Spontane granulocytaire leukemie bij een NOD/Shi-scid IL-2R null-muis

Samenvatting:Hier melden we een geval van spontane granulocytaire leukemie bij een mannelijke NOD/Shi-scidIL-2R nul (NOG) muis. De muis liet het zienprogressieve bloedarmoedeEnruwe ademhalingsbeweging. Macroscopisch was de milt verkleurd en vergroot. Histologisch gezien is het beenmerg van deborstbeenen het dijbeen waren zeer cellulair en bijna uitsluitend gevuld metneoplastische cellen. De kernen van neoplastische cellen waren groot, ovaal tot enigszins onregelmatig van vorm, en een klein aantal cellen was dat ooknier- of ringvormige kernen.Neoplastische celleninfiltreerde uitgebreid in de organen, waarbij de milt en de lever prominent betrokken waren. Immunohistochemisch gezien was een grote populatie neoplastische cellen in de rode pulpa van de milt en de sinusoïde van de lever positief voormyeloperoxidase. Op basis van de histologische kenmerken werd bij dit geval de diagnose gesteldgranulocytaire leukemie. Deze nieuwe informatie overspontane tumorenkan nuttig zijn voor het juiste gebruik van deze muizenstam in verder onderzoek. (DOI: 10,1293/tox.2020-0092; J Toxicol Pathol 2021; 34: 241–244)

Trefwoorden: granulocytaire leukemie, NOG muis, spontane tumor

KLIK HIER VOOR NATUURLIJK BIOLOGISCH CISTANCHE-EXTRACT MET 25% ECHINACOSIDE EN 9% ACTEOSIDE VOOR DE NIERFUNCTIE

Ondersteunende service van Wecistanche, de grootste cistanche-exporteur in China:

E-mail:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/tel:+86 15292862950

Winkel voor meer specificaties:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-winkel

Spontane granulocytaire leukemiewordt zelden gerapporteerd bij verschillende muizenstammen, hoewel chemische middelen en ioniserende straling de incidentie bij sommige muizenstammen kunnen verhogen1, 2. NOD/Shi-scid IL-2R null (NOG) muizen zijn ernstigimmuundeficiënte dieren, en presenteren defecten in T-, B- en natural killer-cellen, en slecht functionerende macrofagen en dendritische cellen door de knock-out van de IL-2-receptorketen (IL2R c) in de NOD-scid-stam3. Deze muizenstam wordt gebruikt voor niet-klinische tests, zoals de tumorigeniciteitstest, om de kwaliteit en veiligheid te beoordelen van biologische producten voor regeneratieve geneeskunde met behulp van van mensen afkomstige cellen/weefsels, vanwege de aanzienlijk betere enting van xenogene cellen. Hoewel de immuundeficiënte toestand en de implicaties ervan voor xenotransplantaten goed zijn bestudeerd, is er weinig informatie beschikbaar over spontane tumoren die voorkomen bij deze muizenstam, zoals thymuslymfoom.borstklier adenoom/adenocarcinoom, bronchioloalveolair carcinoom, rabdomyosarcoomen teratoom7. Hier rapporteren we een geval van granulocytaire leukemie bij een mannelijke NOG-muis van 51-weken oud.

Het dier werd op de leeftijd van 6 weken verkregen van In-Vivo Science Inc. (Kanagawa, Japan) en werd onbehandeld gehouden. Het dier werd individueel gehuisvest in een plastic kooi met een individueel geventileerd kooisysteem (Maxi Miser Caging System; Oriental Giken Inc., Tokyo, Japan) in een omgevingsgecontroleerde barrièresysteemruimte, die op een temperatuur van 22 ± 2 graden werd gehouden met een luchtvochtigheid van 50 ± 20% en een licht/donkercyclus van 12- uur. De muis kreeg een geautoclaveerd gepelletiseerd dieet (CRF-1; Charles River Japan, Inc., Tokyo, Japan) met geautoclaveerd kraanwater en libitum. Het dier werd behandeld volgens het protocol dat is goedgekeurd door het Institutional Animal Care and Use Committee van CMIC Pharma Science Co., Ltd., dat is geaccrediteerd door AAALAC International.

Deze muis vertoonde klinische tekenen van verzwakking, zoals bloedarmoede, ruwe ademhalingsbewegingen en afname van het lichaamsgewicht tussen de leeftijd van 49 en 51 weken. Het dier werd geëuthanaseerd toen het 51 weken oud was. Bij necropsie was de milt verkleurd en vergroot. In de andere organen werden geen duidelijke abnormale grove bevindingen waargenomen. De thymus en de lymfeklier waren atrofisch, vergelijkbaar met die van normale NOG-muizen.

Alle organen en weefselmonsters werden routinematig verzameld, gefixeerd in 10% neutraal gebufferde formaline, ingebed in paraffine en in plakjes gesneden op ongeveer 3 μm. Voor zijn pathologisch onderzoek werden de coupes gekleurd met hematoxyline en eosine (HE). Secties van de milt en lever werden immunohistochemisch gekleurd op polyklonaal antilichaam van konijn tegen menselijk myeloperoxidase (MPO) (Dako Japan, Tokio, Japan) als een myeloïde celmarker, monoklonaal antilichaam van konijn tegen menselijk CD3 (Nichirei Biosciences Inc., Tokio, Japan). ) als een T-celmarker, en anti-humaan Pax-5 monoklonaal antilichaam van konijn (Abcam Inc., Cambridge, VK) als een B-celmarker8. Secties werden gedurende 1 uur bij kamertemperatuur met de antilichamen geïncubeerd en immunodetectie werd uitgevoerd met behulp van een Histofine® MOUSESTAIN KIT (Nichirei Biosciences Inc.) met 3,3'-diaminobenzidine / H2O2 als het chromogeen. Immunogekleurde secties werden vervolgens uitgevoerdtegengekleurd met hematoxyline.

Histopathologisch gezien was het beenmerg van het borstbeen en het dijbeen zeer cellulair en bijna uitsluitend gevuld met neoplastische cellen (Fig. 1A). Het vetweefsel was volledig verplaatst. Er waren af ​​en toe cellulaire foci bestaande uit erytroïde en megakaryocytische elementen in het beenmerg, die werden beschouwd als overblijfselen vannormale hematopoëse. De meeste neoplastische cellen vertoonden een blastisch uiterlijk, gekenmerkt door grote, ovale tot enigszins onregelmatig gevormde kernen, en met een reticulair chromatine dat een of meer prominente nucleoli bevatte. Er was een klein aantal cellen met nier- of ringvormige kernen en er waren ook enkele cellen met gelobde kernen aanwezig (Fig. 1B). Korrels in het cytoplasma van neoplastische cellen waren niet duidelijk zichtbaar in de coupes die met HE waren gekleurd. In het beenmerg werden talloze mitotische figuren gevonden, en af ​​en toe werden ook apoptotische lichamen waargenomen. Neoplastische cellen drongen duidelijk het periosteum en de omliggende skeletspieren binnen. Er was uitgebreide infiltratie van neoplastische cellen in andere organen en weefsels, waarbij de milt en de lever prominent betrokken waren. In de milt werden overal in de rode pulpa neoplastische cellen waargenomen (Fig. 2). Er was sprake van kapselinfiltratie van neoplastische cellen. Er werden enkele zich ontwikkelende erytroïde series en megakaryocyten waargenomen. Af en toe werden megakaryocyten waargenomen die één of enkele myeloïde cellen in het cytoplasma bevatten, hetgeen wijst op emperipolese. In de lever infiltreerden neoplastische cellen diffuus in het Glisson-kapsel en de hepatische sinusoïden (Fig. 3). In sommige bloedvaten waren ook neoplastische cellen met nier- of ringvormige kernen zichtbaar. Sommige hepatocyten in het periportale gebied, met prominente neoplastische celinfiltratie, vertoonden degeneratie of necrose, terwijl de normale structuur van de leverlob intact bleef. Neoplastische celinfiltratie werd ook aangetroffen in andere organen, waaronder de alveolaire wand en het perivasculaire gebied van de long, interstadion in de nier, sinusoïde in de bijnieren, en slijmvlies en submucosa in het maagkanaal (maag en darmen). Immunohistochemisch gezien was een grote populatie neoplastische cellen in de rode pulpa van de milt (Fig. 4) en de sinusoïde van de lever positief voor MPO. CD3- en Pax-5-positieve cellen werden niet gedetecteerd. De resultaten van CD3- en Pax-5-immuunkleuring waren vergelijkbaar met die van de milt van normale NOG-muizen, die histologisch hypoplastisch waren en geen CD3- of Pax-5-positieve cellen vertoonden.

Immunohistochemisch onderzoek onthulde dat de neoplastische cellen afkomstig waren uit de myeloïde cellijnen. In sommige van de betrokken gebieden, vooral de milt en de lever, had een klein aantal cellen nier-, ring- of gelobde vormen die wijzen op differentiërende myeloïde series. Deze bevindingen suggereren dat neoplastische cellen afkomstig zijn van onrijpe granulocyten. Het geval van ernstige myelopoëse kan duidelijk worden door de aanwezigheid van alle soorten zich ontwikkelende myeloïde reeksen, in tegenstelling tot de dominantie van onrijpe cellen bij leukemie. Bovendien is progressieve anemie een veel voorkomend klinisch teken van granulocytaire leukemie, en de toename van erytroïde en megakaryocytische cellen is gering1. De kleine populatie granulocyten met gelobde kernen in het getroffen gebied zonder duidelijke ontsteking geeft aan dat de bevindingen van het onderhavige geval neoplastische en niet reactieve myelopoëse zijn.

Bij granulocytaire leukemie kan het beenmerg worden vervangen door onrijpe en volwassen myeloïde cellen. In een eerder rapport over andere muizenstammen infiltreerden deze neoplastische cellen volledig in de lever, milt, lymfeklieren, enz.2, en deze cellen in de milt en lever bevonden zich voornamelijk in de rode pulpa en rond de capsule van Glisson1. De verdeling van leukemische cellen in het onderhavige geval was dus identiek aan die in het vorige geval. Op basis van de morfologie van cellen wordt granulocytaire leukemie bij muizen ingedeeld in twee typen: het juveniele type, dat vergelijkbaar is met menselijke acute myeloïde leukemie, en het volwassen type met menselijke chronische myeloïde leukemie1. In het juveniele geval werden neoplastische cellen in het beenmerg, de milt en de lever gedomineerd door slecht gedifferentieerde cellen, terwijl myeloïde elementen te zien zijn die verschillende graden van rijping vertegenwoordigen en het percentage myeloblasten laag was in sommige volwassen gevallen2, 9. In het onderhavige geval werden leukemische cellen gedomineerd door een onvolwassen vorm met grote, ovale tot enigszins onregelmatig gevormde kernen. Bovendien, gezien de klinische bevindingen dat de algemene verslechtering van de gezondheid, waaronder progressieve bloedarmoede en ruwe ademhalingsbewegingen, zich acuut ontwikkelde; daarom wordt aangenomen dat het onderhavige geval van het juveniele type is.

Fig. 1. Histologische beelden van het beenmerg van het dijbeen. A: Neoplastische cellen prolifereren diffuus en vervangen daarbij het beenmerg. B: De kernen zijn groot, ovaal tot enigszins onregelmatig van vorm. Een klein aantal cellen heeft nier- (gele pijlpunt), ring- (groene pijlpunt) of lobvormige (witte pijlpunt) kernen. De mitotische figuur wordt aangegeven door de witte pijl. HIJ vlekken. Zwarte balk=50 μm (A), 10 μm (B).

In een eerdere publicatie over NOG-muizen waren neoplastische laesies over het algemeen ongebruikelijk; thymuslymfoom is echter gemeld bij 0,82% in de leeftijdsgroep variërend van 16 tot 40 weken7, 10. Voor zover ons bekend is spontane granulocytaire leukemie niet eerder gemeld bij NOG-muizen. Bij verschillende muizenstammen, waaronder B6C3F1 en BALB/c, kwam granulocytaire leukemie zelden voor2, 11 en is bij deze muizen van 12 maanden of jonger niet gemeld. Het onderhavige geval ontwikkelde granulocytaire leukemie op de leeftijd van 51 weken, wat een relatief jonge leeftijd was. Deze nieuwe informatie over spontane tumoren kan nuttig zijn voor het juiste gebruik van deze muizenstam in verder onderzoek.