Kwaliteitsanalyse en uitgebreide evaluatie van Cistanche Deserticola van verschillende oorsprong in China

Samenvatting: De huidige studie heeft tot doel de kwaliteitsverschillen vanCistanche deserticola(CD) uit verschillende gebieden. De inhoud van bioactieve stoffen gewonnen uit verschillende delen (wortel, middelste en bovenste stengels) en hun antioxiderende activiteiten werden vergelijkend geanalyseerd. De resultaten toonden aan dat de inhoud en antioxiderende activiteiten van bioactieve componenten significant werden beïnvloed door oorsprong en onderdelen. De monsters uit de zuidelijke Tenggerwoestijn (D) vertoonden hoge concentratiestotale polyfenolen(17,66 mg GAE/g DW) enwoordelijk(6,98 mg/g DW). Deze verbindingen vertoonden een hoog opruimingsvermogen tegen ABTS (IC50=1,48 mg/ml) en DPPH (IC50=0,38 mg/ml). Monsters uit de zuidelijke Gurbantunggut-woestijn (E) vertoonden het hoogste gehalte aan totale flavonoïden (16,58 mg RE/g DW). Het hoogste gehalte aan totaal triterpenoïde verscheen in het monster uit de Badangirin-woestijn (A) (18,63 mg OAE/g DW). Monsters uit de gurbantunggut-woestijn (F) hadden polysachariden en procyanidinen in hoeveelheden van respectievelijk 31,18 mg DE/g DW en 4,71 mg PCE/g DW. De monsters uit de noordelijke Tengger-woestijn (C) hadden de hoogsteechinosidegehalte (17,75 mg/g DW) en vermogen om hydroxylradicaal weg te vangen (IC50=3,05 mg/ml). Drie hoofdcomponenten werden geëxtraheerd door middel van hoofdcomponentenanalyse (PCA) met een cumulatieve variantiebijdrage van 85,43 procent. De monsters werden via hiërarchische clusteranalyse (HCA) in drie groepen verdeeld. De vier productiegebieden (A, B, C en D) van de eerste en tweede groep waren verdeeld in Binnen-Mongolië en Gansu, en de uitgebreide score was de top vier. De resultaten van deze studie zullen een theoretische basis bieden voor kwaliteitsevaluatie, productontwikkeling en standaardisatie van Cistanche deserticola in China.

Sleutelwoorden:Cistanche deserticola; oorsprong; bioactieve verbindingen;antioxidante werking; begrijpelijke evaluatie

Krijg een hoogwaardig Cistanche-materiaal

Cistancheis een meerjarige obligate wortel parasitaire plant van Orobanchaceae, ook bekend alsDayun, Kobold, Gouden Bamboeenz. [1]. Er zijn 4 soorten en 1 variant van het geslachtCistanchein mijn land, inclusiefCistanche deserticola, Cistanche tubulosa, Cistanchezout rauw, Cistanche witte bloem en Cistanchezand.Cistanche deserticolaenCistanche tubulosaopgenomen in de 2020-editie van de Chinese Farmacopee

Gedroogde vlezige stengels van Cistanche deserticola. Cistanche Cistanche is parasitair op de wortels van woestijntamarisk, voornamelijk verspreid in de woestijngebieden in het zuiden van Xinjiang. Desert Cistanche is parasitair op de wortels van de zandfixerende en windschermplant Haloxylon-ammonium, en wordt voornamelijk verspreid in de woestijngebieden van Binnen-Mongolië, zoals Alxa League (Zuoqi, Youqi, Ejina Banner), Gansu en het noorden van Xinjiang [{{ 1}}]. Cistanche deserticola werd voor het eerst opgenomen in "Shen Nong's Materia Medica". Het is zoet van smaak, warm van aard en heeft de functies van "het onderhouden van vijf arbeid en zeven verwondingen, het voeden van het midden, het elimineren van koude en hittepijn in de stengel, het voeden van de vijf interne organen, het versterken van yin en het profiteren van de essentie en bloed", en staat bekend als "woestijn ginseng" [4]. Moderne farmacologische studies hebben aangetoond dat Cistanche deserticola de functies heeft van het verlagen van de bloedsuikerspiegel, het verlagen van de bloedlipiden[5], het verbeteren van de botfunctie[6], het bevochtigen van de darmen en laxeermiddelen[7-8], het tegengaan van oxidatie[9], bescherming van de lever[10-11] en antidepressie. [12], verlicht vermoeidheid [13] en andere fysiologische activiteiten. De biologische activiteit van Cistanche hangt nauw samen met de verschillende functionele componenten die het bevat, zoals polyfenolen, flavonoïden, polysachariden, echinacea en verbascoside [14]. Studies hebben aangetoond dat fenylethanoïde glycosiden zoals echinacoside en verbascoside in Cistanche de belangrijkste actieve stoffen zijn voor het versterken van nier-yang, anti-aging en anti-vermoeidheid [15], en de proliferatie van osteoblasten en de proliferatie van mesenchymale beenmergstamcellen kunnen bevorderen . Osteoblastdifferentiatie[16-18]; Cistanche deserticola-polysaccharide heeft farmacologische activiteiten zoals het reguleren van de immuunactiviteit [19], het beschermen van zenuwen [20] en anti-osteoporose [21].

Het leer- en geheugenvermogen heeft een zeker verbeterend effect [22].

De soorten en inhoud van bioactieve componenten in Cistanche deserticola worden sterk beïnvloed door verschillende factoren, zoals klimaat, geografische omgeving en bodemgesteldheid, die de intensieve verwerking van Cistanche deserticola en de kwaliteitscontrole en standaardisatie van de producten bemoeilijken [23]. Daarom is het van groot belang om de soorten, inhoud en antioxiderende activiteiten van bioactieve stoffen in Cistanche deserticola van verschillende oorsprong te bestuderen voor de geneeskunde, voedselveiligheid en uitgebreide ontwikkeling en gebruik van Cistanche deserticola.

In dit artikel werd Cistanche deserticola uit verschillende woestijnproducerende gebieden in mijn land als onderzoeksobject genomen, en zijn totale polyfenolen, totale flavonoïden, totale polysachariden, totale triterpenen, totale proanthocyanidinen, echinacoside, verbascoside en andere biologisch actieve stoffen en hun antioxiderende activiteiten werden bestudeerd. Hoofdcomponentenanalyse (PCA) en hiërarchische clusteranalyse (HCA) werden verder gebruikt voor multivariate statistische analyse om een ​​theoretische basis te bieden voor de kwaliteitsevaluatie van Cistanche deserticola en de standaardisatie van verwerkte producten.

1 Materialen en methoden

1.1 Materialen, reagentia en instrumenten

De monsters uit de zes productiegebieden (AF) waren allemaal gedroogde en vlezige stengels van Cistanche deserticola (tabel 1). Volgens de gerapporteerde bemonsteringsmethoden [24-26] werden de wortel, het midden en de top respectievelijk 1, 2 en 3 genoemd (zoals weergegeven in figuur 1). De monsters werden gevriesdroogd, verpulverd, gezeefd door een 50-gaaszeef, vacuüm verzegeld en bewaard bij -18 graden voor later gebruik.

Tabel 1 Cistanche deserticola-achtige reagentia en standaarden: acetonitril, mierenzuur chromatografisch zuiver Merck bedrijf in Duitsland; Verbasin en echinacoside standaard chromatografisch zuiver Ambel (Shanghai) Co., Ltd.; natriumcarbonaat, galluszuur, natriumnitriet, aluminiumnitraat, natriumhydroxide, ethanol, rutine, vanilline, ijsazijn, perchloorzuur, ethylacetaat, aceton, ether, fenol, zwavelzuur, methanol, kaliumpersulfaat en andere reagentia zijn allemaal huishoudelijk analytische kwaliteit, gekocht bij Beijing Soleil Treasure Technology Co., Ltd.

Instrumenten: FD1A-50 plus vriesdroger, Beijing Bo Yikang Company; TGL-20B Centrifuge, Shanghai Anting Scientific Instrument Co., Ltd.; 756 UV-Vis-spectrofotometer, Shanghai Qinghua Scientific Instrument Co., Ltd.; LC-20AB High Performance Liquid Chromatograph van Shimadzu Corporation uit Japan; Synergy H1 multifunctionele microplaatlezer Porton Instrument Co., Ltd.

1.2 Bepalingsmethoden van biologisch actieve stoffen

1.2.1 Bepaling van het totale polyfenolgehalte

Raadpleeg de methode van Li [27] et al. Weeg 0,50 g van het monster, gebruik 70 procent ethanol als extractiemiddel (vast-vloeistofverhouding 1:40), extraheer het in een ultrasoon apparaat met een vast vermogen van 250 W (60 graden, 40 min. ) en centrifugeer bij 4000 t/min gedurende 10 minuten na afkoeling. Verzamel het supernatant tot het volume (50 ml) voor gebruik.

Voeg folinfenoloplossing (5 ml, 10 procent) toe aan de monsteroplossing (1 ml), schud goed, laat 15 minuten staan, voeg dan natriumcarbonaatoplossing (4 ml, 7,5 procent) toe, schud goed, laat 20 min in het donker staan ​​De absorptie (765 nm) werd gemeten en het resultaat werd uitgedrukt in galluszuurequivalent (mg galluszuurequivalent, GAE/g DW), en de standaardcurvevergelijking was y=0. 0505x plus 0,0347,

R2=0.9991.

1.2.2 Bepaling van het totaal aan flavonoïden

Raadpleeg de methode van Xiong Shuangli [28] et al. De voorbereiding van de monsteroplossing is hetzelfde als 1.2.1. De monsteroplossing (1 ml) werd in een bruine maatkolf van 10 ml gedaan en natriumnitrietoplossing (0,3 ml, 5 procent) werd toegevoegd, geschud en geschud en na een tijdje staan 15 minuten, aluminiumnitraatoplossing (0,3 ml, 10 procent), waterstof Natriumoxide-oplossing (4 ml, 4 procent), verdun tot 10 ml met ethanol (50 procent), goed schudden en in het donker laten staan

Na 20 minuten werd de absorptie (510 nm) gemeten en het resultaat werd uitgedrukt als rutine-equivalent (mg Rutine-equivalent, RE/g DW). De standaardcurvevergelijking was y=00,0053x plus 0,0161, R

2=0.9992.

1.2.3 Bepaling van het totaal aan triterpenen

Raadpleeg de methode van He Ce [29] et al. De voorbereiding van de monsteroplossing is hetzelfde als 1.2.1. De monsteroplossing (0,4 ml) werd in een waterbad drooggedampt en de vers bereide vanilline-ijsazijnoplossing (0,4 ml, 1,5 procent), perchloorzuur (1,6 ml), heetwaterbad (70°C, 15 min) werden achtereenvolgens toegevoegd en na afkoelen toegevoegd. Ethylacetaat (5L), de absorptie (560 nm) werd gemeten na 10 minuten staan, en het resultaat werd uitgedrukt als oleanolzuurequivalent (mg

Oleanolzuur-equivalent, OAE/g DW), is de standaardcurvevergelijking y=16.005x-0.0256, R2=0.9987.

1.2.4 Bepaling van het totale gehalte aan polysachariden

Raadpleeg de methode van Zhang Yadan et al. [30]. Weeg 1.00 g van het monster, gebruik gedeïoniseerd water als extractieoplosmiddel (vast-tot-vloeistofverhouding 1:30), extraheer het in een ultrasoon apparaat met een vast vermogen van 250 W (60 graden, 50 min), en centrifugeer bij 4000 r/min gedurende 10 min na afkoeling. , verzamel het supernatant en voeg 4 keer het volume ethanol toe (95 procent), na staan ​​(4 graden, 12 uur), centrifugeer bij 5000 tpm om het neerslag te verzamelen,

Na herhaald wassen met aceton, ether en absolute ethanol voor 2 keer achter elkaar, toevoeging van een geschikte hoeveelheid gedeïoniseerd water om te reconstitueren, werden deproteïnisatie (sevage-methode) en depigmentatie (actieve kool-methode) uitgevoerd, en het volume werd aangepast tot 10 ml voordat testen.

Aan de monsteroplossing (1 ml) werd achtereenvolgens fenoloplossing (0,6 ml, 6%) en geconcentreerd zwavelzuur (3 ml) toegevoegd, geschud en geschud en vervolgens 10 minuten gekookt. Na afkoelen werd de absorptie (490 nm) gemeten en het resultaat werd uitgedrukt als glucose-equivalent (mg) dextrose-equivalent, DE/gDW). De standaardcurvevergelijking is y=0.0146x-0.015, R2=0.9998.

1.2.5 Bepaling van het proanthocyanidinegehalte

Raadpleeg de methode van Li Caixia [31] en anderen. Weeg 0.50 g van het monster, gebruik 80 procent ethanol als extractiemiddel (vast-vloeistofverhouding 1:30), extraheer het in een ultrasoon apparaat met een vast vermogen van 250 W (50 graden, 40 min), en centrifugeer bij 4000 t/min gedurende 10 min na afkoeling. , verzamel het supernatant tot het volume (50 ml) voor gebruik. Aan de monsteroplossing (0,5 ml) werd vanilline-methanoloplossing (3 ml, 4%) en geconcentreerd zoutzuur (1,5 ml) toegevoegd en de absorptie (500 nm) werd na 15 min reactie gemeten. Het resultaat werd uitgedrukt als proanthocyanidine-equivalent (mg proanthocyanidine-equivalent, PCE/g DW), de standaardcurvevergelijking is y=2,1709x-00,0036, R2=0,9979.

1.2.6 Bepaling van Verascoside en Echinacea

Raadpleeg de methode van Xu Mingjun [32] en anderen. Weeg 1.00 g monster, gebruik 80 procent ethanol als extractiemiddel (vast-tot-vloeistofverhouding 1:30), extraheer het in een ultrasoon apparaat met een vast vermogen van 250 W (60 graden, 40 min. ) en centrifugeer bij 4000 r/min gedurende 10 minuten na afkoeling, verzamel het supernatant tot het volume (50 ml) voor gebruik.

Chromatografische kolom: Alltima C18-kolom (4,6 mm × 250 mm, 5 m); mobiele fase: 0,4 procent mierenzuuroplossing (A)-acetonitril

(B); het elutieprogramma is: 0~10 min, 90 procent (A); 10 ~ 20 min, 90 procent ~ 80 procent (A); 20 ~ 30 min, 80 procent ~ 75 procent

(EEN); 30~40 min, 75 procent ~80 procent (A); 40~50 min, 80 procent ~90 procent (A), kolomtemperatuur 25 graden, stroomsnelheid 1.00 ml/min;

De detectiegolflengte was 330 nm; het injectievolume was 1{{10}} L. Neem de concentratie als de abscis en het overeenkomstige piekoppervlak als de ordinaat en teken de standaardkromme van echinacoside y=15311296.40x-119140.61, R2=0. 9996, het lineaire bereik is 0,04 ~ 0,48 mg/ml; de standaardcurve van verbascoside y=21780400,45x- 121356,95, R2=0,9994, lineair bereik 0,04~0,08 mg/ml.

1.2.7 In vitro antioxidant activiteitstest

Bereiding van de monsteroplossing: weeg 1,20 g monster af, gebruik 60 procent ethanol als extractieoplosmiddel (vast-tot-vloeistofverhouding 1:25) en extraheer het in een ultrasoon apparaat met een vast vermogen van 250 W (60 graden, 40 min), en koel het af voor 4500 r. Centrifugeer bij /min gedurende 15 minuten, verzamel het supernatant, neem een ​​geschikte hoeveelheid supernatant en verdun het met 60% ethanol, zodat de concentratie van de monsteroplossing 1, 3, 5, 10, 20, 30 en 40 mg is /mL te testen.

1.2.7.1 Het vermogen om vrije radicalen af ​​te vangen van ABTS

Verwijzend naar de methode van Roberta et al. [33] met een kleine wijziging: de ABTS-moederoplossing is gedeïoniseerd water om een ​​gemengde oplossing te bereiden met een eindconcentratie kaliumpersulfaat van 2,45 mmol/L en een eindconcentratie ABTS van 7 mmol/L, en laat in het donker staan (25 mmol/L). graad, 12 uur). Verdun voor gebruik met gedeïoniseerd water om de absorptie te verkrijgen bij 734 nm 0.70±0.05, wat een ABTS-werkoplossing is. Voeg 10 μL monsteroplossing (1-40 mg/mL) toe aan de microtiterplaat, voeg ABTS-werkoplossing (200 μL) toe, bescherm tegen licht bij kamertemperatuur gedurende 30 minuten, meet de absorptie (734 nm) met 60 procent ethanol als controle, berekent volgens vergelijking (1) de ABTS plus vrije radicalen wegvangende snelheid. ABTS plus opruimingspercentage van vrije radicalen ( procent)=(1-

A1−A2A0) × 100 (1) In de formule: A0 is de absorptie van 60 procent ethanol in plaats van monsteroplossing (blanco); A1 is de absorptie van monsteroplossing gemengd met ABTS-oplossing; A2 is de absorptie van gedeïoniseerd water in plaats van de ABTS-oplossingswaarde.

1.2.7.2 DPPH vermogen om vrije radicalen op te vangen

Verwijzend naar de methode van Zhong Wenxiu et al. [34] met een kleine wijziging: de monsteroplossing (10 L) werd toegevoegd aan DPPH-oplossing (250 L), goed gemengd en vervolgens toegevoegd aan de ELISA-plaat, en de absorptie was gemeten met 60 procent ethanol als controle in het donker gedurende 25 minuten. (517 nm), en de DPPH-radicalenvangingssnelheid werd berekend volgens formule (2). DPPH·radical scavenging rate ( procent )=(1-A1−A2A0)×100 (2) Onder hen: A0 is de absorptiewaarde van 60 procent ethanol in plaats van het monster (blanco); A1 is de absorptiewaarde van de monsteroplossing na vermenging met DPPH-oplossing; A2 is de absorptiewaarde van watervrije ethanol in plaats van DPPH-oplossing.

1.2.7.3 OH radicalen wegvangend vermogen

Verwijzend naar de methode van Smirnoff et al. [35] met een kleine wijziging: voeg 50 μL van de monsteroplossing toe aan 50 μL ferrosulfaatoplossing (6.0 mmol/L), voeg 50 μL waterstof toe peroxide-oplossing (6 mmol/L), meng goed en reageer 15 min, voeg dan 50 μL 6 mmol/L salicylzuur-absolute ethanoloplossing toe, reageer 30 min bij 37 graden, meet de absorptie bij 510 nm en bereken de OH-radicaalvangingssnelheid volgens formule (3). OH-radicaalvangingssnelheid ( procent)=(1-A1−A2A0) × 100 (3) Onder andere: A0: de absorptiewaarde van het blanco monster (gedestilleerd water in plaats van het monster); A1: de absorptiewaarde van het kleurontwikkelingssysteem en het monster; A2: Gedestilleerd water vervangt de absorptie van waterstofperoxide-oplossing.

1.3 Gegevensanalyse

Alle gegevens werden in drievoud bepaald en de resultaten werden uitgedrukt als gemiddelde ± standaarddeviatie (SD). Origin 2019-software werd gebruikt voor hoofdcomponentenanalyse en clusteranalyse; SPSS Statistics 26.0-software werd gebruikt voor variantieanalyse en P<0.05 indicated="" a="" significant="">

Als u meer informatie wilt over cistanche, stuur ons dan een e-mail: wallence.suen@wecistanche.com