Het mechanisme van Cistanche Deserticola ter bevordering van de darmfunctie

Yuan Gao, Chuanjie Zong, Fen Liu, Lei Fang, Runlan Cai, Yue Shi, Xi Chen, Yun Qi

Abstract

Fenylethaanglycosiden(PhG's), een klasse van polyfenolische verbindingen, worden beschouwd als een van de belangrijkste bioactieve bestanddelen vanCistanchedeserticolaYC Ma (CD), waarvan het extract oraal wordt gebruikt in de traditionele Chinese geneeskunde. Hoewel eerdere farmacologische studies hebben gemeld dat PhG's veel activiteiten uitoefenen, zijn hun darmtransportprofielen niet opgehelderd. In deze studie onderzochten we de darmpermeabiliteit van een PhG-rijk extract (PRE) uitCistancheDeserticolaals een geïntegreerd systeem in het Caco-2-celmonolaagmodel met behulp van een bioassaysysteem. De resultaten toonden aan dat PRE voornamelijk wordt getransporteerd via slecht geabsorbeerde passieve diffusie langs een concentratiegradiënt zonder efflux, wat de farmacokinetische basis vormt voor de klinische toepassing van PhG's inCistanche Deserticola. We bepaalden ook de darmpermeabiliteit van drie belangrijkePhG's[acteoside (AC), isoacteoside (IS) en echinacoside (EC)]door HLPC. Verder hebben we een nieuwe HPLC-fluorescentiedetectiemethode ontwikkeld om de fluxhoeveelheid van AC en IS nauwkeurig te bepalen. Zoals verwacht, zijn de transportkenmerken van de driePhG'sconsistent zijn met die van PRE, wat aangeeft dat het huidige bioassaysysteem geschikt en betrouwbaar is voor de evaluatie van de transportkenmerken van actieve ingrediëntgroepen (AIG) in PRE. Bovendien kan dit systeem ook geschikt zijn voor andere plantenextracten met een geschikte biologische activiteit.

Contact:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Cistanche deserticola heeft veel effecten, klik hier voor meer informatie

Invoering

De Caco-2-cellijn, die is afgeleid van humane colonadenocarcinomen, vertoont enterocytachtige kenmerken. Onder normale omstandigheden differentiëren Caco-2-cellen spontaan van rijpe cellen en vormen intacte monolagen [1]. De aangrenzende cellen hechten zich via tight junctions gevormd aan de apicale zijde van de monolaag, die de passief en actief getransporteerde medicijnen door de epitheellaag kunnen onderscheiden [2]. Vanwege de morfologische en biochemische gelijkenis met normale enterocyten, dienen Caco-2 celmonolagen als een algemeen geaccepteerd in vitro model voor de studie van het intestinale absorptiepotentieel en transportkenmerken van geneesmiddelen [3, 4].

In tegenstelling tot chemicaliën zijn plantenextracten (PE) mengsels waarvan de biologische activiteit en actieve bestanddelen vaak niet goed geïdentificeerd zijn [5]. Bovendien zijn de darmtransporteigenschappen van PE, in tegenstelling tot de eigenschappen van de bestanddelen, nauw verwant aan klinisch gebruik. Fluxmetingen voor een testmonster over een Caco-2-celmonolaag omvatten gewoonlijk chemische methoden, zoals HPLC, LC/MS, enz. Hoewel deze methoden krachtige hulpmiddelen zijn, zijn ze complex, tijdrovend, duur en soms geavanceerde apparatuur nodig. Belangrijker is dat noch een enkele component, noch een minderheidscomponent PE als geheel kan weerspiegelen. Er moet dus een nieuwe benadering worden ontwikkeld die onafhankelijk is van de bepaling van bestanddelen om de transportkenmerken van PE te identificeren en te evalueren.

CistanchedeserticolaYC Ma (CD), een holoparasitaire plant, is een algemeen traditioneel Chinees medicijn dat voornamelijk wordt gebruikt voor de behandeling van nierdeficiëntie, lichaamszwakte en constipatie, en deze toepassingen zijn officieel vastgelegd in de Chinese Farmacopee [6]. Fenylethanoïde glycosiden (PhG's), waaronder echinacoside (EC), acteoside (AC), isoacteoside (IS), enz., zijn een klasse van polyfenolische verbindingen [7]. Ze worden beschouwd als een van de belangrijkste bioactieve bestanddelen vanCistanchesoorten [8]. Farmacologische studies hebben aangetoond dat de biologische activiteit vanPhG'sis divers en omvat anti-oxidatieve [9], anti-vermoeidheid [10], hepatoprotectieve [11], immunomodulerende [12], ontstekingsremmende [7, 13] en neuroprotectieve effecten [14]. Echter, de darmtransportkarakteristieken vanPhG'szijn niet onderzocht. In deze studie onderzochten we de intestinale permeabiliteit van een PhG-rijk extract (PRE) van CD als een geïntegreerd systeem en de permeabiliteit van drie belangrijke PhG's (AC, IS en EC) in gedifferentieerde Caco-2-cellen. Onze resultaten gaven aan dat PRE voornamelijk wordt getransporteerd via slecht geabsorbeerde passieve diffusie langs een concentratiegradiënt zonder efflux, wat de farmacokinetische basis vormt voor de klinische toepassing van PhG's bij CD.

Materialen en methodes

Materialen

The human intestinal Caco-2 cell line was obtained from the American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA). AC, IS and EC (>98 procent) werden gekocht bij Must Biotechnology Co. (Chengdu, China). Dulbecco's gemodificeerd Eagle's medium (DMEM), foetaal runderserum (FBS) en niet-essentiële aminozuren (NEAA) werden geproduceerd door Gibco BRL (Grand Island, NY, VS). 6-well TranswellTM-platen (insert membraangroeigebied 4,67 cm2) werden verkregen van Corning (Costar) Inc. (Tewksbury, MA, VS). Rattenstaartcollageen werd verkregen van Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, VS). Alle reagentia en chemicaliën voor de HPLC-analyse waren van analytische kwaliteit.

Bereiding van PRE van Cistanche deserticola

Het aan de lucht gedroogde CD-materiaal werd verpoederd en geëxtraheerd door percolatie met 70 procent ethanol. De PhG-rijke fractie werd bereid zoals eerder beschreven [10] en geëxtraheerd met waterverzadigde n-butylalcohol. De extractvloeistof werd geconcentreerd en onder verminderde druk gedroogd. Macroporeuze hars-UV-spectrofotometrie [15] mat een PhG-gehalte van 78,4 procent. Het uiteindelijke monster vertegenwoordigde een opbrengst aan ruw materiaal van 1,75% op basis van droog gewicht. Het verkregen monster werd tot verder gebruik bij -20 graden bewaard.

Bepaling van AC, IS en EC door HPLC

Een Shimadzu HPLC-systeem uitgerust met de LC-oplossingssoftware werd gebruikt om de inhoud van AC, IS en EC in PRE te testen. Een Intersil C18-kolom met omgekeerde fase (4,6 mm x 25 0 mm, 5 m) werd gebruikt en op kamertemperatuur gehouden. De mobiele fasen waren acetonitril en water dat 0,1 procent fosforzuur (v/v) bevatte met gradiëntelutie (Tabel 1) bij een stroomsnelheid van 1,0 ml/min. De UV-spectrofotometerdetector was ingesteld op 334 nm. Om de flux van AC en IS nauwkeurig te bepalen, hebben we een nieuwe HPLC-fluorescentiedetectie (HPLC-FLD) methode ontwikkeld. Na een structurele analyse en fluorescentiegolflengtescanning (gegevens niet getoond), verkregen we de optimale fluorescentiedetectiecondities voor AC (Ex: 338 nm, Em: 448 nm) en IS (Ex: 320 nm, Em: 434 nm)

De HPLC-analysemethode is gevalideerd met behulp van de volgende prestatiekenmerken: stabiliteit, lineariteit, gevoeligheid, precisie (variabiliteit binnen en tussen de dag) en nauwkeurigheid. De analyten in de transportbuffer werden 24 uur bij 25 graden in het donker bewaard en hun stabiliteit werd gemeten. De analyten waren zeer stabiel in aanwezigheid van vitamine C (0,4 procent ) omdat de relatieve standaarddeviatie (RSD) waarden in de piekgebieden < 3,5="" procent="" waren.="" de="" lineaire="" regressievergelijking,="" correlatiecoëfficiënt,="" bereik="" van="" lineariteit,="" lod="" en="" loq="" voor="" ac,="" is="" en="" ec="" worden="" weergegeven="" in="" tabel="" 2.="" de="" lod's="" (18–30="" nm)="" en="" loq's="" (60–100="" nm)="" waarden="" illustreren="" dat="" de="" hplc-fld-="" en="" hplc-uv-methoden="" zeer="" gevoelig="" zijn.="" de="" rsd-waarden="" die="" de="" precisie="" van="" de="" methode="" uitdrukken="" waren="" allemaal="">< 2="" procent="" voor="" intra-="" en="" inter-day="" variabiliteit,="" wat="" wijst="" op="" een="" goede="" precisie.="" voor="" herstelevaluatie="" werden="" ac,="" is="" en="" ec="" toegevoegd="" aan="" de="" transportbuffer="" om="" drie="" (hoge,="" gemiddelde="" en="" lage)="" concentratieniveaus="" op="" te="" leveren.="" de="" recovery-waarden="" van="" de="" methode="" voor="" de="" analyten="" zijn="" samengevat="" in="" tabel="" 3.="" de="" gemiddelde="" recovery="" varieerde="" van="" 90,0="" procent="" tot="" 96,4="" procent,="" wat="" wijst="" op="" een="" goede="" nauwkeurigheid.="" concluderend="" zijn="" de="" gevestigde="" hplc-methoden="" bevredigend="" met="" betrekking="" tot="" lineariteit,="" gevoeligheid,="" precisie="" en="" nauwkeurigheid="" voor="" de="" kwantificering="" van="" ac,="" is="" en="" ec="" in="">

Bepaling van PRE door bioassaysysteem

De bioassay (totale antioxidatieve capaciteit) was gebaseerd op de FRAP-assay (ferri-reducerende/antioxidant-kracht) die we eerder beschreven [16] en gevalideerd in termen van lineariteit en precisie (intra- en inter-day variabiliteit). De lineariteit van de bioassay-methode werd bepaald op basis van de kalibratiecurves. Het concentratiebereik van lineariteit was 0.0625 − 40 ug/ml (y=0,0258x plus 0,0968, R2=0,996). De precisie van de gevestigde bioassay-methode werd bepaald in termen van de intra- en inter-day variabiliteit voor een analyse van PRE (10,0 ug/ml). De intra-day herhaalbaarheid van de methode werd bepaald op basis van vijf opeenvolgende bepalingen op dezelfde dag. De herhaalbaarheid tussen de dagen werd gemeten op basis van vijf opeenvolgende bepalingen op drie verschillende dagen. De RSD-waarden voor de precisie van de methode waren respectievelijk 1,014 procent en 4,72 procent voor intra- en inter-day variabiliteit, wat wijst op een goede precisie. De gevestigde bioassaymethode is dus bevredigend met betrekking tot lineariteit, precisie en nauwkeurigheid voor de kwantificering van PRE in transportbuffer.

Cel cultuur

Caco{{0}}-cellen werden gekweekt bij 37 graden en 95 procent relatieve vochtigheid in een atmosfeer die 5 procent CO2 bevat en medium bestaande uit DMEM, 10 procent FBS, 1 procent NEAA, 1 procent L-glutamine, penicilline ( 100 U/ml), en streptomycine (100 ug/ml). Het medium werd om de dag vervangen tijdens celgroei en differentiatie. De cellen werden gekweekt in 75- cm2 plastic kolven en elke 3-5 dagen geoogst met 0,05 procent EDTA-trypsine. Voor de transportexperimenten werden de cellen gezaaid met een dichtheid van 1 x 105 cellen/cm2 op Transwell-inserts bekleed met collageen. Ongeveer 21 dagen na het zaaien werden de monolagen gebruikt voor de transportexperimenten. Hun integriteit werd bepaald door de trans-epitheliale elektrische weerstand (TEER) over de monolagen te meten met een EVOM uitgerust met ENDOHM-SNAP (World Precision Instruments, Inc., VS). De TEER-waarden van de Caco-2 celmonolaag moesten hoger zijn dan 500 O∙cm2.

Transportexperimenten

De monolaag werd gewassen met transportbuffer (P-buffer met 10 mM HEPES, 1 mM natriumpyruvaat, 10 mM glucose, 3 mM CaCl2 en 145 mM NaCl, pH 7,4) en vervolgens 20 minuten voorgeïncubeerd bij 37 graden. Na het verwijderen van de transportbuffer werd verse transportbuffer met testmonsters toegevoegd aan de apicale (AP) kamer (1,5 ml) in AP naar basolaterale (BL) directionele studies of de BL-kamer (2,5 ml) in BL naar AP directionele studies. Voor AC-, IS- en EC-assays met gebruikmaking van HPLC werd een aliquot (300 µl) op verschillende tijdstippen (30, 60, 90 en 120 minuten) uit elke opvangkamer verwijderd. De opvangkamer werd na elke bemonstering aangevuld met hetzelfde volume verse voorverwarmde (37 graden) transportbuffer. De verzamelde monsters werden voor verder gebruik bij -20 graden bewaard. Voor PRE-bepaling met behulp van bioassay werden alleen de monsters na 120 minuten genomen. Vanwege de instabiliteit van PRE, AC, IS en EC werd 0,4 procent (w/v) vitamine C toegevoegd om de monsters te stabiliseren om het AC-, IS- en EC-gehalte te bepalen met HPLC, en de monsters voor de PRE bioassay werden onmiddellijk na bemonstering getest. De schijnbare permeabiliteitscoëfficiënt (Papp of 'Papp) waarde van elk monster werd berekend.

Gegevensanalyse

De Papp-waarden in de AP BL- of BLAP-richtingen van AC, IS en EC werden berekend op basis van de volgende vergelijking: Papp {{0}} (4Q/4t)/(AC0), waarbij Papp is de schijnbare permeabiliteitscoëfficiënt (cm/s) bepaald door HPLC. (4Q/4t) is de snelheid waarmee de testverbinding (AC, IS of EC) aan de ontvangerzijde verschijnt (μmol/s); A is het oppervlak van het inzetstuk (cm2); C0 is de initiële concentratie van de testverbinding aan de donorzijde (μmol/ml). In het bijzonder werd de massa-eenheid "ug" gebruikt in plaats van "μmol" wanneer de 'Papp-waarden werden berekend. De gegevens worden uitgedrukt als de gemiddelden ± SD.

Resultaten

Samenstelling van Acteoside, Isoacteoside en Echinacoside in PRE van Cistanche Deserticola

Omdat AC, IS en EC worden beschouwd als de belangrijkste bioactieve PhG's van Cistanche-soorten [8], hebben we hun inhoud in PRE geanalyseerd via HPLC-UV. Het representatieve chromatogram is weergegeven in Fig. 1. De identificatie van deze bestanddelen was gebaseerd op het vergelijken van de retentietijden en het UV-spectrum met die van authentieke standaarden bij een golflengte van 334 nm. De inhoud van AC, IS en EC in PRE was respectievelijk 26,60 procent, 1,84 procent en 32,83 procent. Deze drie verbindingen zijn dus goed voor 61,27 procent van PRE; bovendien geven de bovenstaande resultaten aan dat het PhG-gehalte in PRE 78,4 procent is. Daarom zijn AC, IS en EC goed voor ongeveer 80 procent van de PhG's in PRE.

Totale anti-oxidatieve capaciteiten van PRE, AC, IS en EC

Studies naar de anti-oxidatieve activiteit van PhG's van CD zijn gerapporteerd [9], en AC, IS en EC zijn verantwoordelijk voor ongeveer 80 procent van de PhG's in PRE. Zo werd de totale anti-oxidatieve capaciteit van PRE, AC, IS en EC bepaald en uitgedrukt met behulp van de FRAP-waarden (× 10-6 mmol). Zoals getoond in Fig. 2, toen de FRAP-waarde 8 × 10-6 mmol was, waren de eindconcentraties van PRE, AC, IS en EC 6,20 ug/ml, 3,14 ug/ml, 22,92 ug/ml en 4,89 ug/ ml, wat aangeeft dat de totale antioxidatieve capaciteit van deze vier monsters als volgt was gerangschikt: AC > EC > PRE > IS. De biologische activiteit van PRE wordt toegeschreven aan de actieve ingrediëntgroepen (AIG). Voor ongeveer 60 procent van PRE vertoonden AC en EC een sterkere totale anti-oxidatieve activiteit dan PRE en IS. Omdat IS (1,84 procent) een zeer kleine fractie van PRE vormt, zijn ook andere componenten, zoals het zwak anti-oxidatieve IS, duidelijk actief in PRE. Verrassend genoeg verschilde de totale anti-oxidatieve activiteit bijna 7-voudig tussen AC en zijn isomeer IS, wat aangeeft dat niet alleen het aantal fenolische hydroxylgroepen [9] maar ook de positie van fenolische hydroxylgroepen in het molecuul de anti- -oxidatieve werking.

Validatie van de Caco-2 monolagen

Om het Caco-2-celmonolaagsysteem te valideren, de Papp-waarden van propranolol (een goed getransporteerde marker) en Lucifergeel (een slecht getransporteerde marker) van de AP naar de BL over de Caco-2-monolagen werden bepaald als respectievelijk 1,51 × 10-5 cm/s en 2,8 × 10-7 cm/s, en deze waarden kwamen overeen met die gepubliceerd in eerdere rapporten [17, 18]. De alkalische fosfatase-activiteitstest bevestigde ook dat de Caco-2-celmonolagen kwalitatief vergelijkbaar waren met het epitheel van de dunne darm [19]

De permeabiliteit van Acteoside, Isoacteoside en Echinacoside

In general, the Papp values of well-absorbed drugs were high (>1.0 × 10–5 cm/s), terwijl die van slecht geabsorbeerde geneesmiddelen laag waren (< 1.0="" ×="" 10–6="" cm/s)="" [3].="" as="" shown="" in="" table="" 4,="" the="" papp="" values="" of="" ac,="" is="" and="" ec="" was="" nearly="" on="" the="" order="" of="" 10–7="" cm/s,="" indicating="" that="" these="" compounds="" were="" poorly="" permeable.="" furthermore,="" efflux="" or="" active="" transport="" were="" not="" observed="" because="" the="" ratios="" of="" papp="" bl="" to="" ap="" papp="" ap="" to="" bl="" for="" ac,="" is="" and="" ec="" was="" between="" 0.90="" ~="" 1.55,="" and="" the="" criterion="" of="" net="" efflux="" proposed="" by="" the="" fda="" guidance="" is="" a="" ratio="" less="" than="" 2="" [20].="" based="" on="" the="" kinetic="" curves="" presented="" in="" fig.="" 3,="" the="" bidirectional="" transport="" percentages="" of="" ac,="" is="" and="" ec="" at="" 200="" μm="" increased="" linearly="" with="" time.="" the="" transport="" rate="" (tr)="" values="" of="" the="" three="" compounds="" increased="" linearly="" in="" both="" directions="" between="" approximately="" 100="" and="" 300="" μm="" (fig.="" 4).="" these="" results="" indicate="" that="" the="" main="" transport="" mechanism="" of="" ac,="" is="" and="" ec="" is="" also="" passive="">

De doorlaatbaarheid van PRE

Bovenstaande resultaten geven aan dat de totale antioxidatieve capaciteit van PRE in ieder geval te danken is aan 61,27 procent van AIG van PRE. We evalueerden dus de TR van PRE op basis van de concentratie-effectcurve van de totale antioxidatieve capaciteit en berekenden de 'Papp-waarden om de transportkenmerken van PRE weer te geven. De 'Papp-waarden van PRE voor AP!BL en BL!AP waren (2,16 ± 0,26) × 10–7 cm/s en (3,13 ± 0,29) × 10–7 cm/ s, wat aangeeft dat deze verbinding slecht permeabel was. Verder was efflux of actief transport niet evident omdat de verhouding van 'Papp BL tot AP / 'Papp AP tot BL voor PRE 1,45 was [20]. Bovendien nam de bidirectionele TR van PRE lineair toe tussen ongeveer 300 en 900 ug/ml (Fig. 5). Het gebrek aan directionele voorkeur van de resultaten suggereert dat passieve diffusie het belangrijkste transportmechanisme van PRE is.

Discussie

In vergelijking met sterk gezuiverde geneesmiddelen is PE over het algemeen een mengsel dat bestaat uit honderden bestanddelen met sterk verschillende fysiochemische eigenschappen. Daarom oefent PE systematische, multitarget en multichannel synergetische actie uit vanwege hun complexe AIG [21], wat de analyse van de transportkenmerken van PE belemmert. Om de transporteigenschappen van PE meer wetenschappelijk te evalueren, hebben sommige onderzoekers meerdere componenten in PE geïdentificeerd in plaats van een enkele component [22-24]. Niettemin kan een beperkt aantal bestanddelen de PE als geheel niet weerspiegelen. Het is echter onmogelijk om alle componenten in PE te bepalen. Bovendien, als verschillende componenten in PE totaal verschillende transportkenmerken vertonen, zullen de holistische transportkenmerken van PE moeilijk te identificeren zijn.

In de jaren negentig werden bioassaysystemen gebruikt om de TR van antimicrobiële middelen te evalueren [25]. Tegen 2005 hadden Eguchi en zijn collega's [26] de anti-oxidatieve activiteit van wortelextract geëvalueerd door BL-media van gedifferentieerde Caco-2-cellen te gebruiken; deze benadering is meer geschikt om in vivo situaties weer te geven.

Op basis van een eerder rapport van de activiteit van PhG's [9] en onze resultaten (Fig. 2), kan de TR van AIG in PRE worden geëvalueerd door de totale antioxidatieve capaciteit van het medium in de opvangkamer te bepalen. Na de transportexperimenten ontdekten we dat de TR van PRE in beide richtingen vergelijkbaar was, en dit transport was onverzadigd en slecht geabsorbeerd ('Papp < ​​1.0="" ×="" 10–6="" cm/s)="" [3],="" en="" het="" duidde="" niet="" op="" efflux,="" wat="" suggereert="" dat="" passieve="" diffusie="" langs="" een="" concentratiegradiënt="" het="" belangrijkste="" transportmechanisme="" van="" pre="" is="" (figuur="" 5).="" bovendien="" zijn="" de="" transportkenmerken="" van="" pre="" consistent="" met="" die="" van="" ac,="" is="" en="" ec,="" de="" effectieve="" componenten="" die="" anti-oxidatieve="" activiteit="" vertonen="" in="" pre="" (fig.="" 4="" en="" tabel="" 4).="" dit="" resultaat="" werd="" verwacht="" en="" gaf="" aan="" dat="" het="" huidige="" bioassaysysteem="" geschikt="" en="" betrouwbaar="" is="" voor="" de="" evaluatie="" van="" de="" transportkenmerken="" van="" aig="" in="" pre="" in="" gedifferentieerde="">

In tegenstelling tot de canonieke Papp-waarde, die gewoonlijk wordt gebruikt om het transport van een enkele verbinding weer te geven, geeft de 'Papp-waarde verkregen uit de TR op basis van de concentratie-effectcurve mogelijk niet alleen de componenten weer die monolagen met een intacte structuur binnendringen, maar omvatten ook andere factoren die verband houden met de activiteit van het doelwit, zoals de metabolieten van de componenten, chemisch afgebroken producten en zelfs sommige cytokinen die worden uitgescheiden door Caco-2-cellen als reactie op stimulatie die de biologische activiteit van het doelwit kunnen beïnvloeden. Dus de hierboven genoemde multifactor, in plaats van alleen de getransporteerde intacte componenten, bepaalt de 'Papp-waarde. Daarom kan 'Papp binnen Vivo-situaties sterker correleren dan de canonieke Papp-waarde [26]. In deze studie hebben we de passief verspreide en slecht geabsorbeerde aard van PRE opgehelderd op basis van zijn 'Papp-waarde, en deze aard kan verband houden met de hoge dosering en lange klinische behandelingsperiode van CD [27]. Desalniettemin zullen deze bevindingen meer systematische begeleiding bieden voor clinici bij de toepassing van CV wanneer alleen de transportkenmerken van de meeste AIG bij CV, en niet alleen PhG's, zijn geïdentificeerd.

Het geselecteerde bioactiviteitsitem moet echter voldoende gevoelig zijn om te worden gedetecteerd in het medium van de ontvangstkamer, wat een uitdaging vormt voor het opzetten van een bioassaysysteem om de transportkenmerken van PE te evalueren. Bovendien moet de biologische activiteit ook afhankelijk zijn van zoveel mogelijk componenten. In onze studie was de totale anti-oxidatieve capaciteitstest geschikter dan verschillende andere methoden (S1 Fig.). Maar toch kan onze test de TR van PRE pas na 120 minuten detecteren.

Gezamenlijk heeft de huidige studie een nieuw bioassaysysteem opgezet om de intestinale permeabiliteit van PRE in gedifferentieerde Caco-2-cellen te evalueren. De verkregen resultaten toonden aan dat een slecht geabsorbeerde passieve diffusie langs een concentratiegradiënt zonder efflux het belangrijkste transportmechanisme van PRE is (Fig. 5), dat de farmacokinetische basis vormt voor de klinische toepassing van PhG's bij CD. Het gebruik van een nieuw bioassaysysteem om de TR te evalueren en daarmee de 'Papp-waarden te berekenen om de intestinale transporteigenschap van AIG in PE's te beoordelen, is duidelijk haalbaar. Deze benadering kan ook geschikt zijn voor andere PE, gegeven de juiste biologische activiteit

ondersteunende informatie

S1 Fig. Effecten van PRE op (A) superoxide-anion, (B) hydroxylradicaal, (C) lipideperoxidatieproduct en (D) DPPH-radicaal. De testprocedures werden uitgevoerd volgens eerdere rapporten [1, 2] zonder gebruik te maken van transportbuffer. De IC50 (50 procent remmingsconcentratie) en SC50 (50 procent opruimingsconcentratie) waarden werden berekend op basis van de standaard concentratie-responscurves. (DOCX)

Bijdragen van auteurs

De experimenten bedacht en ontworpen: YG XC YQ. De experimenten uitgevoerd: YG CZ FL LF RC YS. De gegevens geanalyseerd: CZ YG YQ. Bijgedragen reagentia/materialen/analysetools: RC. Schreef het papier: YG YQ

Afdeling Onderzoekscentrum voor Farmacologie en Toxicologie, Instituut voor de ontwikkeling van geneeskrachtige planten, Chinese Academie voor Medische Wetenschappen & Peking Union Medical College, Beijing, PR China,

Heilongjiang Universiteit voor Chinese Geneeskunde, Harbin, Heilongjiang, PR China