De studie van Cistanche Deserticola-extract dat M2-achtige polarisatie van macrofagen reguleert om celmigratie en kolonievorming bij borstkanker te verminderen

Samenvatting: Doel Het onderzoeken van het regulerende mechanisme van ethanolextract van Cistanche deserticola epimedium brevican op macrofaagpolarisatie in vitro en het effect ervan op M{{0}}-achtige macrofagen die 4T1-celmigratie en kolonievorming bevorderen. Methoden De CCK-8-methode werd gebruikt om het effect te detecteren van verschillende concentraties ethanolextract van Cistanche deserticola deserticola op de activiteit van uit beenmerg afgeleide macrofagen (BMDM), en om de veilige concentratie van ethanolextract van Cistanche deserticola deserticola deserticola te bepalen; Western-blotting en qRT-PCR werden gebruikt om het effect te detecteren van ethanolextract van Cistanche deserticola deserticola op de expressie van arginase-1 (Arg-1) en CD163, de markers van M2-achtige macrofagen; QRT PCR werd gebruikt om het effect te detecteren van alcoholextract van Cistanche deserticola deserticola op inflammatoire zone 1 (Fizz1) en peroxisoom proliferator geactiveerde receptor (PPAR) van M2 Tumor-geassocieerde macrofaag (TAM's) gerelateerde genen (peroxisoom-proliferator-geactiveerde ontvanger, PPAR ）, De effecten van chitinase 3-zoals 3 (Ym1), chemokine 24 (CCL24), macrofaag Galactose type C-type lectine 2 (MGL2) en interferon regulerende factor 4 (IRF4) mRNA-expressie; Het effect van ethanolextract van Cistanche deserticola deserticola op M2 TAM's die 4T1-celmigratie bevorderen, werd gedetecteerd door middel van een krastest; het effect van ethanolextract van Cistanche deserticola deserticola op de groei van 4T1-cellen gestimuleerd door M2 TAM's werd gedetecteerd door kolonie-experiment. De resultaten toonden aan dat het ethanol-extract van Epimedium had geen toxische effecten of bijwerkingen op BMDM-cellen bij een concentratie van 0,015 625 tot 2,000 000 mg/ml. Het ethanolextract van Cistanche deserticola remt de M2 ​​TAM-gerelateerde genen Arg{{ 36}}, CD163, Fizz1, PPAR , De uitdrukking van CCL24, Ym1, MGL2 en IRF4 (P<0.05, 0.01, 0.001) inhibited the migration and colony formation ability of M2-TAMs in 4T1 cells (P<0.05, 0.001). Conclusion The ethanol extract of Cistanche deserticola can weaken the promotion of M2-like macrophages on 4T1 Cell migration and colony formation, and its mechanism may be related to the inhibition of M2-type polarization of macrophages.

Kernwoorden: Cistanche deserticola; Macrofagen; M2 polarisatie; Borstkanker; Migratie; Kolonievorming; Benzoëzuur; Coniferylaldehyde; Emodine; Vanillinezuur

Effecten van Cistanche-Antitumor

Borstkanker is de belangrijkste kwaadaardige tumor die de gezondheid van vrouwen in gevaar brengt, en ook de op een na belangrijkste doodsoorzaak door kanker in de wereld [1-2]. In het late stadium van borstkanker zijn er long- en levermetastasen. Wanneer orgaanmetastasen optreden, zal de overlevingskans en kwaliteit van leven van patiënten sterk worden verminderd [3]. De eerstelijnsbehandeling van borstkanker berust voornamelijk op de chemotherapie van anthracycline, paclitaxel en andere cytotoxische geneesmiddelen, maar tijdens de behandeling treedt vaak resistentie tegen geneesmiddelen op. Daarom is het erg belangrijk om het pathologische mechanisme van borstkanker te onderzoeken en effectieve behandelmethoden te vinden. Macrofagen zijn cruciaal voor het ontstaan ​​en de ontwikkeling van verschillende tumoren [4-5], en biomarkers van macrofagen kunnen dienen als prognostische indicatoren. De hoge mate van infiltratie van macrofagen houdt verband met de slechte prognose van borstkanker. Tumor-geassocieerde macrofagen (TAM's) zijn het meest typische type tumor-infiltrerende immuuncellen. Ze spelen een belangrijke rol van vroege kankervorming van borstkanker tot progressie, vooral metastase [6]. TAM's zijn betrokken bij metastase, angiogenese, matrixremodellering, invasie en immunosuppressie van borstkanker. Traditionele Chinese geneeskunde speelt een belangrijke rol in de hele behandeling van borstkanker. Traditionele Chinese geneeskunde heeft de kenmerken van meerdere componenten, trajecten en doelen, die de recidief- en uitzaaiingspercentages van tumorpatiënten kunnen verminderen, hun kwaliteit van leven kunnen verbeteren en hun overlevingstijd kunnen verlengen. Cistanche deserticola deserticornu Maxim. Het is een Berberidaceae plant van Ranunculales. Het is zoet en zoet van smaak, warm van aard en volgt de twee kanalen van lever en nier. Het heeft de effecten van het versterken van spieren en botten, het versterken van nier-yang, het beschermen van het cardiovasculaire systeem [7], het bevorderen van botvorming [8], het reguleren van het immuunsysteem [9] en het remmen van kanker [10]. Onderzoek toont aan dat het alcoholextract van Cistanche deserticola de proliferatie van borstkankercellen kan remmen [11], maar het onderzoek naar hoe het alcoholextract van Epimedium de tumor-immuun micro-omgeving van borstkanker beïnvloedt, is niet gerapporteerd. Daarom is deze studie bedoeld om het effect te onderzoeken van alcoholextract van Cistanche deserticola deserticola op M2--achtige macrofagen en de regulatie ervan op 4T1 borstkanker Celmigratie en kolonievorming, om experimentele basis en theoretische begeleiding te bieden voor de follow-up klinische toepassing van Epimedium.

Cistanche poeder gezondheidsvoordelen-Antitumor

Klik hier om de producten van Cistanche te bekijken

【Vraag om meer】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

1. Materiaal

1.1 Dier en cel

SPF Grade Female C57BL/6 Mouse, 8 weken oud, gekocht van Sibeifu (Beijing) Biotechnology Co., Ltd., met dierencertificaatnummer 110324210105240115. De muizen werden grootgebracht in het Animal Experimental Centre van het Fifth Medical Center van het General Hospital of het Volksbevrijdingsleger. Gedurende de hele experimentele periode kregen de muizen gratis eten en drinken en kregen ze een cyclus van 12-uur licht/12-uur donker. Dierproeven werden uitgevoerd volgens de richtlijnen voor de verzorging en het gebruik van proefdieren en werden goedgekeurd door het Vijfde Medisch Centrum van het Algemeen Ziekenhuis van het Volksbevrijdingsleger. Het ethische goedkeuringsnummer voor dierproeven is IACUC-2021-0007. 4T1-cellen werden gekocht van Shanghai Fuheng Biotechnology Co., Ltd.

Experimenteel onderzoek naar Cistanche deserticola

1.2 Het medicijn

Cistanche deserticola werd door onderzoeker Xiao Xiaohe geïdentificeerd als Epimedium E., een plant van Berberidaceae Droge bladeren van Brevicornum Maxim. Neem de bladeren van Cistanche deserticola deserticola, plet ze en passeer ze door zeef nr. 4, weeg ze nauwkeurig, voeg verdunde ethanol toe, voer de ultrasone behandeling uit (vermogen 400 W, frequentie 50 kHz) gedurende 1 uur, koel ze af, weeg ze opnieuw, gebruik verdunde ethanol om het verloren gewicht aan te vullen, schud ze, filter ze, neem het continue filtraat, vries en droog ze om Cistanche deserticola deserticola-extract te verkrijgen. 1.3 Geneesmiddelen en reagentia arginase-1 (Arg-1) antilichaam (partijnummer: 93668) werd gekocht van CST Company uit de Verenigde Staten; - Het actine-antilichaam (batchnummer 20536 1-AP) is gekocht bij Protentech Company; Het HRP-gelabelde geit-anti-konijn IgG secundaire antilichaam (partijnummer J111-035-003) werd gekocht bij Jackson Immuno Research; Trizol-reagens (partijnummer BSC51M1) werd gekocht bij het bedrijf Biolux; CCK-8-reagens (batchnummer KTA1020-1000T) is gekocht bij Abbkine Company; Interleukine 4 (IL-4) factor (batchnummer 96-214-14-20) is gekocht bij Peprotech.

1.4 instrument

QB-9002 Seismisch plaatinstrument (Haimen Qilin Bell Company); Epoch enzym-gekoppelde immunosorbent-assay en P100 plus nucleïnezuurconcentratieanalysator (Bio Tek Company, VS); Quantstudio 6 Flex fluorescentie kwantitatief PCR-instrument (Thermo Fisher Scientific, VS); MINI6K palmcentrifuge (Hangzhou Aosheng Company); Vortex-Genie 2 vibrator (Scientific Industries, VS).

2 methoden

2.1 Componentanalyse van alcoholextract van Cistanche deserticola

2.1.1 Voorbeeldbereiding Voeg methanol toe aan het alcoholextract van Cistanche deserticola om een ​​suspensie van 5 mg/ml te bereiden, extraheer deze gedurende 40 min ultrageluid, neem 1 ml en centrifugeer deze gedurende 10 min bij 12 000 r/min , neem het supernatant na centrifugeren, passeer 0,22 μM filtermembraan, monster in UPLC-MS/MS. De componenten van Cistanche deserticola werden verzameld via de farmacologiedatabase en het analyseplatform van de traditionele Chinese geneeskunde (TCMSP). MS-resultaten werden geanalyseerd met behulp van het Progression QI-gegevensplatform (gebaseerd op NPATLAS- en GNPS-databases) en de resultaten werden vergeleken met de Cistanche deserticola-componentretrieval voor niet-gerichte componentanalyse.

2.1.2 Chromatografische omstandigheden:

Acquisitie UPLC BEH C18 chromatografische kolom (100 mm × 2,1 mm, 1,7 µm), de mobiele fase is dubbel gedestilleerd water (A) - acetonitril (B), gradiëntelutie: 0-3 minuten, 5 procent B; 3 tot 35 minuten, 5 procent tot 95 procent B; 35-42 minuten, 95 procent -5 procent B. De volumestroom is 0,3 ml/min; het injectievolume is 5 μL; De temperatuur van de kolomtemperatuurbox is 40 graden. 2.1.3 Massaspectrometrie-omstandigheden: electrospray-ionenbron (ESI) wordt gebruikt voor detectie in positieve ionenmodus en de capillaire temperatuur is 275 graden; Volumestroom mantelgas 20 Arb; Volumestroom hulpgas 5 Arb; De ionenbronspanning is 5 kV. 2.2 Celkweek Van beenmerg afgeleide macrofagen (BMDM) werden geïsoleerd uit het dijbeenmerg van 8-weken oude vrouwelijke C57BL/6-muizen. Ze werden gekweekt in DMEM-medium dat 10 procent foetaal runderserum, 1 procent penicilline/streptomycine en muizenmacrofaag-koloniestimulerende factor M-CSF (50 ng/ml) bevatte, en in een incubator geplaatst bij 37 graden en 5 procent CO2 gedurende 6 dagen.

Digesteer cellen met 0.25 procent trypsine EDTA (2:1) met een snelheid van 1,2 x Inoculeer 106/mL dichtheid in een putjesplaat gedurende de nacht. Op de tweede dag, na toevoeging van het alcoholextract van Cistanche deserticola gedurende 1 uur, werden de cellen gestimuleerd met IL-4 (20 ng/mL) gedurende 24 uur.

2.3 CCK{0}-methode werd gebruikt om de cytotoxiciteit van alcoholextract van Cistanche deserticola deserticola voor BMDM-cellen te detecteren × Inoculeer 106/ml dichtheid in platen met 96 putjes, plaats een nacht in de incubator, behandel cellen met verschillende massaconcentraties (0, 0.015 625, {{10}}.031 25, 0.{{ 9}}, 0,125, 0,25, 0,5, 1, 2, 4 mg/ml) alcoholextract van Cistanche deserticola gedurende 24 uur. Gooi het kweekmedium weg, voeg CCK-8-kweekmedium (1:10)-oplossing toe, incubeer in de incubator gedurende 1 uur, meet de absorptie (A) bij 450 nm met een microplaatlezer en detecteer de toxiciteit van alcoholextract van Cistanche deserticola deserticola naar cellen.

2.4Western-blotting werd gebruikt om de expressie van Arg{{0}}-eiwit in BMDM-cellen te detecteren. De controlegroep, modelgroep en alcoholextractgroep van Cistanche deserticola met verschillende massaconcentraties (0.062 5, 0.125, 0,25 mg/ml) werden opgesteld. Het medicijn werd toegediend volgens de methode onder "2.2". Cellen werden verzameld en RIPA-lysaat werd toegevoegd om eiwit te extraheren. Het eiwitmonster werd onderworpen aan 10 procent natriumdodecylsulfaat-polyacrylamidegelelektroforese, overgebracht naar PVDF-membraan, afgesloten in TBST dat 5 procent magere melk bevatte gedurende 1 uur, toegevoegd met primair antilichaam en overnacht geïncubeerd bij 4 graden; Incubeer na het wassen met TBST met secundair antilichaam en ontwikkel met behulp van verbeterd chemiluminescentiedetectiereagens.

2.5 qRT PCR werd gebruikt om BMDM cel chemotactische factor 24 (CCL24), inflammatoire zone 1 (Fizz1), chitinase 3-achtige 3 (Ym1), macrofaag galactose type C-type lectine 2 (MGL2) en peroxisoom proliferator te detecteren. geactiveerde receptor (peroxisoom-proliferator-geactiveerde ontvanger, PPAR）, Interferon-regulerende factor 4 (IRF4), Arg-1 en CD163-mRNA-expressie werden ingesteld in de controlegroep, modelgroep en verschillende massaconcentraties ({{17} }.062 5, 0.125, 0.25 mg/mL) alcoholextract van Cistanche deserticola volgens "2.2"

2.6Bereiding van geconditioneerd medium Referentiemethode [12]: BMDM werd gekweekt volgens de methode onder "2.2". Nadat de celzaaiplaat was bevestigd, werd een serumvrij medium met Cistanche deserticola-alcoholextract (0.25 mg/ml) toegevoegd, en IL-4 (20 ng/ml ) werd 1 uur later toegevoegd. Verzamel na 24 uur het supernatant als het geconditioneerde medium. Het geconditioneerde medium werd gecentrifugeerd met 2000 tpm om de fragmenten neer te slaan, afgezogen en bewaard bij -80 graden voor celmigratie-experimenten. BMDM werd gekweekt volgens de methode onder "2.2", en DMEM-medium met alcoholextract van Cistanche deserticola (0,25 mg/ml) werd toegevoegd nadat de celzaaiplaat aan de wand was bevestigd, en IL-4 (20 ng /ml) werd een uur later toegevoegd. Verzamel na 24 uur het supernatant als het geconditioneerde medium. Centrifugeer het geconditioneerde medium 2000 om fragmenten neer te slaan, zuig het supernatant op en bewaar het bij -80 graden voor celkolonie-experimenten.2.7 Celmigratie-experiment Plaats de {{0}}plug-in voor wondgenezing in een 12-gatenplaat en de 4T1-cellen worden behandeld met 3,6 × 105/ml vaccinatie . Nadat de cellen 's nachts aan de muur kleven, verwijdert u de plug-in en wast u de zwevende dode cellen weg met PBS. Voeg serumvrij medium toe dat 50 procent geconditioneerd medium bevat. Incubeer in een incubator gedurende 24 uur. Maak op 0 en 24 uur foto's met een omgekeerde microscoop, analyseer de foto's met afbeelding J en bereken de celmigratiesnelheid. Celmigratiesnelheid=(0 uur wondgebied -24 uur wondgebied)/0 uur wondgebied

2.8Celkolonie-experiment 1000 4T1-cellen werden geïnoculeerd in elk putje van platen met 6 putjes en gedurende 8 dagen geïncubeerd met medium dat voor 50 procent geconditioneerd medium bevatte. Fixeer met 2 procent paraformaldehyde, verf met 1 procent kristalviolet, maak foto's en analyseer de foto's met afbeelding J.

2.9Statistische analyse werd uitgevoerd met behulp van GraphPad Prism 8-software, met meetgegevens uitgedrukt als xs ±, en vergelijkingen tussen groepen met behulp van one-way ANOVA.

3. Resultaten

3.1 De samenstellingsanalyse van het alcoholextract van Cistanche deserticola deserticola wordt weergegeven in figuur 1 en tabel 2. Het alcoholextract van Cistanche deserticola deserticola bevat benzoëzuur, coniferylaldehyde, emodin, vanillinezuur, hyaline en lepirudine A.

Tabel 1 Primersequenties

Figuur 1 Analyse van alcoholextracten van Cistanche deserticola deserticola

Tabel 2 Componentanalyse van alcoholextract van Cistanche deserticola deserticola

3.2Cytotoxiciteit van alcoholextract van Cistanche deserticola op BMDM De resultaten toonden aan dat 0.015 625 - 2 mg/ml alcoholextract van Cistanche deserticola geen toxisch effect had op BMDM-cellen na behandeling van BMDM-cellen met verschillende concentraties alcoholextract van Cistanche deserticola gedurende 24 uur (Figuur 2).

Afb. 2 Cytotoxiciteit van alcoholextract van Cistanche deserticola deserticola voor BMDM (xs ±, n=3)

3.3 Ethanol-extract van Cistanche deserticola remt M2-polarisatie van macrofagen in vitro. In BMDM M0 macrofagen zijn de markers Arg-1 en CD163 van M2-achtige macrofagen laag tot expressie gebracht, en de expressie is aanzienlijk verhoogd na inductie door IL-4, wat aangeeft dat BMDM met succes polariseert in M2-achtige macrofagen. Western blotting en qRT PCR-technieken werden gebruikt om te verifiëren dat het alcoholextract van Cistanche deserticola de expressie van Arg-1 en CD163 geïnduceerd door IL-4 op een dosisafhankelijke manier kan moduleren (Afbeelding 3), wat aangeeft dat het alcoholextract van Cistanche deserticola de M2-achtige polarisatie van macrofagen direct kan remmen. Om het effect van alcoholextract van Cistanche deserticola deserticola op M2-polarisatie van macrofagen verder te onderzoeken, werd qRT-PCR gebruikt om de M2-achtige macrofaaggerelateerde genen Fizz1 en PPAR te bestuderen. De transcriptieniveaus van Ym1, CCL24, MGL2 en IRF4 worden weergegeven in figuur 4. Vergeleken met de modelgroep, de mRNA-expressieniveaus van Fizz1, Ym1, CCL24 en IRF4 in het alcoholextract van Cistanche deserticola (0.062 5, 0.125, { {29}}.25 mg/ml) groep nam significant af (P<0.05, 0.01, 0.001), and the PPAR in the alcohol extract of Cistanche deserticola (0.125, 0.25 mg/mL) group γ The mRNA expression level decreased significantly (P<0.01, 0.001), and the MGL2 mRNA expression level in the alcohol extract of Cistanche deserticola deserticola (0.25 mg/mL) group decreased significantly (P<0.001).

3.4 Het ethanolextract van Cistanche deserticola verzwakt de promotie van M2-achtige macrofagen bij 4T1-celmigratie. De krastest werd gebruikt om het effect van het supernatant van Cistanche deserticola-ethanolextract op het migratievermogen van borstkankercellen waar te nemen. BMDM werd gedurende 24 uur geïncubeerd in een serumvrij medium dat IL-4 en alcoholextract van Cistanche deserticola deserticola bevatte, en het supernatant werd verzameld als een geconditioneerd medium. 4T1 werd gekweekt in serumvrij medium met 50 procent geconditioneerd medium, zoals getoond in figuur 5, het geconditioneerde medium verzameld door BMDM behandeld met alleen IL-4 bevorderde significant de migratie van 4T1-cellen (P<0.05), while the conditioned medium of BMDM treated with alcohol extract of Cistanche deserticola significantly inhibited the migration of 4T1 cells (P<0.05). 3.5 Cistanche deserticola alcohol extract weakens the promotion of M2-like macrophages on 4T1 cell colony formation Use colony formation experiment to evaluate the effect of Cistanche deserticola alcohol extract on M2-like macrophages promoting 4T1 cell colony formation. As shown in Figure 6, the conditioned medium treated with IL-4 significantly promoted the colony formation of 4T1 cells (P<0.05), while the conditioned medium treated with alcohol extract of Cistanche deserticola significantly inhibited the colony formation of cells (P<0.001)

4. Discussie

Voordelen van cistanche tubulosa-Antitumor

Op dit moment is borstkanker nog steeds een wereldwijd probleem voor de volksgezondheid. De incidentie van borstkanker neemt jaar na jaar en jong toe, wat de gezondheid van vrouwen ernstig bedreigt [13]. De traditionele Chinese geneeskunde gelooft dat in de vroege stadia van tumoren, als gevolg van het onvermogen van het lichaam om qi te verdrijven als gevolg van yang-tekort, yin qi onvoldoende is en geen normale sperma-ophoping kan vormen. Abnormale accumulatie leidt echter tot pathologische producten zoals slijmtroebelheid en bloedstasis, wat leidt tot de transformatie van toxines in tumoren [14]. Cistanche deserticola deserticola, als een essentieel medicijn voor het versterken van yang, heeft de effecten van het versterken van vitale energie en nier-yang en kan de immuniteit reguleren. Het is een veelgebruikte niertonificerende Chinese geneeskunde in de klinische praktijk. Nu wordt het vaak gebruikt om borstkanker te behandelen en wordt het vaak gebruikt als een hoogfrequent samengesteld geneesmiddel. Een van de kenmerken van kanker is immuundisfunctie. De immuuncellen die tegen tumoren zouden moeten vechten, zijn met name seksuele remming door de omliggende weefsels en de micro-omgeving van de tumor, wat leidt tot ongecontroleerde groei en verspreiding van tumoren [15]. Meer en meer bewijs toont aan dat wanneer het voorkomt in de micro-omgeving van de tumor, aangeboren immuuncellen (macrofagen, neutrofielen, dendritische cellen, aangeboren lymfoïde cellen, van beenmerg afgeleide seksuele remmingscellen en NK-cellen) en adaptieve immuuncellen (T-cellen en B-cellen ) bijdragen aan tumorprogressie [16]. Macrofagen zijn onmisbare mediatoren van weefselhomeostase en hun polarisatie naar alternatief geactiveerde macrofagen (M2-type) kan de proliferatie, angiogenese en metastase van kankercellen bevorderen. Daarom is het reguleren van TAM's en het handhaven van hun homeostase een focus geworden van tumorbehandeling [17]. TAM's zijn betrokken bij metastase, angiogenese, matrixremodellering, invasie en immunosuppressie van borstkanker. TAM's worden voornamelijk verdeeld in twee verschillende fenotypes, namelijk klassiek geactiveerde M1-achtige macrofagen en alternatieve geactiveerde M2-achtige macrofagen [18]. Bij goedaardige of niet-functionele tumoren zijn de meeste TAM's klassiek geactiveerde M1-achtige macrofagen, die interferon-, IFN- of lipopolysaccharide (LPS)-activering zijn, waardoor TAM's worden gestimuleerd om pro-inflammatoire factoren en fagocytose van tumorcellen te produceren. M2-achtige macrofagen kunnen worden geactiveerd door Th2-cytokines zoals IL-4 om een ​​groot aantal ontstekingsremmende factoren te produceren, die direct de ontwikkeling van borstkanker bevorderen [19]. Daarom is het omkeren of remmen van de polarisatie van M2-achtige macrofagen de strategie van immunotherapie voor borstkanker. Arg-1 is een marker van M2-achtige macrofagen en de overexpressie ervan wordt in verband gebracht met een slechte prognose bij kankerpatiënten [20].

Chinees kruid cistanche-Antitumor

CD163 is een specifieke marker van M2-achtige macrofagen [21], die wordt geassocieerd met tumormetastase. CD163 plus TAM induceert epitheel-mesenchymale overgang (EMT) en bevordert migratie van kankercellen [22]. De resultaten van dit onderzoek geven aan dat het extract van Cistanche deserticola deserticola tot op zekere hoogte een rol speelt bij het reguleren van de immuniteit door de expressie van Arg-1 en CD163, de oppervlaktemarkers van M2-achtige macrofagen, te remmen. en het remmen van M2-type polarisatie van macrofagen. PPAR Het is een metabole sensor die de homeostase van lipiden reguleert door de activering van verschillende vetzuren en vetzuurderivaten (zoals palmitinezuur) [23]. PPAR Gerelateerd aan M2-polarisatie van macrofagen, PPAR is de belangrijkste regulator van M2-polarisatie in macrofagen geworden [24], van PPAR-liganden is aangetoond dat ze sterke remmende effecten hebben op tumorgroei in vivo [25]. Fizz1 en Ym1 zijn beide M2-achtige macrofaagmarkergenen, en Fizz1 en Ym1 zijn betrokken bij fibrose tijdens weefselherstel [26]. M2-achtige macrofagen produceren in vitro een grote hoeveelheid CCL24 [27], en de verhoogde expressie van CCL24 kan tumorproliferatie, migratie en invasie bevorderen [28]. IRF4 is een lid van de IRF-familie. Het neemt deel aan het M2-polarisatieproces van macrofagen en werkt als een negatieve regulator van Toll-like receptorsignalen door te combineren met het MyD88-adaptermolecuul [29]. MGL2 is een lid van de Galactose type C type Lectine-familie van macrofagen en wordt ook tot expressie gebracht in macrofagen die worden gestimuleerd onder alternatieve activeringsomstandigheden [30]. De resultaten van deze studie geven aan dat het extract van Cistanche deserticola deserticola het M2-achtige macrofaaggerelateerde gen PPAR remt. De expressie van Fizz1, Ym1, CCL24, IRF4 en MGL2 remt M2-type polarisatie van macrofagen, wat aangeeft dat Epimedium kan dienen als een effectieve remmer van M2 zoals macrofagen. Steeds meer bewijs suggereert dat M2-achtige macrofagen de uitzaaiing en groei van kanker kunnen bevorderen [31]. Geconditioneerde media van M2-achtige macrofagen kunnen de micro-omgeving van de tumor simuleren en tumormigratie en -groei induceren, wat vergelijkbaar is met macrofagen geïsoleerd uit kwaadaardige tumoren [12]. IL-4 kan macrofaagpolarisatie naar het M2-type bevorderen en tumorproliferatie en angiogenese bevorderen [18]. Deze studie toonde de correlatie aan tussen macrofaagpolarisatie en het antitumoreffect van Cistanche deserticola deserticola. Geconditioneerde media van IL-4-geactiveerde macrofagen bevorderden de migratie en groei van 4T1-cellen, en keerden na co-interventie met Cistanche deserticola dit door M2-geactiveerde tumorbevorderende effect om, wat aangeeft dat IL{{55} }geactiveerde M2-polarisatie werd geëlimineerd door Cistanche deserticola.

Deze studie toonde de correlatie aan tussen macrofaagpolarisatie en het antitumoreffect van Cistanche deserticola deserticola. Geconditioneerde media van IL-4-geactiveerde macrofagen bevorderden de migratie en groei van 4T1-cellen, en keerden na co-interventie met Cistanche deserticola dit door M2-geactiveerde tumorbevorderende effect om, wat aangeeft dat IL{{7} }geactiveerde M2-polarisatie werd geëlimineerd door Epimedium. Uit deze studie bleek dat Cistanche deserticola-extract de celmigratie en kolonievorming van borstkanker remt door de polarisatie van macrofagen in vitro te reguleren, wat aangeeft dat de behandeling van borstkanker door Cistanche deserticola mogelijk verband houdt met de regulatie van de micro-omgeving van de tumor, en Epimedium kan fungeren als een regulator van de micro-omgeving van tumoren op de plaats van metastase door macrofagen te beïnvloeden, wat nieuwe inzichten in het mechanisme verschaft voor de antitumorfunctie van Cistanche deserticola. Het onthult het nieuwe potentiële mechanisme van Cistanche deserticola voor de behandeling van kanker, wat kan helpen om de incidentie van kanker en aan kanker gerelateerde sterfte. In de toekomst zal het onderzoeksteam het effect van Cistanche deserticola op de groei en metastase van borstkanker verder onderzoeken na remming van de M2-polarisatie van macrofagen in vivo, om het antitumormechanisme van Cistanche deserticola verder uit te leggen en de basis te leggen voor klinische toepassing. van Cistanche deserticola bij de behandeling van tumorziekten.

Referenties

Referenties

[1] GBD 2019 Kankerrisicofactoren-medewerkers. De wereldwijde last van kanker die kan worden toegeschreven aan risicofactoren, 2010-19: een systematische analyse voor de Global Burden of Disease Study 2019 [J]. Lancet, 2022, 400(10352): 563-591.

[2] Yin L, Duan JJ, Bian XW, et al. Triple-negatieve moleculaire subtypering van borstkanker en behandelvoortgang [J]. Borstkankeronderzoek, 2020, 22(1): 61.

[3] Medeiros B, Allan A L. Moleculaire mechanismen van uitzaaiing van borstkanker naar de long: klinische en experimentele perspectieven [J]. Int J Mol Sci, 2019, 20(9): 2272.

[4] Pathria P, Louis TL, Varner J A. Richten op tumor-geassocieerde macrofagen bij kanker [J]. Trends Immunol, 2019, 40(4): 310-327.

[5] Shen MJ, Chen YB, Xu LJ, et al. Een verhoogde infiltratie van macrofagen in radioresistente longkankercellen draagt ​​bij aan de ontwikkeling van de extra resistentie van tumorcellen tegen de cytotoxische effecten van NK-cellen [J]. Int J Oncol, 2018, 53(1): 317-328.

[6] Tariq M, Zhang JQ, Liang GK, et al. Polarisatie van macrofagen: strategieën tegen kanker om zich te richten op tumor-geassocieerde macrofagen bij borstkanker [J]. J Cell Biochem, 2017, 118(9): 2484-2501.

[7] Ma Li-effecten van Cistanche deserticola-glycoside op stromale cel-afgeleide factor-1 (SDF-1) en zijn receptor CXCR-4 bij ratten met een acuut infarct van de middenhersenslagader [D] Nanjing : Nanjing Universiteit voor Chinese Geneeskunde, 2014

[8] Hao Fuliang Het effect en mechanisme van Cistanche deserticola-glycoside op het herstel en de genezing van defecten aan de schedel van konijnen [D] Shijiazhuang: Hebei Medical University, 2013

[9] He J, Zang SL, Liu N, et al. Epimedium-polysacchariden verzwakken hematotoxiciteit door oxidatieve stress te verminderen en de immuunfunctie te verbeteren in muizenmodel van benzeen-geïnduceerd beenmergfalen [J]. Biomed Pharmacother, 2020, 125: 109908.

[10] Hua Ciyi, Shi Youyang, Xie Ying, et al Onderzoeksvoortgang naar het mechanisme van Cistanche deserticola Actief bestanddeel bij de behandeling van borstkanker [J] Chinese kruidengeneeskunde, 2022, 53 (20): 6593-6600

[11]Chen Xiaolei, Tang Lijian, Li Qinglin Studie over de anti-proliferatie van borstkankercellen door extracten van Cistanche deserticola en frazil in vitro [J] China Pharmacy, 2007, 18 (15): 1124-1127

[12] Xu F, Cui WQ, Wei Y, et al. Astragaloside IV remt de progressie en metastase van longkanker door macrofaagpolarisatie te moduleren via AMPK-signalering [J]. J Exp Clin Cancer Res, 2018, 37(1): 207.

[13] Britt KL, Cuzick J, Phillips K A. Belangrijkste stappen voor effectieve preventie van borstkanker [J]. Nat Rev Kanker, 2020, 20(8): 417-436.

[14] Hao Feifei, Tian Sisheng Verkenning van de "Yang dominerende Yin-volging" bij kwaadaardige tumormetastase op basis van de theorie van vergassing [J] Shi Zhen Guoyi Guoyao, 2021, 32 (1): 164-166

[15] Denk D, Petrocelli V, Conche C, et al. Uitbreiding van T-geheugenstamcellen met superieure antitumorimmuniteit door urolithine A-geïnduceerde mitofagie [J]. Immuniteit, 2022, 55(11): 2059-2073.

[16] Hinshaw DC, Shevde L A. De micro-omgeving van de tumor moduleert van nature de progressie van kanker [J]. Kankeronderzoek, 2019, 79(18): 4557-4566.

[17] DeNardo DG, Ruffell B. Macrofagen als regulatoren van tumorimmuniteit en immunotherapie [J]. Nat Rev Immunol, 2019, 19(6): 369-382.

[18] Dong R, Gong YL, Meng W, et al. De betrokkenheid van remming van M2-macrofaagpolarisatie bij fenretinide-gemedieerde chemopreventieve effecten op darmkanker [J]. Kreeft Lett, 2017, 388: 43-53. [19] Jiménez-Garcia L, Herránz S, Luque A, et al. De cruciale rol van p38 MAPK in IL-4-induceerde alternatieve activatie van peritoneale macrofagen [J]. Eur J Immunol, 2015, 45(1): 273-286.

[20] Ma ZG, Lian J, Yang M, et al. Overexpressie van arginase-1 is een indicator van een slechte prognose bij patiënten met colorectale kanker [J]. Pathol Res Praktijk, 2019, 215(6): 152383.

[21] Tao SF, Chen Q, Lin C, et al. Linc00514 bevordert de metastase van borstkanker en M2-polarisatie van tumor-geassocieerde macrofagen via de Jagged{4}}gemedieerde Notch-signaleringsroute [J]. J Exp Clin Cancer Res, 2020, 39(1): 191.

[22] Wei C, Yang CG, Wang SY, et al. Overspraak tussen kankercellen en tumor-geassocieerde macrofagen is vereist voor mesenchymale circulerende tumorcel-gemedieerde colorectale kankermetastase [J]. Mol Kanker, 2019, 18(1): 64.

[23] Francque S, Szabo G, Abdelmalek MF, et al. Niet-alcoholische steatohepatitis: de rol van door peroxisoomproliferator geactiveerde receptoren [J]. Nat Rev Gastroenterol Hepatol, 2021, 18(1): 24-39.

[24] Tian Y, Yang CM, Yao QY, et al. Procyanidin B2 activeert PPAR om M2-polarisatie in muismacrofagen te induceren [J]. Front Immunol, 2019, 10: 1895.

[25] Takada I, Makishima M. Peroxisome proliferator-geactiveerde receptoragonisten en -antagonisten: een patentoverzicht (2014- aanwezig) [J]. Deskundige mening Pat, 2020, 30(1): 1-13.

[26] Okuzumi S, Miyata J, Kabata H, et al. TLR7-agonist onderdrukt groep 2 aangeboren lymfoïde cel-gemedieerde ontsteking via IL-27-producerende interstitiële macrofagen [J]. Am J Respir Cell Mol Biol, 2021, 65(3): 309-318.

[27] Makita N, Hizukuri Y, Yamashiro K, et al. IL-10 verbetert het fenotype van M2-macrofagen geïnduceerd door IL-4 en verleent het vermogen om eosinofielenmigratie te verhogen [J]. Int Immunol, 2015, 27(3): 131-141.

[28] Jin L, Liu WR, Tian MX, et al. CCL24 draagt ​​bij aan HCC-maligniteit via de RhoB-VEGFA-VEGFR2-angiogeneseroute en duidt op een slechte prognose [J]. Oncotarget, 2017, 8(3): 5135-5148.

[29] Satoh T, Takeuchi O, Vandenbon A, et al. De Jmjd3-Irf4-as reguleert M2-macrofaagpolarisatie en gastheerreacties tegen worminfectie [J]. Nat Immunol, 2010, 11(10): 936-944.

[30] Raes G, Brys L, Dahal BK, et al. Macrofaag galactose type C-type lectines als nieuwe markers voor alternatief geactiveerde macrofagen veroorzaakt door parasitaire infecties en allergische luchtwegontsteking [J]. J Leukoc Biol, 2005, 77(3): 321-327.

[31] Mantovani A, Allavena P, Sica A, et al. Kankergerelateerde ontsteking [J]. Natuur, 2008, 454(7203): 436-444.