Studie naar het intelligentiebevorderende effect van de combinatie van totale glycosiden van Cistanche Deserticola en Lycium Barbarum-polysacchariden op C57BL/6J-muizen op verschillende leeftijden

Samenvatting

Doel: het onderzoeken van de effecten van totale glycosiden van cistanche deserticola gecombineerd met Lycium barbarum-polysacchariden op het leer- en geheugenvermogen, de synthese en afbraak van cholinerge neurotransmitters en het niveau van oxidatieve stress in de hersenen van C57BL/6J-muizen in verschillende maanden van leeftijd. Methoden: 48 C57BL/6J muizen van 3, 6 en 9 maanden elk werden willekeurig verdeeld in een controlegroep, totale glycosiden van cistanche deserticola 100 mg/kg groep, Lycium barbarum polysaccharide 100 mg/kg groep, en gecombineerd (totale glycosiden van cistanche deserticola 100 mg/kg plus lycium barbarum polysaccharide 100 mg/kg) groep. Na 30 dagen intragastrische toediening werden de leer- en geheugencapaciteiten van muizen van verschillende maanden oud geëvalueerd door de Morris water maze test, dark avoidance test en platform jumping test; De niveaus van AChE, ChAT, T-SOD, GSH-Px en MDA in de hersenschors van muizen van verschillende maanden oud werden gemeten door middel van colorimetrie. Resultaten: Vergeleken met de controlegroep waren de leer- en geheugencapaciteiten van muizen in elke combinatiegroep van een maand oud verbeterd, de activiteiten van ChAT en T-SOD in de cortex van muizen in de 3 en 6-maanden oude combinatiegroep waren significant verhoogd, de activiteiten van ChAT en GSH-Px in de cortex van muizen in de 9-maanden oude combinatiegroep waren significant verhoogd, en het gehalte aan MDA in de hersenschors van muizen in de 6 en 9-maanden oude combinatiegroep was significant kleiner (P<0.05) 05 or P<0 01). Conclusion: The combined administration of Cistanche glycosides and Lycium barbarum polysaccharides can improve the learning and memory abilities of C57BL/6J mice aged 3, 6, and 9 months, and its mechanism may be related to regulating the synthesis and degradation of cholinergic neurotransmitters in the brain and inhibiting the level of oxidative stress in the brain.

Trefwoorden

Totaal glycosiden vanCistanche deserticolA; Lycium barbarum polysacchariden; Acetylcholine; oxidatieve stress

Leren en geheugen zijn geavanceerde intelligente activiteiten van het centrale zenuwstelsel en ze zijn nauw met elkaar verbonden. Aan het einde van de vorige eeuw formuleerde en voerde de Wereldgezondheidsorganisatie een "Brain Science Research Plan" uit en voerden landen als de Verenigde Staten en Japan actief onderzoeksplannen uit om de mysteries van het menselijk brein op te lossen, het mysterie van geheugen, en zoek naar effectieve methoden en medicijnen om de menselijke leer- en geheugenfuncties te verbeteren en menselijke leer- en geheugenstoornissen te voorkomen en te behandelen. Het lijdt geen twijfel dat het verbeteren van leer- en geheugenfuncties en het voorkomen en behandelen van gerelateerde ziekten belangrijke taken zullen zijn op het gebied van de levenswetenschappen.

Cistanche deserticolaEnLycium barbarumzijn twee traditionele versterkende kruiden die veel worden gebruikt in de klinische praktijk. De totale glycosiden van Cistanche deserticola zijn ethanolextracten van de gedroogde, geschubde, vlezige stengels van de Orobaceae-plant Cistanche deserticola of Cistanche tubulosa. Studies hebben uitgewezen dat detotale glycosiden van Cistanche deserticola hebben significante effecten op A 1-42-geïnduceerde PC12-celbeschadiging, hebben een significant beschermend effect [2] en kunnen door A 1-42 geïnduceerd leren en cognitieve disfunctie en oxidatieve stressniveaus bij ratten met de ziekte van Alzheimer verbeteren. Lycium barbarum-polysaccharide is een van de belangrijkste effectieve componenten die worden geëxtraheerd uit de vrucht van Lycium barbarum, die goede anti-vermoeidheid, anti-veroudering, antioxiderende en neuroprotectieve effecten heeft.In oud receptonderzoek is gebleken dat Cistanche deserticola vaak een antiverouderingsrol speelt in combinatie met Chinese wolfberry. Er zijn echter geen relevante literatuurrapporten over het gebruik van de combinatie van de twee bij het bevorderen van intelligentie. In dit experiment werden C57BL/6J-muizen van 3, 6 en 9 maanden gebruikt om de effecten te onderzoeken van totale glycosiden van cistanche deserticola gecombineerd met Lycium barbarum-polysacchariden op het leer- en geheugenvermogen van C57BL/6J-muizen van verschillende maanden en de gerelateerde mechanismen door gedragsexperimenten, bepaling van cholinerge en oxidatieve stress-gerelateerde indicatoren in de hersenen, om zo een bepaalde onderzoeksbasis te verschaffen voor de klinische toepassing ervan bij het bevorderen van intelligentie.

Chinese medicines such as ginseng, Cistanche deserticola, and astragalus

Chinese medicijnen zoals ginseng, Cistanche deserticola en astragalus

1 Materiaal en instrumenten

1.1 Proefdieren

Er zijn 48 SPF-klasse C57BL/6J-muizen van 3, 6 en 9 maanden elk, half mannelijk en half vrouwelijk, gekocht bij Nanjing Junke Biotechnology Co., Ltd., met het proefdiercertificaatnummer 20180006018886. Tijdens het experiment, gratis inname water en 12 uur afwisselend lichte en donkere verlichting werden uitgevoerd. Alle experimenten zijn uitgevoerd in overeenstemming met de experimentele voorschriften en de werking en het beheer waren in overeenstemming met de relevante voorschriften voor het beheer van proefdieren.

Chinese geneeskrachtige materialen zoals cistanche

Klik hier om de producten van Cistanche te bekijken

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

1.2 Geneesmiddelen en reagentia

Totaal glycosiden van cistanche deserticola (massafractie groter dan of gelijk aan 80 procent, batchnummer: JZ20092513), Lycium barbarum polysacchariden (massafractie groter dan of gelijk aan 90 procent, batchnummer: JZ21042710), Nanjing Jingzhu Biotechnology Co., Ltd; BCA-kit, Acetylcholinesterase (AChE) Kit, Acetylcholinetransferase (ChAT) Kit, Malondialdehyde (MDA) Kit, Total Superoxide Dismutase (T-SOD) Kit, Glutathion Catalase (GSH-Px) Kit, Nanjing Jiancheng Biological Engineering Research Institute.

1.3 Belangrijkste instrumenten

DMS-2 Morris Water Maze Experimental Device, DTT-2 Mouse Platform Jumping Device, SBA-2 Mouse Darkness Avoidance Test Device, Institute of Medicine, Chinese Academy of Medical Sciences; 4503R hogesnelheidscentrifuge bij lage temperatuur, Eppendorf, Duitsland; VARIOSKAN FLASH ELISA, Thermo Corporation, VS.

2 methoden

2.1 Groepering en administratie van dieren

48 C57BL/6J-muizen van elk 3, 6 en 9 maanden werden willekeurig verdeeld in 4 groepen, met 12 muizen in elke groep, half mannelijk en half vrouwelijk, inclusief de blanco controlegroep, de totale glycosiden van de Cistanche deserticola-groep (100 mg /kg), de Lycium barbarum polysaccharide groep (100 mg/kg), en de gecombineerde groep (totaal glycosiden van Cistanche deserticola plus lycium barbarum polysaccharide 100 mg/kg). Ze werden gedurende 1 maand dagelijks via een maagsonde toegediend.

2.2 Morris waterdoolhof-experiment

Het apparaat bestaat uit een zwart rond zwembad, een transparant rond platform, een camera en een automatisch beeldacquisitie- en verwerkingssysteem. De buitenrand van het zwembad is op gelijke afstand verdeeld in vier wateringangspunten: oost, west, zuid en noord. In het zwembad wordt een rond transparant platform met een diameter van 15 cm geplaatst. Zorg tijdens het experiment voor een constante temperatuur, geluidsisolatie en geen direct licht om te voorkomen dat externe factoren de muizen hinderen. Het experiment duurde in totaal zes dagen: van de eerste dag tot de vijfde dag werd een positioneringsnavigatie-experiment uitgevoerd, waarbij het tijdstip waarop de muis het platform vond binnen 120 seconden werd geregistreerd, wat de ontsnappingslatentie is. Als de muis het platform niet binnen 120 seconden heeft gevonden, was de ontsnappingslatentie 120 seconden. Na de training werd elke muis, ongeacht of hij het platform had gevonden, gedurende 15 seconden op het platform geplaatst om te leren, en ging het water in vanuit het aangrenzende relatieve kwadrant van het platform om twee keer per dag te leren; Op de zesde dag werd een ruimteverkenningsexperiment uitgevoerd en werd het platform verwijderd. De eerste keer dat het het platform overstak nadat het te water was gegaan vanuit het aangrenzende relatieve kwadrant en het aantal keren dat het het platform overstak binnen 120 seconden werd gemeten.

2.3 Duisternisvermijdingsexperiment

Het apparaat is verdeeld in twee kamers, open en donker. De twee kamers zijn verbonden door een klein gaatje waar muizen in en uit kunnen. Er wordt een stroom van 40 V aangelegd op de bodem van de donkere kamer, terwijl er geen elektriciteit wordt aangelegd op de bodem van de lichte kamer. Het experiment is verdeeld in twee fasen: De eerste dag is de leerfase. Plaats eerst de muis terug in het gat en zet hem in de lichte kamer. Nadat je hem 2 tot 3 minuten vrij hebt laten bewegen in twee kamers om zich aan te passen aan de omgeving, plaats je de muis terug in het gat en zet je hem in de lichte kamer. De gewoonte van de muis om naar duisternis te neigen en licht te vermijden en graag gaten te boren, zal ervoor zorgen dat hij de donkere kamer binnengaat en een elektrische schok krijgt. Als de muis niet binnenkomt, wordt hij de donkere kamer in gedreven om geheugen te genereren; De tweede dag is de testfase. Plaats de muis terug in het gat in de lichtkamer en noteer de incubatietijd van de muis die vanuit de lichtkamer de donkere kamer binnenkomt en het aantal keren dat hij de donkere kamer binnengaat binnen 3 minuten als testresultaat.

2.4 Platformduikexperiment

Het duikplatformapparaat is een rechthoekig lichaam van 20 cm × 20 cm × A 30 cm met een geïsoleerd rubberen platform aan de onderkant waarop muizen kunnen staan en waarop een stroom van 36 V wordt toegepast. Het experiment werd gedurende twee opeenvolgende dagen uitgevoerd en de eerste dag was een leer- en trainingsfase. Eerst werden de muizen in een springplatform-testbox geplaatst en mochten ze 3 minuten vrij bewegen om zich aan de omgeving aan te passen. Vervolgens werden de muizen op een isolerend platform geplaatst, waarbij het onderste koperen rooster werd geactiveerd voor continue stimulatie gedurende 180 seconden. Nadat ze een elektrische schok hadden gekregen, sprongen de muizen op het platform om de elektrische schok te vermijden. Als de muizen niet op het platform sprongen, werden ze door de experimentele operator handmatig naar het isolerende platform geleid; De tweede dag is de testfase. Plaats de muis op een geïsoleerd platform en activeer vervolgens het onderste koperen rooster. Noteer het tijdstip waarop de muis voor het eerst van het platform sprong als latentieperiode. Het aantal keren dat de muis binnen 180 seconden van het platform is gesprongen, wordt geregistreerd als een foutnummer. Als de muis niet binnen 180 seconden van het platform springt, wordt de latentietijd geregistreerd als 180 seconden.

2.5 Indexdetectie

Aan het einde van het gedragsexperiment werd de muis onthoofd, werd de cortex snel gescheiden bij lage temperaturen en werd een bepaalde hoeveelheid corticaal weefsel nauwkeurig gewogen. Negen keer het volume van normale zoutoplossing werd toegevoegd. Het homogenaat werd gelyseerd tot 10 procent weefselhomogenaat en gedurende 10 minuten bij 4 graden bij 3000 rpm gecentrifugeerd. Nadat het supernatant was genomen en de eiwitconcentratie was gemeten met een BCA-kit, werd het experiment uitgevoerd in strikte overeenstemming met de stappen in de instructies van de AChE-, ChAT-, MDA-, T SOD- en GSH-Px-kits.

2.6 Statistische verwerking

Gebruik SPSS 19 voor alle gegevens 0 software voor statistische analyse. In het Morris-waterdoolhof-experiment werden de positioneringsnavigatie-experimentgegevens geanalyseerd met behulp van tweerichtings-ANOVA, terwijl andere experimentele gegevens werden geanalyseerd met behulp van eenrichtings-ANOVA, gecombineerd met de LSD-test, om de verschillen tussen de groepen te vergelijken. De resultaten werden uitgedrukt als (· x ± s), waarbij P<0 05 as a statistically significant difference, using Origin 2021 for mapping.

3. Resultaten

Cistanche deserticola ma

3.1 Effect van de compatibiliteit van totale glycosiden van cistanche deserticola en Lycium barbarum polysacchariden op de Morris water maze test in C57BL/6J muizen van verschillende maanden oud

Zoals getoond in figuur 1 was er, vergeleken met de controlegroep, geen significante verandering in de ontsnappingslatentie van de 3 en 6-maanden oude muizen in elke behandelingsgroep, terwijl de ontsnappingslatentie van de 9- muizen van een maand oud in elke behandelingsgroep op de 4e dag waren significant korter (P<0. 05) 05). In the space exploration experiment, compared with the control group, the first time crossing platform time of the 6 and 9-month-old mouse combination group was significantly shortened, the number of times crossing platform in each month-old mouse combination group was significantly increased, the target quadrant residence time was significantly prolonged, and the target quadrant residence time of the 3 and 9-month-old mice in the total glycosides of cistanche deserticola group was significantly prolonged (P<0.05) 05 or P<0 01). The effect of the combination of total glycosides of cistanche deserticola and Lycium barbarum polysaccharides on the dark avoidance experiment in C57BL/6J mice at different months of age is shown in Figure 2. Compared with the control group, the incubation period of mice in the 3-month combined group was significantly prolonged, the number of errors in each month combined group was significantly reduced, and the number of errors in the 9-month Lycium barbarum polysaccharide group was significantly reduced (P<0. 05) 05 or P<0 .01).

3.2 Effect van de compatibiliteit van totale glycosiden van cistanche deserticola en Lycium barbarum-polysacchariden op platformspringtest bij C57BL/6J-muizen van verschillende maanden oud

As shown in Figure 3, there was no statistically significant difference in latency and the number of errors in platform jumping experiments among mice in each group (P>0. 05) 05).

3.3 Effecten van de compatibiliteit van totale glycosiden van cistanche deserticola en Lycium barbarum-polysacchariden op de synthese en afbraak van ACh in de hersenschors van C57BL/6J-muizen op verschillende maanden oud

Woestijnginseng

Zoals getoond in figuur 4, vergeleken met de controlegroep, nam de activiteit van ChAT in de hersenschors van muizen in de gecombineerde groep op elke leeftijd van een maand significant toe (P<0. 05) 05 or P<0 01).

3.4 Effecten van de compatibiliteit van totale glycosiden van cistanche deserticola en Lycium barbarum-polysacchariden op de synthese en afbraak van ACh in de hersenschors van C57BL/6J-muizen op verschillende maanden oud

3.5 Effecten van de compatibiliteit van totale glycosiden van cistanche deserticola en Lycium barbarum-polysacchariden op de niveaus van MDA, T-SOD, GSH-Px in de hersenschors van C57BL/6J-muizen op verschillende leeftijden van maanden

Zoals weergegeven in afbeelding 5, vergeleken met de controlegroep, was het MDA-gehalte in de hersenschors van muizen in de 6-maanden oude en 9-maanden oude combinatiegroepen en de 6-maanden oude -oude totale glycosidengroep van cistanche deserticola nam significant af, het T-SOD-niveau in de hersenschors van muizen in de 3-maanden oude en 6-maanden oude combinatiegroepen nam significant toe, en de GSH- Px-niveau in de 9-maanden oude Lycium barbarum-polysaccharidegroep en de combinatiegroep nam significant toe (P<0. 05) 05 or P<0 01).

Figuur 1 Effect van totale glycosiden van cistanche deserticola gecombineerd met lycium barbarum-polysacchariden op Morris water maze-test bij C57BL/6J-muizen van verschillende maanden oud

A. Controlegroep B. Cistanche-glycosidengroep C. Lycium barbarum-polysaccharidegroep D. Combinatiegroep