Polysachariden uit Cistanche kunnen veroudering van de longfunctie aanzienlijk vertragen

Contactpersoon: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Sun Yun Wang Dejun Liu Xiaomei Shi Le Zhang Hongquan

(Instituut voor Geneeskunde, Universiteit van Yangzhou, Yangzhou 225001)

Verouderingis een proces waarbij weefsels en organen van het lichaam in de loop van het leven functionele en morfologische degeneratie en zelfs veroudering ondergaan. De long is direct verbonden met de externe omgeving en accepteert de bloedcirculatie van het hele lichaam. Het is het meest kwetsbaar voor verschillende schadelijke factoren in het milieu en in het lichaam. Het is een van de vroegste organen in het lichaam waar veroudering optreedt. De rol van vrije radicalen in het verouderingsproces is bevestigd door het onderzoek van vele wetenschappers. Dit experiment gebruikt ozon om een ​​experimenteel verouderingsmodel te creëren om te observerende effecten van polysachariden uit Cistanche op de hypoxietolerantie, antioxidantfunctie en ultrastructuur van de longen van ouder wordende muizen. Invloed hebben. Verwacht wordt dat het de onderzoeksbasis zal leggen voor:polysachariden uit Cistanchebij het uitstellen van pulmonale degeneratieve veranderingen en de gezondheidszorg van het ademhalingssysteem van ouderen.

Het doel van deze studie is om de degeneratieve veranderingen in de ultrastructuur van longweefselcellen in experimenteel ouder wordende muizen en de invloed vanpolysachariden uit Cistancheben ermee bezig. Gebruik van continue inademing van ozon (Ozon, Ob) gedurende 4 weken om de modelmethode voor longveroudering te induceren, met behulp van Polysaccharide van Cistanche 50 en 100 gram om modelmuizen gedurende 6 weken toe te dienen om hypoxietolerantie, long- en serumsuperoxide te detecteren bij ouder wordende muizen Dismutase (SOD ) activiteit en malondialdehyde (MDA) gehalte. De veranderingen van longweefselorganellen en ultrastructuur werden waargenomen onder een elektronenmicroscoop. Resultaten De experimenteel ouder wordende muizen, veroorzaakt door ozon, verminderden de hypoxietolerantie significant; de long- en serum-SOD namen af ​​en MDA nam toe. In vergelijking met de modelgroep kan Polysaccharide van Cistanche de hypoxietolerantietijd van ouder wordende muizen aanzienlijk verlengen (P<0.01), improve="" the="" activity="" of="" sod="" in="" the="" serum,="" reduce="" the="" content="" of="" mda=""><0.01), and="" delay="" the="" degeneration="" of="" mitochondria="" and="" lamellar="" bodies="" in="" the="" lung="" cells="" of="" aging="" mice=""><0.01). conclusion="">Polysachariden uit Cistanche kunnen aanzienlijkhet experiment vertragen Fysiologische degeneratie en celmorfologie van de longenvan seksueel ouder wordende muizen.

1 materiaal

1.1 Dieren

3 schone muizen van één jaar oud van de ICR-stam, 18~22g, ¥^ elke helft, geleverd door het Experimental Animal Centre van de Yangzhou University, certificaatnummer: Su Dongzhi 98002^

1.2 Geneesmiddelen en reagentia

Polysacchariden van Cistanche: geleverd door Nanjing Wild Plant Research Institute, bereid met gedestilleerd water tot 2,5 g·LT, 5.0 gL-1; SOD, MDA-testkits worden geleverd door het Nanjing Juli Biomedical Engineering Research Institute.

1.3 Instrument

UV755B ultraviolet spectrofotometer, een product van Shanghai Analytical Instrument Factory; ozongenerator, een product van Wuxi Medical Instrument Factory; H-300 transmissie-elektronenmicroscoop, een product van Hitachi, Japan.

2 methode:

2 1 Voorbereiding van een experimenteel longverouderingsmodel met geurverwonding ICR-muizen werden genomen van de dag en het experimentele ontwerp, en de muizen in de modelgroep en de behandelingsgroep werden willekeurig gegroepeerd.

Het experimentele verouderingsmodel werd gedurende 4 weken continu gecreëerd. Tegelijkertijd kregen de controlegroep (neem de normale muizen die in dezelfde batch waren gekocht) en de modelgroep 20 ml-kg ^d'1 met normale zoutoplossing, Polysaccharide van Cistanche-behandelingsgroep I en II Polysaccharide van Cistanche 50, 100 mg-kg-1-d-' werd intragastrisch toegediend en de toedieningsperiode was 6 weken. Na de laatste toediening zijn verschillende indextesten uitgevoerd.

2.2 Hypoxie tolerantie testmethode (2)

Elke groep muizen werd in een maalfles van 250 ml gedaan die 20 g natronkalk bevatte. Vaseline werd verzegeld en de tijd vanaf het in de fles plaatsen van de muizen tot verstikking en dood werd geregistreerd onder normale temperatuur en druk.

2.3 Longen en bloed

SOD^MDA-gehaltebepaling van elke groep muizen 1 uur na de laatste toediening, verwijder de oogbollen en verzamel bloed om het serum te scheiden; vervolgens werden de muizen opgeofferd, werden de longweefsels eruit gehaald en werd zoutoplossing toegevoegd aan de glazen homogenisator om 100 g -f1 longweefselhomogenaat te bereiden, de SOD-activiteit van long en serum werd bepaald met de Huangsuyin-oxidasemethode en het MDA-gehalte werd bepaald door thiobarbituurzuurcondensatiemethode.

2.4 Elektronenmicroscopie monstervoorbereidingsmethode (3)

Het experiment is verdeeld in een controlegroep, een modelgroep en een groep met een hoge dosis. De modellerings- en toedieningsmethoden zijn hetzelfde als hierboven. Na de laatste toediening worden 3 muizen uit elke groep willekeurig geselecteerd, en ze worden ter dood gebracht door insnoering, en respectievelijk de rechterkant wordt genomen. Longtopweefsel, 0,4 mmol, L-1 glutaaraldehyde en 0,04 mmol, dubbele fixatie met L'1 OfeO4, acetongradiëntdehydratie, Epon 812 inbedding, lood-uranium elektronenkleuring, Hitachi H-300 transmissie-elektronenmicroscoop met 10,000 tot 20,000 vergroting Observeer de veranderingen en structurele veranderingen van de belangrijkste organellen onder veelvouden.

2.5 De ​​resultaten van statistische verwerking worden uitgedrukt in tientallen grond s, en de vergelijking van de twee steekproefgemiddelden maakt gebruik van de t-toets.

3. Resultaten

3.1 Het effect van Polysaccharide uit Cistanche op hypoxietolerantie bij ouder wordende muizen

Eén uur na de laatste toediening van muizen in elke groep werd de hypoxietolerantietijd getest. De resultaten toonden aan dat de tijd dat ouder wordende muizen hypoxie konden verdragen, significant korter was dan die van normale muizen. De tijd is aanzienlijk langer in vergelijking met de modelgroep, maar er is geen significant verschil met de controlegroep, wat aangeeft dat Polysaccharide van Cistanche de hypoxietolerantie van ouder wordende muizen aanzienlijk kan verbeteren, zie Tabel 1

3.2 Het effect van Cistanche-polysaccharide op de antioxidantfunctie van ouder wordende muizen

Het bloed (serum) en longweefsel (longhomogenaat) van de muizen in elke groep werden verzameld na de laatste toediening en SOD en MDA werden bepaald. Resultaten De serum- en long-SOD-activiteit van ouder wordende muizen namen af ​​en het MDA-gehalte nam toe. In vergelijking met de controlegroep was het verschil significant. Polysachariden uit Cistanche kunnen de activiteit van serum- en long-SOD bij ouder wordende muizen verhogen en het MDA-gehalte verlagen. Vergeleken met de controlegroep is er geen significant verschil, en het verschil met de vergrijzingsmodelgroep is significant, zie Tabellen 2 & 3.

3.3 Het effect van Polysaccharide uit Cistanche op de intracellulaire duisternis van alveolaire epitheelcellen⑷

De fabricagemethode van de elektronenmicroscoop is hetzelfde als voorheen. Morfometrische analyse: Onder de elektronenmicroscoop werd elk monster in 10 gezichtsvelden bekeken om de organellen te meten. De resultaten toonden aan dat de mitochondriën en lamellaire lichamen van de modelgroep waren verminderd, het basaalmembraan was verdikt en de polysomen waren toegenomen. In vergelijking met de controlegroep waren er significante verschillen. Polysachariden uit de Cistanche hooggedoseerde groep verbeterden het. Vergeleken met de modelgroep was het verschil significant en lag het in principe dicht bij de controlegroep. Zie tabblad 4.

3.4 Veranderingen in de ultrastructuur van longepitheelcellen bij experimenteel ouder wordende muizen en de invloed van Cistanche-polysacchariden

Verouderde modelmuizen zijn te zien onder een elektronenmicroscoop: alveolaire type I epitheelcellen zijn een enkele laag van het afgeplatte type met een dikte van ongeveer {{0}}.2 pm. De kern is klein en dicht. Er zijn een paar mitochondriën, Golgi-complex en verspreid endoplasmatisch reticulum in het perinucleaire cytoplasma. Relatief schaars, met minder microfilamenten en microtubuli. De histologische veranderingen van de longen van ouder wordende muizen werden waargenomen onder de elektronenmicroscoop. De belangrijkste veranderingen waren type II alveolaire epitheelcellen. De microvilli op het vrije oppervlak van de cellen namen af ​​of verdwenen, de lamellaire lichamen waren verzwakt, de lamellaire structuur was wazig en enkele cellen hadden kleine lamellaire cellen. Het lichaam verdwijnt en het is een holle of homogene amorfe strookachtige substantie met een lage elektronendichtheid. Mitochondriën en ruw endoplasmatisch reticulum zijn verminderd in het cellichaam. Het basaalmembraan van alveolaire epitheelcellen is duidelijk verdikt en de proliferatie van diafragmacellen en fibroblasten is te zien in het alveolaire interstitium (Fig 1,2). Hoewel de binnenste kernmembraan en mitochondriale zwelling werden gezien in de Cistanche-polysaccharidegroep, was de mate significant verminderd in vergelijking met de modelgroep (Fig 3.4). Observatie onder de elektronenmicroscoop van de medicatiegroep toonde aan dat de epitheelcellen van het type plat waren, met een glad oppervlak, geen kern, en sommige waren ongeveer 0,1 dik. Er waren een paar organellen in de perinucleus en radiumdeeltjes waren zichtbaar. Type II-cellen hebben korte villi op het oppervlak, een groot aantal mitochondriën, ruw endoplasmatisch reticulum en Golgi-complex in het cytoplasma (Fig 5,6)

Het verouderingsmodel voor ozonschade is gebaseerd op de theorie van veroudering door vrije radicalen. Schade door zuurstofvrije radicalen speelt een belangrijke rol in het proces van longveroudering. De longen zijn het enige orgaan dat communiceert met de externe omgeving. Dieren worden gedurende een bepaalde periode continu met ozon ingeademd. De longen worden als eerste blootgesteld aan ozon en zijn het meest kwetsbaar voor schade. Nadat ozon het lichaam is binnengekomen, genereert het snel zeer actieve vrije radicalen van superoxide-anionen. Overtollige vrije radicalen overschrijden het vermogen van het lichaam om het lichaam op te vangen, vernietigen en consumeren de vrije radicalen wegvangende enzymen (zoals SOD) in het lichaam, en veroorzaken dan de organen en zelfs het lichaam om te verouderen. In dit experiment nam het anti-hypoxievermogen van ouder wordende muizen, veroorzaakt door ozon, aanzienlijk af, de activiteit van de antioxidantstof SOD in serum en longweefsel nam af en de lipideperoxidatiemetaboliet MDA nam aanzienlijk toe. Met het gebruik van Rongrong Duojing 50.100 mg-kg1 continue infusie van experimentele ouder wordende muizen, hebben de ouder wordende muizen duidelijke hypoxietolerantie. Verhoogd, de activiteit van superoxide dismutase voor het opruimen van vrije radicalen is verbeterd. Het gehalte aan lipideperoxidatiemetabolieten is verminderd, wat aangeeft dat polysachariden uit Cistanche de antioxidantfunctie van ouder wordende muizen kunnen versterken.

Lamellaire lichamen in het cytoplasma van alveolaire n-type epitheelcellen worden vaak gebruikt om de functie van epitheelcellen te meten. De afscheidingen van uitgehongerde lamellaire lichamen worden alveolaire oppervlakteactieve stoffen genoemd, die aanwezig zijn op het lucht-vloeistofgrensvlak van longblaasjes en de oppervlaktespanning van de longblaasjes kunnen verminderen. De verouderingsveranderingen van de lamellaire lichamen kunnen leiden tot de vermindering van alveolaire oppervlakte-actieve stoffen. De oppervlaktespanning van de longblaasjes is relatief hoog en de terugtrekkracht van de longblaasjes wordt verhoogd, wat resulteert in het krimpen van de longblaasjes. Elektronenmicroscopie-waarnemingen onthulden dat de n-type alveolaire epitheelcellen van ouder wordende muizen aanzienlijk zijn veranderd. Het is te zien dat de lamellaire bloedlichaampjes zijn verzwakt, de structuur is wazig, de mitochondriën zijn gezwollen en verminderd, het ruwe endoplasmatisch reticulum is ook verminderd en het basaalmembraan is aanzienlijk verdikt. Hoewel vergelijkbare structurele veranderingen kunnen worden waargenomen na het aanbrengen van Polysaccharide uit Cistanche, is de mate aanzienlijk verminderd, wat aangeeft dat Polysaccharide van Cistanche de morfologische degeneratieve veranderingen in lamellaire lichamen van longepitheelcellen en mitochondriale degeneratie bij ouder wordende muizen aanzienlijk kan verbeteren of vertragen. Het grootste deel van de celstructuur is in principe intact, waardoor de veranderingen van de ultrastructuur van de longen worden vertraagd. De resultaten van deze studie suggereren dat polysachariden uit Cistanche de structurele en functionele veranderingen veroorzaakt door ozon-geïnduceerde oxidatieve longschade kunnen verminderen, longveroudering kunnen vertragen en experimenteel bewijs kunnen leveren voor toegepast onderzoek.