Urinezuurverlagend effect en mechanisme van acteoside en echinacoside geëxtraheerd uit cistanche tubulosa
Mar 03, 2025
Abstract:Probeer de urinezuurverkeringseffecten en mechanismen van acteoside (As) en echinacoside (ECH) te verkennen die zijn geëxtraheerd uitCistanche tubulosa.
MethodenHyperuricemia (HUA) rattenmodel werd vastgesteld met behulp van kaliumoxonaat (1,5 g · kg -1 · d -1) gecombineerd met adenine (100 mg · kg -1} · d -1). De HUA -modelratten werden willekeurig verdeeld in een modelcontrolegroep, een allopurinolgroep (30 mg · kg -1 · d -1), als laag en hoog (50, 100 mg · kg -1 · d {13}}) dosisgroepen, en ech low en high (50, 100 mg · kg -1 · d -1) dosisgroepen. Een normale controlegroep werd eerder opgericht. Na vier weken toediening werd de bloedbiochemanalysator gebruikt om SUA -ureum, crea, adenosine -deaminase (ADA) en urinezuur (UUA) niveaus in urine te detecteren. Enzym Linked Immunosorbent Assay werd gebruikt om xanthine -oxidase (XOD) niveaus in serum te detecteren. Nierweefsel werd verzameld en de niercoëfficiënt werd gewogen en berekend. Hematoxyline eosine (HE) kleuring werd gebruikt om nierpathologische veranderingen te observeren. Immunohistochemie (IHC) en realtime PCR werden gebruikt om de eiwit- en mRNA -expressieniveaus van uraattransporter 1 (Urat1), glucosetransporter 9 (GLUT9), organische aniontransporter 1 (OAT1) en organische aniontransporter 3 (OAT3) in nierweefsel te detecteren. Resultaten AS en ECH kunnen de nierfunctie bij HUA -modelratten verbeteren, het urinezuurgehalte van het bloed verminderen, urinezuuruitscheiding bevorderen, serumspiegels van ADA en XOD downreguleren en eiwit- en mRNA -expressie van urat1 en GLUT9 in nierweefsel in nierweefsel worden gereguleerd, terwijl het opreguleert van eiwit en mRNA -expressie van OAT1 en OAT3 in renaal weissue.
Conclusies De fenylethanoïde glycosiden AS en ECH uit cistanche tubulosa kunnen urinezuurverlagingseffecten uitoefenen door de nierfunctie in HUA -modelratten te verbeteren, ADA- en XOD -niveaus te verminderen en de expressie van urat1, GLUT9, OAT1 en OAT3 te reguleren.
Sleutelwoorden: Cistanche Tubulosa; acteoside; echinacoside; hyperurikemie; het verminderen van urinezuur; mechanisme
Cistanche tubulosa -extract met 16% acteoside
Hyperurikemie (HUA) is een metabole ziekte die wordt veroorzaakt door ongeordend purinemetabolisme in het menselijk lichaam, wat leidt tot verhoogde urinezuurspiegels van bloed [1]. Het wordt meestal gediagnosticeerd wanneer de urinezuurniveaus van het bloed groter zijn dan 7. 0 mg · dl⁻¹ (416. 0 μmol·l⁻¹) in mannen en 6. 0 mg · dl⁻¹ (357. {8}}} μmol⁻¹) in vrouwen [2]. De ontwikkeling van hyperurikemie is voornamelijk gerelateerd aan factoren zoals diëten met een hoog purine, chronisch alcoholgebruik, medicatiegebruik en hypothyreoïdie. Het verhoogt niet alleen het risico op cardiovasculaire aandoeningen, diabetes en hypertensie [3-4], maar heeft ook aanzienlijk invloed op de gezondheid van patiënten.
Momenteel omvatten klinische behandelingen voor hyperurikemie voornamelijk geneesmiddelen die de productie van urinezuur remmen en urinezuuruitscheiding bevorderen. Deze behandelingen hebben echter bepaalde beperkingen voor patiënten met een verminderde lever- of nierfunctie [5-6]. Daarom is het verkennen van effectieve medicijnen met lage bijwerkingen van groot belang voor de preventie en behandeling van hyperurikemie.
Cistanche Tubulosa (Schenk) R. Wight, vaak gebruikt in de traditionele Chinese geneeskunde als een niertonerend kruid, wordt gebruikt om aandoeningen zoals impotentie, onvruchtbaarheid, essentie en bloed, zwakte in de onderrug en knieën, spierzwakte en constipatie als gevolg van darm droogheid te behandelen [7]. Studies hebben dat aangetoondCistanche tubulosaBezit neuroprotectief [8], ontstekingsremmende [9], botmetabolisme-regulerend [10] en werkzaamheidverbeterende effecten bij chemotherapie voor kankerpatiënten [11]. Onder de verschillende actieve componenten zijn fenylethanoïde glycosiden de meest voorkomende.
Acteoside (AS) en echinacoside (ECH), twee fenylethanoïde glycosiden met een hoog gehalte inCistanche tubulosa, vertonen een sterke biologische activiteit en hebben een aanzienlijk potentieel voor ontwikkeling en toepassing. Bijgevolg is onze onderzoeksgroep geselecteerd als en ECH voor verder onderzoek. Via voorspellingen van netwerkfarmacologie en pre-experimenten bij muizen hebben we ontdekt dat fenylethanoïde glycoside-extracten uitCistanche tubulosakan een bepaald urinezuurverlagend effect hebben. De paden en mechanismen van deze effecten blijven echter onduidelijk.
Met behulp van de mechanismen van de productie van urinezuur en de primaire uitscheidingspaden ervan als de onderzoeksfocus, hebben we dus de urinezuur-verlagende effecten van de fenylethanoïde glycoside-extracten onderzocht als en ECH. Deze studie heeft als doel de paden en mechanismen op te helderen waardoor AS en ECH hun urinezuurverlagende effecten uitoefenen.
1 materialen
1.1 Experimentele dieren
Zeventig mannelijke SPF-grade Sprague-Dawley (SD) ratten, met een gewicht van 150-180 g, werden gekocht bij het experimentele dierencentrum van Xinjiang Medical University. Licentienummer van het dierproductie: scxk (xin) 2023-0001. Dit experiment werd goedgekeurd door de Animal Ethics Committee van het Xinjiang Autonomous Region Uygur Medicine Research Institute, met het goedkeuringsnummer van de dierethiek: IACUC- (Zhun) -2024-009.
1.2 medicijnen en reagentia
Fenylethanoïde glycoside -extracten (AS en ECH)vanCistanche tubulosa (purity >98%, geverifieerd door krachtige vloeistofchromatografie) werden geëxtraheerd, gezuiverd en bereid door het belangrijkste laboratorium van Uygur Formulation Science, Xinjiang Autonomous Region Uygur Medicine Research Institute. Batchnummers: 20220617 (AS) en 20220526 (ECH).
Allopurinol -tabletten, batchnummer: 62208726, vervaardigd door Jiangsu Wanbang Biochemical Pharmaceutical Group Co., Ltd.
KaliumoxonaatEnadenine, Batchnummers: I2130050 en C2202255, gekocht bij Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.
Crea (creatinine), UA (urinezuur), ureum en ADA (adenosine deaminase) assaykits, Batchnummers: 141123010, 141223004, 141323008 en 043624005, gekocht bij Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd.
Xod (xanthine oxidase) activiteitsassaykit, batchnummer: Y10001219, gekocht bij Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd.
Antilichamen (Urat1, Glut9, OAT1, OAT3), batchnummers: 3i5723 0, 92F0296/4, 0F33081/2I44618, gekocht bij Affinity Biosciences.
HRP-gelabelde geit anti-konijn IgG, batchnummer: 245440113, gekocht bij ZSGB-BIO.
Hematoxyline -kleuroplossing, batchnummer: 24135741H, gekocht bij Beijing Lanjieke Technology Co., Ltd.
DAB chromogene reagenset, batchnummer: 240010512, gekocht bij ZSGB-BIO.
DEPC (diethylpyrocarbonaat), catalogusnummer: d 60029-500 ml, gekocht bij amresco (VS).
M5 hikleaire DL2000 DNA -marker, catalogusnummer: MF025, gekocht bij Beijing Genomics Biotechnology Co., Ltd.
TRIZOL ™ reagens, catalogusnummer: 15596026, gekocht bij Thermo Fisher Scientific (VS).
5x alles-in-één RT MastermixEnEvagreen express 2 × qpcr mastermix-low rox, Catalognummers: G492 en G891, beide gekocht bij Applied Biological Materials Inc. (ABM).
2 methoden
2.1 Modelinstelling en groepering
Zeventig mannelijke Sprague-Dawley (SD) ratten werden geacclimatiseerd en verdeeld in twee groepen: een normale controlegroep (1 0 ratten) en een modelcontrolegroep (60 ratten). De normale controlegroep kreeg 0,5% cmc-na toegediend via gavage. De modelcontrolegroep werd toegediend kaliumoxonaat (1,5 g · kg⁻¹) gecombineerd met adenine (100 mg · kg⁻¹) bij een dosis van 10 ml · kg⁻¹, eenmaal daags gedurende 14 opeenvolgende dagen. Het model werd met succes vastgesteld wanneer ureum-, CRA -en SUA -niveaus aanzienlijk toenamen, zoals gemeten door een biochemische analysator.
De Hyperuricemia Model-ratten werden verder verdeeld in de volgende groepen op basis van SUA-, ureum- en CREA-niveaus: modelcontrolegroep, allopurinolgroep (3 {0 mg · kg⁻¹), lage dosis als groep (50 mg · kg⁻¹), hoge dosis als groep (100 mg · kg · kg · kg · kg · kg · kg · kg · kg · kg · kg · kg · kg · kg (50 mg · kg ⁻ ama en groep (100 mg. ECH -groep (100 mg · kg⁻¹), met 10 ratten in elke groep. Om stabiele hyperurikemie te handhaven, kregen alle groepen behalve de normale controlegroep kaliumoxonaat (500 mg · kg⁻¹) gecombineerd met adenine (100 mg · kg⁻¹) via gavage in de ochtend, gevolgd door toediening van de respectieve medicijnen in elke behandelingsgroep in de middag. De normale controlegroep ontving 's ochtends 0,5% cmc-NA-oplossing en drinkwater' s middags met een dosis van 10 ml · kg⁻¹, eenmaal daags gedurende 14 opeenvolgende dagen. Daarna werd het toediening van modelleringsmiddelen gestopt en werden de respectieve geneesmiddelen continu dagelijks gedurende nog eens 14 dagen toegediend.
2.2 Voorbeeldverzameling
Na de laatste dosis werden de ratten 's nachts vast (water was niet beperkt). Urine van elke groep werd verzameld voor urinezuurtesten. Lichaamsgewicht werd gemeten na vasten en bloedmonsters werden verzameld onder anesthesie. Serum werd gescheiden door centrifugatie en opgeslagen voor toekomstig gebruik. Nierweefsels werden verzameld en gewogen. De ene nier werd gefixeerd in 4% paraformaldehyde-oplossing, terwijl de andere in vloeibare stikstof in vloeibare stikstof was voor verdere analyse.
2.3 Meting van urinezuur in ratten urine
Urinemonsters van elke groep werden gecentrifugeerd (3, 000 r · min⁻¹, 10 min, centrifuge -straal 14 cm) en het supernatant werd verzameld. Urinemonsters werden 1: 9 verdund met zoutoplossing en geanalyseerd op urinezuurgehalte met behulp van een biochemische analysator.
2.4 Meting van ADA, ureum, crea en sua in rattenserum
Bloedmonsters van elke groep werden gecentrifugeerd (3, 000 r · min⁻¹, 10 min, centrifuge -straal 14 cm) en serum werd verzameld. ADA-, ureum-, crea- en sua -niveaus in het serum werden gemeten met behulp van een biochemische analysator.
2.5 Meting van XOD in rattenserum
Veranderingen in XOD -niveaus in rattenserum werden gemeten met behulp van een enzymatische test volgens de instructies van de fabrikant. De initiële absorptie (a₁) en uiteindelijke absorptie (a₂) bij 290 nm werden geregistreerd en ΔA (ΔA=a₂ - a₁) werd berekend. ΔA werd vervangen door de formule:
Xod (nmol⁻¹ · min⁻¹ · ml⁻¹)=[ΔA × reactiesysteem totaal volume ÷ (molaire extinctiecoëfficiënt van urinezuur x optische padlengte) × 10⁹] ÷ monstervolume ÷ tijd {{2} × δa,
om de hoeveelheid urinezuur gekatalyseerd per minuut per milliliter serum te berekenen.
2.6 Niercoëfficiëntmeting
Nierweefsels werden verzameld, gewassen met zoutoplossing en overtollig water werd verwijderd. Het orgaangewicht werd nauwkeurig gemeten en de niercoëfficiënt werd als volgt berekend:
Niercoëfficiënt=niergewicht (mg) / lichaamsgewicht (g).
2.7 Histopathologische observatie van nierweefsel door hij vlekken
Nierweefsels gefixeerd in 4% paraformaldehyde -oplossing werden uitgedroogd met graded ethanolconcentraties, opgeruimd met xyleen, ingebed in paraffine en in segment 4- μm plakjes. De secties werden gedeparaffineerd met xyleen, gehydrateerd met graded ethanol, gekleurd met hematoxyline en eosine (HE) en afgesloten met neutrale tandvlees. De morfologische veranderingen in nierweefsel werden waargenomen onder een lichtmicroscoop en beelden werden vastgelegd met een vergroting van 400 x.
2.8 Detectie van urat1-, glut9-, oat1- en OAT3 -eiwitexpressie in nierweefsel door IHC
Nierweefsels gefixeerd in 4% paraformaldehyde -oplossing werden uitgedroogd met graded ethanolconcentraties, opgeruimd met xyleen, ingebed in paraffine en in secties. Antigeen -ophalen en geitenserumblokkering werden uitgevoerd. Primaire antilichamen (URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3) werden toegevoegd bij een verdunning van 1: 200 en overnacht geïncubeerd na 4 graden. De volgende dag werden de secties gewassen met PBS, aan de lucht gedroogd en geïncubeerd met biotine-gelabelde geit anti-konijn IgG gedurende 30 minuten bij 37 graden. De secties werden gewassen met PBS en gedurende 10 minuten geïncubeerd met DAB -chromogeen reagens, gevolgd door PBS -spoeling, hematoxyline -kleuring gedurende 3 minuten, differentiatie met zoutzuur ethanoloplossing, lithiumcarbonaatblauwe, uitdroging met gradiëntethanol, clearing met xyleen en verzegeling met neutraal gom.
Voor elke rat werden twee willekeurige 4 0 0 × velden van niersecties geselecteerd. Positieve kleuring (bruingeel) werd geanalyseerd en de geïntegreerde optische dichtheid (IOD) van elk veld werd gemeten met behulp van Image-Pro Plus 6.0 voor statistische analyse.
