Ascorbinezuur reguleert de immuniteit, anti-oxidatie en apoptose in Abalone Haliotis Discus Hannai Ino Deel 2

3.5. Uitingen van immuungerelateerde genen en eiwitten in abalone spijsverteringsklier en kieuw

Glycoside van cistanche kan ook de activiteit van SOD in hart- en leverweefsels verhogen en het gehalte aan lipofuscine en MDA in elk weefsel aanzienlijk verminderen, waardoor verschillende reactieve zuurstofradicalen (OH-, H₂O₂, enz.) door OH-radicalen. Cistanche-fenylethanoïdeglycosiden hebben een sterk wegvangend vermogen van vrije radicalen, een hoger reducerend vermogen dan vitamine C, verbeteren de activiteit van SOD in spermasuspensie, verminderen het gehalte aan MDA en hebben een zeker beschermend effect op de functie van het spermamembraan. Cistanche-polysacchariden kunnen de activiteit van SOD en GSH-Px in erytrocyten en longweefsels van experimenteel senescente muizen veroorzaakt door D-galactose verbeteren, evenals het gehalte aan MDA en collageen in long en plasma verminderen en het gehalte aan elastine verhogen, hebben een goed wegvangend effect op DPPH, verlengt de tijd van hypoxie bij senescente muizen, verbetert de activiteit van SOD in serum en vertraagt ​​de fysiologische degeneratie van de longen bij experimenteel senescente muizen Met cellulaire morfologische degeneratie hebben experimenten aangetoond dat Cistanche het goede antioxiderende vermogen heeft en heeft het potentieel om een ​​medicijn te zijn om huidverouderingsziekten te voorkomen en te behandelen. Tegelijkertijd heeft echinacoside in Cistanche een aanzienlijk vermogen om DPPH-vrije radicalen op te vangen en heeft het het vermogen om reactieve zuurstofsoorten op te vangen en door vrije radicalen veroorzaakte collageenafbraak te voorkomen, en heeft het ook een goed herstellend effect op schade door anionen door vrije radicalen van thymine.

Klik op Cistanche Reddit voor Anti-Aging

【Voor meer informatie:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】

De mRNA-niveaus van de sleutelgenen in de toll-like receptor (TLR)-signaalroute in de spijsverteringsklier van abalone worden weergegeven in de tabellen 6 en 7. De expressieniveaus van tlr2 en tlr4 in de spijsverteringsklier waren significant verlaagd (p < { {5}}.05) en hadden hun laagste niveaus bij de AA1000 en AA500{{43 }} groepen, respectievelijk (Tabel 6). Het mRNA-niveau van the-a was significant opgereguleerd (p < 0.05), en the-b werd niet beïnvloed door graduele niveaus van AA in de voeding (p > 0.05 ). De expressies van myd88, trip-related adapter molecule (tram), interleukine 1-receptor-geassocieerde kinase 4 (irak4) en tumornecrosefactor-receptor-geassocieerde factor 6 (traf6) waren significant verminderd na voedings-AA-suppletie (p < 0,05). De traf4 werd niet beïnvloed door het niveau van AA-suppletie (p > 0,05). De mRNA-niveaus van iκb-kinase (ikk) en nf-KB-remmer (iκb) in de spijsverteringsklier van abalone werden niet beïnvloed door voedings-AA (p > 0,05) (Tabel 7). De expressie van p38-mitogeen-geactiveerde proteïnekinase (p38-markering) en rommel werd echter aanzienlijk verlaagd met de toenemende AA in de voeding (p <0,05). Dieet-AA kon de expressieniveaus van nf-κb, activatorproteïne 1 (ap-1) en tumornecrosefactor (tnf-) (p < 0,05) significant verlagen, en het niveau van interleukine 16 (il 16) was niet onderworpen aan voedings-AA (p > 0,05). Eiwitexpressies van MyD88, JNK, volwassen IL-1 en nucleair NF-KB p65 worden getoond in figuur 2. De eiwitniveaus van MyD88, volwassen IL-1 en nucleair NF-KB p65 in het spijsverteringskanaal Abalone-klieren werden significant verlaagd door AA in de voeding (p < 0,05). Daarentegen werd het eiwitniveau van JNK niet beïnvloed door AA (p > 0,05).

De mRNA-niveaus van tlr2, tlr4 en the-b in de kieuw van abalone waren niet significant verschillend (p > 0.05), en het tar-a-niveau was significant verlaagd na graduele niveaus van voedings-AA (p < 0.05) (Tabel 8). Bovendien waren de expressieniveaus van myd88, irak4 en traf6 in de kieuw van de abalone aanzienlijk verlaagd met het toenemende niveau van AA in de voeding (p < 0.{{20}}5). In plaats daarvan werden geen significante verschillen waargenomen in de uitingen van tram en verkeer4 (p > {{30}}.05). Dieet-AA reduceerde significant het mRNA-niveau van ikk (p < 0,05), en de expressies van iκb, p38 mark en junk in de kieuw werden niet beïnvloed door AA (p > 0,05) (Tabel 9). Een one-way ANOVA onthulde dat de expressieniveaus van nf-κb, ap-1 en tnf- significant waren verlaagd door voedings-AA (p < 0,05), en er werd geen significant verschil in il 16-niveaus waargenomen (p > 0,05). De eiwitniveaus van MyD88 en nucleair NF-KB p65 werden significant verlaagd door gegradeerde niveaus van AA in de voeding (p <0,05) (Figuur 3). De eiwitexpressies van JNK en volwassen IL-1 in de kieuw van de zeeoor werden echter niet beïnvloed door voedings-AA (p > 0,05).

Uitdrukkingen van -defensin, mythmaking 6 en arginase-I in de spijsverteringsklier en kieuw van de zeeoor worden gegeven in Tabel 10. De niveaus van -defensine en arginase-I in de spijsverteringsklier waren significant verhoogd na AA in de voeding (p < 0.05), terwijl de expressie van mythevorming 6 niet werd beïnvloed door AA in de voeding (p > 0,05). Daarentegen waren de mRNA-niveaus van -defensine en arginase-I in de kieuw niet significant verschillend, en de expressie van mythevorming 6 werd significant opgereguleerd door voedings-AA (p < 0,05).

3.6. Expressies van immuungerelateerde genen in de spijsverteringsklier als reactie op Vibrio Parahaemolyticus

De expressieniveaus van verschillende kritieke genen in de TLR-signaalroute, die tlr4, myd88, tram, nf-κb, ap-1 en tnf- bevatten in de spijsverteringsklier van abalone na infectie met V. parahaemolyticus, worden weergegeven in figuur 4 De mRNA-expressies van tlr4, myd88, tram, nf-κb, ap-1 en tnf- waren significant opgereguleerd na toediening van V. parahaemolyticus (p < 0.05). De vouwverandering van tlr4 was het hoogst in de AA0-groep (10.24--voudig) 24 uur na infectie, en vervolgens daalde het hoogste niveau tot 3.{{ 20}}voudig in de AA5000-groep om 6 uur. Het mRNA-niveau van myd88 was significant opgereguleerd na 12–72 uur in de AA0-groep (686-voudig) en na 6–12 uur in de AA5000-groep (388-voudig) na V. parahaemolyticus-infectie. De expressie van tram in de spijsverteringsklier van abalone na infectie met V. parahaemolyticus was significant verhoogd van 12 uur tot 72 uur in de AA0-groep en van 12 uur tot 24 uur in de AA5000-groep. De voudige verandering van nf-KB bereikte zijn hoogste niveau na 48 uur in de AA0-groep (10,55-voudig), gevolgd door een afname van het hoogste niveau na 12 uur in de AA5000-groep (3,{{48 }}voudige verandering). Het expressieniveau van ap-1 was significant opgereguleerd van 6 uur naar 72 uur in de AA0- en AA50-groep voordat het herstelde naar het normale niveau na 72 uur na continue AA-suppletie. De vouwverandering van TNF- bereikte zijn hoogtepunt 24 uur na V parahaemolyticus-infectie in AA0-, AA50-, AA100-, AA200- en AA500-groepen, en had zijn hoogste niveau na 12 uur in de AA1000- en AA5000-groepen.

De resultaten van de niveaus van -defensin en mythmaking 6 in de spijsverteringsklier na infectie met V. parahaemolyticus worden getoond in figuur 5. De expressieniveaus van -defensine en mythmaking 6 in de spijsverteringsklier van abalone waren significant verhoogd na infectie met V. parahaemolyticus ( p < 0.05). Het mRNA-niveau van -defensine was significant verhoogd in AA0-, AA50-, AA100- en AA200-groepen na 12 uur en 24 uur, en bereikte hun hoogtepunt na 12 uur in AA200-, AA500-, AA1000- en AA5000-groepen met 4 .51-vouwen, 4.74-vouwen, 5.20-vouwen en 5.47-vouwen, respectievelijk. De vouwverandering van mythmaking 6 in de spijsverteringsklier van abalone was significant opgereguleerd van 12 uur tot 24 uur in de AA0-, AA50-, AA100-, AA200- en AA500-groepen, en van 6 uur tot 72 uur in de AA1000- en AA5000-groepen. Het hoogste expressieniveau van mythevorming 6 werd waargenomen om 12 uur in de AA5000-groep met een factor 5.{43}}.

3.7. Expressies van anti-oxidatie-gerelateerde en apoptose-gerelateerde genen en eiwitten in spijsverteringsklier en kieuw

De mRNA-niveaus van nf-e2-related factor-2 (nrf2), gpx, cat en cuznsod in de spijsverteringsklier van abalone waren significant verhoogd met graduele niveaus van AA in de voeding (p < {{4 }}.05) (Tabel 11). Daarentegen waren de mRNA- en eiwitniveaus van Keap1 significant verlaagd na AA in de voeding (p < 0.05), en werd het glutathion-s-transferase (GST) niet beïnvloed door AA (Figuur 6, tabel 11) (p > 0.05). In de kieuw waren de mRNA-niveaus van nrf2 en gpx significant verhoogd door AA in de voeding (p < 0,05) (Tabel 11). De uitdrukkingen van keap1, cat, GST en cuznsod in de kieuw waren echter niet onderworpen aan gegradeerde niveaus van AA in de voeding (p > 0,05). Er werd geen significant effect van AA in de voeding op de eiwitexpressie van Keap1 in de kieuw van abalone waargenomen (p > 0,05) (Figuur 6).

Wat opvalt in tabel 12 is dat de expressieniveaus van Bax en caspase3 in de spijsverteringsklier van abalone significant waren verlaagd na geleidelijke niveaus van AA in de voeding (p < 0.05). Ondertussen was het mRNA-niveau van bcl-2 aanzienlijk opgereguleerd (p < 0.05). De expressie van caspase7 werd echter niet beïnvloed door AA in de voeding (p > 0.{{20}}5). Het gesplitste caspase3-eiwit in de spijsverteringsklier was significant verminderd na suppletie van AA (p < 0,05) (Figuur 6). In de kieuw waren de mRNA-niveaus van caspase7 en bcl-2 respectievelijk significant verlaagd en verhoogd na voedings-AA (p < 0,05) (Tabel 12). Niettemin waren de expressies van Bax en caspase3 niet significant verschillend tussen alle behandelingen (p > 0,05). Bovendien werd de eiwitexpressie van gesplitst caspase3 in de kieuw van abalone niet beïnvloed door gegradeerde niveaus van AA in de voeding (p > 0,05) (Figuur 6).

4. Discussie

4.1. Ascorbinezuurgehalte in verschillende weefsels

In de huidige studie nam het AA-gehalte in de spieren, kieuwen en spijsverteringsklier toe met toenemende AA-niveaus in de voeding. Een soortgelijk resultaat werd ook gevonden in Vundu (Heterobranchus logfiles), Japanse paling en Chu's croaker (Nibea-kleur) [27,56,57]. Het AA-gehalte was het hoogst in de kieuw, gevolgd door de spijsverteringsklier van de zeeoor. De AA-inhoud in de kieuw, de spijsverteringsklier en de spier van abalone bereikte echter niet hun verzadiging na 4821,17 mg / kg AA in de voeding. Bij de Chinese sukkel (Myxocyprinus asiaticus) was het AA-gehalte in de lever significant verhoogd door AA in de voeding [58]. Het verhoogde AA-gehalte in de lever van de Chinese sukkel na voedings-AA was gecorreleerd met de gezondheid van de lever. Bij graskarpers was het AA-gehalte in de kop, nier, milt en huid significant verhoogd met de toenemende AA-suppletie via de voeding [35]. De kop, nier, milt en huid zijn de belangrijke immuunorganen bij waterdieren [59-61]. Deze resultaten tonen aan dat het verhoogde AZ-gehalte in de spijsverteringsklier en de kieuw van zeeoren nauw verband hield met de gezondheid van zeeoren na voedings-AA en dat de accumulatie van AZ de niveaus van blootstelling aan AA-voeding weerspiegelt.

4.2. De rol van ascorbinezuur bij de regulering van de immuniteit van Abalone

Hemocyten, als veelzijdige cellulaire componenten van hemolymfe in weekdieren, zijn verantwoordelijk voor vele aspecten van het leven van weekdieren, zoals immuunrespons, biomineralisatie, cel-celcommunicatie en regeneratie [62,63]. Daarom kunnen THC, RB en PA van hemolymfe de immuniteit van het organisme direct weerspiegelen. AA was nauw verbonden met THC, RB en PA van hemocyten, resulterend in activatie van het adaptieve immuunsysteem [64,65].

In de huidige studie waren de THC, RB en PA in de hemolymfe van abalone significant verhoogd door AA in de voeding. Er wordt aangegeven dat gegradeerde niveaus van AA in de voeding erin slaagden de immuunfunctie bij abalone te verbeteren. Soortgelijke resultaten werden waargenomen bij nijltilapia en grasgarnaal (Penaeus monodon) [64,66]. De RB in het serum van rode moeraskreeft (Procambarus clarkii) en PA in het serum van hybride sorubim-meerval (Pseudoplatystoma reticulatum × P. bloedlichaampjes) waren significant verlaagd na een hoog niveau van AA-suppletie via de voeding (321,38 mg/kg en 850 mg/kg). kg, respectievelijk) [67,68]. Er werd echter geen significante afname van THC, RB en PA in de hemolymfe van abalone waargenomen bij de behandeling met hoge niveaus van AA-suppletie via de voeding (4821,17 mg/kg).

Lysozyme, C3 en C4 spelen een centrale rol in de aangeboren immuniteit en beschermen dieren tegen pathologische infecties [69-71]. In de huidige studie was de LZM in de CFH van abalone significant verhoogd na gegradeerde niveaus van AA in de voeding. Dit was vergelijkbaar met de resultaten van eerdere studies in cobia (Rachycentron canadum), Koreaanse roodbaars (Sebastes schlegelii) en tandbaars (Epinephelus malabaricus) [29,72,73]. AA-deficiëntie verlaagde de C3- en C4-inhoud in graskarpers, en AA in de voeding kon immuunparameters zoals C3 en C4 in largemouth bass aanzienlijk verbeteren [35,74]. In de huidige studie werd het C4-gehalte in de CFH van abalone echter niet beïnvloed door AA-niveaus in de voeding. Er was een stijgende trend van het C3-gehalte in de CFH van abalone, hoewel het C3-gehalte niet significant werd verbeterd door AA in de voeding. Deze resultaten onthulden dat voedingssuppletie van AA het vermogen zou kunnen vergroten om infectie van pathogenen door LZM en C3, niet C4, te elimineren om de immuunbarrières van abalone te verbeteren.

Aangeboren immuniteit is van vitaal belang voor abalone vanwege de afwezigheid van adaptieve immuniteit bij ongewervelde dieren [43,49]. TLR's spelen een vitale rol in het aangeboren immuunsysteem tegen verschillende microben [75]. PAMP-geactiveerde TLR's rekruteren specifieke adaptermoleculen om transcriptiefactoren te activeren, zoals NF-KB en AP-1, die de uitkomst van de aangeboren immuunrespons bepalen [76]. TLR-signalering wordt geclassificeerd in twee verschillende routes: MyD88- afhankelijk en MyD88-onafhankelijk, die verschillende cytokines induceren, zoals TNF- en IL-1 bij zoogdieren en andere waterdieren [77,78 ]. In het MyD{13}}afhankelijke pad werkt MyD88 samen met IRAK4 en daarna met TRAF6 [79]. TRAF6 kan TGF- -geactiveerde kinase 1 (TAK1) en TAK1-bindende eiwitten (TAB's) [80] activeren. De TAK1 activeert het IKK-complex, dat IKB kan fosforyleren dat bindt aan NF-KB-subeenheden (bestaande uit p50 en p65) en MAPK's en JNK fosforyleert, wat de translocatie van AP-1 naar de kern bevordert [81]. De vernietiging van IKB vergemakkelijkt de nucleaire translocatie van NF-KB [82]. De nucleaire NF-KB en AP-1 richten zich op de transcriptie van cytokines, zoals TNF- en IL-1 , die algemeen worden erkend als pro-inflammatoire mediatoren die ontstekingen bevorderen [76,77,83] . In het MyD88-onafhankelijke pad is de TRAM vereist en speelt het een cruciale rol in dit pad [84]. De intracellulaire componenten stroomafwaarts van de TLR-signaalroute zijn gewoonlijk en sterk geconserveerd tussen gewervelde en ongewervelde dieren [60,85]. De intrahepatische expressie van TLR4 was neerwaarts gereguleerd bij muizen die met AA werden behandeld (Mus musculus) [86]. AA oefende gunstige hepatoprotectie uit tegen concanavaline A-geïnduceerde immunologische leverbeschadiging bij muizen door remming van de NF-KB-signaalroute [87,88]. Uit deze resultaten kan dus worden afgeleid dat AA de TLR-signaleringsroute kan beïnvloeden. Het blijft echter onbekend hoe AA de TLR-signaalroute reguleert bij waterdieren, vooral bij weekdieren.

In de huidige studie werden de mRNA-niveaus van tlr2 en tlr4 in de spijsverteringsklier aanzienlijk verlaagd door graduele niveaus van AA in de voeding. Er wordt gesuggereerd dat de TLR-signaalroute werd geactiveerd door AA in de spijsverteringsklier van abalone (Figuur 7). De term-a en tlr-b hadden een breder patroonherkenningsvermogen en waren betrokken bij de antibacteriële en antivirale immuniteit van abalone [89]; het onderliggende mechanisme van de -a/b is echter nog onbekend. Het niveau van tlr-b werd echter niet beïnvloed door AA in de voeding, en tlr-a werd significant opgereguleerd door AA in de huidige studie. Verdere onderzoeken zijn nodig. De expressies van myd88, irak4 en traf6, en de eiwitexpressie van MyD88, in de spijsverteringsklier van abalone werden neerwaarts gereguleerd door suppletie van AA, en het niveau van traf4 werd niet beïnvloed door AA in de voeding. De TRAF4 werkt als een geluiddemper bij TLR-gemedieerde signalering door TRAF6 te onderdrukken [90]. Er wordt aangegeven dat de remming van de TLR-route door voedings-AA niet werd gemedieerd door de traf4 in de spijsverteringsklier van abalone. Het mRNA-niveau van iκb in de spijsverteringsklier werd niet beïnvloed door AA. De NF-KB kan echter alleen na IKB-fosfaatafbraak naar de kern worden overgebracht [91]. De mRNA-expressies van nf-KB en eiwitexpressie van nucleair NF-KB p65 in de spijsverteringsklier werden aanzienlijk verlaagd door AA in de voeding. Deze resultaten suggereerden dat AA de fosforylering van IKB-eiwit zou kunnen onderdrukken om de nucleaire NF-KB te verminderen. IKK kan NF-KB p65 activeren om de NF-KB canonieke route te activeren, en IKK kan NF-KB p52 activeren om de NF-KB niet-canonieke route te activeren [92]. Er wordt aangegeven dat AA in de voeding de canonieke NF-KB-route in de spijsverteringsklier van abalone zou kunnen activeren. Bovendien werden de mRNA-expressies van de tram, p38-mark, junk, ap-1 en tnf-, en het eiwitniveau van volwassen IL-1 significant verlaagd door AA in de voeding. Deze resultaten suggereren dat AA in de voeding de TLR-signaalroute zou kunnen remmen via de Myd88-afhankelijke route via NF-KB, p38 mark/ap-1 en JNK/ap-1, en Myd{{ 43}}onafhankelijke paden om ontstekingen in de spijsverteringsklier van abalone te verlichten. In de kieuw beïnvloedde AA ook de TLR-signaleringsroute (Figuur 7). De mRNA-niveaus van de tram-, p38-markering en junk- en eiwitexpressie van volwassen IL-1 waren echter niet significant verschillend. Deze resultaten gaven aan dat voedings-AA de TLR-signaalroute zou kunnen onderdrukken via de Myd88-afhankelijke route, niet de MyD88-onafhankelijke. De geremde TLR-route verlichtte de ontsteking in de kieuw van de abalone via de NF-KB en p38 mark/ap-1-route, niet de JNK/ap-1-route. Dieet-AA had een sterker effect op de TLR-route in de spijsverteringsklier dan die in de kieuw van zeeoor.

【Voor meer informatie:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】