Voorspellende betekenis van nier-myeloïde-gerelateerd eiwit 8-expressie bij patiënten met obesitas- of type 2 diabetes-geassocieerde nierziekten

Contactpersoon: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Takashige Kuwabara¹, Kiyoshi Mori1,^2*, Masato Kasahara^1,3, Hideki Yokoi¹, Hirotaka Imamaki¹Akira Ishii¹, Kenichi Koga¹, Akira Sugawara⁴, Shinji Yasuno³, Kenji Ueshima³, Takashi Morikawa⁵Yoshio Konishi⁵, Masahito Imanishi⁵, Akira Nishiyama⁶, Kazuwa Nakao^1,2, Masashi Mukoyama¹

¹Afdeling Geneeskunde en Klinische Wetenschap, Kyoto University Graduate School of Medicine, Kyoto, Japan,

²Medisch Innovatiecentrum, Kyoto University Graduate School of Medicine, Kyoto, Japan,

³Afdeling EBM Research, Institute for Advancement of Clinical and Translational Science, Kyoto University Hospital, Kyoto, Japan,

⁴Afdeling Nefrologie, Osaka Rode Kruis Ziekenhuis, Osaka, Japan,

5 Afdeling Nefrologie en Hypertensie, Osaka City General Hospital, Osaka, Japan,

6 Afdeling Farmacologie, Kagawa University Medical School, Kagawa, Japan

Abstract

Achtergrond en doelstelling: We hebben gerapporteerd dat toll-like receptor 4 (TLR4) en een van zijn endogene liganden, myeloïde-gerelateerd eiwit 8 (MRP8 of S100A8), een belangrijke rol spelen in de progressie van diabetische nefropathie bij muizen. Het doel van dit onderzoek was om de betekenis vannierMRP8-expressie bij patiënten metzwaarlijvigheid- of type 2 diabetes-geassocieerdnierziekten. Methoden: Bij diabetische, zwaarlijvige of controlepersonen werden MRP8-mRNA- en eiwitexpressieniveaus in nierbiopsiemonsters bepaald door realtime RT-PCR en immunohistochemie (respectievelijk n=28 en 65), en hun associaties met baseline en prognostische parameters werden geanalyseerd. Effecten van MRP8 op pro-inflammatoire genexpressies werden onderzocht met behulp van macrofagen. Resultaten:NierMRP8-gen- en eiwitexpressieniveaus waren verhoogd in zwaarlijvige of diabetische groepen in vergelijking met de controlegroep. Van alle proefpersonen waren, door middel van univariate lineaire regressieanalyse, glomerulaire MRP8-positieve celtelling en tubulo-interstitiële MRP8-positieve gebied bij baseline beide respectievelijk gecorreleerd, niet alleen met verschillende bekende risicofactoren voor diabetische nefropathie (zoals zoals systolische bloeddruk, proteïnurie en serumcreatinine) maar ook met de mate van glomerulosclerose en tubulo-interstitiële fibrose. Onafhankelijke factoren die een jaar later eiwitniveaus in de urine voorspelden, werden onderzocht door multivariate analyse, en ze omvatten glomerulaire MRP8-positieve celtelling (b=0.59, P,0.001), proteïnurie (b=0.37, P=0.002) en systolische bloeddruk (b=0.21, P=0.04) bij baseline, na correctie voor bekend risico factoren. MRP8-eiwitexpressie werd waargenomen in CD68-positieve macrofagen en atrofische tubuli. In gekweekte muismacrofagen veroorzaakten door MRP8-eiwit geïnduceerde pro-inflammatoire cytokine-expressies ook auto-inductie van MRP8 op een TLR4-afhankelijke manier.

Conclusies: Glomerulaire MRP8-expressie lijkt geassocieerd te zijn met de progressie van proteïnurie bij obese of type 2 diabetespatiënten, mogelijk door inflammatoire veranderingen in macrofagen te induceren via TLR4-signalering.

Effecten van cistanche: behandeling van nierziekten

Invoering

Chronische ontsteking speelt een belangrijke rol bij de pathogenese van diabetes ofzwaarlijvigheiden de cardiovasculaire complicaties [1]. De betrokkenheid van aangeboren immuunreceptoren en de endogene liganden bij het proces van chronische ontsteking is geïmpliceerd. Myeloïde-gerelateerd eiwit 8 (MRP8, ook bekend als S100A8 of calgranuline A) werd oorspronkelijk geïdentificeerd als een cytoplasmatisch calciumbindend eiwit in neutrofielen en monocyten [2] en wordt algemeen erkend als een krachtig endogeen ligand voor toll-like receptor 4 (TLR4 ) bij verschillende ziekten, waaronder septische shock, vasculaire en auto-immuunziekten [3,4,5]. We hebben onlangs voorgesteld dat MRP8/TLR4-signalering een belangrijke rol speelt in de door hyperlipidemie geïnduceerde progressie van diabetische nefropathie [6]. Glomerulaire macrofagen en verzamelbuiscellen zijn belangrijke bronnen van MRP8 in respectievelijk muismodellen van diabetische nefropathie [6] en nierfibrose [7]. Plasmaspiegels van MRP8, dat gewoonlijk een heterodimeer complex vormt met een bindingspartner MRP14 in de bloedbaan, zijn verhoogd bij obese personen [8,9]. Er zijn echter geen rapporten die de renale expressie van MRP8 bij patiënten met obesitas oftype2diabetesen de associatie met de nierprognose.

Het doel van deze studie was het bepalen van mRNA- en eiwitexpressieniveaus van MRP8 in deniervan Japanse patiënten met diabetische nefropathie (DN),zwaarlijvigheid-gerelateerde glomerulopathie (ORG), nefrotisch syndroom met minimale verandering (MCNS) of kleine glomerulaire afwijking (MGA), die allemaal werden gediagnosticeerd door middel van nierbiopsie, en om te evalueren of renale MRP8-expressie de nieruitkomsten kan voorspellen.

Cistanche kan de nierfunctie verbeteren

Materialen en methodes

Ethische uitspraak

De studie bij mensen werd uitgevoerd volgens de principes uitgedrukt in de Verklaring van Helsinki en werd goedgekeurd door respectievelijk de ethische commissies voor menselijk onderzoek van de Kyoto University Graduate School of Medicine en het Osaka City General Hospital. Alle deelnemers gaven schriftelijke geïnformeerde toestemming. Het dierstudieprotocol is goedgekeurd door de Animal ResearchCommittee van de Kyoto University Graduate School of Medicine (vergunningsnummer: Med Kyo 13318). Alle operaties bij dieren werden uitgevoerd onder narcose met natriumpentobarbital en er werd alles aan gedaan om het lijden tot een minimum te beperken.

Studieonderwerpen

Proteïnurie patiënten metzwaarlijvigheidof type 2-diabetes die een nierbiopsie ondergingen, werden in deze studie opgenomen. Patiënten met infectieziekte, kanker, leverziekte of collageenziekte werden uitgesloten. Proteïnurie werd gedefinieerd als eiwit in de urine hoger dan 0,5 g/g creatinine of albumine in de urine hoger dan 300 mg/g creatinine in ten minste twee opeenvolgende metingen.zwaarlijvigheidwerd gedefinieerd als een body mass index (BMI) groter dan 25.0 (kg/m²). Type 2 diabetes werd gediagnosticeerd volgens de criteria van de Wereldgezondheidsorganisatie. Biochemische metingen bij opname voor nierbiopsie werden gebruikt als basislijnkenmerken voor cross-sectionele analyse. De geschatte glomerulaire filtratiesnelheid (eGFR) werd berekend met behulp van een vereenvoudigde voorspellingsvergelijking voorgesteld door de Japanese Society of Nephrology: eGFR (ml/min/1,73 m²)=1946 [leeftijd (jaren)]20.287 6 [serumcreatinine (mg perdl)]21.094 60.739 (voor vrouwen), wat een gevalideerde lokale wijziging van MDRD is [ 10]. De serumconcentraties van creatinine werden gemeten met behulp van een enzymatische methode.

Voor immunohistochemie werden 65 Japanse patiënten geanalyseerd die tussen 2000 en 2011 een nierbiopsie ondergingen bij de afdeling Geneeskunde en Klinische Wetenschappen van het universiteitsziekenhuis van Kyoto. Door biopsie bewezen diagnoses van alle patiënten tijdens deze periode staan ​​vermeld in Tabel S1 in Bestand S1. De proefpersonen die in dit werk werden onderzocht, waren DN (n=19), ORG (n=10) en niet-obese, niet-diabetische controlepersonen bij wie de diagnose MGA (n=19) of MCNS (n=17). Sommige gevallen in deze categorieën werden uitgesloten omdat de beschikbare restmonsters minder dan 10 glomeruli bevatten. Definitie van DN bestond uit (1) een duur van meer dan 5 jaar na het begin van diabetes, (2) het bestaan ​​van micro- of macro-albuminurie, (3) compatibele histopathologische veranderingen met DN zoals verdikking van het glomerulaire basaalmembraan, mesangiale expansie, nodulair sclerose (Kimmelstiel-Wilson knobbeltjes) en/of arteriolaire hyalinose, en (4) uitsluiting van andere oorzaken van nieraandoeningen [11]. ORG werd morfologisch gedefinieerd als focale segmentale glomerulosclerose en/of glomerulomegalie bij personen met beidezwaarlijvigheiden proteïnurie, waarvan de definities hierboven werden beschreven [12,13].

Voor mRNA-expressieanalyse werden monsters van lage kwaliteit, waarin 18S-ribosomaal RNA (rRNA) -niveaus lager waren dan de detectiegevoeligheidslimiet door realtime RT-PCR, uitgesloten. De deelnemers bestonden uit 22 type 2 diabetespatiënten die tussen 2000 en 2010 een nierbiopsie ondergingen in het Osaka City General Hospital, en 6 niet-diabetische controlepersonen bij wie door biopsie bewezen MGA was.

Tabellen 1 en 2 vatten de klinische basiskenmerken samen van de patiënten die werden onderzocht door respectievelijk immunohistochemische of genexpressie-analyse. Voor lichtmicroscopie werden de weefselmonsters verwerkt volgens standaardprocedures. Secties werden gekleurd met hematoxyline-eosine, perjoodzuur-Schiff, perjoodzuur methenaminezilver of Masson-trichroom (Fig. S1). De verhoudingen van het aantal glomeruli met globale sclerose tussen dat van de totale glomeruli en de relatieve gebieden van tubulo-interstitiële fibrose werden onafhankelijk geëvalueerd door twee pathologen die niet op de hoogte waren van de diagnose en klinische gegevens.

Effecten van cistanche: behandeling van nierziekten

Definitie van renale uitkomsten

De volgende twee prognostische indicatoren werden onderzocht door respectievelijk lineaire regressie- en logistische regressieanalyses: (1) de mate van proteïnurie gemeten één jaar na biopsie, en (2) niergebeurtenis gedefinieerd als de jaarlijkse toename van serumcreatinine met 0,50 procent vanaf baseline of aanvang van chronische dialyse.

Immunohistochemie

Immunohistochemie van MRP8 en CD68 werd uitgevoerd met behulp vanniersecties (dikte 4 mm) gefixeerd met 4 procent gebufferde paraformaldehyde. Na het ophalen van antigeen door citraatbuffer, werden niersecties geïncubeerd met 10 procent geitenserum, gevolgd door muis-anti-humaan MRP8 (1:100; BMA biomedicals, Augst, Zwitserland) [14] of muis-anti-humane CD68-antilichamen (1:50 ; DAKO, Ely, VK), respectievelijk. Primaire antilichamen werden zichtbaar gemaakt met aan mierikswortelperoxidase geconjugeerd secundair antilichaam en 3,3-diaminobenzidinetetrahydrochloride (Dako USA, Carpinteria, CA). Kernen werden tegengekleurd met hematoxyline. MRP8-positieve cellen werden geteld in meer dan 10 glomeruli en het MRP8-positieve gebied in tubulointerstitium werd kwantitatief gemeten om een ​​gemiddelde te verkrijgen voor elke proefpersoon met behulp van MetaMorph 7.5-software (Molecular Devices, Downingtown, PA, VS ). Colocalisatie van CD68- en MRP8-positieve cellen werd geëvalueerd met seriële secties. Er was noch MRP8- noch CD68-signaal in negatieve controles gekleurd zonder eerste antilichaam (Fig. S2). Door pre-incubatie van anti-MRP8-antilichaam met 20 molaire overmaat recombinant humaan MRP8-eiwit (Life Technologies, Carlsbad, CA, VS) 's nachts bij 4 ° C, werd de kleuring aanzienlijk verminderd, zo niet volledig, wat de specificiteit van het antilichaam verder ondersteunt (Fig. S3) .

Cistanche om nier te behandelen

Evaluatie van mRNA-expressie

Bevrorenniersecties werden gescheiden in glomeruli- en niet-glomerulusweefsels door microdissectie met laseropname (LM200; Olympus, Tokyo, Japan) zoals eerder beschreven [15]. Totaal RNA werd geëxtraheerd met RNeasy-minikit (Qiagen, Tokyo, Japan). mRNA-expressieniveaus werden bepaald door TaqMan realtime PCR (Applied Biosystems, Foster City, CA, VS) [16,17]. Expressieniveaus van alle genen werden genormaliseerd door 18S rRNA (interne controle) niveaus. Zie tabel S2 in bestand S1 voor primer- en probesequenties. Eukaryoot 18S-rRNA werd gedetecteerd met PreDeveloped TaqMan Assay Reagents (Applied Biosystems).

Tabel 1. Klinische kenmerken bij baseline van patiënten bij nierbiopsie die werden geanalyseerd op MRP8-eiwitexpressie door middel van immunohistochemie.

MGA: kleine glomerulaire afwijking, MCNS: nefrotisch syndroom met minimale verandering, ORG:zwaarlijvigheid-gerelateerde glomerulopathie, DN: diabetische nefropathie, BMI: body mass index, BUN: bloedureumstikstof, CRP: C-reactief proteïne. Gegevens zijn gemiddelden 6 SD. *Algemene verschillen tussen MGA-, MCNS-, ORG- en DN-groepen werden vergeleken door ANOVA.doi:10.1371/journal.pone.0088942.t001

MRP8-behandeling van macrofagen

Van beenmerg afgeleide macrofagen werden gegenereerd uit wildtype of TLR4 knock-out (KO) muizen [18] op C57BL/6J genetische achtergrond (Oriental BioService, Kyoto, Japan) zoals eerder beschreven [6]. In het kort, na lysis van rode bloedcellen, werden beenmergcellen opnieuw gesuspendeerd in een medium dat 20 procent foetaal kalfsserum en 50 ng/ml recombinante menselijke macrofaag-kolonie-stimulerende factor bevat (Peprotech, Rocky Hill, NJ, VS) en gekweekt op 37uC in 5 procent CO2-atmosfeer. Op dag 7 werden macrofagen 4 uur geïncubeerd met recombinante muis MRP8 (Abnova, Taipei, Taiwan) of vehikel. Polymyxine B (25 mg/ml, NacalaiTesque, Kyoto, Japan) werd aan elk putje toegevoegd om contaminatie van endotoxine te minimaliseren, zoals eerder beschreven [3,19]. Noendotoxine werd gedetecteerd bij elke concentratie van MRP8 die hierna werd getest incubatie met 25 mg / ml polymyxine B door ToxinSensorChromogenic LAL Endotoxine Assay Kit (GenScript, Piscataway, NJ, VS). Totaal RNA uit cellen werd geëxtraheerd met RNeasy MiniKit, en mRNA-expressieniveaus van interleukine-1 bèta (IL-1b), tumornecrosefactor-alfa (TNFa) en MRP8 werden in realtime bepaald door TaqMan RT-PCR. Expressieniveaus van alle genen werden genormaliseerd door GAPDH-niveaus van knaagdieren (interne controle, vooraf ontwikkelde TaqMan-assayreagentia). Primer- en probesequenties voor realtime PCR worden vermeld in tabel S2 in bestand S1.

statistische analyse

Gegevens worden uitgedrukt als gemiddelden 6 SD, of betekent 695 procent betrouwbaarheidsinterval (BI) indien van toepassing. Voor de vergelijking tussen vier groepen werd een eenrichtings- of tweerichtings-ANOVA met Bonferroni's post-hocanalyse gebruikt en werden categorische variabelen vergeleken met behulp van een x2-test. De ongepaarde t-test van de student werd toegepast voor vergelijking tussen twee groepen, waar van toepassing. Spearman-correlatiecoëfficiënten werden geschat om associaties tussen twee variabelen te bepalen. Om de effecten te onderzoeken van baseline-covariaten die de mate van glomerulaire of tubulo-interstitiële MRP8-expressie of urine-eiwitniveaus bepalen één jaar na biopsie, werden univariate en multivariate lineaire regressieanalyses uitgevoerd. Logistische regressieanalyse werd gebruikt om verklarende variabelen te analyseren die het optreden van nieraandoeningen voorspellen. Alle gegevens werden geanalyseerd met behulp van StatView 5.0-software (SAS InstituteInc., Cary, NC, VS). P-waarden,0.05 werden als statistisch significant beschouwd.

Effecten van cistanche: behandeling van nierziekten

Resultaten

We vergeleken MRP8-eiwitexpressieniveaus in deniertussen DN-, ORG- en niet-zwaarlijvige, niet-diabetische controlegroepen (MGA en CNS). Immunohistochemische analyse onthulde dat zowel glomerulaire MRP8-positieve celtelling (Fig. 1A) en tubulo-interstitiële MRP8-positieve gebied (Fig. 1B) in DN significant groter waren dan die in andere groepen, waaronder MGA, MCNS, en ORG (P<0.01). org="" subjects="" also="" showed="" a="" tendency="" of="" elevated="" mrp8expression="" compared="" to="" mga="" and="" mcns="" (fig.="" 1a,="" 1b).="" furthermore,="" glomerular="" mrp8="" mrna="" expression="" levels="" in="" dn="" subjects="" were="" significantly="" higher="" compared="" to="" non-dm="" control="" subjects="" (p,0.01,="" fig.="" 1c).="" in="" non-glomerulus="" tissues,="" mrp8mrna="" expression="" levels="" were="" much="" lower="" than="" those="" in="" glomeruli,="" both="" in="" non-dm="" and="" dm="" groups.="" abundant="" mrp8="" protein="" expression="" in="" the="" tubulointerstitium="" of="" dn="" cases="" was="" not="" clearly="" reflected="" into="" increased="" mrna="" expression,="" which="" may="" be="" partly="" caused="" by="" deposition="" of="" blood-derived="" proteins="" in="" the="" tubulointerstitium="" as="" discussed="" in="" the="" next="" section.="" as="" shown="" in="" representative="" photos="" (fig.="" 1d–g,="" see="" fig.="" s4="" in="" detail),="" renal="" biopsy="" samples="" from="" mga="" and="" mcns="" subjects="" showed="" few="" mrp8-positive="" cells="" in="" glomeruli="" (fig.="" 1d,="" 1e="" and="" fig.="" s4).="" in="" org="" subjects,="" somemrp8-positive="" cells="" appeared="" in="" glomeruli="" and="" tubulointerstitium(fig.="" 1f="" and="" fig.="" s4).="" in="" dn="" subjects,="" a="" marked="" increase="" of="" mrp8-expressing="" cells="" in="" glomeruli="" and="" significant="" expansion="" of="" mrp8-positive="" areas="" in="" the="" tubulointerstitium="" were="" observed="" in="" a="" focal="" manner="" (fig.="" 1g="" and="" fig.="" s4).="" of="" note,="" mrp8-positive="" cells="" were="" absent="" in="" nodular="" sclerosing="" lesions="" of="" diabetic="" glomeruli="" (fig.="" s4:dn="" case="" 2,="" 3)="" as="" described="" previously="" for="" sclerotic="" lesions="" in="" anca-associated="" glomerulonephritis="" [20].="" paired="" immunohistochemistry="" for="" cd68="" and="" mrp8="" in="" serial="" sections="" suggested="" thatmrp8="" signals="" were,="" at="" least="" in="" part,="" observed="" in="" macrophages="" expressing="" cd68="" (fig.="" 2),="" as="" we="" reported="" in="" a="" mouse="" model="" of="" diabetic="" nephropathy="" [6].="" besides,="" focally="" injured="" atrophic="" tubular="" epithelial="" cells="" also="" strongly="" expressed="" mrp8,="" which="" were="" surrounded="" by="" mrp8(+)-,="" cd68(+)-positive="" macrophages="" (fig.="" 2,="" fig="" s4:="" dn="" case="" 3-5).="" in="" the="" cases="" with="" nephrotic="" range="" proteinuria,="" mrp8="" staining="" was="" also="" observed="" along="" brush="" borders="" of="" proximal="" tubules="" both="" in="" mcns="" and="" dn="" cases="" (fig.="" s4).="" since="" the="" sample="" number="" of="" mrna="" expression="" was="" too="" small="" for="" multivariate="" analysis,="" the="" following="" analyses="" were="" performed="" using="" data="" from="" patients="" studied="" by="">

Tabel 2. Klinische kenmerken bij baseline van patiënten bij nierbiopsie die werden geanalyseerd op MRP8-mRNA-expressie door real-time RT-PCR.

De associaties tussennierMRP8-signalen en klinische baselineparameters op het moment van nierbiopsie werden cross-sectioneel geanalyseerd (Tabel 3). Door univariate analyse was glomerulaire en/of tubulo-interstitiële MRP8-eiwitexpressie significant gecorreleerd met leeftijd, systolische en diastolische bloeddruk, urine-eiwit, serumspiegels van creatinine, BUN- en HDL-cholesterol, eGFR en mate van globale glomerulosclerose en tubulo-interstitiële fibrose. Deze parameters werden verder onderzocht door multivariate analyse na uitsluiting van diastolische bloeddruk, eGFR en BUN vanwege collineariteit. Percentage tubulo-interstitiële fibrose was onafhankelijk gecorreleerd met glomerulaireMRP8-signalen (b=0.62, gecorrigeerde P=0.02) en tubulo-interstitiëleMRP8-signalen (b=0.85, gecorrigeerde P ,0,001), respectievelijk. Bovendien waren tubulo-interstitiële MRP8-signalen ook onafhankelijk gecorreleerd met baseline proteïnurie (b=0.20, aangepaste P=0.01). Verspreide plotanalyses tussen MRP8-signalen in glomeruli of tubulo-interstitium en klinische parameters gaven aan dat de MCNS-groep een duidelijk distributiepatroon van andere groepen, vooral wat betreft urine-eiwit en serum LDL-cholesterolwaarden (Fig. S5A-D, S6A-D). Uitsluiting van de MCNS-groep verbeterde de correlatie tussen MRP8-signalen en urine-eiwit- of serum-LDL-cholesterolniveaus (Fig. S5E-F, S6E-F). Daarom voerden we een subanalyse uit waarbij MCNS-patiënten werden uitgesloten en ontdekten dat urine-eiwit een onafhankelijke factor was die gecorreleerd was met glomerulaire MRP8-signalen door multivariate analyse (Tabel 4; b=0.36, aangepaste P=0.03 ).

Vervolgens voerden we lineaire regressie- of logistische regressieanalyses uit om verklarende factoren te identificeren die de nieruitkomsten voorspellen, namelijk de mate van proteïnurie een jaar later en niergebeurtenis binnen een jaar. Aangezien er een goede associatie was tussen glomerulaire en tubulo-interstitiële MRP8-signalen (Fig. S7; R=0.67,P,0.001), werden deze parameters als alternatief opgenomen in verdere analyses . We evalueerden de associatie tussen baseline parameters en urine-eiwit 1 jaar na nierbiopsie door middel van meervoudige regressie-analyse. Zoals weergegeven in Tabel 5 was het glomerulaire MRP8-signaal (b=0,59, aangepaste P:0,001) een voorspellende factor voor de mate van proteïnurie een jaar later, evenals voor de baseline systolische bloeddruk (b {{13} }.21, gecorrigeerde P=0.04) en baseline proteïnurie (b=0.37, gecorrigeerde P=0.002) waren. Deze parameters waren onafhankelijk van andere bekende risicofactoren voor diabetische nefropathie, waaronder nierdisfunctie (serumcreatinine) en de mate van globale sclerose en tubulo-interstitiële fibrose [11,21-24]. Aan de andere kant was het tubulo-interstitiële MRP8-signaal (b=0.34, gecorrigeerde P=0.09) een jaar later geen onafhankelijke voorspellende factor voor urinaire eiwitniveaus. Niervoorvallen traden op bij 7 patiënten (6 in DN en 1 in ORG-gevallen) binnen een jaar na nierbiopsie. Door univariate analyse waren niet alleen de mate van glomerulosclerose en tubulo-interstitiële fibrose, en glomerulaire en tubulo-interstitiële MRP8-signalen, maar ook bloeddruk, nierdisfunctie en urine-eiwitniveaus bij baseline significante voorspellende factoren voor het optreden van nieraandoeningen. Door multivariate analyse werden hun covariaten echter door elkaar tenietgedaan (tabel S3 in bestand S1), waarschijnlijk als gevolg van hoge correlaties tussen deze parameters.

Ten slotte onderzochten we de potentie van MRP8 als een endogeen ligand voor TLR4 met behulp van gekweekte macrofagen. In beenmerg-afgeleide macrofagen van wildtype muizen, veroorzaakte MRP8-eiwit de opregulatie van pro-inflammatoire cytokinegenen zoals IL-1b en TNFa en veroorzaakte het ook auto-inductie van MRP8, op een dosisafhankelijke manier tussen 1{{ 15}}–1000 ng/ml. Deze effecten van MRP8 werden met ongeveer tweederde onderdrukt in macrofagen die waren verkregen van TLR4 KO-muizen (P=0,01) (Fig. 3).

Figuur 1. Immunohistochemische en mRNA-analyses voor MRP8 innierbiopsie monsters. Kwantificering van glomerulaire MRP{{0}}positieve celtelling (A) en tubulo-interstitiële MRP8-positieve gebied (B). mRNA-expressie van MRP8 in glomerulaire en niet-glomerulaire fracties (C). Open balken: niet-zwaarlijvige, niet-diabetische controles die MGA of MCNS zijn, gesloten balken: ORG of DN (A–C). Representatieve foto's van MGA-, MCNS-, ORG- en DN-groepen (D-G). MGA: kleine glomerulaire afwijking, MCNS: nefrotisch syndroom met minimale verandering, ORG: aan obesitas gerelateerde glomerulopathie, DN: diabetische nefropathie. *P,0.01.doi:10.1371/journal.pone.0088942.g001

Discussie

De huidige studie heeft aangetoond dat MRP8 overvloedig tot expressie wordt gebracht in glomeruli en tubulo-interstitium van patiënten met DNA's in vergelijking met ORG en niet-obese, niet-diabetische controle (MGA en MCNS). Bovendien waren de MRP8-expressieniveaus bij ORG-proefpersonen meestal hoger dan bij MGA- of MCNS-proefpersonen. In cross-sectioneel onderzoek bij baseline met alle proefpersonen, door univariate lineaire regressieanalyse, waren respectievelijk glomerulaire MRP8-positieve celtelling en tubulo-interstitiële MRP8-positieve gebied niet alleen gecorreleerd met verschillende bekende risicofactoren voor diabetische nefropathie (zoals systolische bloeddruk, proteïnurie en serumcreatinine), maar ook met de mate van glomerulosclerose en tubulo-interstitiële fibrose. Door multivariate analyse was het tubulo-interstitiële MRP8-positieve gebied significant gecorreleerd met proteïnurie en tubulo-interstitiële fibrose. Glomerulaire MRP8-positieve celtelling was significant gecorreleerd met tubulo-interstitiële fibrose in de primaire analyse, en met proteïnurie in een subanalyse exclusief de MCNS-groep. Immunohistochemie gaf aan dat MRP8, tenminste gedeeltelijk, tot expressie werd gebracht door CD68(plus) tot expressie brengende macrofagen en atrofische tubuli. Deze bevindingen verhogen de mogelijkheid datnierMRP8-signalen in glomeruli of tubulo-interstitium kunnen dienen als nieuwe markers van diabetische nefropathie.

Figuur 2. Lokalisatie van CD68- en MRP8-eiwitexpressie in seriële secties van gevallen van diabetische nefropathie. Expressie van CD68(A, B) en MRP8-expressie (C, D) in gepaarde niermonsters (A en C, ofB en D). Pijlen geven colokalisatie van CD68- en MRP8-signalen aan.doi:10.1371/journal.pone.0088942.g002

In het prognostische onderzoek bleek uit multivariate analyse dat eiwitniveaus in de urine een jaar na nierbiopsie onafhankelijk geassocieerd waren met glomerulaire MRP8-positieve celtelling, urine-eiwit en systolische bloeddruk bij baseline. Merk op dat glomerulaire MRP8-expressie een jaar later de sterkste correlatie vertoonde met urine-eiwit (b= 0,87), zelfs sterker dan baseline urine-eiwit (b=0,78), door univariate analyse. Dit komt deels doordat de glomerulaire MRP8-expressie niet grotendeels verhoogd is bij 'goedaardige' vormen van proteïnurie zoals die worden waargenomen bij MCNS-patiënten, van wie de proteïnuriespiegels extreem hoog zijn bij diagnose door middel van een nierbiopsie, maar gewoonlijk binnen een jaar na aanvang van de immunosuppressieve therapie verdwijnen. Deze bevindingen suggereren dat glomerulaire MRP8-expressie een unieke voorspellende aard kan hebben als een ziektemarker, die niet kan worden vervangen door baseline proteïnurie of routinematige pathologische analyse die globale glomerulosclerose en tubulo-interstitiële fibrose evalueert. Bovendien speculeren we dat glomerulaire MRP8-expressie geen eenvoudige marker of omstander is, maar een actieve speler in glomerulaire verwonding, zoals hieronder wordt besproken.

De determinatiecoëfficiënt (R2) berekend met verklarende parameters opgenomen in meervoudige regressieanalyse was respectievelijk 0,52* en 0,74#. ja, jaren; bloeddruk, bloeddruk; gCr, g-creatinine; T-chol, totaal cholesterol; HDL-Chol, HDL-cholesterol; LDL-chol, LDL-cholesterol; GS, glomerulosclerose; TI, tubulointerstitial.doi:10.1371/journal.pone.0088942.t003

Tabel 4. Subanalyse van de relatie tussen klinische baselineparameters en MRP8-signalen, na uitsluiting van de MCNS-groep.

Tabel 5. Meervoudige regressieanalyse voor identificatie van factoren die eiwitniveaus in de urine voorspellen 1 jaar na nierbiopsie

Figuur 3. Effecten van MRP8 op uit beenmerg afgeleide macrofagen. Van beenmerg afgeleide macrofagen (BMDM) werden gedurende 4 uur gestimuleerd met recombinant muis MRP8. Foutbalken geven 95 procent CI aan en statistische analyses werden uitgevoerd met log-getransformeerde waarden. Tweeweg-ANOVA onthulde significante effecten van genotypen, MRP8-concentraties en hun interacties voor expressie van alle 3 de genen (P,0.001 voor alle vergelijkingen). n=4. WT, wildtype; KO, knock-out; IL-1b, interleukine 1 bèta; TNFa, tumornecrosefactor-alfa. *P,0,01 onder verschillende concentraties, #P,0,01 onder genotypes.doi:10.1371/journal.pone.0088942.g003

In een andere poging tot een longitudinaal onderzoek kon bij logistische regressieanalyse geen onafhankelijke voorspeller worden gevonden voor het optreden van een nieraandoening binnen een jaar. We speculeren dat dit gedeeltelijk komt omdat tubulo-interstitiële MRP8-expressie en tubulo-interstitiële fibrose twee krachtige voorspellers waren voor niergebeurtenissen in univariate analyse, maar hun significanties werden door elkaar tenietgedaan in multivariate analyse. Deze twee parameters vertoonden een sterke correlatie (R=0.68, P,0.001) (Fig. S8), wat suggereert dat deze twee parameters equivalent zouden kunnen zijn aan het voorspellen van niergebeurtenissen. Interstitiële MRP8-expressie vertoonde inderdaad een vrij gelijkaardig patroon als interstitiële fibrose geëvalueerd door Masson-trichroomkleuring. De hoeveelheid interstitiële MRP8 hangt grotendeels af van de positieve signalen in atrofische tubuli in plaats van die in macrofagen, waarvan het kenmerk verschilt van dat van glomerulaire MRP8 in een puntvormige verdeling. Bovendien kunnen een kleine steekproefomvang, een korte observatieperiode en een paar proefpersonen die nieraandoeningen ontwikkelden, het detectievermogen hebben verminderd. Aangezien MRP8-expressie in tubulaire epitheelcellen een oorzakelijke rol speelt in de progressie van tubulo-interstitiële ontsteking in een muismodel van nierfibrose [7], zal verdere analyse nodig zijn om de rol van tubulo-interstitiële MRP8 in DN te verduidelijken.

In overeenstemming met onze eerdere studie [6], werd MRP8-mRNA voornamelijk opgereguleerd in de glomerulaire fractie van menselijke DN-proefpersonen in vergelijking met controlepersonen met MGA. Aan de andere kant werd MRP8-eiwitexpressie niet alleen waargenomen in de glomerulus, maar ook in het tubulo-interstitium. In dit verband moet worden opgemerkt dat er twee verschillende patronen van MRP8-kleuring waren in het tubulo-interstitium van DN. Een daarvan was intense en focale kleuring in ernstig atrofische tubuli. De andere was milde kleuring verspreid langs de borstelrand van proximale tubuli, die ook werd gevonden in ORG en MCNS. De laatste signalen vertegenwoordigen waarschijnlijk MRP8-eiwit dat is afgeleid van het bloed en opnieuw wordt geabsorbeerd door proximale tubuli, wat niet gepaard mag gaan met verhoogde MRP8-mRNA-expressie. Met betrekking tot andere eiwitten dan MRP8 hebben wij en anderen onlangs soortgelijke fenomenen gerapporteerd van detectie van immunoreactief eiwit in de proximale tubuli, veroorzaakt door reabsorptie maar niet door renale synthese [25,26]. Aan de andere kant, aangezien er een beetje MRP8-kleuring achterbleef in de antilichaamabsorptietest, vooral in glomerulaire exsudatieve laesies en ernstig littekens, fibrotische laesies rond atrofische tubuli, kan de aanwezigheid van niet-specifieke signalen niet volledig worden teniet gedaan (Fig. S3).

Glomerulaire MRP8-signalen vertoonden voornamelijk interpunctiepatronen bij DN-proefpersonen (Fig. 1, Fig. S4). Aangezien zowel CD68 als MRP8 werden gedetecteerd door monoklonale antilichamen van muizen, werd de lokalisatie van deze moleculen geëvalueerd door seriële secties, niet door dubbele immunokleuring. Kleurpatronen van MRP8 waren compatibel met die bij andere inflammatoire nieraandoeningen, waaronder IgAnephritis [27], membranoproliferatieve glomerulonefritis [14] en ANCA-gerelateerde glomerulonefritis [20], waarbij macrofagen werden gesuggereerd als een belangrijke bron van MRP8, zoals we rapporteerden in een knaagdiermodel [6]. Bovendien kunnen neutrofielen worden beschouwd als een andere bron van MRP8 die vasculaire complicaties beïnvloedt [28]. Momenteel onderzoeken we het moleculaire mechanisme waarom MRP8 voornamelijk wordt opgereguleerd in cellen van de myeloïde lijn die glomeruli infiltreren. In vitro onderzoek onthulde dat MRP8 inflammatoire cytokine-expressie induceerde en ook expressie van MRP8 zelf in macrofagen op een TLR4-afhankelijke manier versterkte. Bovendien waren MRP8-positieve cellen afwezig in nodulaire scleroserende laesies, wat suggereert dat glomerulaire MRP8 aanhoudende glomerulaire schade zou kunnen weerspiegelen [20]. Belangrijk is dat een grootschalige menselijke studie rapporteerde dat MRP8-genexpressie in mononucleaire bloedcellen van type 1 diabetespatiënten significant verhoogd is bij personen met diabetische complicaties, waaronder nefropathie [29].

Omdat remming van het renine-angiotensinesysteem (RAS) een belangrijke determinant is van nieruitkomsten, onderzochten we de effecten van RAS-blokkade opnierMRP8 uitdrukking. We vonden geen significant verschil in MRP8-mRNA-expressie in de nieren tussen DN-patiënten die met of zonder RAS-blokkade werden behandeld (Fig. S9), waarschijnlijk omdat gevallen die met RAS-blokkade werden behandeld de neiging hadden om ernstigere hypertensie en proteïnurie te hebben dan gevallen zonder RAS-blokkade

Bij zwaarlijvige mensen en muizen kan een verhoogd plasma MRP8/14-complex wijzen op een mate vanzwaarlijvigheiden zijn afkomstig van zowel adipocyten als leukocyten [8,9]. Onze ORG-gevallen vertoonden milde kleuring van MRP8 in proximale tubuli, wat wijst op verhoogde plasmaspiegels van MRP8. Daarentegen was er geen significante correlatie tussen tubulo-interstitiële MRP8-expressie en body mass index (Fig. S6G). Daarom is lokale MRP8-expressie in denierkan beter dienen als een marker voor nierbeschadiging dan voor:zwaarlijvigheid[8,9].

Cistanche voor het verbeteren van nierdisfunctie

Onze studie heeft verschillende beperkingen. Het steekproefaantal van elke onderzochte groep was klein. Niet-identieke proefpersonen werden opgenomen in de mRNA- en immunohistochemische analyses. Aangezien we alleen patiënten hebben geanalyseerd die een nierbiopsie hebben ondergaan, is het mogelijk dat de samenstelling van de hier onderzochte patiënten niet overeenkomt met die van algemene type 2 diabetespatiënten of in het algemeen chronischenierziekte onderwerpen. Hoewel leeftijd niet werd behouden als een onafhankelijke factor geassocieerd met MRP8-signalen in onze gegevens (Tabel 3), is het bekend dat veroudering geassocieerd is met chronische ontsteking [30]. De effecten van leeftijd kunnen niet volledig worden verwaarloosd. Hoewel de meeste MRP8-signalen verloren gingen in de antilichaamabsorptietest, bleven er enkele positieve signalen over, die mogelijk veroorzaakt werden door de niet-specifieke binding van het eerste antilichaam. Zoals hierboven besproken, helpt onderzoek naar renale MRP8-expressie door nierbiopsie ons de pathofysiologie en prognose van chronische nierziekten te begrijpen, vooral geassocieerd metzwaarlijvigheiden diabetes, maar heeft een nadeel bij routinematig en herhaald gebruik in poliklinieken

Samenvattend suggereert de huidige studie dat de expressie van MRP8 in denierweerspiegelt de huidige pathologische status en voorspelt ook de nieruitkomsten bij patiënten metzwaarlijvigheidoftype 2 diabetes. Verder onderzoek naar urine MRP8-niveaus bij obese of diabetespatiënten op grote schaal kan gerechtvaardigd zijn

ondersteunende informatie

Figuur S1 Representatieve foto's met nierbiopsiesecties van een DN-patiënt gekleurd met (A) perjoodzuur Schiff, (B) perjoodzuur methenaminezilver of (C) Masson-trichroom. De verhouding van het aantal glomeruli met globale sclerose (pijlen) tussen dat van de totale glomeruli en het relatieve gebied van tubulo-interstitiële fibrose was bij deze patiënt respectievelijk 33 procent en 65 procent. (TIF)

Figuur S2 Immunohistochemie voor MRP8- en CD68-eiwitten bij DN-patiënten. Foto's in de rechterkolom tonen experimenten met negatieve controle zonder 1e antilichaam. (TIF)

Figuur S3 Antilichaamabsorptietest voor MRP8-kleuring.PBS: fosfaatgebufferde zoutoplossing, rhMRP8: recombinant humaanMRP8.(TIF)

Figuur S4 Representatieve foto's van MRP8-expressie in MGA-, MCNS-, ORG- en DN-groepen. (TIF)

Figuur S5 Correlatie tussen glomerulaire MRP8-positieve celtelling en klinische parameters. De log-getransformeerde waarden van MRP8-signalen werden gebruikt. De correlaties werden geanalyseerd met behulp van alle 4 groepen (A-D, G) of 3 groepen exclusief de MCNS-groep (E, F). Open cirkels: kleine glomerulaire afwijking (MGA), gesloten cirkels: minimale verandering nefrotisch syndroom (MCNS), open driehoeken:zwaarlijvigheid-gerelateerde glomerulopathie (ORG), gesloten driehoeken: diabetische nefropathie (DN).(TIF)

Figuur S6 Correlatie tussen tubulo-interstitiële MRP8-positieve gebied en klinische parameters. De log-getransformeerde waarden van MRP8-signalen werden gebruikt. Deze correlaties werden geanalyseerd met behulp van alle 4 groepen (A-D, G) of 3 groepen met uitzondering van de MCNS-groep (E, F). (TIF)

Figuur S7 Correlatie tussen glomerulaire en tubulo-interstitiële MRP8-expressie. De log-getransformeerde waarden van MRP8-signalen werden gebruikt. (TIF)

Figuur S8 Correlatie tussen tubulo-interstitiële MRP8-positief gebied en tubulo-interstitiële fibrose. De log-getransformeerde waarden van MRP8-signalen werden gebruikt. (TIF)

Figuur S9 Renale mRNA-expressie van MRP8 bij DN-patiënten met of zonder renine-angiotensineblokkade.NS: niet significant. n=15 (Ja), 6 (Nee). Van 22 DN-gevallen was informatie over medicatie niet beschikbaar bij één patiënt. (TIF)

Bestand S1 Ondersteunende tabellen.

Tabel S1, Pathologische diagnoses van alle gevallen die nierbiopsie ondergingen bij de afdeling Geneeskunde en Klinische Wetenschappen, Kyoto University Hospital tussen 2000 en 2011. Tabel S2, Primer- en probesequenties voor TaqMan realtime RT-PCR. Tabel S3, Logistieke regressieanalyse voor het optreden van een nieraandoening binnen een jaar. (DOC) Dankbetuigingen We erkennen dankbaar S. Tanaka voor statistisch advies, Y. Ogawa, N.Igarashi en C. Kimura voor technische assistentie, en A. Yamamoto en SOgino voor assistentie van de secretaris. Auteur Bijdragen De experimenten bedacht en ontworpen: TK KM MK HY MI AN KNMM. De experimenten uitgevoerd: TK HI AI KK TM YK MI AN. De gegevens geanalyseerd: TK KM MK HY AS SY KU KN MM. Bijgedragen reagentia/materialen/analysetools: TK KM. Schreef het papier: TK KMMM.

Effecten van cistanche: behandeling van nierziekten

Referenties

1. Donath MY, Shoelson SE (2011) Type 2-diabetes als een ontstekingsziekte. Nat Rev Immunol 11: 98-107.

2. Odink K, Cerletti N, Bruggen J, Clerc RG, Tarcsay L, et al. (1987) Twee calciumbindende eiwitten bij het infiltreren van macrofagen van reumatoïde artritis. Nature 330: 80-82.

3. Vogl T, Tenbrock K, Ludwig S, Leukert N, Ehrhardt C, et al. (2007) Mrp8 en Mrp14 zijn endogene activatoren van Toll-like receptor 4, die dodelijke, endotoxine-geïnduceerde shock bevorderen. Nat Med 13: 1042-1049.

4. Croce K, Gao H, Wang Y, Mooroka T, Sakuma M, et al. (2009) Myeloïde-gerelateerd eiwit-8/14 is van cruciaal belang voor de biologische reactie op vaatletsel. Circulatie 120: 427-436.

5. Verliezer K, Vogl T, Voskort M, Lueken A, Kupas V, et al. (2010) De Toll-like receptor 4-liganden Mrp8 en Mrp14 zijn cruciaal bij de ontwikkeling van autoreactieve CD8 plus T-cellen. Nat Med 16: 713-717.

6. Kuwabara T, Mori K, Mukoyama M, Kasahara M, Yokoi H, et al. (2012) Exacerbatie van diabetische nefropathie door hyperlipidemie wordt gemedieerd door Toll-like receptor 4 bij muizen. Diabetologie 55: 2256-2266.

7. Fujiu K, Manabe I, Nagai R (2011) Nierverzamelbuisepitheelcellen reguleren ontsteking bij tubulo-interstitiële schade bij muizen. J Clin Invest 121: 3425-3441.

8. Sekimoto R, Kishida K, Nakatsuji H, Nakagawa T, Funahashi T, et al. (2012) Hoge circulerende niveaus van S100A8 / A9-complex (calprotectine) bij mannelijke Japanners met abdominale adipositas en ontregelde expressie van S100A8 en S100A9 in vetweefsel van zwaarlijvige muizen. Biochem Biophys Res Commun 419: 782-789.

9. Mortensen OH, Nielsen AR, Erikstrup C, Plomgaard P, Fischer CP, et al. (2009) Calprotectine - een nieuwe marker vanzwaarlijvigheid. PLoS One 4: e7419.

10. Matsuo S, Imai E, Horio M, Yasuda Y, Tomita K, et al. (2009) Herziene vergelijkingen voor geschatte GFR van serumcreatinine in Japan. ben JNierDis53: 982-992.

11. Gross JL, de Azevedo MJ, Silveiro SP, Canani LH, Caramori ML, et al. (2005) Diabetische nefropathie: diagnose, preventie en behandeling. Diabeteszorg 28:164-176.

12. Kambham N, Markowitz GS, Valeri AM, Lin J, D'Agati VD (2001)zwaarlijvigheid-gerelateerde glomerulopathie: een opkomende epidemie.NierInt 59: 1498-1509.

13. Praga M, Morales E (2006)zwaarlijvigheid, proteïnurie en progressie van nierfalen. Curr Opin Nephrol Hypertens 15: 481-486.

14. Kawasaki Y, Hosoya M, Takahashi A, Isome M, Tanji M, et al. (2005) Myeloïdgerelateerde eiwit 8-expressies op macrofagen is een bruikbare prognostische marker voor nierdisfunctie bij kinderen met MPGN type 1. Am JNierDis 45: 510-518.

15. Nishiyama A, Konishi Y, Ohashi N, Morikawa T, Urushihara M, et al. (2011) Urine-angiotensinogeen weerspiegelt de activiteit van het intrarenale renine-angiotensinesysteem bij patiënten met IgA-nefropathie. Nephrol-wijzerplaattransplantatie 26: 170-177.

16. Ogawa Y, Mukoyama M, Yokoi H, Kasahara M, Mori K, et al. (2012) Natriuretische peptidereceptor guanylylcyclase-A beschermt podocyten tegen door aldosteron geïnduceerde glomerulaire schade. J Am Soc Nephrol 23: 1198-1209.

17. Yokoi H, Mukoyama M, Mori K, Kasahara M, Suganami T, et al. (2008) Overexpressie van bindweefselgroeifactor in podocyten verergert diabetische nefropathie bij muizen.NierInt 73: 446-455.

18. Hoshino K, Takeuchi O, Kawai T, Sanjo H, Ogawa T, et al. (1999) Cutting edge: Toll-like receptor 4 (TLR4)-deficiënte muizen zijn hyporesponsief op lipopolysaccharide: bewijs voor TLR4 als het Lps-genproduct. J Immunol162: 3749-3752.

19. Suganami T, Tanimoto-Koyama K, Nishida J, Itoh M, Yuan X, et al. (2007) Rol van de Toll-like receptor 4/NF-kappaB-route in door verzadigde vetzuren geïnduceerde inflammatoire veranderingen in de interactie tussen adipocyten en macrofagen. Arterioscler Tromb Vasc Biol 27: 84-91.

20. Pepper RJ, Hamour S, Chavele KM, Todd SK, Rasmussen N, et al. (2013) Leukocyten- en serum S100A8 / S100A9-expressie weerspiegelt ziekteactiviteit bij ANCA-geassocieerde vasculitis en glomerulonefritis.NierInt 83: 1150-1158.

21. Ravid M, Brosh D, Ravid-Safran D, Levy Z, Rachmani R (1998) De belangrijkste risicofactoren voor nefropathie bij type 2 diabetes mellitus zijn plasmacholesterolwaarden, gemiddelde bloeddruk en hyperglykemie. Arch Intern Med 158: 998-1004.

22. Adler AI, Stratton IM, Neil HA, Yudkin JS, Matthews DR, et al. (2000) Associatie van systolische bloeddruk met macrovasculaire en microvasculaire complicaties van diabetes type 2 (UKPDS 36): een prospectieve observationele studie. BMJ 321: 412-419.

23. Ruggenenti P, Remuzzi G (1998) Nefropathie van het type -2 diabetes mellitus. J Assoc Nephrol 9: 2157-2169.

24. Taft JL, Nolan CJ, Yeung SP, Hewitson TD, Martin FI (1994) Klinische en histologische correlaties van achteruitgang van de nierfunctie bij diabetespatiënten met proteïnurie. Diabetes 43: 1046-1051.

25. Matsusaka T, Niimura F, Shimizu A, Pastan I, Saito A, et al. (2012) Liverangiotensinogeen is de primaire bron van renaal angiotensine II. J Am Soc Nephrol23: 1181-1189.

26. Kuwabara T, Mori K, Mukoyama M, Kasahara M, Yokoi H, et al. (2009) Urine-neutrofiele gelatinase-geassocieerde lipocaline-niveaus weerspiegelen schade aan glomeruli, proximale tubuli en distale nefronen.NierInt 75: 285-294.

27. Kawasaki Y, Suyama K, Go H, Imamura T, Ushijima Y, et al. (2009) Accumulatie van macrofagen die myeloïde-gerelateerd eiwit tot expressie brengen 8 geassocieerd met de progressie van sclerotische veranderingen bij kinderen met IgA-nefropathie. Tohoku J Exp Med 218: 49-55.

28. Nagareddy PR, Murphy AJ, Stirzaker RA, Hu Y, Yu S, et al. (2013) Hyperglykemie bevordert myelopoëse en schaadt de resolutie van atherosclerose. Celmetab 17: 695-708.

29. Jin Y, Sharma A, Carey C, Hopkins D, Wang X, et al. (2013) De expressie van inflammatoire genen wordt opgereguleerd in perifeer bloed van patiënten met type 1 diabetes. Diabetes Zorg.

30. Longo VD, Finch CE (2003) Evolutionaire geneeskunde: van dwergmodelsystemen tot gezonde honderdjarigen? Wetenschap 299: 1342-1346.

Visum: Kuwabara T, Mori K, Kasahara M, Yokoi H, Imamaki H, et al. (2014) Voorspellende betekenis vanNierMyeloïde-gerelateerde proteïne 8-expressie bij patiënten metzwaarlijvigheid- of type 2 diabetes-geassocieerde nierziekten. PLoS ONE 9(2): e88942. doi:10.1371/journal.pone.0088942

Redacteur: Utpal Sen, Universiteit van Louisville, Verenigde Staten van Amerika

Ontvangen 11 september 2013; Geaccepteerd 14 januari 2014; Gepubliceerd op 18 februari 2014

Auteursrecht: 2014 Kuwabara et al. Dit is een open-access artikel dat wordt gedistribueerd onder de voorwaarden van de Creative Commons Attribution License, die onbeperkt gebruik, distributie en reproductie in elk medium toestaat, op voorwaarde dat de oorspronkelijke auteur en bron worden vermeld.

Financiering: Dit werk werd gedeeltelijk ondersteund door Grant-in-Aid voor diabetische nefropathie en nefrosclerose-onderzoek van het ministerie van Volksgezondheid, Arbeid en Welzijn van Japan (aan KM), onderzoekssubsidies van het Japanse ministerie van Onderwijs, Cultuur, Sport, Wetenschap , en Technologie (naar TK, KM en MM), van de Japan Foundation for Applied Enzymology (naar TK) en van de Smoking Research Foundation (naar MM). De financiers hadden geen rol bij het ontwerp van de studie, het verzamelen en analyseren van gegevens, de beslissing om het manuscript te publiceren of de voorbereiding van het manuscript.

Concurrerende belangen: De auteurs hebben verklaard dat er geen concurrerende belangen bestaan.

* E-mailadres: keyem@kuhp.kyoto-u.ac.jp