Farmacodynamische studie van cistanche-fenyl-ethanolglycosiden op door gentamicine geïnduceerd acuut nierletsel bij ratten
Mar 18, 2022
Contactpersoon: Audrey Huéaudrey.hu@wecistanche.com
Abstract
Doel Onderzoek naar het beschermende effect vanfenylethanoïde glycosiden(phG's)op door gentamicine geïnduceerdacuut nierletselbij ratten. Methoden Een totaal van 54 mannelijke SD-ratten werden willekeurig verdeeld in de controlegroep (10 d, 15 d, normale zoutoplossing 10 ml/kg), modelgroep (10 d, 15 d, normale zoutoplossing 10 ml/kg), phGs500 mg/ kg-groep (10 d,15 d), phGs 250 mg/kg-groep (10 d,15 d), en gesimuleerde klinische groep (21 d, normale zoutoplossing 10 ml/kg), elke groep had zes ratten. Het rattenmodel van acuut nierletsel werd vastgesteld door intraperitoneale injectie van gentamicine bij 75 mg/kg gedurende 10 dagen. Aan het einde van het experiment werd de 24-uurs urine van ratten verzameld, werd het bloed van ratten afgenomen uit de abdominale aorta, werden de bilaterale nieren van ratten afgenomen en werd de nierindex berekend. Serumcreatinine (Scr), bloedureumstikstof (BUN) werden gemeten met een auto-analyser. Superoxide dismutase (SOD), glutathionperoxidase (GSH-Px), catalase (CAT) en malonaldehyde (MDA) niveaus in nierweefsel werden gedetecteerd. Resultaten Vergeleken met de blanco controlegroep, de Scr, BUN, 24 uur urinevolume en MDA-expressie niveau in nierweefsel waren verhoogd in de 10 d en 15 d modelgroep, en de activiteiten van SOD, CAT en GSH-PX in nierweefsel waren significant afgenomen (P<0.01). compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" serum="" scr,="" bun,24="" h="" urine="" volume,="" and="" the="" expression="" of="" mda="" in="" kidney="" tissue="" were="" decreased="" in="" 10="" d="" and="" 15="" d="" phgs="" high="" and="" low="" dose=""><0.05), while="" the="" activities="" of="" sod,="" cat,="" and="" gsh-px="" in="" kidney="" tissue="" were=""><0.05). conclusion="" phgs="" had="" a="" protective="" effect="" on="" gentamicin-induced="">acuut nierletselbij ratten.
trefwoorden:Cistanche Herba; fenylethanoïde glycosides; gentamicine;acuut nierletsel
Cistanche Herba
Acuut nierletsel (AKI)is een klinisch syndroom van plotselinge en snelle achteruitgang of verlies van de filterfunctie van de nieren, veroorzaakt door verschillende redenen [1]. Op dit moment neemt de incidentie van AKI jaar na jaar toe. De oorzaken zijn divers en kunnen leiden tot een verscheidenheid aan complicaties, en de interventiemethoden voor klinische behandeling zijn zeer beperkt [2·3]. Studies hebben aangetoond dat continue behandeling met aminoglycoside-antibiotica een onafhankelijke risicofactor is voor AKI [4], en het inducerende mechanisme ervan is gerelateerd aan door geneesmiddelen gemedieerde productie van vrije radicalen, afzetting van fosfolipiden, verminderde nierbloedstroom en lokale ontsteking [5]. Klinisch worden therapeutische technieken voor het monitoren van geneesmiddelen vaak gebruikt om acute nierfunctiebeschadiging te behandelen die wordt veroorzaakt door aminoglycoside-antibiotica, maar ze kunnen het risico op nierbeschadiging veroorzaakt door dergelijke antibiotica niet vanaf de grondoorzaak verbeteren of omkeren [6]. Vroegtijdige interventie van de nefrotoxiciteit van aminoglycoside-antibiotica is een hot spot in het onderzoek naar de rationele toepassing van aminoglycoside-antibiotica. De traditionele Chinese geneeskundeCistanchesHerba is een droge vlezige stengel met geschubde bladeren van deCistanchesplant behorende tot de familie OrobanchaceaeCistanches. Het heeft de functies van voedende nier-yang en voedende essentie en bloed [7]. Het is warm van aard, zoet van smaak en keert terug naar de niermeridiaan.fenylethanoïde glycosidenzijn de belangrijkste chemische componenten inCistanche, die de activiteit van serumsuperoxide-dismutase kan verhogen, de expressie van malondialdehyde kan remmen, het vermogen van het lichaam om vrije zuurstofradicalen op te vangen kan verbeteren, de ophoping van vrije radicalen in het lichaam kan verminderen en het lichaam kan beschermen tegen overmatige stress. Oxidatief schade-effect [8]. In deze studie werd gentamicine gebruikt om een rattenmodel van acuut nierletsel te construeren om de preventieve en therapeutische effecten van citronella te onderzoeken.fenylethanoïde glycosidenop gentamicine-geïnduceerde acute nierschade. Het rapport is als volgt.
1 Materiaal en methoden
1.1 Proefdieren
54 SD-ratten, mannelijk, lichaamsgewicht (200 ± 20) g, gekocht bij het Animal Experimental Center van Xinjiang Medical University, licentienummer voor dierlijke productie: SCXK (nieuw) 2016-0003, alle dieren zijn grootgebracht in Xinjiang Medical University SPF barrièreomgeving van Animal Experiment Center, licentienummer: SYXK (nieuw) 2016-0002, omgevingstemperatuur 24-26 graad , constante temperatuur en vochtigheid, relatieve vochtigheid 40 procent -70 procent , ratten eten en drinken vrij .
1.2 Testmedicijn
Cistanche fenethyl totaal glycosiden (deze onderzoeksgroep is verrijkt en gezuiverd uit Cistanche tubulosa, het totale fenethyl alcohol glycoside gehalte is 89,5 procent, het echinacoside gehalte is groter dan 40 procent en het verbascoside gehalte is groter dan 16,0 procent) ; Gentamicine-injectie (Henan Furen Huaiqingtang Pharmaceutical Co., Ltd., batchnummer 16122411), malondialdehyde (MDA) detectiekit (Wuhan Elite Biotechnology Co., Ltd., batchnummer VAAAK6S286), superoxide disproportionering Enzyme (SOD) detectiekit (Wuhan Elite Biotechnology Co., Ltd., batchnummer WSH27SS9GB), Catalase (CAT) detectiekit (Wuhan Elite Biotechnology Co., Ltd., batchnummer FGS3J66D2K), Valley Glutathione Peroxidase (GSH-PX) detectiekit (Wuhan Elite Biotechnology Co., Ltd., batchnummer DK8A622XZP), BCA-eiwitkwantificatiekit (Beijing Soleibao Technology Co., Ltd., batchnummer 20190622).
1.3 Experimenteel instrument
TD50002A elektronische balans (Yuyao Jinnuo Balance Instrument Co., Ltd.), Multiskan microplaatlezer met volledige golflengte (US Thermo Fisher Company), BS-320 automatische biochemische analysator (Shenzhen Mindray Biomedical Electronics Co., Ltd.), Biofugeprimo desktop gekoelde centrifuge (Thermo Fisher Company, VS).
1.4 Modellering, groepering en beheermethoden
Na 1 week adaptieve voeding werden 54 mannelijke SD-ratten willekeurig verdeeld in 10d, 15d blanco controlegroep, 10d, 15d modelgroep, 10d, 15d Cistanche cistanche fenethylalcohol groep met hoge dosis, 10d, 15d Cistanche fenyl ethanol lage dosis groep De dosisgroep en 21d gesimuleerde klinische behandelingsgroep, elke groep heeft 6 dieren. Met uitzondering van de 10d en 15d blanco controlegroepen, werden ratten in elke groep gedurende 10 opeenvolgende dagen intraperitoneaal geïnjecteerd met gentamicine (75 mg/kg lichaamsgewicht) om een model voor acuut nierletsel vast te stellen. Toedieningsmethode: (1) 10d en 15d blanco controleratten kregen een intraperitoneale injectie van normale zoutoplossing (10 ml/kg lichaamsgewicht) en sondevoeding voor respectievelijk 10d en 15d; (2) 10d- en 15d-modelratten hebben gelijktijdig gemodelleerd. De ratten in de groepen met hoge doses van 10d en 15d kregen normale zoutoplossing (10 ml/kg lichaamsgewicht) door middel van sondevoeding tot respectievelijk 10d en 15d; Maag tot 10d en 15d; (4) Ratten met een lage dosis van 10 en 15 dagen werden dagelijks gemodelleerd en kregen gedurende 10 en 15 dagen via een maagsonde Cistanche fenelythanol totale glycosiden (250 mg/kg lichaamsgewicht) toegediend; (5) 21d gesimuleerde klinische groep Tegelijkertijd kregen ratten gedurende 21 dagen normale zoutoplossing (10 ml/kg lichaamsgewicht) via een sonde. De ratten worden wekelijks gewogen en de dosering van het medicijn wordt aangepast aan het lichaamsgewicht.
1.5 Monsterverzameling
Ratten in elke groep werden 24 uur per dag urine verzameld op de 10e, 15e en 21e dag (het dier werd de dag ervoor in de metabole kooi geplaatst en één dier in elke metabole kooi, na 24 uur verwijderd), gecentrifugeerd bij 3000r/min gedurende 20 min bij 4 graden, Verzamel het supernatant en bevries bij -20 graden voor later gebruik. Na het experiment werden de ratten in elke groep gevast zonder voedsel en verdoofd met 10% chloraalhydraat in de buikholte. Er werd bloed afgenomen van de abdominale aorta en men liet het gedurende 1 uur bij kamertemperatuur staan bij 4 graden, het werd 15 minuten gecentrifugeerd bij 3500r/min, en de bovenste laag van lichtgele heldere vloeistof werd in porties verdeeld. Bevroren op 20 graden voor later gebruik. De ratten in elke groep werden verdoofd, de buikholte werd volledig blootgelegd, de slagaders en aders van de distale en proximale uiteinden van de nierweefsels werden gefixeerd met een hemostatische tang, de nieraders werden doorgesneden en 4 graden isotone normale zoutoplossing werd geïnjecteerd door de abdominale aorta, en de kleur van de nieren was doorbloed. Nadat u bleek bent geworden, verwijdert u snel beide nieren en plaatst u ze op filtreerpapier om water te absorberen en weegt u ze om de orgaanindex te berekenen. Neem 0,4 g verse rechternierschors van de rat, voeg voorgekoelde normale zoutoplossing toe op 1:9, laat 10 procent nierweefsel homogeniseren onder een lage temperatuuromgeving, vries het in en reserveer het voor later gebruik. De berekeningsformule van de orgaanindex is als volgt: Nierindex=bilaterale niermassa × 103/ratlichaamsmassa.
1.6 Detectie van serumcreatinine- en ureumstikstofniveaus bij ratten
Neem de te testen serummonsters en leg ze ter bepaling in een automatische biochemische analysator. Bepaal volgens de instructies van de kit het gehalte aan creatinine en ureumstikstof in rattenserum.
1.7 Detectie van SOD, CAT, GSH-PX en MDA in nierweefsel van ratten
Laat het rattennierhomogenaat ontdooien bij kamertemperatuur, centrifugeer bij 3000r/min gedurende 20 minuten bij 4 graden, verzamel het supernatant en gebruik de BCA-kit om de rattennieren in elke groep te testen Weefseleiwitconcentratie. Volg de instructies van de kit om de activiteit van superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), glutathionperoxidase (GSH-Px) en malondialdehyde (MDA) inhoud in nierweefsel te bepalen. 1.8 Statistische analyse De statistische software SPSS21.0 werd gebruikt voor statistische analyse. De meetgegevens werden uitgedrukt als gemiddelde ± standaarddeviatie (-x ± s). De vergelijking tussen de twee groepen werd uitgevoerd door middel van een t-test, met het testniveau =0.05.
cistanche extract
2 Resultaten
2.1 De effecten van de totale glycosiden van cistanche-fenethylalcohol op de lichaamsmassa, de nierindex en de 24-uurs urineproductie van ratten in elke groep
There was no significant difference in the body mass of rats in each group before modeling (P>0.05). Na modellering, vergeleken met de blanco controlegroep, nam de lichaamsmassa van elke modelgroep af en namen de nierindex en 24-uurs urineproductie toe, het verschil was statistisch significant (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" 10d="" and="" 15d="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" the="" body="" mass="" of="" rats="" in="" the="" high="" and="" low="" dose="" groups="" of="" total="" glycosides="" increased,="" and="" the="" renal="" index="" and="" 24h="" urine="" output="" decreased,="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.05); the="" body="" mass="" of="" the="" simulated="" clinical="" group="" increased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.05), there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" in="" the="" renal="" index="" and="" 24h="" urine="" volume="" (p="">0.05)
2.2 Het effect van Cistanche-fenylethanoïde-glycosiden op het serumcreatininegehalte van ratten in elke groep
In vergelijking met de blanco controlegroep nam het serumcreatininegehalte van ratten in elke modelgroep toe en was het verschil statistisch significant (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" serum="" creatinine="" of="" rats="" in="" the="" high="" and="" low="" dose="" groups="" of="" cistanche="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" was="" compared="" with="" that="" of="" the="" model="" group.="" the="" content="" decreased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.05); the="" difference="" in="" serum="" creatinine="" content="" of="" rats="" in="" the="" simulated="" clinical="" group="" was="" not="" statistically="" significant="" (p="">0.05).
2.3 Het effect van Cistanche-fenylethanoïde-glycosiden op het serumureum-stikstofgehalte van ratten in elke groep
In vergelijking met de blanco controlegroep nam het serumureumstikstofgehalte van ratten in elke modelgroep toe en was het verschil statistisch significant (P<0.01). compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" serum="" urea="" of="" rats="" in="" the="" high="" and="" low="" doses="" of="" cistanche="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" was="" 10d="" and="" 15d.="" nitrogen="" content="" is="" reduced,="" and="" the="" difference="" is="" statistically="" significant="" (p="" difference="" is="" not="" statistically=""> 2.4 Het effect van Cistanche-fenylethanoïde-glycosiden op de SOD-activiteit in het nierweefsel van elke groep ratten In vergelijking met de blanco controlegroep was de SOD-activiteit in het nierweefsel van elke modelgroep verminderd en was het verschil statistisch significant (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" rats="" in="" the="" high="" and="" low="" doses="" of="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" on="" 10d="" and="" 15d="" the="" sod="" activity="" in="" the="" kidney="" tissue="" increased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.01); the="" sod="" activity="" in="" the="" kidney="" tissue="" of="" the="" simulated="" clinical="" group="" increased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><> 2.5 Het effect van cistanche fenylethanoïde glycosiden op de activiteit van CAT in het nierweefsel van elke groep ratten In vergelijking met de blanco controlegroep nam de activiteit van CAT in het nierweefsel van elke modelgroep af en was het verschil statistisch significant (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" rats="" in="" the="" high="" and="" low="" doses="" of="" cistanche="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" group="" the="" activity="" of="" cat="" in="" the="" kidney="" tissue="" increased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.01); the="" activity="" of="" cat="" in="" the="" kidney="" tissue="" of="" the="" simulated="" clinical="" group="" was="" not="" statistically="" significant="" (p=""> 0.05) 2.6 Effecten van cistanche-fenylethanoïde-glycosiden op GSH-PX-activiteit in nierweefsels van ratten in elke groep In vergelijking met de blanco controlegroep was de GSH-PX-activiteit in het nierweefsel van elke modelgroep verminderd en was het verschil statistisch significant (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" 10d="" and="" 15d="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" high="" and="" low="" dose="" groups="" the="" activity="" of="" gsh-px="" in="" the="" kidney="" tissue="" of="" rats="" increased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.05); the="" activity="" of="" gsh-px="" in="" the="" kidney="" tissue="" of="" rats="" in="" the="" simulated="" clinical="" group="" was="" not="" statistically="" significant="" (p=""> 0.05). 2.7 Effecten van cistanche-fenylethanoïde-glycosiden op het MDA-gehalte in nierweefsels van ratten in elke groep In vergelijking met de blanco controlegroep nam het gehalte aan MDA in het nierweefsel van elke modelgroep toe en was het verschil statistisch significant (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" high="" and="" low="" dose="" groups="" of="" cistanche="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" were="" larger="" than="" those="" of="" the="" model="" group.="" the="" content="" of="" mda="" in="" rat="" kidney="" tissue="" decreased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.01). there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" in="" the="" content="" of="" mda="" in="" the="" kidney="" tissue="" of="" rats="" in="" the="" simulated="" clinical="" group="" (p="">0.05) cistanche beschermt de nierfunctie Een veel voorkomende ernstige bijwerking van aminoglycoside-antibiotica is nefrotoxiciteit [9]. Dit type medicijn wordt gemakkelijk door de glomerulus gefilterd als een prototype medicijn, en sommige medicijnen worden uitgescheiden in de urine, en de meeste medicijnen worden selectief geaccumuleerd in de nierschors, waardoor de concentratie op deze plaats meerdere malen hoger is dan de concentratie van het medicijn in het serum (10)], veroorzaakt de ophoping van dit soort medicijn onvermijdelijk celbeschadiging en een verminderde nierfunctie. Lange tijd heeft de klinische behandeling van AKI veroorzaakt door aminoglycosidegeneesmiddelen altijd het principe gevolgd van symptomatische en ondersteunende behandeling van ontwenning van het geneesmiddel en routinematige rehydratatie. schade. Daarom stelde deze studie een 21-dag gesimuleerde klinische behandelgroep in om routinematige klinische behandeling en lichaamsrevalidatie zoveel mogelijk te simuleren, om zo het therapeutische effect van Cistanche-fenylethanoïde-glycosiden verder objectief te onderzoeken. Bij klinische behandeling worden Scr en BUN vaak gebruikt als indicatoren om de nierfunctie te evalueren. Hoe hoger het niveau van Scr en BUN, hoe ernstiger de nierfunctiebeschadiging wordt weerspiegeld [11]. In deze studie werd een AKI-model vastgesteld door intraperitoneale injectie van gentamicine 75 mg/kg bij ratten gedurende 10 opeenvolgende dagen. Vergeleken met de blanco controlegroep namen de niveaus van Scr en BUN in de modelgroep toe, wat aangeeft dat het model succesvol was. Na tussenkomst van cistanche-fenylethanoïde-glycosiden gedurende 10 en 15 dagen, namen de Scr en BUN van ratten in elke behandelingsgroep af, wat aangeeft dat de cistanche-fenylethanoïde-glycosiden een goed effect hadden op het verbeteren van AKI veroorzaakt door gentamicine. Studies hebben aangetoond dat de toename van reactieve zuurstofspecies (ROS) een belangrijke rol speelt in het pathologische proces van niertubulaire schade veroorzaakt door gentamicine [12]. MDA is een van de belangrijkste stoffen die het ROS-gehalte in het lichaam weerspiegelen [13-14]. Het anti-oxidant (antioxidanten) afweersysteem in het lichaam tegen ROS omvat SOD, CAT, GSH-PX, enzovoort. Als het belangrijkste effectieve bestanddeel van Cistanche deserticola, kunnen totale fenylethanoïde glycosiden een significante antioxiderende activiteit uitoefenen bij dieren [15]. Na tussenkomst van de totale glycosiden van Cistanche fenethylalcohol, was het MDA-gehalte in het nierweefsel van ratten in de toedieningsgroep significant verminderd en waren de SOD-, CAT- en GSH-PX-activiteiten significant verhoogd, wat suggereert dat de totale glycosiden van Cistanche fenethylalcohol kan de nierschade door oxidatieve stress verbeteren en de nierschade verlichten. Samenvattend hebben de totale glycosiden van cistanche-fenethylalcohol een beschermend effect op door gentamicine geïnduceerd acuut nierletsel. Het oefent antioxiderende effecten uit door de productie van vrije radicalen te remmen en enzymen voor het opruimen van vrije radicalen te activeren, de oxidatieve stresstoestand van het lichaam te verbeteren en het antioxiderende effect van het lichaam te versterken. Oxiderend vermogen, verminderen nierschade. cistanche beschermt de nierfunctie
3 Discussie
