Xinjiang Cistanche Deserticola Polysaccharide Opruimende actieve zuurstofvrije radicalen
Mar 14, 2023
Wang Guowei Zhao Fang
(College of Chemistry and Chemical Engineering, Shihezi University, 832000, Beisi Road, Shihezi City, Xinjiang)
abstract
De antioxidantactiviteit van Cistanche deserticola polysaccharide in vitro werd bestudeerd. Ascorbinezuur als controle nemen, de Fenton-achtige reactie nemen om hydroxylradicalen te produceren, de auto-oxidatiereactie van dopamine om superoxide-anionradicalen te produceren, de reactie van natriumhypochloriet met waterstofperoxide om singletzuurstof te produceren, difenylbittere hydrazineradicalen als experimenteel model , de effecten van Cistanche deserticola-polysacchariden op superoxide-anionradicalen, hydroxylradicalen DPPH · vrije radicalen (difenylbittere hydrazineradicaal), het wegvangende effect van singlet-zuurstof. De resultaten toonden aan dat de polysacchariden van Cistanche deserticola duidelijke wegvangende effecten hadden op de bovengenoemde vrije radicalen, en het wegvangende effect was positief gecorreleerd met de concentratie van polysacchariden.
Trefwoorden :Cistanche deserticola; Polysaccharide; Vrije radicalen
1. Inleiding
Het lichaam produceert continu verschillende reactieve vrije zuurstofradicalen (ROS) in het proces van oxidatieve stofwisseling van levensactiviteiten, wat het tussenproduct is van de oxidatie-reductiereactie van aërobe stofwisseling.Uit onderzoek is gebleken dat overtollige vrije radicalen levensmacromoleculen en verschillende organellen zullen aanvallen, verschillende schade aanrichten op moleculair niveau, celniveau, weefsel- en orgaanniveau, het verouderingsproces van het lichaam versnellen en ziekten veroorzaken zoals trombose, diabetes, atherosclerose, tumoren, enz. [1]. Vanwege de toxiciteit van chemisch gesynthetiseerde antioxidanten voor het menselijk lichaam, is het zoeken naar natuurlijke antioxidanten met hoge efficiëntie en lage toxiciteit die vrije zuurstofradicalen kunnen verwijderen, een populair onderzoeksonderwerp geworden op het gebied van geneeskunde, voedsel, chemische technologie en andere gebieden in recente jaren.
Cistanche deserticola(YCMa.)is een zeldzame Chinese traditionele geneeskunde en staat bekend als "woestijn ginseng" [2]. Cistanche deserticola mapolysaccharide is een van de belangrijkste bioactieve componenten van Cistanche deserticola, maar er is geen rapport over of Cistanche deserticola-polysaccharide het effect heeft van het wegvangen van vrije radicalen. In dit artikel werden de wegvangende effecten van Cistanche deserticola-polysaccharide op superoxide-anionradicaal, hydroxylradicaal, DPPH · vrije radicalen en singlet-zuurstof bepaald door spectrale analyse, om de antioxiderende activiteit ervan te evalueren en een wetenschappelijke basis te bieden voor de volledige ontwikkeling en het gebruik van deze natuurlijke hulpbron.
Chinese kruidencistanche
2. Experimenteel gedeelte
2.1 Instrumenten en reagentia
UV-2401 UV-zichtbare spectrofotometer (Shimadzu, Japan); LumatLB9507 ultragevoelige buisluminometer (Duitsland
BertholdTechnologieën); RE-52CS rotatieverdamper (Shanghai Yarong Biochemical Instrument Factory); HW-SY elektronisch thermostatisch waterbad (Jintan Xinhang Instrument Factory); PHS-3C pH-meter (Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd.); DZF-6020 vacuümdroogoven (Shanghai Yiheng Technology Co., Ltd.). Cistanche deserticola: gekocht bij Kuitun Pharmaceutical Corporation. Luminol (Sigma, VS), dopamine (China Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products), FeSO4, EDTA, vitamine C, H2O2, NaClO, Na2CO3, NaHCO3, etc. zijn allemaal huishoudelijke analytische reagentia. Het experimentele water is gedestilleerd water met ionenuitwisseling.
2.2 Experimentele methode
2.2.1 Extractiemethode vanCistanche deserticolapolysaccharide
Neem 30 g Cistanche deserticola-poeder en doe dit in een erlenmeyer van 500 ml. Dompel het onder in petroleumether (60-90 graden), ether en 80 procent ethanol hete oplossing (30 graden) gedurende respectievelijk 6 uur en het residu wordt vervluchtigd om het oplosmiddel te drogen. Week het filterresidu in water in een verhouding van 1 ∶ 10 gedurende 24 uur, verwarm het tot 30 graden en haal het er 100 minuten uit. Centrifugeer na extractie om het supernatant te verkrijgen. Nadat het supernatant onder verlaagde druk is geconcentreerd, wordt het geprecipiteerd met 95 procent ethanol van 3 keer het volume. Het mag 24 uur staan bij 4 graden. Na centrifugeren wordt het verzameld en neergeslagen. Na vacuümdrogen kan het ruwe polysaccharide van Cistanche deserticola worden verkregen. Weeg 1,00 g ruw polysaccharide af, los het op met water en doe het in een maatkolf van 50 ml voor stand-by.
Klik hier om Cistanche poederproducten te bekijken
【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
2.2.2 Test op het spoelvermogen vanCistanche deserticolapolysaccharide tot O-2 · vrije radicalen
Het wegvangende vermogen van Cistanche deserticola-polysaccharide tot O{{0}} · werd getest door de productie van vrije superoxide-radicalen (O-2 ·) uit dopamine-autoxidatie [3]. Voeg 3.0ml {{10}}.1mmol/LpH=10.12 carbonaatbufferoplossing, 3.0ml water en {{18 }}.5mL polysaccharide monsteroplossing van verschillende concentraties in de drogende reageerbuis met beurtelings schaal. Voeg na 5 minuten voorverwarmen in een waterbad van 3{{25} graden 1.0 ml 2,0 mmol/L dopamine toe, voorverwarmd in een waterbad van 30 graden, meng onmiddellijk en laat de reactie op 30 graden gedurende 5 minuten en stop de reactie onmiddellijk met 2 druppels 10 mol/L HCl. Gebruik de bufferoplossing als referentie, meet de absorptie (monster A) bij 221 nm, vervang het monster (blanco A) door 0,5 ml water in de blanco groep en vervang het monster door 0,5 ml ascorbinezuur in de controlegroep , meet elk monster drie keer parallel en neem de gemiddelde waarde. O-2 · vrijgavepercentage ( procent )=(Een blanco - Een steekproef)/Een blanco × 100 procent
2.2.3 Test op het spoelvermogen vanCistanche deserticolapolysaccharide tot · OH vrije radicalen
Dverlaten levende cistanche—antioxidant
EDTA-Fe (Ⅱ) - methyleenblauw - H2O2-systeem werd gebruikt om het wegvangende vermogen van Cistanche deserticola-polysaccharide op hydroxylradicaal te testen. Het principe is dat EDTA-Fe (Ⅱ) reageert met waterstofperoxide om · OH vrije radicalen te produceren, wat de karakteristieke absorptiepiek van methyleenblauwoplossing bij 660 nm vermindert.
Voeg 1.0ml 5mmol/L LFeSO4-oplossing, 1,2ml 5mmol/L LEDTA-oplossing, 2.0ml 0.03mol/L NaH2PO{ toe {12}}Na2HPO4 (pH=7.4) bufferoplossing en 1,3 ml 20 mmol/L waterstofperoxide-oplossing in een reeks reageerbuizen van 10 ml met stoppers, goed schudden, 0.7 ml 0,2 mmol/L methyleenblauwoplossing toevoegen en vervolgens 1,0 ml van de te testen oplossing en vitamine C1.0 met verschillende concentraties respectievelijk toevoegen, verdunnen tot 10.00 ml met water, meng goed, houd 30 minuten op 37 graden en meet de absorptiewaarde van elke oplossing bij 660 nm. De blanco groep verving de monsteroplossing door water. Elk monster wordt driemaal parallel gemeten en de gemiddelde waarde wordt genomen. · OH-radicaalopvangsnelheid van monster ( procent )=[(A2-A1)/(A0-A1) × In de formule van 100 procent: A0 -- absorptie waarde onbeschadigde buis; A1 - absorptiewaarde van beschadigde tube; A2 -- Fotometrische waarde na toevoegen van monster.
2.2.4 Test op DPPH · Opruimend vermogen vanCistanche deserticolapolysaccharide
Neem {{0}}.1mL Cistanche deserticola polysaccharide-oplossing en voeg het toe aan 5.0mLDPPH · oplossing, meng het snel en laat 10min staan bij kamertemperatuur,
Bepaal de absorptieverandering bij een golflengte van 517 nm [4]. Elk monster wordt driemaal parallel gemeten en de gemiddelde waarde wordt genomen. Het klaringspercentage van DPPH · ( procent )=1 - [(AB)/A0] × In de formule van 100 procent : A{{6} } absorptiewaarde van DPPH · (1.9mLDPPH · plus 0.1mL50 procent ethanol) zonder monster; A - absorptiewaarde van het monster na reactie met DPPH ·; B -- absorptiewaarde van blanco monster (monster 0,1 ml plus 1,9 ml 50 procent ethanol).
2.2.5Cistanche deserticolapolysaccharide scavenging singlet zuurstof 1O2 test
Single-line zuurstof (1O2) wordt geproduceerd door de chemische reactie van NaClO en H2O2 bij 37 graden [5]. De oplossing die wordt gebruikt voor de bepaling van 1O2 is 100 μ L2.8mmol/L NaClO-oplossing, 400 μ L5mmol/LNaOH-oplossing, 300 μ L10mmol/LH2O2-oplossing, 50 μ L1mmol/Luminol-oplossing. Tijdens de reactie wordt de reactieoplossing aan de monsteroplossing toegevoegd en registreert het chemiluminescentie-instrument tegelijkertijd automatisch het reactieproces. Neem NaClO-H2O2-NaOH-Luminol als blanco controle. Start de reactie en voeg de reactieoplossing toe aan de monsterbuis uit de opslagfles van het chemiluminescentie-instrument volgens de hoeveelheid die is ingesteld door de procedure. Vervolgens wordt de intensiteit van de chemiluminescentie van het reactiemengsel elke 5 seconden op het opnamepapier geregistreerd, wordt elk monster driemaal parallel gemeten en wordt de gemiddelde waarde genomen.
Het opruimingspercentage wordt berekend volgens de volgende formule: opruimingspercentage ( procent )=(controle lichtintensiteit - monster lichtintensiteit)/controle lichtintensiteit × 100 procent
3. Resultaten en discussie
3.1 Opruimingseffect vanCistanche deserticolapolysaccharide op O-2 ·
Voordelen van cistanche tubulosa—Antioxidant
De chemische eigenschap van O-2 · is actief, waardoor de vetzuren op de biofilm peroxide kunnen produceren en vervolgens de cellen kunnen vernietigen [6]. In dit artikel werd de dopaminemethode gebruikt om het wegvangende vermogen van O-2 · te bepalen. Het wegvangende vermogen van Cistanche deserticola tot O-2 · wordt weergegeven in figuur 1. De resultaten toonden aan dat Cistanche deserticola polysaccharide de O-2 · geproduceerd door de auto-oxidatie van dopamine kon remmen, en toenam met de toename van concentratie binnen het gemeten concentratiebereik (0-8mg/ml), maar het afvangend vermogen was lager dan dat van ascorbinezuur.
3.2 Opruimingseffect vanCistanche deserticolapolysaccharide · OH
·OH is een van de meest actieve vrije zuurstofradicalen in de actieve zuurstofsoorten. Het kan reageren met bijna elk biologisch macromolecuul in levende cellen en kan leiden tot biochemische processen zoals lipideperoxidatie, eiwitpolymerisatie en depolymerisatie, nucleïnezuurbreuk, enz. in het lichaamsweefsel, waardoor weefsel- en celziekten ontstaan, wat leidt tot het optreden van verschillende ziekten en het versnellen van de veroudering van het lichaam [7]. Het afvangend vermogen van Cistanche deserticola-polysaccharide voor · OH wordt weergegeven in figuur 2. De resultaten toonden aan dat Cistanche deserticola-polysaccharide een goed afvangend effect had op · OH, en het nam toe met de toename van de concentratie.
3.3 Het afvangend vermogen van Cistanche deserticola polysaccharide voor DPPH ·
DPPH · (difenylbittere hydrazine-radicaal) is een stabiel vrij radicaal, dat paars is in organisch oplosmiddel en een sterke absorptie heeft in de buurt van 517 nm. Na toevoeging van antioxidanten worden sommige vrije radicalen verwijderd, wat de absorptie verzwakt, wat kan worden gebruikt om de antioxidantactiviteit van deze stof te evalueren [8]. Zie figuur 3 voor DPPH · afvangend vermogen van Cistanche deserticola polysaccharide. De experimentele resultaten toonden aan dat het afvangend vermogen van Cistanche deserticola polysaccharide op DPPH · positief gecorreleerd was met de concentratie ervan, en dat het afvangend vermogen groter was dan dat van ascorbinezuur.
3.4 Opruimend vermogen van Cistanche deserticola polysaccharide tot 1O2
Single-line zuurstof is geëxciteerde moleculaire zuurstof met actieve chemische eigenschappen. Omdat ongepaarde elektronen de neiging hebben om te paren, vertonen vrije radicalen actievere chemische eigenschappen [9]. Het afvangend vermogen van Cistanche deserticola-polysaccharide tot 1O2 wordt getoond in figuur 4. De experimentele resultaten toonden aan dat het afvangend vermogen van Cistanche deserticola-polysaccharide lager was dan dat van ascorbinezuur in het bereik van 0-4.0mg /ml, en het afvangend vermogen van Cistanche deserticola-polysaccharide was hoger dan dat van ascorbinezuur wanneer de concentratie groter was dan 4,0mg/ml.
4. Conclusie
De antioxidantactiviteit van Cistanche deserticola-polysacchariden in vitro werd in detail bestudeerd door middel van verschillende reactieve zuurstofvrije radicalensystemen.Uit de experimentele resultaten blijkt dat binnen het experimentele concentratiebereik het polysaccharide-extract van Cistanche deserticola afvangende effecten heeft op O-2 ·, · OH, DPPH · en 1O2, en de afvangende effecten zijn verschillend voor verschillende systemen.Dat lieten de resultaten zienCistanche deserticola polysaccharide is een effectieve exogene natuurlijke antioxidant, die verder onderzoek, ontwikkeling en uitgebreid gebruik waard is.
Cistanche 200mg—Antioxidant
【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
referentie
[1] Lenggarantie. Antioxidant voeding en gezondheid [M]. Peking: Chemical Industry Press, 2004.1-58.
[2] Gao Ming, Tian Ziyu, Cai Hongmei, et al. Alkali-extractie en chemische analyse van polysaccharide uit Cistanche deserticola [J]. Wetenschap en technologie op het gebied van landbouw en voeding, 2008,2 (3): 32-34.
[3] Shi Shuangqun, Song Xinfang. De auto-oxidatie van dopamine [J]. Journal of Hebei Normal University, 1997,21 (4): 387-389.
[4] Zhang Zeqing, Tian Yingjuan, Zhang Jing. Studie naar de antioxidantactiviteit van Fangfeng-polysaccharide [J]. Chinese geneeskunde, 2008,31 (2): 268-271.
[5] Li Haiping, Zhang Shuhai, Zhang Kunsheng. Studie naar de antioxiderende werking van lentinan [J]. Voedselonderzoek en -ontwikkeling, 2008,29 (4): 56-60.
[6] Mo Jian. Inleiding Medische Vrije Radicale Biologie [M]. Peking: People's Health Publishing House, 1989.21-25.
[7]FrederickVL.FreeRadicals[J].ClinicalChemistry,1993,65(12):374—377.
[8]MatsudaM,NagahamaY,SatoTetal.DMYisSpecifiekDMDomeinGenVereistvoorManOntwikkelingindeMedakaVis[J].Natuur,2002,30:559—563.
[9]KanofskyJR.SingletOxygenProductionbyLactoperoxidase[J].JournalofBiologicalChemistry,1983,258(10):5991—5993.
