UPLC-Q-Orbitrap HRM's gecombineerd met moleculaire docking om de materiaalbasis van bittere smaak en smaak-effectrelatie in Cistanchia Desertica te onderzoeken
Dec 18, 2024
Abstract
Gebaseerd op Ultra Performance vloeistofchromatografie-quadrupole-elektrostatisch veld orbitrap hoge resolutie massaspectrometrie (UPLC-Q-Orbitrap HRMS) en moleculaire docking, de bittere smaak presenteren stoffen van Cistanchis Deserticola Extract werden onderzocht om een onderzoek te leggen voor het de-bittering en corrigeren van de Relatie van de Biteranchis met de Bitter-Deserticola Extract. Ten eerste werd UPLC-Q-Orbitrap HRMS gebruikt om de bestanddelen van C. deserticola te karakteriseren en werden 69 chemische componenten geïdentificeerd. Moleculaire docking van deze chemische componenten met de bittere smaakreceptor resulteerde in de screening van 20 bittere aanwezige stoffen, waaronder 6 fenylethanolglycosiden, 5 flavonoïden, 3 fenolzuren, 2 cycloalkenyl ether-terpen, 2 alkaloïden en 2 andere componenten. De extracten van dezelfde oorsprong werden verzameld van dezelfde plaats van herkomst en de bittere aanwezige stoffen werden onderzocht door moleculaire docking. Andere componenten werden negen batches verse C. Deserticola-monsters verzameld uit verschillende maanden van dezelfde oorsprong, verdeeld in verschillende maanden en verschillende delen, en de kwantitatieve waarde van de bitterheid van de monsters werd bepaald door de elektronische tongmethode en de inhoud van zes componenten in de monsters (Pineconotyloside, trichothecoside, tubuline A, iso-triside, iso-triside, iso-triside, iso-triside, iso-triside, iso-triside, iso-triside, iso-triside, iso-triside, iso-triside, iso-triside, iso-triside, iso-triside, iso-triside, iso-triside, iso-triside, iso-triside, iso-triside, iso-triside, iso-triside, iso-triside, iso-triside, iso-triside, iso-triside, iso-trichothek. Jinshihuaoside en jingnipinoside) werden bepaald door vloeistofchromatografie met hoge prestaties (HPLC) en totale fenylethanolglycosiden in de monsters werden bepaald met de uvvisibele spectrofotometrische methode. Fotometrische methode om de inhoud te bepalen van totale fenylethanolglycosiden, totale polysacchariden, totale alkaloïden, totale flavonoïden en totale fenolzuren in de monsters, en zal worden gecombineerd met chemometrische analyse op deze basis, en door Pearson's Correlatieanalyse, grijze correlatieanalyse, en orthogon-discriminant-analyse in C. Deserticola, die in overeenstemming waren met de resultaten van de moleculaire docking; en ten slotte, met de bittere aanwezige stoffen als het object van de studie.
Cistanchis Deserticola Extract
Ten slotte werden netwerkfarmacologische voorspelling en analyse uitgevoerd met de bittere substantie als het doelwit, en de relatie tussen het doelwit van de bittere stof en de bittere werkzaamheid werd onderzocht. De resultaten toonden aan dat de belangrijkste doelen van de Bertter -substantie EGFR, PIK3CB en PTK2 waren en dat de bittere stof de bittere werkzaamheid zou kunnen uitoefenen door de activiteit op de relevante ziektedoelen, wat betekent dat de bittere stof van C. Desertica de materiële basis is van de bittere effectiviteit. Kortom, deze studie toonde aan dat de fenylethanolglycosiden, voornamelijk pijnappelkleurige, Mauritiana Glycoside en Gibbe Rellin, de materiële basis zijn van de bittere smaak van C. woestica, en de moleculaire docking -technologie heeft een leidende rol in de screening van de bittere stoffen in de traditionele Chinese geneeskunde, en dat de bittere bitterheid is van de bitterheid van de bitterheid, die de bittere bitterheid heeft, wat een goede stoffen is in de traditionele Chinese geneeskunde, en dat de bittere bitterheid is, wat een goede stoffen is in de traditionele Chinese geneeskunde, en dat de bittere bitterheid is, wat een goede stoffen is in de traditionele Chinese geneeskunde, en dat de bittere bitterheid is, die een goede bitterheid heeft in de traditionele Chinese geneeskunde, en dat is een goede stoffen van de bitterheid van de bitterheid, wat een goede stoffen is in het traditionele Chinese "Taste-effectiviteit" van de traditionele Chinese geneeskunde in de toekomst. De bittere stoffen in C. Desertica hebben een bittere smaak en effect, die ideeën en referenties zullen bieden voor het toekomstige onderzoek naar de Relationsh IP tussen smaak en effect in de traditionele Chinese geneeskunde
Trefwoorden Cistanchis Deserticola Extract; UPLC-Q-Orbitrap HRMS; netwerkfarmacologie; moleculaire docking; elektronische tong; Bittere stoffen;Taste-effect relatie
Cistanche Deserticola YC MA.is een eeuwige wortelparasiet van de familie Orobanchaceae, geslacht Cistanche, algemeen bekend als woestijn cistanche [1]. De kruidenklassieker van de Shennong stelt dat Cistanche zoet en enigszins warm smaakt. Het heeft echter eigenlijk een aanhoudende en lichte bittere smaak nadat hij is ingenomen. De "smaak" van de vijf smaken van de traditionele Chinese geneeskunde werd oorspronkelijk bepaald op basis van de werkelijke smaak van het medicijn wanneer het werd geproefd, maar omdat de smaak van het medicijn nauw verwant is aan het effect ervan, evolueerde het geleidelijk naar het verklaren en samenvatten van het effect van het medicijn door "smaak" [2]. Cistanche is opgenomen in veel klassieke oude medische boeken. Het heeft de effecten van het voeden van de nier en het aanvullen van essentie, het bevochtigen van de darmen en het verlichten van constipatie. Sinds de oudheid is het gebruikt om ziekten met betrekking tot niergebrek te behandelen, waaronder seksuele disfunctie, vrouwelijke onvruchtbaarheid, verlies van essentie en bloed, pijn van de taille en knieën, droge darmen en constipatie, enz. [3]. De bitterheid van de traditionele Chinese geneeskunde is een van de vijf smaken van de traditionele Chinese geneeskunde -theorie en is een belangrijke theoretische basis voor het begeleiden van het klinische gebruik van traditionele Chinese geneeskunde. Bitterheid is een van de vijf smaken van de traditionele Chinese geneeskunde. De kenmerken ervan zijn zuiverend, droog en brand [4], en het speelt een belangrijke rol bij het begeleiden van het klinische gebruik van traditionele Chinese geneeskunde. De meeste traditionele Chinese geneesmiddelen en traditionele preparaten voor Chinese geneeskunde hebben een bittere smaak. Traditionele Chinese geneeskunde is van mening dat de bittere smaakstoffen (hierna bittere stoffen) in bittere geneesmiddelen de effectieve stoffen zijn [5]. De relatie tussen bittere stoffen in traditionele Chinese medicijnen en hun bittere werkzaamheid is echter nog steeds onduidelijk. Er is nog steeds een gebrek aan relevant wetenschappelijk onderzoek naar de vraag of de bittere stoffen in bittere traditionele Chinese medicijnen bittere werkzaamheid hebben. Cistanche bevat een verscheidenheid aan chemische componenten, voornamelijk fenylethanolglycosiden, cyclopentaanetherdenen, lignanen en hun glycosiden, suikers, enz. Bovendien bevat het ook flavonoïden, fenolzuren, alkaloïden, volatiele oliën, aminozuren, inorganische trace -elementen en andere componenten [6]. Onder hen worden fenylethanolglycosideverbindingen beschouwd als de belangrijkste effectieve componenten in cistanche [7]. Cistanche Deserticola heeft twee oogstseizoenen: lente en herfst. Studies hebben aangetoond dat het polysaccharidegehalte van veercistanche woestijnticola laag is, het fenylethanolglycosidegehalte hoog is en de smaak is bitter, maar de antioxidantcapaciteit is sterk [8]. Het is te zien dat zijn bittere componenten een zekere correlatie hebben met de werkzaamheid van het medicijn, maar de materiële basis van de bittere smaak van Cistanche -woestijnola is nog onduidelijk, wat de verdere ontwikkeling ervan kan beperken.
Om de bittere substantiebasis van te verkennenCistanche woesticolaEn zijn relatie met bittere werkzaamheid (smaakeffectrelatie), deze studie nam Cistanche Deserticola-extract als het onderzoeksobject en screende de bittere stoffen in Cistanche Deserticola door ultrahoog prestaties vloeistofchromatografie-quadrupole-elektrostrostatisch veld-massaspectrometrie (Uplc-quidtrap HRMS) technologie en molecular docking hrms en molecule docking hrms en molecule docking-hrms) technologie en molecular-docking-hrms) technologie en molecular-docking hrms en molecular-docking hrms en molecular-docking-hrms) technologie en molecule docking-hrms) technologie en molecuul docking-hrms en molecular-docking hrms) De inhoud van de belangrijkste bittere medicinale componenten werd bepaald doorHigh Performance Liquid Chromatography (HPLC)en de inhoud van elke belangrijke categorie bittere stoffen werd bepaald door UV-zichtbare spectrofotometrie. De mate van bitterheid werd geëvalueerd door elektronische tong en de bittere componenten werden gevonden in combinatie met chemometrie; En netwerkfarmacologietechnologie werd gebruikt om de KEGG -route uit te voeren en te verrijken analyse van de doelen van bittere stoffen in de traditionele Chinese geneeskunde, en de doelen van bittere stoffen waren gecorreleerd met de doelen van hun bittere werkzaamheid, om de relatie tussen bittere stoffen en bittere werkzaamheid in het traditionele Chinese geneeskunde te onderzoeken. De onderzoeksideeën worden getoond in figuur 1. Deze studie maakte volledig gebruik van moderne technologieonderzoeksmethoden om de smaakinformatie van Cistanche Deserticola te verkennen, waardoor de bittere materiaalbasis en de smaak-effectrelatie worden onthuld. It is expected to provide a reference for the scientific analysis of the material basis of taste of traditional Chinese medicine, and provide a basis for the in-depth and precise development and utilization of Cistanche deserticola resources, making the five flavors theory clearer, more objective, and standardized, scientifically explaining the scientific connotation of the bitterness theory, and providing research ideas and references for exploring the true taste and efficacy relationship of the material basis of the nature and smaak van traditionele Chinese geneeskunde.
Fig. 1 Route van de studie over de relatie tussen bittere aanwezige stoffen en bittere werkzaamheid van cistanche-woestijnticola-extracten
1 materialen
1.1 Medicinale materialen
Verse Cistanche Deserticola -monsters werden verzameld in Aksu, Xinjiang van april tot december 2023. De monsters werden geïdentificeerd door Li Mingjie, een apotheker in het Shaya County People's Hospital, als de gedroogde vlezige stengels met schaalbladen van Cistanche Deserticola, een plant van de genus cistanche in de familie OroBanchaceae. De voucherspecimens werden opgeslagen in het Pharmacy Research Laboratory van Xinjiang Medical University. De monsters werden schoongemaakt van onzuiverheden, verse en geblancheerd in water gedurende 5 minuten volgens de literatuur, en vervolgens verwerkt, gedroogd met 60 graden, verpletterd en gezeefd door een 40- meshzeef, zie tabel 1.
Tabelmonsters Informatie van Cistanche Deserticola
| Nee. | Code | Verzamelingstijd | Voorbehandeling voor het drogen | Detectielite |
|---|---|---|---|---|
| 1 | M1 | 2023-04-10 | Hele - plantenplakken | Hele plant |
| 2 | M2 | 2023-05-08 | Hele - plantenplakken | Hele plant |
| 3 | M3 | 2023-06-15 | Hele - plantenplakken | Hele plant |
| 4 | M4 | 2023-07-10 | Hele - plantenplakken | Hele plant |
| 5 | M5 | 2023-08-11 | Hele - plantenplakken | Hele plant |
| 6 | M6 | 2023-09-10 | Hele - plantenplakken | Hele plant |
| 7 | M7 | 2023-10-09 | Hele - plantenplakken | Hele plant |
| 8 | M8 | 2023-11-14 | Hele - plantenplakken | Hele plant |
| 9 | M9 | 2023-12-10 | Hele - plantenplakken | Hele plant |
| 10 | P1 | 2023-08-11 | Sectie - Specifieke plakjes | Bovenste epidermis |
| 11 | P2 | 2023-08-11 | Sectie - Specifieke plakjes | Bovenste cortex |
| 12 | P3 | 2023-08-11 | Sectie - Specifieke plakjes | Bovenste merger |
| 13 | P4 | 2023-08-11 | Sectie - Specifieke plakjes | Middelste epidermis |
| 14 | P5 | 2023-08-11 | Sectie - Specifieke plakjes | Middelste cortex |
| 15 | P6 | 2023-08-11 | Sectie - Specifieke plakjes | Middelste merger |
| 16 | P7 | 2023-08-11 | Sectie - Specifieke plakjes | Lagere epidermis |
| 17 | P8 | 2023-08-11 | Sectie - Specifieke plakjes | Lagere cortex |
| 18 | P9 | 2023-08-11 | Sectie - Specifieke plakjes | Lager merger |
1.2 Databases en software
Tcmsp (https://tcmspw.com/tcmsp.php), genecards (https://www.genecards.org), omim (https://www.omim.org), uniprot (https://www.uniprot.org), pdb ) (https://alphafold.ebi.ac.uk/), alphafold2 en autodockvina (https://alphafold.ebi.ac.uk/) werden gebruikt voor moleculaire docking. IBM SPSS Statistis 25 werd gebruikt voor Pearson -analyse. Software: Gray Association-analyse werd uitgevoerd met behulp van de online website SPSSPRO (https://www.spsspro.com), orthogonale gedeeltelijke kleinste kwadraten Discriminant Analysis (OPLS-DA) werd uitgevoerd met behulp van SIMCA14.1-software en netwerkfarmacologie-analyse werd uitgevoerd met behulp van cytoscape-software.
1.3 instrumenten en reagentia
Overwinnen Ultra-High Performance Liquid Chromatograph, Orbitrap Exploris 120 Massaspectrometer met hoge resolutie (Thermofisher Scientific, VS); Sa -402 b elektronische tong (insent, Japan); LC -20 een krachtige vloeistofchromatograaf (Shimadzu, Japan); UV-zichtbare spectrofotometer (Shanghai Youke Instrument Co., Ltd.); AUW2200 elektronische balans (Shimadzu Philippines Factory); SK250 Ultrasone Cleaner (Shanghai Kedao Ultrasonic Instrument Co., Ltd.); Dhg -9246 Een elektrische constante temperatuurstoot drogen oven (Shanghai Jinghong Experimental Equipment Co., Ltd.); Plusel+Chorusl Ultrapure Water Instrument (Veolia, Frankrijk).
De referentiestoffen echinacoside (zuiverheid groter dan of gelijk aan 98%, batchnummer PCL-#-A003), Verbascoside (zuiverheid groter dan of gelijk aan 98%, batchnummer PCL-#-M235), tubuloside A (puur groter dan 99%, batch-nummer PCL-#-t003), scutellarin (purity groter dan of gelijk dan 99%, batch-nummer PCL-#-D005) en isovalascoside (zuiverheid groter dan of gelijk aan 98%, batchnummer PCL-#-I236) werden gekocht bij Sichuan PUXI'AO Standard Material Technology Co., Ltd.; De referentiestoffen geniposide (zuiverheid groter dan of gelijk aan 98%, batchnummer WP23120502), rutin (zuiverheid groter dan of gelijk aan 98%, batchnummer wp32110405), galzuurzuur (zuiverheid groter dan of gelijk aan 98%, batch -nummer wp32140706) en betaine (purity groter dan of gelijk aan 98%, batch -nummer WP33654874) werden gekocht van Sichuan Weikeqi Biotechnology Co., Ltd.; Reinstein's zout, watervrije glucose (analytische kwaliteit), acetonitril, methanol (chromatografische graad) en fosforzuur werden gekocht van Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.
