Kwaliteitsmarkeringen van Cistanches Herba op basis van de relatie tussen antioxidanten en spectrumeffecten Ⅱ

3. Resultaten

3.1 Opstelling van een vingerafdrukkaart

Bereid 10 partijen testoplossingen volgens de methode onder 2.1, gebruik de chromatografische omstandigheden onder 2.2 voor detectie, verkrijg de vingerafdrukken van elke partij monsters (Figuur 1) en selecteer piek nr. 11 (C11) als de referentiepiek van de vingerafdruk. Importeer de vloeistoffasegegevens.AIA-bestand van de vingerafdruk van het Cistanche deserticola-testproduct in de software "Traditional Chinese Medicine Chromatographic Fingerprint Likenity Evaluation System" (versie 2012). Zeventien gemeenschappelijke chromatografische pieken werden gekalibreerd in de gemeenschappelijke modus en vergeleken met het gemengde referentiestandaardspectrum (Figuur 2) werden in totaal 10 gemeenschappelijke pieken geïdentificeerd.

3.2 Onderzoek naar de antioxiderende werking van Cistanche deserticola

3.2.1 Effect van Cistanche deserticola op de levensvatbaarheid van HEK 293-cellen.

Vergeleken met cellen in de normale groep produceerde Cistanche deserticola geen cytotoxiciteit bij een massaconcentratie van 50~100 ug·mL–1, en de celoverlevingspercentages waren groter dan 90%. Naarmate de concentratie van Cistanche deserticola toenam, nam de levensvatbaarheid van de cellen af. Daarom werd Cistanche deserticola met een massaconcentratie van 100 µg·mL–1 geselecteerd voor daaropvolgende toediening.

3.2.2 Effect van Cistanche deserticola op ROS geïnduceerd door H2O2 in HEK 293-cellen

De ROS IC50 van Cistanche deserticola bij verschillende concentraties werd berekend met behulp van GraphPad Prism 8-software. De resultaten worden weergegeven in Figuur 3 en Tabel 2.

Laten we voor meer kennis over cistanche eens kijken hoe we de kwaliteit van cistanche kunnen onderscheiden. De kwaliteit van Cistanche is afhankelijk van het gehalte aan de actieve ingrediënten Echinacoside en Acteoside, het hogere gehalte betekent een sterkere werking, vandaag nemen we 30% Echinacoside en 12% Acteoside Cistanche Supplementen als voorbeeld om ons uitleg te geven, in dit artikel doorgaans cistanche genoemd.

HOE LANG DUURT HET VOORDAT CISTANCHE WERKT?

3.2.3 Effect van Cistanche deserticola op H2O2-geïnduceerde SOD van HEK 293-cellen

Zoals weergegeven in figuur 4 was de SOD-activiteit in de cellen van de modelgroep, vergeleken met de normale groep, aanzienlijk verminderd, en nam de SOD-activiteit van de Cistanche deserticola-toedieningsgroep in verschillende mate toe (P<0.001), indicating that Cistanche deserticola can increase the intracellular SOD enzyme activity.

3.2.4 Effect van Cistanche deserticola op H2O2-geïnduceerde CAT in HEK 293-cellen

Zoals weergegeven in Figuur 5 kan H2O2 een significante afname van de intracellulaire CAT-enzymactiviteit veroorzaken (P<0.001), with the activity only reaching 30% of the normal group, indicating that H2O2 has seriously damaged the antioxidant system of cells. After Cistanche deserticola administration, intracellular CAT enzyme activity decreased significantly (P<0.001). The enzyme activity was significantly increased (P<0.001).

3.3 Cistanche deserticola Q-markerscreening op basis van correlatieanalyse van spectrale efficiëntie

3.3.1 PCA gebruikt de eigenwaarde > 1 en het cumulatieve variantiebijdragepercentage > 85% als standaard om 4 hoofdcomponenten te extraheren. De scree plot (Figuur 6) van de eerste drie hoofdcomponenten heeft een steilere curve, wat betekent dat de bijdrage hoger is. groot. Het cumulatieve variantiebijdragepercentage van de vier hoofdcomponenten bedraagt ​​87,640%, wat aangeeft dat deze vier hoofdcomponenten 87,640% van de informatie van de oorspronkelijke variabelen kunnen vertegenwoordigen. De initiële eigenwaarden en variantiebijdragen worden weergegeven in Tabel 3. De geroteerde componentenmatrix wordt verkregen met behulp van de Kaiser-normalisatie-maximale variantiemethode, zie Tabel 4. Volgens de laadwaarde van elke chromatografische piek op de vier hoofdcomponenten, wordt de informatie die door elke component wordt gereflecteerd, hoofdbestanddeel kan worden geëxtraheerd. Dat wil zeggen: hoe groter de belastingswaarde, hoe groter de invloed van de chromatografische piek op de hoofdcomponent. In hoofdcomponent 1 hebben pieken 1 tot 3, 5, 7, 11 en 13 tot 15 de grootste absolute belastingen; in hoofdcomponent 2 hebben de pieken 6 en 16 de grootste absolute belastingen; piek 17 verklaart de informatie van hoofdcomponent 3. Piek 8 heeft de grootste impact op hoofdcomponent 4, dus werden de 13 chemische componenten van pieken 1~3, 5~8, 11, 13~17 geselecteerd als de belangrijkste materiële basis van Cistanche deserticola voor daaropvolgende analyse van de spectrale efficiëntie.

3.3.2 PCC

ROS IC50 is een negatieve indicator voor de werkzaamheid van geneesmiddelen, dus een negatieve correlatiecoëfficiënt betekent dat de afhankelijke variabele positief gecorreleerd is met de werkzaamheid van geneesmiddelen. De correlatiecoëfficiënten van de 13 chromatografische pieken van Cistanche deserticola zijn allemaal negatief, wat aangeeft dat ze allemaal positief gerelateerd zijn aan de verwijdering van ROS IC50, waarvan de pieken 14 en 3, 7, 11, 1 en 13 extreem sterk gecorreleerd waren met ROSIC50. (P<0.01), and peaks 2, 5, and 15 were strongly correlated (P<0.05); the 13 chromatographic peaks were all positively correlated with SOD, among which peaks 13 and 3 , 15, 11, 2 were extremely strongly correlated with SOD (P<0.01), and peaks 1, 14, 7, 5, and 6 were strongly correlated (P<0.05); 11 peaks were positively correlated with CAT, and peak 5 was positively correlated with CAT. There was a strong correlation (P<0.05). The results are shown in Table 5.

Door de PCC-resultaten van ROS IC50, SOD en CAT te combineren, werden pieken 1~3, 5, 7, 11 en 13~15 geselecteerd als de actieve ingrediëntengroep voor Cistanche deserticola om antioxiderende effecten uit te oefenen.

3.3.3 PLS

In PLS, the ROS IC50 regression coefficients of 13 chromatographic peaks are all negative and positively correlated with the pharmacodynamic activity. Among them, the chromatographic peaks with VIP>1 are: 14, 3, 11, 1, 7, 13, 2, 5, 15 (Figure 7A); in the study of SOD enzyme activity, the coefficients of all peaks are positive, that is, all peaks are positively correlated with drug efficacy. Among them, the chromatographic peaks with VIP>1 are: 13, 3, 15, 11, 2, 1 , 14, 7 (Figure 7B); in the study of CAT enzyme activity, except for peaks 6 and 16, the other chromatographic peaks are positively correlated with drug efficacy, among which the chromatographic peaks with VIP>1 zijn: 5, 13, 14, 11, 7 (Fig. 7C). De verbindingen weergegeven door pieken 1~3, 5, 7, 11 en 13~15 werden in het PLS-model uitgesloten als potentiële actieve antioxidantcomponenten.

3.4 Cistanche deserticola Q-marker activiteitverificatie

3.4.1 Effect van actieve ingrediënten op HEK 293 cytotoxiciteit

Op basis van de resultaten van spectrum-effectcorrelatieanalyse werden zes ingrediënten, waaronder genipinezuur, 8-epistrychnoïnezuur, echinaceoside, verbascoside, anthocynoside A en isorbascoside geselecteerd voor activiteitverificatie. De zes actieve ingrediënten van Cistanche deserticola vertoonden geen cytotoxiciteit bij concentraties variërend van 0.781 tot 3,125 µmol·mL–1, en de celoverlevingspercentages waren allemaal groter dan 90%. Naarmate de concentratie toeneemt, wordt de levensvatbaarheid van de cellen geremd. Daarom werden de volgende doseringsconcentraties geselecteerd op 0,781, 1,563 en 3,125 µmol·ml–1.

3.4.2 Paren van actieve ingrediënten

Het antioxiderende effect van H2O2-geïnduceerde HEK 293-cellen werd geverifieerd door het detecteren van het wegvangende effect van elk actief ingrediënt op intracellulaire ROS en het vermogen om de activiteit van SOD- en CAT-enzymen te reguleren om te verifiëren of het een antioxiderende werking heeft. In het ROS-wegvangexperiment waren de verschillen tussen de midden- en hoge dosis genipinezuurgroepen en de modelgroep statistisch significant (P<0.01, P<0.001, Figure 8A). Compared with the model group, there were statistically significant differences between the low, medium and high dose groups of inulin, anthoside A, verbascoside and isorbascoside (P<0.001, Figure 8B, Figure 8C), indicating that the six monomers All have a certain degree of ROS scavenging effect; in the SOD and CAT enzyme activity measurement test, the enzyme activities of the low, medium and high dose groups of active ingredients were all higher than the model group, indicating that all 6 monomers can increase SOD and CAT Enzyme activity.