Onderzoek naar de neuro-endocriene immuunfunctie van Cistanche Deserticola en zijn rijstwijn-stoomproducten in door glucocorticoïden geïnduceerd rattenmodel-Ⅱ

3.2.4. Immunohistochemie

Neuronale apoptose wordt gecontroleerd door veel apoptotische en anti-apoptotische genen, voornamelijk het apoptose-bevorderende gen Bax en de anti-apoptotische genen van de Bcl-2 genfamilie. Bcl-2 is gelokaliseerd in reactieve zuurstofproducerende organellen zoals de mitochondriën, het endoplasmatisch reticulum en kernmembranen. Bcl-2 heeft weinig invloed op vrije zuurstofradicalen, maar kan dat weloxidatieve schade in cellen voorkomen. Bax transporteert van het cytoplasma naar het mitochondriale membraan, verandert de structuur van het mitochondriale membraan en bevordert de afgifte van cytochroom c en de inductie van apoptose.

NATUURLIJKE CISTANCHE TUBULOSA VOOR HET VERBETEREN VAN DE SEKSUELE FUNCTIE PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Er was een expressie in het bijniercytoplasma van het Bax- en Bcl-2-eiwit. De kleuring toonde alle gele deeltjes. Vergeleken met die van de BC-groep nam de gemiddelde optische dichtheid van het Bax-eiwit in de MC-groep aanzienlijk toe (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the average optical density in the CD-LD and WCD-LD groups decreased significantly (P < 0.01) (Figure 5(a)).

Figuur 5(b) laat zien dat vergeleken met die van de BC-groep de gemiddelde optische dichtheid van Bcl-2-eiwit in de MC-groep aanzienlijk afnam (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and CD-HD groups increased significantly (P < 0.01), while those of the WCD-MD and CD-MD groups increased (P < 0.05).

Het caspase-3-eiwit is in zijn oorspronkelijke vorm voornamelijk in het cytoplasma gelokaliseerd in normale weefsels en heeft een lage expressie. Positieve signalen zijn lichtgeel of bruingeel. Vergeleken met die van de BC-groep nam de expressie van caspase-3 in de MC-groep aanzienlijk toe (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the expression of caspase-3 in the WCD-HD and WCD-MD groups increased (P < 0.05) (Figure 5(c)).

In normale weefsels was de expressie van het Fas-gen verminderd en was het positieve signaal voor in situ hybridisatie bruingeel. Zoals weergegeven in figuur 5 (d), nam de gemiddelde optische dichtheid van Fas-eiwit in de MC-groep, vergeleken met die van de BC-groep, toe (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and WCD-LD groups improved (P < 0.05) (Figure 5(d)).

Het FasL-eiwit bevindt zich voornamelijk in het celmembraan of cytoplasma en de positieve signalen zijn bruin. Vergeleken met die van de BC-groep nam de gemiddelde optische dichtheid van het FasL-gen in de MC-groep aanzienlijk toe (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density of the FasL gene in the WCD-HD, WCD-MD, CDHD, and CD-MD groups increased significantly (P < 0.01) (Figure 5(e)).

De resultaten toonden aan dat CD en WCD dat wel kondeninduceren apoptose in ontstekingscellenen de schade aan de bijnieren verminderen door de expressie van het FasL-eiwit en de binding aan het Fas-eiwit te bevorderen, waardoor het caspase-3-eiwit wordt geactiveerd en een caspase-cascade wordt geactiveerd. Het effect van de WCD-HD-groep was het beste.

3.3. Bepaling van de immuunfunctie

3.3.1. Immuunorgaanindex

Vergeleken met die van de BC-groep daalden de thymuscoëfficiënt en de miltindex van de MC-groep aanzienlijk (P< 0.01). Compared to the MC group, the WCD-MD group had the greatest difference (P < 0.05). The thymus coefficient was almost back to the normal level. For the spleen index, the WCDMD, WCD-LD, and CD-MD groups showed significant differences compared with that of the MC group (P < 0.01) (see Figure 6). Therefore, WCD and CD treatment could protect the immune organs, and the effects of WCD were better.

NATUURLIJKE CISTANCHE TUBULOSA VOOR HET VERBETEREN VAN DE SEKSUELE FUNCTIE PHGS75% ECH 30% ACT 12%

3.3.2. Detectie van subsets van T-lymfocyten in perifeer bloed

Het percentage CD4+-cellen in het kwadrant linksboven en CD8+-cellen in het kwadrant rechtsonder in de BC en elke medicijngroep was hoger dan dat in de MC-groep. Vergeleken met die van de BC-groep daalde de verhouding CD4+ThCD8+ aanzienlijk in de MC-groep (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the ratio of CD4+ThCD8+ increased significantly in the PC group, the WCD group, and the CD-HD group (P < 0.01) (Figure 7).

3.3.3. Bepaling van het niveau van IL-10, IL-6, IL-2, TNF-Α en IFN-C in serum

Figuur 8 laat zien dat, vergeleken met dat van de BC-groep, het niveau van IL-6, TNF- en IFN-c significant toenam (P< 0.01). The level of IL-10 and IL-2 decreased in the MC group. Compared to that of the MC group, the level of IL-6, TNF-α, and IFN-c decreased and IL-10 and IL-2 increased in serum in each of the drug groups. The effect of WCD was better than the effect of CD, especially in the WCD-MD group, in which the effect was close to that of the PC group.

3.3.4. Resultaten van het Lymus-weefselmicroscoopobservatie-experiment

Figuur 9 laat zien dat in de BC-groep een groot aantal lymfocyten aanwezig was. Lymfocyten en reticulocyten waren losjes in het midden gerangschikt met verspreide ronde of ovale thymocyten. Er was geen necrose, geen infiltratie van ontstekingscellen en geen abnormale veranderingen.

De MC-groep vertoonde een grote hoeveelheid lymfoïde necroseweefsel, met een ongeordende rangschikking van lymfocyten en reticulocyten in het midden. Ronde of ovale thymocyten verdwenen, massieve celdegeneratie of necrose was duidelijk, en er was inflammatoire celinfiltratie met abnormale pathologische veranderingen.

In de CD-groepen waren de morfologische kenmerken van de lymfocyten weer normaal geworden en was de rangschikking van centrale lymfocyten en reticulocyten vrijwel normaal. Ronde of ovale thymocyten waren hersteld, maar een klein aantal degeneratieve of necrotische lymfocyten en infiltrerende ontstekingscellen bleven achter.

In de WCD-groepen en de PC-groep werden de morfologische kenmerken van lymfocyten beter hersteld. De lymfocyten en reticulocyten in het midden waren goed uitgelijnd, de ronde of ovale thymocyten waren bijna normaal, maar er bleef een klein aantal infiltrerende en degeneratieve lymfocyten over.

3.4. CaM-eiwitgenexpressie

RQ-waarde (CaM-mRNA -actine-mRNA) werd overwogen om de expressie van CaM-mRNA te onderzoeken. De RQ van de BC-groep was 1. De expressie van CaM-mRNA in de hypothalamus in de MC-groep nam aanzienlijk toe (P< 0.01), while the value decreased in the WCD-HD, WCD-MD, WCDLD, and CD-HD groups (P < 0.05) (Figure 10). The expression of CaM mRNA in the hypophysis in the MC group was lower than that in the BC group (P < 0.01). The expression in the WCD-HD, WCD-MD, WCD-LD, CD-HD, and CD-LD groups increased (P < 0.05), and the effect in the WCD groups was better than the effect in the CD groups.

4. Discussie

De Chinese Farmacopee [2] vermeldt dat CD en WCD in de kliniek kunnen worden gebruikt als de belangrijkste soorten afkooksels. Na te zijn gestoomd met rijstwijn, wordt deanti-aging en versterkende nier-yang-effectenwerden verbeterd. Via UPLC-QqQ-MS hebben we de kwantitatieve veranderingen in de chemische materiaalbasis gedetecteerd tijdens het stomen van rijstwijn. Iridoïde glycosiden waren onstabiel en het gehalte aan deze glycosiden nam af en werd zelfs niet meer waarneembaar. Ook het gehalte aan fenylethanolglycosiden veranderde, wat veranderingen in de farmacodynamiek en het klinische effect zou kunnen veroorzaken.

NATUURLIJKE CISTANCHE TUBULOSA VOOR HET VERBETEREN VAN DE SEKSUELE FUNCTIE PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Het klassieke nier-yang-deficiëntiemodel werd gerepliceerd door subcutane injectie van corticosteron [19]. Een overdosis corticosteron zou het geheim van CRH in de hypothalamus kunnen remmen. Ondertussen werd ook het geheim van ACTH geremd. Het niveau van het bijnierschorshormoon nam af, en dus werd de functie van de HPA-as verminderd. Hypofunctie van de HPA-as is een gemeenschappelijk kenmerk van nier-yang-deficiëntie [20]. Vervolgens vertonen de ratten "uitputtingsverschijnselen" en de symptomen komen overeen met die van nier-yang-tekort in de kliniek.

In de MC-groep daalde het niveau van CRH, ACTH, T en CORT in rattenserum aanzienlijk (P< 0.01). After being treated by CD and WCD, the content of CRH, ACTH, T, CORT, and cortisol all increased to some degree, and the effect of WCD-MD was the best, almost equal to that in the PC group. These results indicated that the relative hormone balance in the HPA axis had been destroyed in the MC group, CD and WCD could improve the functional recovery of abnormal adrenal axis hormone levels, but the effect of WCD was better.

Het moduleren van het aandeel Bcl-2-familieleden is een van de kernmechanismen waarmee FasThFasL de doodsreceptorroute bemiddelt, en de Bcl-2-familie de mitochondriale route reguleert [21]. Apoptose-remmende factor Bcl-2 en apoptose-inducerende factoren, zoals Bax, behoren allemaal tot de Bcl-2-familie [22]. Celapoptose kan worden bepaald door de relatieve verhouding van apoptose-remmende factoren en apoptose-inducerende factoren [23]. Mitochondria hebben de functie van centrale controlepunten voor vele vormen van apoptose [24]. De huidige studie toonde aan dat CD-MD en WCD's de expressie van Bax konden afleiden en Bcl-2 konden verhogen totverbetering van de nier-yang-deficiëntie. Fas is de belangrijkste doodsreceptor die apoptose induceert door ligatie met het Fas-ligand (FasL) [25]. De expressie van Fas en FasL in de MC-groep nam toe, terwijl deze expressie significant toenam in de WCD-MD-groep (P< 0.01) compared with the MC group. Both FasThFasL and BaxThBcl-2 systems transduce apoptotic signals to the caspase family [26]. Caspase-3 is one of the pivotal proteinases that initiate cell apoptosis. The activation of caspase-3 indicates that apoptosis enters an irreversible stage [27]. The expression of caspase-3 in the MC group increased and increased significantly in the WCD-HD and WCD-MD groups (P < 0.05).

Een tekort aan immuunfunctie is een van de belangrijke manifestaties van een tekort aan nier-yang [28]. In deze studie ontdekten we dat de index van de milt en de thymus van de WCD-MD-groep aanzienlijk herstelde (P< 0.01, P < 0.05). The immune response of the immune system is regulated mainly by the Th subgroups [29]. IL-2 is the growth factor for T cells, secreted by T cells and macrophages, participates in inflammatory regulation, regulates immunity, and increases infection resistance [30]. The level of IL-2 in the MC group decreased (P < 0.01), and after treatment with CD and WCD, the level of IL-2 recovered. IL-6 and TNF-α are proinflammatory cytokines. Increased levels of IL-6 and TNF-α cytokines cause cytokine imbalances and exacerbate inflammation. The levels of IL-6 and TNF-α increased in the MC group, while after treatment, the levels of IL-6 and TNF-α decreased. T cells are divided into CD4 cells and CD8 cells, and the CD4+ThCD8+ ratio can be used as an important index of immune regulation [31]. CD4+ThCD8+ in the MC group decreased (P < 0.01), while in the WCD and CDHD groups increased (P < 0.01).

De HPA-as is het belangrijkste regulerende systeem omdat het de secretie van glucocorticoïden en het endocriene systeem reguleert om de secretoire functie van de bijnierschors te behouden [32]. Overexpressie van CaM-mRNA in hypothalamusweefsel hield verband met een tekort aan nier-yang. CD en WCD zouden de calciumkanalen kunnen blokkeren, de mRNA-expressie van CaM in de hypothalamus kunnen remmen en de calciuminstroom kunnen verminderen, waardoor de activiteit van het Ca2+·CaM-complex afneemt.

De vorming van nier-yang-deficiëntie is een chronisch ziekteontwikkelingsproces. Nier is niet langer een puur anatomisch concept, maar een algemene term voor neuro-endocriene immuniteit en urogenitale systemen. Het neuro-endocrien-immuunnetwerk (NEI) is een belangrijk geïntegreerd regulerend systeem [33]. CD en WCD kunnen de functie van de HPAT-as reguleren en het herstel van nier-yang-deficiëntie verbeteren. Dit resultaat vormt de experimentele basis voor de klinische preventie en behandeling van nier-yang-deficiëntie.