindering van spanningsafhankelijke Ca2 plus-kanaalactiviteit en bij de daaropvolgende remming van glutamaatafgifte.

Binnenkomst van Ca2 plus via spanningsafhankelijke Ca2 plus-kanalen activeert verschillende proteïnekinasen die geassocieerd zijn met glutamaatafgifte in zenuwuiteinden, waaronder door mitogeen geactiveerde proteïnekinase, proteïnekinase C en proteïnekinase A. Hier tonen we aan dat proteïnekinase C-remmers deechinacoside-gemedieerde remming van glutamaatafgifte; desalniettemin was de door mitogeen geactiveerde proteïnekinaseremmer PD98059 of de proteïnekinase A-remmer H89 niet effectief. Verder dat. J. Mol. Wetenschap. 2016, 17, 1006 8 van 13 4-aminopyridine-geïnduceerde fosforylering van proteïnekinase C nam af in synaptosomen na voorbehandeling metechinacosidebij een concentratie die effectief is voor het remmen van glutamaatafgifte. Daarom is de signaalroute van deechinacoside-gemedieerde remming van glutamaatafgifte kan proteïnekinase C omvatten. Proteïnekinase C is een belangrijk intracellulair signaleringssysteem dat aanwezig is op presynaptisch niveau en een cruciale rol speelt bij exocytose van neurotransmitters. Verschillende synaptische eiwitten die betrokken zijn bij de handel in synaptische blaasjes of rekrutering en exocytose, zoals het gemyristoyleerde alaninerijke C-kinasesubstraat, worden bijvoorbeeld gefosforyleerd door eiwitkinase C [38,39]. Dit fosforyleringsproces kan worden verhoogd door depolarisatie-gestimuleerde Ca2 plus-invoer, wat de afgifte van glutamaat vergemakkelijkt [40]. Daarom kunnen we redelijkerwijs speculeren dat het remmende effect vanechinacosideop Ca2 plus-invoer die hier wordt waargenomen, kan de activiteit van proteïnekinase C en bijgevolg de afgifte van glutamaat verminderen.

3.2. Therapeutische implicaties

Excitotoxiciteit, een pathologisch proces veroorzaakt door overmatige afgifte van glutamaat en activering van glutamaatreceptoren, is de belangrijkste oorzaak van neuronale dood bij acute en chronische hersenaandoeningen zoals beroerte, traumatisch hersenletsel, de ziekte van Parkinson en de ziekte van Alzheimer [13,41], en therapeutische strategieën met remming van glutamaatafgifte kunnen veelbelovende neuroprotectieve strategieën zijn voor de behandeling van dergelijke ziekten.Echinacosideis bevestigd dat het de bloed-hersenbarrière (BBB) ​​penetreert en neuroprotectieve effecten vertoont in verschillende in vivo modellen van neurotoxiciteit [8,10-12,42]. Hoewel het mechanisme van deze neuroprotectieve effecten niet volledig wordt begrepen, zijn er verschillende mogelijke mechanismen gemeld, waaronder remming van de ontstekingsreactie, stabilisatie van de mitochondriale functie, antioxidatie, opruiming van vrije radicalen en het nabootsen van neurotrofe functie [5,9,12,42]. In de huidige studie kan het vermogen van echinacoside om de afgifte van glutamaat uit zenuwuiteinden te verminderen ook het neuroprotectieve mechanisme ervan gedeeltelijk verklaren. Of dit effect echter bijdraagt ​​aan het schijnbare therapeutische potentieel van echinacoside bij hersenaandoeningen die verband houden met glutamaat-excitotoxiciteit, rechtvaardigt verder onderzoek.

4. Materialen en methoden

4.1. Chemicaliën

Fura-2-acetoxymethylester (Fura-2-AM) en 3',3',3'-dipropylthiadicarbocyaninejodide [DiSC3(5)] werden gekocht bij Invitrogen (Carlsbad, CA, VS). ω-conotoxine MVIIC, rottlerin,2-[1-(3-dimethylaminopropyl)indol-3-yl]-3-(indol-3-yl)maleïmide ( GF109203X), 5,6,7,13-tetrahydro-13-methyl-5-oxo-12H-indolo[2,3-a]pyrrolo[3,{ {27}}c]carbazol-12-propaannitril (Go6976) en N-[2-(p bromocinnamylamino)ethyl]-5-isochinolinesulfonamide (H89) werden gekocht bij TocrisBioscience (Bristol, VK). Echinacoside, dantroleen, DL-threo-beta-benzyl-oxyaspartaat (DL-TBOA),7-chloor-5-(2-chloorfeny)-1,5-dihydro -4,1-benzothiazepine-2(3H)-on (CGP37157), 2-(2-amino-3-methoxyfenyl)-4 H-1-benzopyran-4-on) (PD98059), ethyleenglycol-bis(-aminoethylether)-N,N,N1,N1-tetraazijnzuur (EGTA) en alle andere reagentia werden gekocht van Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, VS).

4.2. Dieren

Er werden twee maanden oude mannelijke Sprague-Dawley-ratten gebruikt. Dieren werden gehuisvest onder gestandaardiseerde omgevingscondities (22 1 C; 50 procent relatieve vochtigheid; 12 uur licht/donker cyclus) en kregen onbeperkte toegang tot voedsel en water. De dieren werden gedood door onthoofding en de hersenschors werd snel verwijderd bij 4 C. De experimentele procedures werden goedgekeurd door de Fu Jen Institutional Animal Care and Utilization Committee (A10259), in overeenstemming met de National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. Alles is in het werk gesteld om het dierenleed tot een minimum te beperken en om een ​​minimaal aantal dieren in te zetten dat nodig is om betrouwbare resultaten te verkrijgen.

4.3. Synaptosomale voorbereidingen

Synaptosomen werden gezuiverd uit de hersenschors van ratten op discontinue Percoll-gradiënten zoals eerder beschreven [43,44]. In het kort, het weefsel werd gehomogeniseerd in een medium dat 0,32 M sucrose (pH 7,4) bevatte, het homogenaat werd 10 min gecentrifugeerd bij 3000ˆg (5{{25 }}00 tpm in een JA 25.5 rotor; Beckman Coulter, Inc., Miami, FL, VS) en 4 ˝C, en het supernatant werd opnieuw 12 minuten gecentrifugeerd bij 14.500ˆg 11,000 tpm in een JA 25.5 rotor). De pellet werd voorzichtig opnieuw gesuspendeerd in 0,32 M sucrose (pH 7,4) en een aliquot van deze synaptosomale suspensie (2 ml) werd op een 3 ml Percoll discontinue gradiënt met 0,32 M sucrose, 1 mM EDTA, 0,25 mM DL-dithiothreitol en 3 procent, 10 procent en 23 procent Percoll (pH 7,4). Na centrifugeren bij 32.500 ˆg (16.500 rpm in een JA 20.5 rotor) gedurende 7 minuten bij 4 ˝C, werden de synaptosomen teruggewonnen uit tussen de 10 procent en de 23 procent Percoll banden, en ze werden verdund in een eindvolume van 30 ml HEPES-buffermedium (140 mM NaCl, 5 mM KCl, 5 mM NaHCO3, 1 mM MgCl2¨ 6H2O, 1,2 mM Na2HPO4, 10 mM glucose en 10 mM HEPES (pH 7,4)). Na verdere centrifugatie bij 27, 000 ˆg (15.000 rpm in een JA 25.5) gedurende 10 minuten, werd de synaptosoompellet opnieuw gesuspendeerd in 3 ml HEPES-buffermedium en werd het eiwitgehalte bepaald met behulp van een Bradford-assay. Ten slotte werd 0,5 mg van de synaptosomensuspensie verdund in 10 ml HEPES-buffermedium en gedurende 10 minuten bij 3000 g (5000 rpm in een JA 20.1-rotor) gecentrifugeerd. Het supernatant werd weggegooid en de pellets die de synaptosomen bevatten, werden op ijs bewaard en binnen 4-6 uur gebruikt.

4.4. Glutamaatafgifte

De afgifte van glutamaat werd bepaald door online fluorimetrie zoals eerder beschreven [45,46]. Synaptosomale pellets werden opnieuw gesuspendeerd in HEPES-buffermedium (0,5 mg/ml) en voorgeïncubeerd bij 37 ˝C gedurende 10 minuten in aanwezigheid van 16 µM runderserumalbumine om eventuele vrije vetzuren te binden die tijdens de pre-incubatie uit synaptosomen vrijkomen. Een aliquot van 2-ml van de synaptosomen werd overgebracht naar een geroerde cuvette die 2 mM NADP plus, 50 eenheden glutamaatdehydrogenase en 1,2 mM CaCl2 bevatte, en de FL-fluorescentie van NADPH werd gemeten in een Perkin-Elmer LS{{ 14}} spectrofluorimeter (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, VS) bij excitatie- en emissiegolflengten van respectievelijk 340 en 460 nm. Omdat synaptosomen niet vatbaar zijn voor elektrische stimulatie, werd de kaliumkanaalblokker 4-aminopyridine gebruikt om de afgifte van glutamaat te stimuleren. 4-aminopyridine destabiliseert de membraanpotentiaal en er wordt aangenomen dat het repetitieve spontane Na- plus kanaalafhankelijke depolarisatie veroorzaakt die de in vivo depolarisatie van de synaptische terminal dicht benadert, wat leidt tot de activering van spanningsafhankelijke Ca2 plus-kanalen en afgifte van neurotransmitters [47 ]. Gegevens werden verkregen met intervallen van 2 s. Aan het einde van elk experiment werd een standaard exogeen glutamaat (5 nmol) toegevoegd. De waarde van de FL-fluorescentieverandering geproduceerd door de standaardadditie werd gebruikt om het vrijgekomen glutamaat te berekenen als nanomol glutamaat per milligram synaptosomaal eiwit (nmol/mg). Vrijgiftewaarden die in de tekst worden vermeld, zijn niveaus die na 5 min depolarisatie (nmol/mg/5 min) bij steady-state worden bereikt. Cumulatieve gegevens werden geanalyseerd met behulp van Lotus 1-2-3-spreadsheets (IBM, White Plains, NY, VS) en MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, VS).

4.5. Plasmamembraan potentieel

De plasmamembraanpotentiaal werd bepaald met een membraanpotentiaalgevoelige kleurstof, DiSC3(5) [48]. Synaptosomen werden opnieuw gesuspendeerd in HEPES-buffermedium en aliquots van 2 ml werden overgebracht naar een geroerde cuvet met 5 µM DiSC3(5) bij 37 °C in een Perkin-Elmer LS-55-spectrofluorometer (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, VS). Nadat het mengsel 3 minuten in evenwicht was gebracht, werd de FL-fluorescentie bepaald bij excitatie- en emissiegolflengten van respectievelijk 646 en 674 nm. Gegevens werden verzameld met tussenpozen van 2 s. Cumulatieve gegevens werden geanalyseerd met behulp van MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, VS) en uitgedrukt in FL-fluorescentie-eenheden.

4.6. Cytosolische Ca2 plus Concentratie ([Ca2 plus ]C)

De [Ca2 plus ]C werd gemeten met de Ca2 plus indicator fura-2. Synaptosomen (0,5 mg/ml) werden voorgeïncubeerd in HEPES-buffermedium met 5 µM fura-2 en 0,1 mM CaCl2, gedurende 30 minuten bij 37 °C in een geroerde test buis. Na het laden van fura-2 werden synaptosomen 30 seconden gecentrifugeerd in een microcentrifuge bij 3000 g (5000 rpm). De synaptosomale pellets werden opnieuw gesuspendeerd in een HEPES-buffermedium en de synaptosomale suspensie werd geroerd in een gethermostateerde cuvet in een Perkin-Elmer LS -55 spectrofluorometer (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, VS). CaCl2 (1 mM) werd toegevoegd na 3 min en verdere toevoegingen werden gedaan na nog eens 10 min. Fluorescentiegegevens werden verzameld bij excitatiegolflengten van 340 en 380 nm (emissiegolflengte 505 nm) met intervallen van 2 s. [Ca2 plus]C (nM) werd berekend met behulp van kalibratieprocedures [49] en eerder beschreven vergelijkingen [50]. Cumulatieve gegevens werden geanalyseerd met behulp van MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, VS).

4.7. Western-blotting

Synaptosomen werden gehomogeniseerd in een lysisbuffer (10 mM HEPES-buffer, pH 7,4), 1% Triton X-100 en een proteaseremmermengsel. Lysaten werden geklaard door centrifugeren en de eiwitconcentratie werd bepaald met behulp van een eiwittestkit (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, VS). Gelijke hoeveelheden eiwitten werden gescheiden door natriumdodecylsulfaat-polyacrylamidegelelektroforese (SDS-PAGE) en overgebracht naar het nitrocellulosemembraan. De membranen werden geblokkeerd met Tris-gebufferde zoutoplossing die 5 procent magere melk bevatte en 's nachts geïncubeerd met geschikt primair antilichaam (fosfo-eiwitkinase C (pan), 1: 3000, NOVUS Biologicals Inc., Beverly, MA, VS). 4 C. Na drie wassingen in met Tris gebufferde zoutoplossing werd het membraan vervolgens gedurende 1 uur bij kamertemperatuur behandeld met het secundaire met mierikswortelperoxidase geconjugeerde antilichaam (1:3000). De membranen werden vervolgens ten minste drie keer gewassen met Tris-gebufferde zoutoplossing en zichtbaar gemaakt met behulp van het verbeterde chemiluminescentiesysteem (Amersham, Buckinghamshire, VK). Een hoeveelheid monsters werd geladen en onderzocht met een anti-PKC-antilichaam voor de detectie van PKC als laadcontrole. Het niveau van expressie of fosforylering werd bepaald door banddichtheid, die werd gekwantificeerd door densitometrie. Densitometrische kwantificering van banden werd geanalyseerd met behulp van Syngene-software (Synoptics, Cambridge, VK).

4.8. Statistische analyse

Gegevens werden verkregen van een enkel synaptosomaal preparaat en waren niet onafhankelijk van elkaar. Om de significantie van het effect van een medicijn versus controle te testen, werd een tweezijdige Student's t-test gebruikt. Wanneer een aanvullende vergelijking nodig was (bijvoorbeeld of een tweede behandeling de werking van echinacoside beïnvloedde), werd een eenrichtings-ANOVA gevolgd door de Tukey-test gebruikt. Analyse werd voltooid via software SPSS (17.0; SPSS Inc., Chicago, IL, VS). Gegevens worden uitgedrukt als gemiddelde ˘ SEM; significantie werd geëvalueerd bij p < 0.05="" voor="" alle="" statistische="">

5. Conclusies

Dit is de eerste studie die aantoont datechinacosideremt de afgifte van glutamaat uit de cerebrocorticale synaptosomen van de rat door de instroom van Ca2 plus via de Cav2.2- en Cav2.1-kanalen te verminderen, en deze remming van de afgifte is waarschijnlijk afhankelijk van de onderdrukking van de proteïnekinase C-route, althans gedeeltelijk. De huidige bevinding is waardevol omdat het een nieuw inzicht geeft in de werkingsmechanismen van echinacoside in de hersenen.

Dankbetuigingen:Dit werk werd ondersteund door een subsidie ​​van het ministerie van Wetenschap en Technologie (MOST 103-2320-B-030-001 MY3).

Auteursbijdragen:Tzu Yu Lin en Su Jane Wang bedachten en ontwierpen de experimenten; Cheng Wei Lu voerde de experimenten uit; Cheng Wei Lu en Shu Kuei Huang analyseerden de gegevens; Su Jane Wang schreef de krant.

Belangenverstrengeling:De auteurs verklaren geen belangenconflicten.

Belangenverstrengeling: De auteurs verklaren geen belangenverstrengeling.

Referenties

1. Tu, PF; Wang, B.; Deyama, T.; Zhang, ZG; Lou, ZC Analyse van fenylethanoïde glycosiden vanHerba cistanchedoor RP-HPLC. Acta Pharm. Zonde. 1997, 32, 294-300.

2. Dalby-Brown, L.; Barrett, H.; Landbo, AK; Meyer, AS; Molgaard, P. Synergetische antioxidatieve effecten van alkamiden, cafeïnezuurderivaten en polysacharidefracties van Echinacea purpurea op in vitro oxidatie van menselijke lipoproteïnen met lage dichtheid. J. Agric. Voedsel Chem. 2005, 53, 9413-9423. [CrossRef] [PubMed]

3. Dapas, B.; Dall'Acqua, S.; Bulla, R.; Agostinis, C.; Perissutti, B.; Invernizzi, S.; Grassi, G.; Voinovich, D. Immunomodulatie gemedieerd door een kruidensiroop die een gestandaardiseerd Echinacea-wortelextract bevat: een pilotstudie bij gezonde mensen naar cytokine-genexpressie. Fytogeneeskunde 2014, 21,1406-1410. [CrossRef] [PubMed]

4. Hij, WJ; Fang, TH; Tu, PF Onderzoeksvooruitgang op farmacologische activiteiten van echinacoside. China J. Chin. Mater. Med. 2009, 34, 476-479.

5. Deng, M.; Zhao, JY; Tu, PF.; Jiang, Y; Li, ZB; Wang, YH Echinacoside redt de SHSY5Y-neuroncellen van door TNFalpha geïnduceerde apoptose. EUR. J. Pharmacol. 2004, 505,11-18. [CrossRef] [PubMed]

6. Koo, KA; Gezongen, SH; Park, JH; Kim, SH; Lee, Kentucky; Kim, YC In vitro neuroprotectieve activiteiten van fenylethanoïde glycosiden van Callicarpa dichotoma. Planta Med. 2005, 71, 778-780. [CrossRef] [PubMed]

7. Wang, YH; Xuan, ZH; Tian, ​​S.; Du, GH Echinacoside Beschermt tegen 6-Hydroxydopamine-geïnduceerde mitochondriale disfunctie en ontstekingsreacties in PC12-cellen door de ROS-productie te verminderen. Evid. Gebaseerd complement. alternatief. Med. 2015, 2015, 189239. [CrossRef] [PubMed]

8. Zhu, M.; Lu, C.; Li, W. Tijdelijke blootstelling aan echinacoside is voldoende om Trk-signalering te activeren en neuronale cellen te beschermen tegen rotenon. J. Neurochem. 2013,124, 571-580. [CrossRef] [PubMed]

9. Geng, X.; Tian, ​​X.; Tu, P.; Pu, X. Neuroprotectieve effecten van echinacoside in het muis MPTP-model van de ziekte van Parkinson. EUR. J. Pharmacol. 2007, 564, 66-74. [CrossRef] [PubMed]

10. Wei, LL; Chen, H.; Jiang, Y; Tu, PF.; Zhong, M.; Du, J.; Liu, F.; Wang, L.; Liu, CY Effecten van echinacoside op histiocentrale niveaus van actieve massa bij ratten met occlusie van de middelste hersenslagader. biomed. omgeving. Wetenschap. 2012, 25, 238-244. [PubMed]

11. Wu, CR; Lin, HC; Su, MH Omkering door waterige extracten vanCistanche tubulosavan gedragstekorten in het Alzheimer-achtige ratmodel: relevantie voor amyloïde afzetting en centrale neurotransmitterfunctie. BMC-complement. alternatief. Med. 2014, 14, 202. [CrossRef] [PubMed]

12. Zhao, Q.; Gao, J.; Li, W.; Cai, D. Neurotrofe en neurorescue-effecten van Echinacoside in het subacute MPTP-muismodel van de ziekte van Parkinson. Hersenonderzoek. 2010, 1346, 224-236. [CrossRef] [PubMed]

13. Meldrum, BS Glutamaat als neurotransmitter in de hersenen: een overzicht van fysiologie en pathologie. J. Nutr. 2000, 130, 1007S-1015S. [PubMed]

14. Lee, D.; Shim, MS; Kim, Kentucky; Nee, YH; Kim, H.; Kim, SY; Weinreb, RN; Ju, WK Co-enzym Q10 remt glutamaat-excitotoxiciteit en oxidatieve stress-gemedieerde mitochondriale verandering in een muismodel van glaucoom. Onderzoek. Oftalmol. Zicht. Wetenschap. 2014, 55, 993-1005. [CrossRef] [PubMed]

15. Choi, DW Calcium en excitotoxisch neuronaal letsel. Ann. NY Acad. Wetenschap. 1994, 747,162-171. [CrossRef] [PubMed]

16. Lau, A.; Tymianski, M. Glutamaatreceptoren, neurotoxiciteit en neurodegeneratie. Pflugers. Boog. 2010, 460, 525-542. [CrossRef] [PubMed]

17. Sattler, R.; Tymianski, M. Moleculaire mechanismen van glutamaatreceptor-gemedieerde excitotoxische neuronale celdood. Mol. neurobiol. 2001, 24, 107-129. [Kruisref]

18. Schauwecker, PE Neuroprotectie door glutamaatreceptorantagonisten tegen door aanvallen geïnduceerde excitotoxische celdood in de verouderende hersenen. Exp. neurol. 2010, 224, 207-218. [CrossRef] [PubMed]

19. Yeganeh, F.; Nikkht, F.; Bahmanpoui; S.; Rastegar, K.; Namavar, R. Neuroprotectieve effecten van NMDA en groep I metabotrope glutamaatreceptorantagonisten tegen neurodegeneratie geïnduceerd door homocysteïne in de hippocampus van de rat: in vivo onderzoek. J. Mol. neurosci. 2013, 50, 551-557. [CrossRef] [PubMed]

20. Doble, A. De rol van excitotoxiciteit bij neurodegeneratieve ziekte: implicaties voor therapie. Pharmacol. daar. 1999, 81,163-221. [Kruisref]

21. Muir, KW Op glutamaat gebaseerde therapeutische benaderingen: klinische onderzoeken met NMDA-antagonisten. Curr. Opin. Pharmacol. 2006, 6, 53-60. [CrossRef] [PubMed]

22. Gonzalez, JC; Egea, J.; del Carmen Godino, M.; Fernandez-Gomez, FJ; Sanchez-Prieto, J.; Gandia, L.; Garcia, AG; Jordan, J.; Hernandez-Guijo, JM Neuroprotectant minocycline onderdrukt glutamaterge neurotransmissie en Ca2 plus-signalering in hippocampale neuronen. EUR. J. Neurosci. 2007, 26, 2481-2495. [CrossRef] [PubMed]

23. Lu, CW; Lin, TY; Wang, SJ Memantine onderdrukt glutamaatafgifte door remming van spanningsafhankelijke Ca2 plus-invoer en proteïnekinase C in zenuwuiteinden van de hersenschors van de rat: een NMDA-receptoronafhankelijk mechanisme. Neurochem. Int. 2010, 57,168-176. [CrossRef] [PubMed]

24. Wang, SJ; Sihra, TS Niet-competitieve metabotrope glutamaat 5-receptorantagonist (E)-2-methyl-6- styryl-pyridine (SIB1893) onderdrukt de glutamaatafgifte door remming van spanningsafhankelijke Ca2 plus-invoer in de cerebrocorticale zenuwuiteinden van de rat (synaptosomen). J. Pharmacol. Exp. daar. 2004, 309, 951-958. [CrossRef] [PubMed]

25. Dunkley, PR.; Jarvie, PE; Heide, JW; Kidd, GJ; Rostas, JA Een snelle methode voor het isoleren van synaptosomen op Percoll-gradiënten. Hersenonderzoek. 1986, 372,115-129. [Kruisref]

26. Araque, A.; Li, N.; Doyle, RT; Haydon, PG SNARE eiwitafhankelijke glutamaatafgifte uit astrocyten. J. Neurosci. 2000, 20, 666-673. [PubMed]

27. Dunlop, J. Op glutamaat gebaseerde therapeutische benaderingen: gericht op het glutamaattransportsysteem. Curr. Opin. Pharmacol. 2006, 6,103-107. [CrossRef] [PubMed]

28. Zucchi, R.; Ronca-Testoni, S. Het sarcoplasmatisch reticulum Ca2 plus kanaal / ryanodinereceptor: modulatie door endogene effectoren, medicijnen en ziektetoestanden. Pharmacol. Rev. 1997, 49,1-51. [PubMed]

29. Ventilator, Y.; Li, J.; Zhang, YQ; Jiang, LH; Zhang, YN; Yan, CQ Eiwitkinase C delta gemedieerde cytotoxiciteit van 6-Hydroxydopamine via aanhoudende extracellulaire signaal-gereguleerde kinase 1/2-activering in PC12-cellen. neurol. Onderzoek 2014, 36, 53-64. [CrossRef] [PubMed]

30. Gschwendt, M.; Müller, HJ; Kielbassa, K.; Zang, R.; Kittstein, W.; Rincke, G.; Marks, F. Rottlerin, een nieuwe proteïnekinaseremmer. Biochem. Biofysica. Onderzoek gemeenschappelijk 1994, 199, 93-98. [CrossRef] [PubMed]

31. Nicholls, DG; Sihra, TS; Sanchez-Prieto, J. Calciumafhankelijke en onafhankelijke afgifte van glutamaat uit synaptosomen gevolgd door continue fluorometrie. J. Neurochem. 1987, 49, 50-57. [CrossRef] [PubMed]

32. Nicoll, RA De koppeling van neurotransmitterreceptoren aan ionkanalen in de hersenen. Wetenschap 1988, 241, 545-551. [CrossRef] [PubMed]

33. Wu, LG; Saggau, P. Presynaptische remming van opgewekte afgifte van neurotransmitters. Trends Neurosci. 1997, 20, 204-212. [Kruisref]

34. Turner, TJ; Dunlap, K. Farmacologische karakterisering van presynaptische calciumkanalen met behulp van subseconde biochemische metingen van synaptosomale neurosecretie. Neurofarmacologie 1995, 34, 1469-1478. [Kruisref]

35. Millan, C.; Sanchez-Prieto, J. Differentiële koppeling van N- en P / Q-type calciumkanalen aan glutamaat-exocytose in de hersenschors van de rat. neurosci. Let. 2002, 330, 29-32. [Kruisref]

36. Vazquez, E.; Sanchez-Prieto, J. Presynaptische modulatie van glutamaatafgifte richt zich op verschillende calciumkanalen in cerebrocorticale zenuwuiteinden van ratten. EUR. J. Neurosci. 1997, 9, 2009-2018. [CrossRef] [PubMed]

37. Lang, P; Mercer, A.; Begum, R.; Stephens, GJ; Sihra, TS; Jovanovic, JN zenuwterminale GABAA-receptoren activeren Ca2 plus/Calmoduline-afhankelijke signalering om spanningsafhankelijke Ca2 plus instroom en glutamaatafgifte te remmen. J. Biol. Chem. 2009,284, 8726-8737. [CrossRef] [PubMed]

38. Turner, Jr; Hoek, JM; Zwart, ED; Joyal, JL; Zakken, DB; Madara, JL PKC-afhankelijke regulatie van transepitheliale resistentie: rollen van MLC en MLC-kinase. Ben. J. Fysiol. 1999, 277, C554-C562. [PubMed]

39. Vaughan, PF; Walker, JH; Peters, C. De regulatie van neurotransmittersecretie door proteïnekinase C. Mol. neurobiol. 1998, 18, 125-155. [CrossRef] [PubMed]

40. Coffey, ET; Sihra, TS; Nicholls, DG; Pocock, JM Fosforylering van synapsine I en MARCKS in zenuwuiteinden wordt gemedieerd door Ca2 plus binnenkomst via een Aga-GI gevoelig Ca2 plus kanaal dat gekoppeld is aan glutamaat exocytose. FEBS Lett. 1994, 353, 264-268. [Kruisref]

41. Obrenovitch, TP; Urenjak, J. Veranderde glutamaterge transmissie bij neurologische aandoeningen: van hoog extracellulair glutamaat tot overmatige synaptische werkzaamheid. prog. neurobiol. 1997, 51, 39-87. [Kruisref]

42. Zhang, D.; Li, H.; Wang, JB Echinacoside remt amyloïde fibrillatie van HEWL en beschermt tegen door Ap geïnduceerde neurotoxiciteit. Int. J. Biol. Macromol. 2015, 72, 243-253. [CrossRef] [PubMed]

43. Lin, TY; Lu, CW; Wang, CC; Lu, JF; Wang, SJ Hispidulin remt de afgifte van glutamaat in de cerebrocorticale zenuwuiteinden van de rat. Toxicol. toepassing Pharmacol. 2012, 263, 233-243. [CrossRef] [PubMed]

44. Chang, CY; Lin, TY; Lu, CW; Huang, SK; Wang, YC; Chou, SS; Wang, SJ Hesperidine remt de afgifte van glutamaat en oefent neuroprotectie uit tegen excitotoxiciteit veroorzaakt door kaïnezuur in de hippocampus van ratten. Neurotoxicologie 2015,2015,157-169. [CrossRef] [PubMed]

45. Nicholls, DG; Sihra, TS Synaptosomen bezitten een exocytotische pool van glutamaat. Natuur 1986, 321, 772-773. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Wang, CC; Kuo, Jr; Wang, SJ Dimebon, een antihistaminicum, remt de afgifte van glutamaat in de cerebrocorticale zenuwuiteinden van de rat. EUR. J. Pharmacol. 2014, 734, 67-76. [CrossRef] [PubMed]

47. Tibbs, GR; Barry, AP; van Mieghem, FJ; Mc Mahon, HT; Nicholls, DG Herhaalde actiepotentialen in geïsoleerde zenuwuiteinden in aanwezigheid van 4-aminopyridine: effecten op cytosolvrij Ca2 plus en glutamaatafgifte. J. Neurochem. 1989,53,1693-1699. [CrossRef] [PubMed]

48. Akerman, KE; Scott, LG; Heikkila, JE; Heinonen, E. Ionische afhankelijkheid van membraanpotentiaal en glutamaatreceptor-gekoppelde reacties in synaptoneurosomen zoals gemeten met een cyaninekleurstof, DiSC2 (5). J. Neurochem. 1987, 48, 552-559. [CrossRef] [PubMed]

49. Sihra, TS; Bogonez, E.; Nicholls, DG Gelokaliseerde Ca2 plus-invoer beïnvloedt bij voorkeur eiwitdefosforylering, fosforylering en glutamaatafgifte. J. Biol. Chem. 1992, 267,1983-1989. [PubMed]

50. Grynkiewicz, G.; Poënie, M.; Tsien, RY Een nieuwe generatie Ca2 plus-indicatoren met sterk verbeterde fluorescentie-eigenschappen. J. Biol. Chem. 1985, 260,3440-3450. [PubMed]