Studie naar de componentenanalyse en antioxidantactiviteit van polysacchariden uit Cistanche Deserticola Deserticola

Abstract: In dit artikel werden de neutrale suiker CLP1 en zure suiker CLP2 van Cistanche deserticola verkregen door het polysaccharide uit Cistanche deserticola deserticola te extraheren en het ruwe polysaccharide CLP van Cistanche deserticola deserticola te zuiveren met DEAE-cellulosekolomchromatografie. Het gehalte aan totale suiker, uronzuur en eiwit in Cistanche deserticola ruwe polysaccharide CLP, Cistanche deserticola neutrale suiker CLP1 en Cistanche deserticola zure suiker CLP2 werden bepaald door ultraviolette spectrumscanning, en het molecuulgewicht en de monosaccharidesamenstelling van polysaccharide werden bepaald. Tegelijkertijd werd het gehalte aan ruw polysaccharide CLP van Cistanche deserticola. Het DPPH-vermogen voor het wegvangen van radicalen en het totale antioxidantvermogen van neutrale suiker CLP1 van Cistanche deserticola deserticola en zure suiker CLP2 van Cistanche deserticola deserticola experimenteel geanalyseerd. De gemeten gegevens toonden aan dat de samenstelling van ruw polysaccharide CLP van Cistanche deserticola deserticola, neutrale suiker CLP1 van Cistanche deserticola deserticola en zure suiker CLP2 van Cistanche deserticola deserticola vergelijkbaar waren, maar de inhoud significant verschilde; De neutrale suiker CLP1 van Cistanche deserticola deserticola en de zure suiker CLP2 van Cistanche deserticola deserticola kunnen meerdere elutiepieken verkrijgen wanneer ze worden gescheiden en gezuiverd door een DEAE-cellulosechromatografische kolom, en het molecuulgewicht ligt tussen 0 en 10.000 Da, wat aangeeft dat het hoofdbestanddeel van Cistanche deserticola deserticola polysaccharide kleinmoleculaire suiker is. De monosacchariden van neutrale suiker CLP1 in Cistanche deserticola deserticola toonden aan dat de monosacchariden in neutrale suiker CLP1 in Cistanche deserticola deserticola deserticola voornamelijk mannose, galactose, uronzuur, glucose, galactose en arabinose waren; De bepalingsresultaten van monosacchariden van Cistanche deserticola zure suiker CLP2 toonden aan dat de monosacchariden in Cistanche deserticola zure suiker CLP2 voornamelijk Rhamnose, Galactose uronzuur, glucose en Galactose waren. Het DPPH-experiment voor het wegvangen van vrije radicalen en het totale antioxidantcapaciteitsexperiment van polysacchariden in Cistanche deserticola toonden aan dat de antioxidantcapaciteit van neutrale suiker CLP1 in Cistanche deserticola hoger was dan die van ruw polysaccharide CLP in Cistanche deserticola en zure suiker CLP2 in Cistanche deserticola.

Kernwoorden: Cistanche deserticola; Polysacchariden; Componentenanalyse; Antioxidante werking; absorptie

Cistanche deserticola-experiment

Cistanche deserticola deserticola is een soort kruidachtige parasitaire plant, die een groot aantal fenolische glycosiden, alkaloïden, fenethylalcoholglycosiden, suikers en alcoholen bevat. Onder hen zijn suikers voornamelijk in de vorm van polysacchariden. Cistanche deserticola-polysacchariden hebben een sterke regulerende werking op de immuunactiviteit [1-2]. Als intermediaire metaboliet in de activiteiten van het menselijk leven, bevinden vrije radicalen zich in een onstabiele toestand en hebben ze een hoge oxidatie-activiteitsintensiteit, wat schade zal veroorzaken aan weefsels en organen van biomacromoleculen in het menselijk lichaam. Daarom is het gebruik van natuurlijke antioxidanten om vrije radicalen te elimineren de belangrijkste richting geworden van de huidige voedselonderzoeken. Polysaccharidecomponenten in Cistanche deserticola hebben een sterke antioxidantcapaciteit, die de eliminatie van vrije radicalen in het menselijk lichaam kan bevorderen [3].

Voordelen van cistanche tubulosa—Antioxidant

In dit artikel werd Cistanche deserticola deserticola als onderzoeksobject genomen en werden de polysaccharidestoffen geëxtraheerd en geclassificeerd. Het molecuulgewicht van Cistanche deserticola deserticola-polysaccharidestoffen werd gemeten met hoogwaardige gelpermeatiechromatografie. Tegelijkertijd werd de samenstelling van polysaccharidestoffen grondig geanalyseerd. De antioxiderende activiteit van Cistanche deserticola deserticola deserticola polysaccharide werd geanalyseerd door het vrije radicalen wegvangende vermogen en de totale antioxidantcapaciteit van Cistanche deserticola deserticola polysaccharidecomponenten te meten. Het biedt een theoretische basis voor de ontwikkeling en het gebruik van Cistanche deserticola deserticola en de bevordering van toegevoegde waarde.

Woestijn levende cistanche

Klik hier om de producten van Cistanche te bekijken

【Vraag om meer】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

1 Monsterbereiding van Cistanche deserticola

Weeg 2,5 kg Cistanche deserticola af, snijd het in plakjes, voeg 12,5 l gedestilleerd water toe en kook het gedurende 3 uur. Filtreer na het koken en vang het filtraat op. Voeg 75 procent ethanol toe en laat het 24 uur staan. Centrifugeer het gedurende 30 minuten bij 4000 omw/min, verzamel het sediment en bevries en droog het sediment om ruw polysaccharide CLP van Cistanche deserticola te verkrijgen [4]. Neem DEAE-cellulose, doorweek en zwel het vóór de ontgassingsbehandeling, laad het in de DEAE-cellulose-anionenuitwisselingschromatografiekolom en breng het in evenwicht met gedestilleerd water en NaCl-oplossing. Weeg 100 mg ruw polysaccharide CLP van Cistanche deserticola deserticola af en los het op in 10 ml gedestilleerd water. Na wassen met gedestilleerd water, verzamelt u het eluens en concentreert u het voor vriesdrogen om neutrale suiker CLP1 te verkrijgen uit Cistanche deserticola deserticola; Na elutie met NaCl-oplossing werd het eluens verzameld, geconcentreerd en na dialyse gevriesdroogd om de zure suiker CLP2 van Cistanche deserticola [5] te verkrijgen.

Bereid de neutrale suiker CLP1 en de zure suiker CLP2 van Cistanche deserticola tot polysaccharide-oplossingen met een concentratie van respectievelijk 1 mg/ml. Gebruik een 210-600nm-spectrofotometer voor scannen met UV-spectroscopie. Wanneer een piek verschijnt bij 260-280nm, wordt bevestigd dat de oplossing eiwit en nucleïnezuur bevat [6].

Belangrijkste chemische bestanddelen van Cistanche deserticola

2 Bepaling van polysaccharidecomponenten van Cistanche deserticola

Het gehalte aan totale suiker in Cistanche deserticola werd bepaald met de fenolzwavelzuurmethode. Meet {{0}}, 0.2, 0.4, 0.6, {{10}}.8 en 1 ml af glucose-oplossingen met een concentratie van 0,1 mg/ml en doe ze in glazen reageerbuizen. Voeg gedestilleerd water toe tot een constant volume van 1 ml en voeg vervolgens 0,5 ml fenolreagens met een concentratie van 6 procent en 2,5 ml geconcentreerd zwavelzuur toe aan de reageerbuizen. Goed schudden en afkoelen tot kamertemperatuur. Gebruik een spectrofotometer om de absorptie te meten bij 490 nm, met het suikergehalte als de x-as en de absorptie als de y-as, teken een standaardkromme en bereken de regressievergelijking [7-8].

De Coomassie brilliant blue-methode werd gebruikt om het eiwitgehalte in Cistanche deserticola-monsters te bepalen. Neem 1 ml standaardmonsters met verschillende concentraties en monsteroplossingen met concentraties van 0,1 mg/ml, voeg respectievelijk 4 ml Coomassie briljante blauwe oplossing toe aan elk reageerbuisje, schud goed en sta stil. Gebruik een spectrofotometer om de absorptie bij 495 nm te meten en bereken het eiwitgehalte in het monster volgens de standaardkrommevergelijking [9].

Het gehalte aan uronzuur in Cistanche deserticola werd bepaald met de m-hydroxyfenylmethode. Neem 0.4mL standaardoplossing met verschillende concentraties en monsteroplossing met een concentratie van 0.1mg/mL, voeg 2.5mL geconcentreerd zwavelzuur toe aan de reageerbuis, schud het goed en voer een kokend waterbad van 25 minuten, haal het eruit en laat het afkoelen tot kamertemperatuur, voeg m-hydroxyfenyl toe met een concentratie van 0,3 procent en natriumhydroxideoplossing met een concentratie van 0,5 procent in het reageerbuisje, goed schudden en vervolgens 30 minuten plaatsen. Gebruik een spectrofotometer om de absorptie bij 525 nm te meten en bereken het uronzuurgehalte in het monster volgens de standaardkrommevergelijking [10-11]. Het relatieve molecuulgewicht van Cistanche deserticola-polysaccharide werd bepaald door middel van hoogwaardige gelchromatografie en de monosaccharidesamenstelling van Cistanche deserticola deserticola werd bepaald door middel van krachtige vloeistofchromatografie [12].

3 Bepalingsresultaten en analyse van polysaccharidecomponenten van Cistanche deserticola

De scancurve van het UV-spectrum van de fotometer bij 210-600nm wordt weergegeven in afbeelding 1

Afbeelding 1 UV-spectrale scancurve (210-600nm)

In figuur 1 is te zien dat de neutrale suiker CLP1 van Cistanche deserticola deserticola een duidelijke absorptiepiek heeft bij 280 nm, en de zure suiker CLP2 van Cistanche deserticola deserticola deserticola heeft geen duidelijke absorptiepiek bij 260-280nm, maar de UV absorptiespectrum is hoog. Aangezien het tryptofaan en tyrosine in het eiwit een grote absorptiewaarde hebben voor ultraviolet licht bij 280 nm, kan worden bepaald dat de neutrale suiker CLP1 van Cistanche deserticola glycoproteïne bevat en het is onmogelijk om te bepalen of de zure suiker CLP2 van Cistanche deserticola nucleïnezuur bevat. zuur en eiwit.

DEAE cellulose-anionenuitwisselingschromatografische kolomchromatografie kan ionische stoffen en onzuiverheden op de chromatografische kolom adsorberen om de scheiding van polysaccharidestoffen te realiseren. Na concentreren en drogen van de wasoplossing met gedestilleerd water werd in totaal 34,68 mg neutrale suiker CLP1 verkregen uit Cistanche deserticola, en na elueren, concentreren en drogen met NaCl-oplossing werd in totaal 16,52 mg zure suiker CLP2 verkregen uit Cistanche deserticola. Tijdens het experiment werden de standaardcurvevergelijkingen van het totale suikergehalte, het eiwitgehalte en het uronzuur van Cistanche deserticola verkregen. De inhoud van totaal suiker, eiwit en uronzuur in Cistanche deserticola werd gemeten, zoals weergegeven in tabel 1.

Tabel 1 Totaal suiker-, eiwit- en uronzuurgehalte van Cistanche deserticola

De regressievergelijking kan worden verkregen door het molecuulgewicht en het piekoppervlak van het standaardmonster te bepalen. Het molecuulgewicht van het te testen monster kan worden verkregen door de foto-emissiesignaalwaarde van het te testen monster in de regressievergelijking te vervangen. Verdere analyse en berekening kunnen het getalsgemiddelde molecuulgewicht, het gewichtsgemiddelde molecuulgewicht en de dispersiecoëfficiënt van de neutrale suiker CLP1 en zure suiker CLP2 van Cistanche deserticola verkrijgen. De resultaten van de retentietijd en de berekening van het molecuulgewicht van het hoogwaardige gelpermeatiechromatogram van Cistanche deserticola neutrale suiker CLP1 en Cistanche deserticola zure suiker CLP2 worden weergegeven in tabel 2. Het aantalgemiddelde molecuulgewicht wordt gebruikt om de grootte van het gemeten molecuul weer te geven, en de verhouding van het gewichtsgemiddelde molecuulgewicht tot het getalsgemiddelde molecuulgewicht wordt gebruikt om de moleculaire distributiebreedte weer te geven.

Tabel 2 Bepalingstijd retentiepiek en resultaten berekening moleculair gewicht

Uit tabel 2 blijkt dat het bereik van de molecuulgewichtsverdeling van de neutrale suiker CLP1 van Cistanche deserticola en de zure suiker CLP2 van Cistanche deserticola 0~10000 Da is, wat aangeeft dat het polysaccharide in Cistanche deserticola een klein molecuul polysaccharide met verschillende moleculen, en het molecuulgewicht vertoont heterogeniteit. Hieruit kan worden afgeleid dat de neutrale suiker CLP1 van Cistanche deserticola en de zure suiker CLP2 van Cistanche deserticola mengsels zijn van verschillende polysaccharidestoffen.

Zie Tabel 3 voor de HPLC-pieken en piekretentietijden van negen monosaccharidestandaardmonsters, neutrale suiker CLP1 van Cistanche deserticola deserticola en zure suiker CLP2 van Cistanche deserticola deserticola. Door de piektijd te vergelijken, kan worden geconcludeerd dat er vijf voor de hand liggende monosachariden zijn in de neutrale suiker CLP1 van Cistanche deserticola en vier voor de hand liggende monosachariden in de zure suiker CLP2 van Cistanche deserticola. Het aandeel monosacchariden in neutrale suiker CLP1 van Cistanche deserticola deserticola en zure suiker CLP2 van Cistanche deserticola deserticola wordt weergegeven in Tabel 4.

Tabel 3 Retentietijd van monosaccharide hoogwaardige vloeistofchromatografiepieken

Tabel 4 Aandeel monosacchariden in Cistanche deserticola

Het monosaccharidegehalte van de neutrale suiker CLP1 van Cistanche deserticola na hydrolyse verschilt aanzienlijk van dat van de zure suiker CLP2 van Cistanche deserticola. Het glucosegehalte van de neutrale suiker CLP1 van Cistanche deserticola is zo hoog als 88,62 procent, het glucosegehalte van de zure suiker CLP2 van Cistanche deserticola is slechts 9,99 procent, en het Galactose aldehyde zuur, Galactose en Rhamnose gehalte van de zure suiker CLP2 van Cistanche deserticola zijn allemaal meer dan 5 procent.

4 Antioxidant activiteitsanalyse van Cistanche deserticola polysaccharide

Tijdens de analyse van het antioxidantexperiment van Cistanche deserticola deserticola polysaccharide, werd Cistanche deserticola deserticola polysaccharide bereid in Cistanche deserticola deserticola polysaccharide-oplossing met de concentratie van {{0}}, 0.25, 0 .5, 1.0, 2.0, 4,0 mg/ml, en de DPPH-snelheid van het wegvangen van vrije radicalen en de totale antioxidantcapaciteit van de oplossing werden gemeten. Tijdens de bepaling van de DPPH-snelheid van het wegvangen van vrije radicalen van Cistanche deserticola deserticola-polysaccharide-oplossing, voeg 2 × toe. In totaal werd 2 ml 10-4mol/L DPPH gelijkmatig gemengd en gedurende 15 minuten in een donkere omgeving geplaatst. De oplossing werd gecentrifugeerd met een centrifugeersnelheid van 4000 omw/min en een centrifugeertijd van 15 minuten. Gebruik een spectrofotometer om de absorptiewaarde van de oplossing te meten bij een golf van 517 nm, waaruit de DPPH-radicaalopruimingssnelheid van Cistanche deserticola deserticola polysaccharide-oplossing kan worden verkregen, zoals weergegeven in tabel 5.

Tabel 5 DPPH radicalen wegvangende snelheid van Cistanche deserticola polysaccharide-oplossing

Uit Tabel 5 blijkt dat de afvangsnelheid van ruw polysaccharide CLP van Cistanche deserticola en neutrale suiker CLP1 van Cistanche deserticola op DPPH vrije radicalen significant hoger is dan die van zure suiker CLP2 van Cistanche deserticola op DPPH vrije radicalen. Wanneer de concentratie van de oplossing minder is dan 2,{4}}mg/ml, neemt de DPPH-radicalenverwijderingssnelheid van ruw polysaccharide CLP van Cistanche deserticola deserticola en neutrale suiker CLP1 van Cistanche deserticola deserticola geleidelijk toe met de toename van de concentratie, en wordt eindelijk stabiel.

Bij de bepaling van de totale antioxidantcapaciteit van Cistanche deserticola deserticola polysaccharide werd de testkit voor antioxidantcapaciteit gebruikt voor snelle detectie. Neem de standaard Trolox-detectieoplossing en verdun deze met gedestilleerd water tot {{0}}, 0.25, 0.5, 1.0, 2.{ {10}} en 4,0 mg/ml, respectievelijk. Voeg peroxidase-werkoplossing toe aan de detectieputplaat, voeg vervolgens het te testen monster of standaard detectieoplossing toe en voeg ten slotte de werkoplossing van de snelle detectiekit toe. Meng goed en laat het 6 minuten staan. De totale antioxidantcapaciteit van Cistanche deserticola-polysaccharide werd bepaald door een microplaatlezer bij een golflengte van 405 nm en 734 nm [14-15]. Zie Tabel 6 voor de testresultaten van de totale antioxidant prestatietest van de Cistanche deserticola deserticola polysaccharide-oplossing.

Tabel 6 Totale antioxidantcapaciteit van Cistanche deserticola polysaccharide-oplossing

Uit tabel 6 blijkt dat wanneer de concentratie van de Cistanche deserticola-oplossing minder is dan 4,{2}}mg/ml, de totale antioxidantcapaciteit van ruw polysaccharide CLP van Cistanche deserticola, neutrale suiker CLP1 van Cistanche deserticola en zure suiker CLP2 van Cistanche deserticola neemt toe met de toename van de oplossingsconcentratie; De antioxidantcapaciteit van neutrale suiker CLP1 van Cistanche deserticola deserticola is aanzienlijk hoger dan die van ruwe polysaccharide CLP van Cistanche deserticola deserticola deserticola en zure suiker CLP2 van Cistanche deserticola deserticola deserticola.

Cistanche-thee

5. Conclusie

De analyseresultaten van Cistanche deserticola deserticola-polysaccharide door middel van hoogwaardige gelpermeatiechromatografie toonden aan dat het molecuulgewicht van het daarin aanwezige polysaccharide niet meer was dan 10.000 Da en dat het meerdere elutiepieken bevatte. Cistanche deserticola deserticola polysaccharide had bepaalde antioxiderende eigenschappen. De resultaten van dit onderzoek leggen een basis voor de verdere ontwikkeling en benutting van Cistanche deserticola.

Referenties:

 [1] Bi Cuicui, Liu Yinlu, Wei Fenfen, et al. Voortgang van het onderzoek naar de belangrijkste chemische bestanddelen en biologische activiteiten van Cistanche deserticola [J]. Onderzoek naar geneesmiddelenevaluatie, 2019, 42 (9): 1896-1900

[2] Dong Yuwei, Miao Jingzhi, Li Yong. Optimalisatie van het dubbele enzymextractieproces voor knoflookpolysacchariden en de in-vitro-antioxidantactiviteit ［ J ］. Chinese kruiden, 2020, 45 (10): 30-35, 48

[3] Yang Ting, Eladan McIntyre, Tao Yichun, et al. Bepaling van polysaccharidegehalte en antioxiderende activiteit van Cistanche tubulosa-droesem ［ J ］. Journal of Xinjiang Medical University, 2019, 42 (2): 234-236241

[4] Liu Lisa, Zhang Qing, You Lin, et al. Studie naar de solventextractietechnologie van fenethylalcoholglycosiden uit Cistanche tubulosa [J]. Voedingswetenschap en -technologie, 2019, 44 (4): 225-229

[5] Liu Yaowei, Su Zihao. Onderzoek naar het flash-extractieproces van echinacea- en Verbascum thapsus-glycosiden in Cistanche deserticola ［ J ］. Medische voeding en gezondheid, 2020, 18 (23): 27-28

[6] Tian Wenjing, Zhou Xuan, Huang Qunhui, et al. Effect van ultrasone behandeling op reologische eigenschappen van Cistanche deserticola deserticola polysaccharide ［ J ］. Bulletin of Biology, 2021, 56 (2): 48-53

[7] Feng Jie, Guo Yehong, Zhu Wenjuan, et al. Effecten van verschillende gastheren, habitats en oogstdata op het gehalte aan actieve ingrediënten in Cistanche deserticola ［ J ］. Chinese wilde plantenbronnen, 2021, 40 (5): 18-23

[8] Lv Mingshuai, Zhao Bo, Sun Wenyu, et al. Studie naar de fysisch-chemische eigenschappen en antioxiderende activiteit van seleniumrijke Auricularia auricula-judge polysaccharide ［ J ］. Chinees aroma, 2021, 46 (6): 54-59

[9] Chen Yuebai. De screening van het Lentinan-extractieproces en de analyse van de huidige stand van het onderzoek naar de gezondheidseffecten ervan [J]. Chinees aroma, 2021, 46 (8): 189-191

[10] Guo Qiaoli, Wu Zhibo, Zhou Yubi, et al. Samenstellingsanalyse en antioxiderende activiteit van polysacchariden uit Cistanche deserticola in Lanzhou ［ J ］. Wetenschap en technologie in de voedingsindustrie, 2021, 42 (15): 96-103

[11] Cao Libo, Gong Xingcheng, Jia Jinru, et al. Snelle kwalitatieve analyse van chemische bestanddelen van Cistanche salsa door directe injectie meertraps massaspectrometrie volledige scanmethode ［ J ］. Chinees tijdschrift voor traditionele Chinese geneeskunde, 2021, 46 (16): 4150-4156

[12] Hu Dongbao, Du Wei, Yang Meng. Optimalisatie van het extractieproces en de antioxiderende activiteit van polysaccharide uit Macrocybe gigantea door responsoppervlakmethodologie ［ J ］. Chinese Specerijen, 2021, 46 (10): 78-82

[13] Xu Sheng, Chai Shasha. De snelle detectiemethode van de belangrijkste werkzame stoffen in Cistanche deserticola [J]. Journal of Wuhan Vocational and Technical College, 2021, 20 (4): 116-120

[14] Zhang Hongchi, Liu Rui, Jiao Lele, et al. Optimalisatie van het extractieproces van Lentinan op basis van de kwadratische regressierotatie orthogonale methode ［ J ］. Chinees aroma, 2021,46 (11): 88-93

[15] Song Qingqing, Zhang Ke, Li Ting, et al. Gelijktijdige bepaling van het gehalte aan meerdere componenten van Cistanche deserticola door hydrofiele interactiechromatografie met omgekeerde fase op maat gemaakte monitoringmethode met meerdere reacties [J]. Analytische chemie, 2020, 48 (11): 1573-1593