DEEL Ⅱ: Rol van menselijke primaire nierfibroblasten in TGF- 1-Gemedieerde fibrose-nabootsende apparaten

Contactpersoon: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

DEEL Ⅱ: Rol van menselijke primaire nierfibroblasten in TGF- 1-Gemedieerde fibrose-nabootsende apparaten

Seong-Hye Hwang, Yun-Mi Lee & et al.

Abstract

Nierfibroseis een progressieve chronische nierziekte die uiteindelijk leidt tot nierfalen in het eindstadium. Ondanks verschillende benaderingen om te bestrijdennierfibrose, is een experimenteel model om momenteel beschikbare medicijnen te evalueren niet ideaal. We hebben b-nabootsende modellen ontwikkeld met behulp van driedimensionale (3D) co-cultuurapparaten die zijn ontworpen met drie afzonderlijke lagen van tubulus interstitium, namelijk epitheliale, fibroblastische en endotheliale lagen. We introduceerden humane renale proximale tubulaire epitheelcellen (HK-2), humane endotheelcellen van de navelstrengader en van de patiënt afgeleide renale fibroblasten, en evalueerden de effecten vanttransformerende groeifactor- (TGF-)enTGF-behandeling met remmers hieropnierfibrosemodel. De uitdrukking van defibrosemarker alfa-gladde spier actine opTGF- 1behandeling werd uitgebreid in monolaag-gekweekte HK-2-cellen in een 3D-ziektemodel. In het vasculaire compartiment vannierfibrosemodellen, de dichtheid van vaten werd verhoogd en verlaagd in deTGF--behandelde groep enTGF--remmerbehandelingsgroep, respectievelijk. Multiplex ELISA met behulp van supernatanten in deTGF--stimulerende 3D-modellen toonden aan dat pro-inflammatoire cytokine- en groeifactorniveaus waaronder interleukine-1 bèta, tumornecrosefactor-alfa, basale fibroblastgroeifactor enTGF- 1, TGF- 2, enTGF- 3waren verhoogd, wat de fibrotische micro-omgeving van menselijke nieren nabootste. Deze studie kan de constructie van een mens mogelijk makennierfibrose- apparaatmodel nabootsen dat verder gaat dan traditionele cultuurexperimenten.

Trefwoorden: nierfibroblast; fibrose; TGF- 1

gezondheidsvoordelen van cistanche tubolosa: behandeling van chronische nierziekten

KLIK HIER OM DEEL TE NEMEN

3. Discussie

TGF- 1speelt een belangrijke rol bij matrixaccumulatie bij renale fibrogenese en remt de proliferatie in de meeste cellen, waaronder glomerulaire epitheel- en endotheelcellen, evenals tubulaire epitheelcellen 【1】. TGF-ß1 induceert echter proliferatie in menselijke nierfibroblasten via inductie van basische fibroblastgroeifactor (FGF-2) [8].

In de huidige studie hebben we eenfibrose-het nabootsen van een apparaat dat drie essentiële cellulaire componenten gebruikt, waaronder menselijke primaire nierfibroblasten, tubulaire epitheelcellen van de nieren en menselijke endotheelcellen, en evalueerde het als eennierfibrosemodel gebaseerd opTGF- 1stimulatie. Genererennierfibrose-on-a-chip hebben we een nieuw 3D-kweeksysteem opgezet dat is ontworpen met drie afzonderlijke delen van weefsel, met als doel obstakels te overwinnen die verband houden met nierziektemodellering. Onze studie toonde aan datTGF- 1geïnduceerde cellulaire reacties, waaronder tubulaire epitheliale-mesenchymale overgang (EMT) van epitheelcellen, microvasculaire verandering van endotheelcellen en cytokineveranderingen in renale fibroblasten. Dit is de eerste studie die eenfibrose- nabootsend hulpmiddel bestaande uit primaire fibroblasten afkomstig van menselijke nieren en gestimuleerde fibroblasten geïsoleerd uit patiënten metTGF- 1, een bekende inductor van fibrotische reacties die over het algemeen wordt gebruikt als de standaard omfibrosein celculturen [9]. Deze resultaten suggereren datTGF- 1-behandelde epitheelcellen worden omgezet in een mesenchymaal celachtig fenotype. WanneerTGF- 1wordt toegediend aan fibroblasten, worden verschillende cytokinen gewijzigd om de inductie van fibrotische processen weer te geven. Het is duidelijk dat in denierfibrosemodel zijn fibroblasten de belangrijkste kracht achter de ontwikkeling van het gevestigde kweeksysteem door middel van TGF-stimulatie.

Davis et al, rapporteerden dat de 3D-cultuur van endotheelcellen voldoende is om de cellen binnen te dringen en een lumen- en buisnetwerk te vormen, in navolging van een intact organisme in vivo [10,11]. Verschillende groepen hebben gemeld dat 3D-cultuurmodellen hogere niveaus van nefrotoxiciteit vertonen dan 2D-celcultuurmodellen [12]. Bovendien was de expressie van nefrotoxiciteit- en ontstekingsgerelateerde genen significant hoger in het renale 3D-celcultuurmodel dan in een typische 2D-cultuur [13].

In deze studie hebben de cultuurmedia van menselijkenierfibrose-on-a-chip had een significant hoger niveau van cytokines vergeleken met dat in 2Dculture. Onze groep heeft aangetoond dat van de patiënt afkomstige fibroblasten inheemse nierweefsels kunnen recreëren, inclusief endotheliale en epitheliale cellagen, door onze voorgesteldefibrose-op-een-chip-model. Bijgevolg geven deze bevindingen aan dat denierfibrose-on-a-chip model simuleert nauwkeurig de microfysische omgeving van de menselijke nier. Omdat de in de chip gekweekte fibroblasten bovendien afkomstig zijn van patiënten, kunnen andere klinisch relevante patiëntmodellen eenvoudig en duidelijk op een veilige manier worden verkregen. Daarom is de mensnierfibrose-on-a-chip modelsysteem kan de ontwikkeling van gepersonaliseerde geneeskunde mogelijk maken met gevoelige metingen van epitheliale en endotheliale functies. In onze experimenten,fibroseen angiogenese waren verminderd in deTGF-met remmer behandelde groepen. TGF-remmers zijn natuurlijke antagonisten van TGF-, die zijn aangetoond met behulp van verschillende nierziektemodellen. Het lijkt mogelijk om experimenten uit te voeren om de effectiviteit van behandeling te bevestigen in ziektemodellen met therapeutische middelen zoals deze TGF-remmer. Daarom heeft deze chip een middel opgeleverd om een ​​verbeterd model van nierfibrose te ontwikkelen om celmorfologie en -functie te meten en kan het nuttig zijn bij het uitvoeren van nefrotoxiciteitsbeoordelingen voor geneesmiddelen.

TGF-is de belangrijkste profibrotische factor bij verschillende nierziekten [14] en speelt een rol bij angiogenese [15]. De angiogene effecten van TGF- zijn zeer complex en kunnen proangiogene of antiangiogene activiteit hebben, afhankelijk van de setting en verschillende regulerende factoren [16]. Angiogene groeifactoren zoals VEGF en FGF-2induceren angiogenese in vivo lijken een centrale rol te spelen bij de modulatie van angiogenese in vivo [17-20]. Er zijn aanwijzingen dat deze twee factoren synergetisch kunnen werken om morfogenetische gebeurtenissen van endotheelcellen te bevorderen [21,22]. We hebben bewijs geleverd dat VEGF-mRNA-expressie en FGF-2-eiwitsecretie significant verhoogd zijn door TGF- 1 in 3D-chips in vergelijking met 2D-cultuur.

De beperking van onzefibrosemodellen kunnen zijn dat ze zijn gemaakt in een relatief korte tijdsperiode, 24 uur. TGF-bèta heeft binnen een vroeg stadium pro-fibrotische en ontstekingsremmende eigenschappenfibroseproces, niet in het chronische proces. conventioneel,TGF-is voornamelijk gebruikt in door cytokine geïnduceerdefibrosemodellen. Aangezien echter slechts één cytokine in vivo niet kan worden weergegeven,fibroseinductiemodellen die verschillende aanvullende kandidaat-stoffen gebruiken, zoals:TGF-en BMP7 zijn voorgesteld. Twee of drie cytokinen zijn echter nog steeds niet voldoende om in vivo te reproduceren. We gebruiktenTGF-als uitgangspunt; we hebben echter geprobeerd een in vivo micro-omgeving op de chip te implementeren door een meer diverse cytokinestorm te induceren. Fibroblast, een belangrijke cellulaire component vanfibrose, werd geïntroduceerd, en secundaire stimulatie van meer diverse cytokinen (IL-1 , TNF- , b-FGF,TGF- 1, TGF-2, enTGF-3) werd geïnduceerd in fibroblasten gestimuleerd metTGF-. Dus een omgeving die lijkt op:fibrosein het menselijk lichaam werd gereproduceerd.

cistanche deserticola-extract: behandeling van nierziekten

4. Materialen en methoden

4.1.Celculturen

Kidney fibroblasts(KFs)were isolated from biopsies of the normal tissue portion of renal cell carcinoma patients with an estimated glomerular filtration rate (eGFR)>60 ml/minuut/1,73 m2 nadat patiënten toestemming hadden gegeven voor een tweede biopsie voor onderzoeksdoeleinden. KF's werden gekweekt in een fibroblastgroeimedium (FGM-2, Lonza, Zwitserland) en passages 3 tot 4 werden voor de experimenten gebruikt. Nierfibroblasten werden 1-2 weken uit de kweek geschraapt totdat de cellen een monolaag vormden. Om epitheelcellen die de kweek verontreinigen te elimineren, werden fibroblasten geselecteerd met behulp van magnetische anti-fibroblastparels (Miltenyi Biotec Inc., Auburn, CA, VS) na de eerste passage. Cellen werden losgemaakt met behulp van 0. 05 procent trypsine-ethyleendiaminetetra-azijnzuur (EDTA) (Welgene, Gyeongsan, Korea), geïncubeerd met anti-fibroblastkorrels en gescheiden met behulp van een magnetische kolom, en de stroom- door werd verzameld. De gezuiverde primaire fibroblasten werden gekarakteriseerd door fluorescentie-geactiveerde celsortering (FACS) analyse met gebruikmaking van PE-geconjugeerde anti-fibroblast-antilichamen. De zachte magnetische geactiveerde celsortering (MACS) Dissociator werd gebruikt voor het voorzichtig hakken van nierweefsel. Een Octo MACSTM Magnetic Separator met MACS LS-kolommen (met plunjers) toegepast voor de zuivering van met microbolletjes gelabelde cellen werd gekocht bij Miltenyi Biotec Inc. (Auburn, CA, VS). Zachte MACS C-buizen (Miltenyi Biotec Inc., Auburn, CA, VS) werden gebruikt voor het fijnhakken van de nieren voor celscheiding. MACS Smart Strainers (70 um) werden verkregen van Miltenyi Biotec Inc. (Auburn, CA, VS). Kolombuffer werd gebruikt om kolommen te wassen en celpellets te resuspenderen. De buffer werd bereid als een oplossing die 0,5 procent runderserumalbumine (BSA) met 2 mM EDTA in fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) (pH 7,4) bevat en gekocht bij Miltenyi Biotec Inc. (Auburn, CA, VS). Groene fluorescerende eiwit tot expressie brengende menselijke navelstrengader endotheelcellen (GFP-HUVEC's, Lonza, Zwitserland) werden gekweekt in endotheliaal groeimedium (EGM -2, Lonza, Zwitserland) en cellen in passages 3 tot 4 werden gebruikt. Humane proximale tubulaire cellijn (humane nier-2(HK-2) cellen werden verkregen van de American Type Culture Collection (ATCC) De cellijn werd gekweekt in hoog-glucose Dulbecco's gemodificeerd Eagle's medium (DMEM) aangevuld met 10 procent foetaal runderserum (FBS), penicilline (100 U / ml) en streptomycine (100 ug / ml). Reagentia werden gekocht bij Gibco (Rockville, MD, VS). Alle cellen werden losgemaakt met behulp van 0,05 procent trypsine- EDTA en bewaard in een bevochtigde incubator bij 37 graden en 5 procent CO2. KF's werden opnieuw gesuspendeerd in FGM-2 bij een celconcentratie van 4 x 10 graden cellen/ml. Menselijke niertubulaire epitheelcellen (HK{{49 }}) werden opnieuw gesuspendeerd in een concentratie van 2×10 graden cellen/ml in hoog-glucose DMEM. GFP-HUVEC's werden opnieuw gesuspendeerd in een concentratie van 2×10 graden cellen/ml in EGM-2.

4.2.Reagentia

De matrix was samengesteld uit fibrinegels, waaronder commercieel verkrijgbaar fibrinogeen uit runderplasma, aprotinine uit runderlong en trombine uit runderplasma. De bovengenoemde drie materialen zijn gekocht bij Sigma (St. Louis, MO, VS). Fibrinogeen werd opgelost in lxPBS in een waterbad (37°C) gedurende 30 min bij een concentratie van 10 mg/ml. Trombine en aprotinine werden opgelost in gedeïoniseerd water in een concentratie van 50 eenheden/ml en 4 TIU/ml. De drie oplossingen werden gesteriliseerd door te filtreren door een filter van 0,22 m. Recombinant mensTGF- 1werd verkregen van PeproTech EC Ltd. (Londen, VK). Een specifieke remmer van TGF-bèta-receptorkinase, SB431542, werd gekocht bij Tocris Cookson, Inc. (Ellisville, MO, VS).

4.3. Celpatronen in het apparaat

Vóór het zaaien van cellen om een ​​hechte hechting te vergemakkelijken, werd het apparaat gedurende 1 minuut behandeld in een plasmamachine (Femto Science Inc., Suwon, Korea) met een vermogen van 7 0 W, 50 Hz. Door plasmabehandeling geïnduceerde hydrofiliciteit van het oppervlak en hielp bij het vergemakkelijken van gelpatronen en het laden van media. Om veranderingen in hydrofiliciteit te voorkomen, werden experimenten uitgevoerd binnen 30 minuten na plasmabehandeling. Verschillende cellulaire patronen binnen de apparaten kunnen op een zeer aanpasbare manier worden gedaan. Het was belangrijk om vooraf de samenstelling en concentratie van de verschillende celtypes te bepalen. Voor cellulaire hydrogelsuspensies werden 37,5 L celsuspensie en een gescheiden aliquot van 12,5 L 10 mg/ml fibrinogeenoplossing (250 μL 10 mg/ml fibrinogeenoplossing met 40 μL 4 TIU/ml aprotinine) bereid om onmiddellijk te worden gemengd voor het laden. Onmiddellijk voorafgaand aan het laden werd de 37,5 L celsuspensie gemengd met 12,5 L 10 mg/mL fibrinogeen tot gehomogeniseerd. De 50 µl hydrogel werd gemengd met een druppel van 1 µl trombine (0,5 eenheid/ml). Onmiddellijk na het mengen werd trombine met een fibrinesuspensie van GFP-HUVEC's (celconcentratie van 2 x 10' cellen/mL) in de buitenrand van het buitenste kanaal geïnjecteerd (Figuur 3, Gel A). We wachtten 3 minuten totdat de verknoping van fibrinogeen volledig was. Onmiddellijk na het mengen werd trombine met een fibrinesuspensie van KF's (celconcentratie van 4 x 10 graden cellen/ml) aan elke kant van de reservoirbodem per putje geplaatst (Figuur 3, Gel C). Deze fibrinesuspensie van KF's mocht gedurende 3 minuten bij kamertemperatuur verknopen. Een celsuspensie van 10 L menselijke renale proximale tubulaire epitheelcellen (HK-2) werd geïnjecteerd in de injectiepoort van het binnenkanaal (Figuur 3, Gel B). Om HK-2 aan de wand van de fibrinegel in het GFP-HUVECs-kanaal, werd het apparaat 90 graden gedraaid en in de 5 procent CO2 geplaatst, een incubator gedurende 30 minuten bij 37 graden. De HK-2 zette zich neer en vormde een cellaag aan de zijkant van de fibrinegel.

Na het bevestigen van de HK-2, was het apparaat gevuld met EGM-2. Het apparaat werd gedurende 3 dagen bij 37 graden geïncubeerd in een incubator van 5 procent CO. Het medium is veranderd met of zonder 5ng/mLTGF- 1en met 5ng/mLTGF- 1en 10 umTGF- 1remmer na drie dagen incubatie (Figuur 3).

wat is cistanche?

4.4. immunocytofluorescentie

Samengekweekte weefsels in het apparaat werden gedurende 2 0 minuten gefixeerd met 4 procent (g / v) paraformaldehyde-oplossing (Biosesang, Seongnam, Korea) in PBS (Welgene, Gyeongsan, Korea) gedurende 2 0 minuten, gevolgd door permeabilisatie met een 20 min onderdompeling in 0,15 procent Triton X-100 (Sigma, St.Louis, MO, VS). De monsters werden vervolgens gedurende 1 uur behandeld met 3 procent BSA (Sigma, VS). De cellen werden geïncubeerd met antilichamen die waren gekocht bij Abcam. De primaire antilichamen waren anti-cytokeratine 8 en anti-o-SMA, gedurende 2 dagen bij kamertemperatuur (RT) gelaten. Alexa Fluor 647 geconjugeerd ezel-anti-konijn IgG (H plus L) werd gebruikt als het secundaire antilichaam. DNA-labeling werd uitgevoerd met een 1: 250 verdunning van Hoechst33342 (Thermo Scientific, Rockford, IL, VS) gedurende 3 uur bij kamertemperatuur. Beelden werden verzameld met behulp van een Zeiss LSM 710 confocale lasermicroscoop. De gemiddelde fluorescentie-intensiteit (MFI) werd gemeten met ImageJ en een fluorescentie-intensiteitanalysator.

4.5. Multiplexanalyse van cytokinen

De MSD V-Plex Cytokine and Angiogenesis Panel 1 Human kit (Rockville, MD, VS) werd gebruikt om interleukine-1 beta （IL-1ß） en basale fibroblastgroeifactor （b-FGF）-concentraties te meten in enkele monsters, volgens de instructies van de fabrikant. Alle monsters werden beoordeeld op totale eiwitniveaus van IL-1 en b-FGF. De hoeveelheid (in pg/ml) werd gekwantificeerd uit de standaardcurve van elke meting.

4.6. Immunoassay met multiplexparels

Cytokineconcentraties werden geanalyseerd met behulp van een multiplex-bead-immunoassaysysteem (Procarta Cytokine Assay Kit; Affymetrix, Inc., Santa Clara, CA, VS), gebaseerd op multiplextechnologie (xMAP; Luminex, Austin, TX, VS), volgens de gebruiksaanwijzing. De gegevens zijn verkregen met behulp van een Luminex-compatibel werkstation en de bijbehorende beheersoftware (Bio-Plex-werkstation en versie 6.0-software; Bio-Rad, Tokyo, Japan), volgens de instructies van de fabrikant. Humaan TGF- 1, TGF- 2 en TGF- 3 gerelateerd aan defibroseproces werden gelijktijdig geanalyseerd in de verdunde monsters. de isovormen vanTGF-werden gedetecteerd met behulp van Bio-Plex 200-systemen en in de handel verkrijgbare Bio-Plex ProTM HumanTGF-testen (Bio-Rad Laboratories, Inc); op basis van de door de fabrikant verstrekte informatie. De multiplex-assaykit kan kwantitatief meerdere cytokinen uit het supernatant meten met een ondergrens van detectie van 1 pg/mL per cytokine. Elk monster werd uitgevoerd als een enkele meting voor een beperkte hoeveelheid van het verzamelde supernatant.

4.7.Realtime PCR

RNA-extractie werd uitgevoerd met behulp van TRIzol-reagens (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA, VS). Master Mix en een Revert Aid First Strand cDNA Synthesis Kit werden gebruikt voor de reverse transcriptie van het totale RNA.qPCR werd uitgevoerd met de Applied BiosystemsTM PowerUpTM SYBRTM Green Master Mix (Thermo Fisher Scientific, Inc.). De specifieke primers werden bereid door Bioneer (Daejeon, Korea) en als volgt in dit experiment gebruikt. De primersequenties zijn samengevat in Tabel 1.

Tien microliter PowerUp SYBR Green Master Mix, 4 L cDNA en 2 pmol van elke primer werden gebruikt voor realtime PCR in een eindvolume van 20 μL. De reactie werd uitgevoerd bij 95 graden gedurende 1 sec en 60 graden gedurende 20 sec gedurende 45 cycli na denaturatie bij 95 graden gedurende 20 sec. PCR werd voor elk monster in tweevoud of in drievoud uitgevoerd. cDNA-niveaus werden bepaald met behulp van een standaardcurve van cyclusdrempels. Alle gegevens voor elk cDNA lagen binnen de overeenkomstige standaardcurve. De verkregen gegevens werden genormaliseerd naar -actine-cDNA.

4.8. Statistische analyse

Kwantitatieve gegevens worden gepresenteerd als gemiddelde ± SD of SE van ten minste drie onafhankelijke experimenten. Statistische analyses werden uitgevoerd met behulp van een tweezijdige Student's t-test. We beschouwden een significant verschil alleen bij een betrouwbaarheidsniveau van 95 procent of hoger (p<>

5. Conclusies

Samengevat maakten de protocollen in deze studie de constructie van menselijkenierfibrose- apparaten nabootsen als een model en verschillende effecten vertoonden die niet mogelijk zijn in 2D-cultuurexperimenten. Wij zijn van mening dat de in deze studie voorgestelde evaluatiestrategie zal leiden tot een beter begrip van de gedetailleerdefibrosemechanismen die betrokken zijn bij pathologische veranderingen tijdensnierziekte. De ontwikkelde 3D-nierfibrose-op-een-chip zou kunnen worden gebruikt als een potentieel in vitro-model, wat ons dichter bij het creëren van een verbeterd nier-op-een-chip-model zal brengen.

cistanche phelypaes: behandeling van nierziekten

Referenties

1. Grens, W.; Noble, N. Transformerende groeifactor in weefselfibrose.N. Engels. J. Med.1994, 331,1286-1292.

2. Wang, W.;Huang, XR;Li,AG;Liu, F;Li,J.; Truong, LD; Wang, XJ; Lan, HYSsignaleringsmechanisme van TGF-betal bij de preventie van nierontsteking: rol van Smad. Ik ben. Soc. Nephrol.2005, 16, 1371-1383. [Kruisref]

3. Liu, Y.nierfibrose: Nieuwe inzichten in de pathogenese en therapieën. Nier Int.2006,69,213-217. [CrossRef][PubMed]

4. Andes, D.; Craig, WA Farmacokinetiek en farmacodynamiek van diermodellen: een kritische beoordeling. Int. J.Antimicrob.Agents 2002, 19,261-268. [Kruisref]

5. Kim, S.; Takayama, S.Organ-on-a-chip en de nier. nier res. clin. Pract.2015, 34, 165-169.[CrossRef][PubMed]

6. Jang, KJ; Mehr, AP; Hamilton, Georgia; McPartlin, LA; Chung, S.; Zo, KY; Ingber, DE Menselijke nier proximale tubulus op een chip voor geneesmiddeltransport en beoordeling van nefrotoxiciteit. Geheel getal. Biol. 2013,5,1119-1129. [CrossRef[PubMedl]

7. Reardon, S. 'Organs-on-chips' worden mainstream. Natuur 2015, 523, 266. [CrossRef]

8. Strutz, F; Zeisberg, M; Renziehausen, A.; Raschke, B.; Becker, V; Kooten, CV; Muller, GATGF- 1induceert proliferatie in menselijke nierfibroblasten via inductie van basische fibroblastgroeifactor (FGF-2). Nier Int. 2001, 59, 579-592.[CrossRef][PubMed]

9. Zanotti, S.; Bragato, C.; Zucchella, A.; Maggi, L.; Mantegazza, R.; Morandi, L.; Mora, M. Antifibrotisch effect van pirfenidon in spierafgeleide fibroblasten van Duchenne-spierdystrofiepatiënten. Levenswetenschap. 2016, 145,127-136. [Kruisref]

10. Davis, GE.: Camarillo. C, W. Een alfa 2 bèta 1 integrine-afhankelijk pinocytisch mechanisme waarbij intracellulaire vacuole-vorming en -coalescentie betrokken zijn, reguleert capillaire lumen- en buisvorming in een driedimensionale collageenmatrix. Exp. Cel res. 1996, 224, 39-51.[CrossRef]

11. Bayless, KJ; Davis, G. De Cdc42 en Race GTPases zijn vereist voor capillaire lumenvorming in driedimensionale extracellulaire matrices. J. Cel Wetenschap. 2002,115,1123-1136. [CrossRef [PubMed]

12. DesRochers, TM; Suter, L.; Roth, A.; Kaplan, DL Bioengineered 3D menselijk nierweefsel, een platform voor de bepaling van nefrotoxiciteit. PLoS ONE 2013, 8, e59219. [Kruisref]

13. Astashkina, AI; Mann, BK; Prestwich, GD; Grainger, DW Vergelijking van voorspellende biomarkers voor nefrotoxiciteit van geneesmiddelen in nier 3-D primaire organoïde cultuur en onsterfelijke cellijnen. Biomaterialen 2012, 33, 4712-4721. [CrossRef] [PubMed]

14. Meng, XM; Nikolic-Paterson, DJ; Lan, HY TGF-bèta: de hoofdregelaar vanfibrose. Nat.Rev.Nephrol.2016,12, 325-338. [Kruisref]

15. Pardali,E.;Goumans, MJ;ten Dijke,P. Signalering door leden van de TGF-bèta-familie bij vasculaire morfogenese en ziekte. Trends Cell Biol.2010, 20, 556-567. [CrossRef] [PubMed]

16. Cunha, SL; Pietras, K. ALK1 als een opkomend doelwit voor anti-angiogene therapie van kanker. Bloed 2011,117,6999-7006.[CrossRef]

17.Klagsbrun, M.;D'Amore, PA Regelgevers van angiogenese. Ann. Rev. Physiol.1991,53, 217-239. [Kruisref]

18. Folkman, J.;Shing, Y.Angiogenesis. J.Biol. Chem. 1992, 267, 10931-10934. [Kruisref]

19. Shweiki, D. Itin, A.Soffer, D.Keshet, E. Vasculaire endotheliale groeifactor geïnduceerd door hypoxie kan hypoxie-geïnitieerde angiogenese mediëren. Natuur 1992, 359, 843-848. [Kruisref]

20. Kim, KJ; Li, B.; Winer, J.; Armanini, M; Gillett, N.; Philips, HS; Ferrera, N. Remming van vasculaire endotheliale groeifactor-geïnduceerde angiogenese onderdrukt tumorgroei in vivo. Natuur 1993, 362, 841-844. [Kruisrefl]

21. Peper, MS; Ferrara, N.; Orci, L.; Montesano, R. Krachtig synergisme tussen vasculaire endotheliale groeifactor en basale fibroblastgroeifactor bij de inductie van angiogenese in vitro. Biochem. Biofysica. Onderzoek Commun.1992,189,824-831.[CrossRefl

22. Ga naar, F.; Ga naar, K.; Weindel, K.; Folkman, J. Synergetische effecten van vasculaire endotheliale groeifactor en basale fibroblastgroeifactor op de proliferatie en vorming van strengen van rundercapillaire endotheelcellen in collageengels. Laboratorium. Onderzoek 1993,69, 508-551.[PubMed]

KLIK HIER OM DEEL TE NEMEN