Heeft cistanche totaal glycoside effecten op de reuk?

Contact:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Het effect van totale glycosiden van cistanche op reukcellen van ratten en hun afscheiding van neurotrofe factoren

Li Chuangfeng, Guo Jinyu, Zhang Xu, Liu Yunnan

Ruggenmergletsel (SCI) is een ernstig letsel van de centralezenuwstelsel, goed voor {{0}},2 procent —0,5 procent van het totale trauma. Bij wervelfracturen wordt 16 procent — 40 procent gecompliceerd door dwarslaesie, wat vaak leidt tot ernstige invaliditeit, wat leidt tot moeilijkheden in het dagelijks leven die de kwaliteit van leven van patiënten aantasten en een grote belasting vormen voor het gezin en de samenleving.olfactorischeomhullende cellen (OEC's) zijn een speciaal type zenuwlijm. Plasmacellen kunnen migreren naar de hersenen metolfactorischzenuwaxonen en kunnen veel groeifactoren afscheiden, zoals NGF, GDNF, BDNF, NT-3, neuropeptide-Y en S-100. Door deze kenmerken vanolfactorischomhullende cellen worden OEC's beschouwd als een van de veelbelovende zaadcellen voor celtransplantatie om SCI te herstellen. Op dit moment is de behandeling van dwarslaesie op het gebied van revalidatiegeneeskunde voornamelijk gebaseerd op uitgebreide revalidatie. Om een ​​effectievere methode te vinden is het volgende onderzoek gedaan naar het effect van:cistanchetotaalglycosidenop OEC's:

Cistanche totaal glycoside voor olfactorische omhullende cellen

1 Materiaal en methoden

1.1 Experimentele materialen

Wistar-rat (geleverd door het Animal Center van de Universiteit van Binnen-Mongolië);cistanchetotaalglycosiden, DMEM/F12-medium, foetaal kalfsserum (FCS), poly-D-lysine, arabinoside (Ara-C), trypsine, D-Hanks-oplossing, konijnen-anti-p75NGFR (Santa Cruz), ELISA-kit (Promega), celincubator (Thermo-HEPA Class 100), omgekeerde fase-contrastmicroscoop (Olympus CKX41, Japan), ultraschone werkbank (Suzhou Antai Air Technology Co., Ltd.) Het bedrijf, SW-CJ-2FD), enzym labelanalysator (Wellscan MKH), flowcytometer, enz.

1.2 Onderzoeksmethoden

1.2.1 OECs-kweek, zuivering en identificatie: Wistar-ratten werden opgeofferd door onthoofding en gedurende 5 minuten in wijn geweekt. De voorste schedel werd geopend om deolfactorischlamp. De tweeolfactorischbollen werden volledig verwijderd onder een dissectiemicroscoop. Wassen in D-Hanks-oplossing; snij deolfactorischbol met een microchirurgische schaar, voeg 2 ml 0,25 procent pancreatine toe en incubeer gedurende 20 minuten bij 37 graden; voeg D MEM/F12-kweekmedium met 10 procent kalfsserum toe aan een centrifugebuis van 2 ml. De spijsvertering werd in het midden beëindigd; de buspipet aspireerde het onvolledig verteerde weefsel bij 800 rpm en centrifugeerde gedurende 5 minuten, gooide het supernatant weg; uiteindelijk het geconditioneerde medium gebruikt (20 procent FCS plus 20|i, mol/LForskolin plus 20|ig/mlBPE plus DMEM /F12) Maak er lx 107 ml eencellige suspensie van, ent het in een met polylysine gecoate celcultuurkolf, plaats het in een 37 graden, 5 procent CO2-incubator, en voeg vervolgens Arac toe. Zuivering werd uitgevoerd om 36 uur. Gebruik konijn anti-p75E en FITC-gelabelde geit anti-konijn IgG secundair antilichaam voor immunohistochemische celidentificatie en fluorescentiemicroscoop observatie.

1.2.2 Gebruik MTT en flowcytometrie om het effect te bepalen vancistanche totale glycosidenAanolfactorischomhullende cellen: inoculeer de gekweekte en gezuiverdeolfactorischcellen omhullen in een 96-putjesplaat bij 1X106, en toevoegencistanche totale glycosiden(actieconcentraties zijn Ijig/ml, 10 mg/ml, 100 mg/ml), meet de OD-waarde en meet de celstroomcytometrie na 24 uur actie. Stel stuurgroep in enCistanche totaal glycosidenverschillende concentratiegroepen: Groep A (controlegroep): als negatieve controle wordt serumhoudend kweekmedium gebruikt; Groep B (cistanche totale glycosidengroep met lage concentratie: llig/ml); Groep C (cistanche totale glycosiden gemiddelde concentratie Groep: L10jxg/MK); Groep D (cistanche totale glycosidenhoge concentratiegroep: 100|xg/mlo): 15 ratten in elke groep.

1.2.3 Bepaling van het gehalte aan neurotrofe factor in het supernatant door middel van ELISA: ent de gekweekte en gezuiverdeolfactorischcellen omhullen in een 6-well plate op 1x106, addcistanche totale glycosiden(dezelfde concentratie als hierboven) na 24 uur en 24 uur inwerken, en verzamel het supernatant afzonderlijk, opgeslagen op -80 lang. Het gehalte aan zenuwgroeifactoren in de vloeistof werd bepaald met de ELISA-methode.

1.3 Statistische analyse

De gegevens in deze studie worden behandeld als meetgegevens en de verkregen gegevens worden uitgedrukt als gemiddelde ± standaarddeviatie, en SPSS 11.0 statistische software wordt gebruikt voor statistische analyse. De verkregen gegevens worden geanalyseerd door variantieanalyse en P<0.05 indicates="" that="" there="" is="" a="" significant="">

2 Resultaten

2.1 Het effect vancistanchetotale glycosiden aanolfactorischomhullende cellen

2.1.1 Resultaten van de bepaling van de methyloxazolyltetrazolmethode (MT): Groep A: 0.617±0.149; Groep B: 0.589±0.147; Groep C: 0.761±0.138; Groep D: 0.732±0.234. Vergelijking tussenCistanche totaal glycosiden group (B) and Control group (A), P>0.05, het verschil was niet significant;Cistanche totaal glycosiden10 mg/ml, 100 mg/ml concentratiegroep (C, D) vergeleken met controlegroep (A) P<0.05, the="" difference="" is="">

2.1.2 Het resultaat van de flowcytometriebepaling is weergegeven in figuur 1. Vergeleken met de controlegroep is decistanche totale glycosidengroep was hoger dan de controlegroep en het percentage apoptotische cellen was lager dan de controlegroep.

2.2 Enzym-linked immunosorbent assay (ELISA) resultaten

De testresultaten toonden aan dat het gehalte aan van gliacellen afgeleide neurotrofe factor (GDNF): vóór dosering: 302,1±16,6 pg/ml, groep A: 340,5±13,2 pg/ml; groep B: 333,2 ± 23,6 pg/ml; Groep C: 355,2 ± 17,6 pg/ml; Groep D; 379,2 ± 15,3 pg/ml. Vergeleken met de pre-toediening was het GDNF-gehalte significant verhoogd; vergeleken met de controlegroep (A) was het GDNF-gehalte van deCistanche totaal glycosidenDe concentratiegroep (D) van 100 mg/ml was significant verhoogd.

3 Discussie

Moeilijkheden bij de regeneratie van axonen is een van de belangrijkste redenen waarom het moeilijk is om te herstellen na een dwarslaesie. OEC's spelen een rol bij de regeneratie van centrale neuron-axonen die moeilijk te vervangen zijn door andere typen cellen. In de afgelopen jaren is het onderzoek vanolfactorischomhullende cellen is een hotspot geworden.olfactorischeomhullende cellen zijn een speciaal type gliacellen met de kenmerken van Schwann-cellen en astrocyten. Ze zijn afkomstig uit deolfactorischbasaalmembraan en zijn wijd verspreid op het oppervlak van deolfactorischslijmvlies,olfactorischzenuw, enolfactorischlamp. Het heeft het vermogen om te delen en te regenereren voor het leven en kan deolfactorischzenuwaxonen om naar de hersenen te migreren. De axonen van deolfactorischzenuw kan om de 30-60 dagen door de verbinding tussen het perifere zenuwstelsel en het centrale zenuwstelsel gaan en opnieuw uitgroeien tot hetolfactorischschede en breng synaptische verbindingen tot stand4.olfactorischeomhullende cellen kunnen veel groeifactoren afscheiden, zoals NGF, BDNF, GDNF, NT-3, neuropeptide-Y en S-100. Studies hebben aangetoond dat zenuwgroeifactor (NGF) kan voorkomen dat spinale rode kernneuronen atrofiëren en het corticospinale kanaal kan versterken Ontkiemen en de regeneratie van de rode kern van de zenuwbaan van het ruggenmerg kan bevorderen; zowel de van de hersenen afgeleide neurotrofe factor (BDNF) als neurotrofine -3 (NT-3) kunnen de apoptose van de rode kern van het ruggenmerg bij volwassen ratten met axotomized letsel voorkomen en stervende neuronen redden en axonale regeneratie bevorderen P. In aanvulling,olfactorischomhullende cellen brengen ook andere factoren tot expressie op hun celmembranen, zoals zenuwceladhesiefactor (N-CAM), die betrokken zijn bij celadhesie en axongroei. Door deze kenmerken vanolfactorischomhullende cellen worden OEC's beschouwd als een van de veelbelovende zaadcellen voor celtransplantatie om SCI te herstellen.

De chemische componenten vanCistancheomvatten voornamelijk fenylethanoïde glycosiden, iridoïden, vluchtige componenten, lignanen, polysachariden en alkaloïden. De studie wees uit datCistancheen de chemische componenten ervan hebben neuroprotectieve effecten. Deng et al. bestudeerde het effect van tubulosa B op de apoptose van SH-SY5Y-neuronen geïnduceerd door tumornecrosefactor (TNF). De resultaten toonden aan dat na 100 ug/ De SH-SY5Y-neuronen na 36 uur TNF-behandeling door L typische apoptose-eigenschappen vertoonden, terwijl de behandeling van tubuline B gedurende 2 uur de door TNF geïnduceerde apoptose significant kon verminderen. Bovendien hebben onderzoeken ook aangetoond dat fenylethanoïde glycosiden de apoptose van cerebellaire granulecellen van ratten kunnen remmen door caspase-3 en caspase-8 te remmen, en tegen het C57-muiszwart veroorzaakt door methylfenyltetrahydropyridine (MPTP). De beschadiging van hoogwaardige dopaminerge neuronen heeft een beschermend effect. Niet alleen dat, maarCistanchekan ook verschillende schade verlichten, zoals ischemie-reperfusie van het zenuwstelsel. Het experiment met hersenischemieschade bij muizen laat zien dat het infarctbereik van 24 uur en 48 uur na ischemie in de cerebrale ischemie-reperfusiegroep 72,98 procent en 60,45 procent gemiddeld is. Daarentegen is decistanchetotale glycosiden grote, gemiddelde en lage dosisgroepen (250.0mg·kg/d; 125,0 mg·kg/d; 62,5 mg·kg/d) kunnen de hersenen van muizen maken na cerebrale ischemie-reperfusie 24 uur De omvang van het infarct was verminderd tot 25,94 procent, 25,81 procent en 31,13 procent, en de omvang van het herseninfarct werd teruggebracht tot 22,14 procent, 20,06 procent en 22,27 procent na 48 uur. Er was een significant verschil tussen de twee, wat een significant remmend effect op neuronale apoptose liet zien.

In deze studie zijn verschillende concentraties vancistanche totale glycosidenwerden toegepast op OEC's. De MTT-methode en flowcytometriemeting bevestigden dat 10 mg/ml 100 mg/mlcistanche totale glycosidenkan de verspreiding vanolfactorischomhullende cellen. De resultaten van flowcytometrie toonden aan dat:cistanche totale glycosidenkan de verspreiding vanolfactorischomhullende cellen Het bevordert voornamelijk de proliferatie van de G1-cyclus vanolfactorischzaadcellen en vermindert apoptotische cellen aanzienlijk. Daarom,Cistanche totaal glycosidenkan niet alleen de verspreiding vanolfactorischomhullende cellen, maar verhogen ook de celactiviteit en remmen hun apoptose. Enzym-linked immunosorbent assay bewijst dat:Cistanche totaal glycosidenkan de secretie van GDNF aanzienlijk bevorderen doorolfactorischomhullende cellen. De bovenstaande resultaten bieden een experimentele basis voor de klinische toepassing vanCistanche totaal glycosiden.

Referenties

[1] Qiu Weihong, Zhu Hongxiang, Zhang Baixiang, et al. Factoren die de kwaliteit van leven van patiënten met dwarslaesie tijdens revalidatie beïnvloeden [J]. Chinees tijdschrift voor revalidatiegeneeskunde, 2009, 4(24): 313.

[2] Richter MW, Fletcher PA, Liu J, et al. Lamina propria enolfactorischstieromhullende cellen vertonen differentiële integratie en migratie en bevorderen het ontspruiten van eerbiedige axonen in het beschadigde ruggenmerg [J]. J Neurosci, 2005.25(46):10700 -10711.

[3] Fairless R, Bamet SC. olfactorische omhullende cellen: hun rol bij het herstel van het centrale zenuwstelsel [J.Int J Biochem Cell Biol. 2005,37(4):693-699.

[4] Chen X, Fang H. Schwob JE. Multipotentie van gezuiverd. getransplanteerde glucose basale cellen inolfactorischepitheel [J]. J Comp Neurol, 2004, 46914): 457-474.

[5] La P, Jones LL. Tuszynski MH. BDNF tot expressie brengende marostromale cel; ondersteuning van uitgebreide axonale groei op plaatsen d ruggenmergletsel [J]. Exp Neurol, 2005, 191 (2): 344-360.

[6] Deng M, Zhao JY, Ju XD, et al. Beschermend effect van tubulosa B op door TNF geïnduceerde apoptose in neuronale cellen [J]. Acta Pharmacol Sin,2004,25(102 1276

[7] TianXue-Fei, PuXiao-Ping.FenylethaanglycosidenvanCistanchessalsa remt apoptose geïnduceerd door 1-methyl-4-fenylpyridinium-ion in neuronen[J]. J Ethnopharmacol, 2005,97 (1):59.

[8] Geng X, Song L.Pu X, et al. Neuroprotectief effect