Een nieuwe rol voor interleukine (IL) bij fibrose
Mar 17, 2022
Contact:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Deel Ⅰ: Nucleair IL-33 remt de vroege conversie van fibroblasten naar een extracellulair matrix-afscheidend fenotype
Francesca Gatti, Sobuj Mia, Clara Hammarström & et al.
Interleukine(IL)-33 is een cytokine dat lijkt te mediërenfibrosedoor te signaleren via zijn receptor ST2 (IL(Interleukine)-33R/ILiRL1). Het is echter ook een eiwit dat na synthese wordt gesorteerd naar de celkern, waar het de chromatinevouwing lijkt te beïnvloeden. Hier beschrijven we een nieuwe rol voor nucleaire IL(Interleukine)-33 bij het reguleren van het fibroblast-fenotype bij muizennierfibrosegedreven door eenzijdige ureterale obstructie. Transcriptionele profilering van IL(Interleukine)-33-deficiënte nieren 24 uur na ligatie onthulden verhoogde expressie van fibrogene genen en verrijking van genensets die betrokken zijn bij de vorming en hermodellering van extracellulaire matrix. Deze veranderingen waren afhankelijk van intracellulaire effecten van IL(Interleukine)-33 omdat ze niet werden gereproduceerd door behandeling met een neutraliserend antilichaam tegen L.33 dat IL . voorkomt(Interleukine)-33R/ST2L-receptorsignalering, noch werden ze waargenomen in L-33R/ST2-deficiënte nieren. Om de intracellulaire functie van lL-33 verder te onderzoeken, hebben we transcriptieprofielen van menselijke fibroblasten vastgesteld, waarbij we hebben waargenomen dat knockdown van IL-33 het transcriptieprofiel van een inflammatoir naar een myofibroblast-fenotype scheefgetrokken heeft, weerspiegeld in hogere niveaus van COL3Al , COL5A1 en transgeline-eiwit, evenals lagere expressieniveaus van IL6, CXCL8, CLL7 en CCL8. Concluderend suggereren onze bevindingen dat nucleaire IL(Interleukine)-33 in fibroblasten dempt de initiële profibrotische respons totdat aanhoudende stimuli, zoals afgedwongen door UUO, dit beschermende mechanisme kunnen opheffen.
Interleukine-33 (IL-33/IL(Interleukine)1F1l) is lid van deinterleukine-1 superfamilie die veel aandacht heeft gekregen als vermeende bemiddelaar vanfibroseontwikkeling. Veel van deze interesse werd versterkt door te observeren dat herhaalde injecties met IL(Interleukine)-33, werkend via de transmembraanreceptor ST2(IL(Interleukine)33RJ/IL(Interleukine)1RL1), geïnduceerde cutaanfibrose' en door te observeren dat IL(Interleukine)-33-deficiëntie verminderde aanzienlijk de door koolstoftetrachloride geïnduceerde leverfibrose. inderdaad, IL(Interleukine)-33 mag promotenfibrosedoor profibrotische IL . te genereren(Interleukine)-13 van type 2 aangeboren lymfoïde cellen (ILC2) en T-helper 2-lymfocyten'.
Nier interstitieelfibroseen verlies van parenchymale tubulaire cellen zijn veelvoorkomende eindresultaten van chronische nierziekten en goede voorspellers van ziekteprogressie. Huidige gegevens die zijn gegenereerd met twee verschillende muismodellen ondersteunen de hypothese dat IL(Interleukine)-33 draagt ook bij aan de pathologie van nierfibrose: bij unilaterale ureterobstructie (UUO) rapporteerden Chen et al. verminderd parenchymaal verlies en verhoogde epitheliale proliferatie in beide IL(Interleukine)-33- en ST2-deficiënte muizen', en bij renale ischemie-reperfusie, Liang et al. toonde aan dat remming van IL(Interleukine)-33 signalering door toediening van oplosbare IL(Interleukine)-33 receptor (sST2) ook verlaagdfibrose.
Rapporten over de fibrogene eigenschappen van IL(Interleukine)-33 worden over het algemeen uitgevoerd en geïnterpreteerd met het oog op een mechanisme waarmee IL(Interleukine)-33, dat vrijkomt uit gestreste of beschadigde cellen, bindt aan het extracellulaire domein van zijn receptor. Daarentegen sorteren van IL.(Interleukine)-33 naar de celkern na synthese - en het vermogen ervan om receptoronafhankelijke chromatinevouwing te beïnvloeden, suggereert dat IL-33 ook transcriptiefactorachtige, receptoronafhankelijke functies kan uitoefenen, een werkingsmechanisme dat veel minder experimentele aandacht heeft gekregen . Deze overwegingen zijn des te interessanter gezien het feit dat de nucleaire lokalisatie van IL(Interleukine)-33 is van vitaal belang, zoals blijkt uit een dodelijke, niet-oplossende ontsteking wanneer het nucleaire lokalisatiesignaal wordt verstoord'.
De belangrijkste cellulaire mediator vanfibroseis de myofibroblast, die, wanneer geactiveerd, dient als de primaire collageenproducerende en contractiele cel voor weefselherstel. Myofibroblasten worden gekenmerkt door de expressie van a-glad spieractine (a-SMAACTA2) dat hun contractiele functie mogelijk maakt en bijdraagt aan het destructieve effect vanfibroseontwikkeling, We hebben eerder aangetoond dat nucleair I-33 snel en sterk wordt geïnduceerd in myofibroblasten tijdens experimentele wondgenezing, bij maagzweren en bij colitis ulcerosa. Inderdaad, expressie van IL(Interleukine)-33 lijkt een algemeen kenmerk te zijn van a-SMA-positieve myofibroblasten, omdat het ook wordt aangetroffen in pancreasfibroseen in de myofibroblast-achtige stellaatcellen van de lever. Alles bij elkaar maken deze bevindingen het interessant om te vragen of IL(Interleukine)-33 zou een rol kunnen spelen bij de regulatie van de functie en differentiatie van myofibroblasten.
We beschrijven hier een nieuwe rol voor nucleaire lL-33 bij het reguleren van het myofibroblast-fenotype. Door middel van genetische deletie of farmacologische remming van IL(Interleukine)-33 in het UUO-model, evenals uitputting van IL(Interleukine)-33 in geactiveerde menselijke primair gekweekte dermale fibroblasten, tonen we aan dat nucleaire IL(Interleukine)-33 remt de vroege conversie naar een volledig myofibroblastisch fenotype en ondersteunt een inflammatoir fenotype. uitputting van IL(Interleukine)-33 verhoogde de expressie van extracellulaire matrixcomponenten COL1Al, COL1A2, COL3A1, COL5A1 en transgelin, maar remde de expressie van het pro-inflammatoire cytokine IL(Interleukine)-6 en chemokinen CXCL8 CCL7 en CCL8. Onze bevindingen introduceren daarom een nieuw perspectief voor het begrijpen van de rol van IL-33 infibroseontwikkeling en weefselhomeostase.
Cistanchetubulosavoorkomtnierziekte, klik hier om het monster te krijgen
Resultaten
Myofibroblasten zijn de dominante IL(Interleukine)-33-tot expressie brengende cellen in UUO van muis.Een recente studie door Chen en collega's rapporteerde verhoogde expressie van IL(Interleukine)-33 en ST2 op dag 4 na eenzijdige ureterobstructie. We benaderden hun experiment door nieren te verzamelen op 1,7 en 21 dagen na UUO in C57BL/6J-muizen, waarbij een gestage toename van IL werd waargenomen(Interleukine)33 mRNA-transcripten (Fig. 1A) en verhoogd aantal cellen die nucleair IL . tot expressie brengen(Interleukine)-33(Afb.1B). We hebben ook transcriptie en eiwitexpressie van type I collageen waargenomen die de ontwikkeling vanfibrose(Afb. IC, D). Vervolgens analyseerden we het fenotype van IL(Interleukine)-33-cellen tot expressie brengen. Net als Chen et al. zagen we dat de IL(Interleukine)-33-tot expressie brengende celsubset die op dag 2 werd gezien, bestond voornamelijk uit a-SMA-positieve myofibroblasten, maar we vonden geen signaal voor IL(Interleukine)-33 in CD31-positieve endotheelcellen noch in CD45-positieve leukocyten (Fig. IE en Figuur S1). We hebben ook IL . waargenomen(Interleukine)-33 in verspreide pericyten (rode pijlpunt in Fig.1A, dag 21 paneel). Een gepaarde immunokleuring voor PDGFRB, een andere marker voor myofibroblasten en pericyten, onthulde uitgebreide colokalisatie (Fig. IE). Bovendien hebben we beoordeeld of IL(Interleukine)33 werd gecolokaliseerd met bekende markers van fibroblastactivering, waarbij werd vastgesteld dat de expressie van S100A4 (ook bekend als fibroblast-specifiek eiwit, FSP -1), eerder tot expressie werd gebracht in endotheelcellen van capillairen en middelgrote bloedvaten (Fig. IE) . Evenzo werd VIM / vimentine ook voornamelijk aangetroffen in endotheelcellen, met name in glomeruli en middelgrote bloedvaten, en was er geen openlijke co-expressie in IL(Interleukine).33-positieve cellen (Fig 1E). Verdere analyse van IL(Interleukine)-33-het tot expressie brengen van myofibroblasten op dag 7 onthulde dat ze voornamelijk gelokaliseerd waren in de cortex en de corticomedullaire overgang. en minder overvloedig in de medulla en papilla (Fig.1F).
Figuur 1. Unilaterale ureterobstructie induceert IL(Interleukine)-33 expressie in muizennieren.
(A,C) Relatieve expressie van 33 en Collal in nieren van gezonde controlemuizen (n=2) of muizen die een schijnoperatie (n=1) of UUO hebben ondergaan na l,7 of 21 dagen (n=3 op elk tijdstip). Transcriptieniveaus werden gekwantificeerd zoals beschreven in Materialen en methoden door qRT-PCR. Gegevenspunten vertegenwoordigen individuele muizen. (B, DF) Representatieve microfoto's van weefselsecties gekleurd voor IL(Interleukine)-33 [bruin signaal in (B) en (F), bruin of groenblauw signaal in (E)], COL1 (bruin signaal in paneel D), Asma (rood, E, F), CD31 (paars, E ),PDGFRB(blauwgroen,E),vimentine (blauwgroen,E) en S100A4(paars,E) in nieren van gezonde controlemuizen of muizen die werden onderworpen aan UUO2 dagen(E),7 dagen(B,D,F) of 21 dagen (B,D)voorheen. Paneel F） toont verschillende delen van de nier zoals aangegeven. Schaalbalken=20 m.
Genetische deletie van I-33 heeft een verwaarloosbare invloed op de progressie van fibrose in UUO, maar medieert een vroege boost van collageensynthese.Vervolgens hebben we de vermeende rol van IL . beoordeeld(Interleukine)-33 door de reactie op nierobstructie in IL . te vergelijken(Interleukine)-33 en wildtype muizen. In tegenstelling tot Chen en collega's, die aangaven verminderdefibroseontwikkeling in IL(Interleukine)-33-deficiënte muizen onderworpen aan UUO, we hebben geen verschil waargenomen tussen IL(Interleukine)33--en WT'muizen in fibrose-ontwikkeling op dag 7 of 21 na UUO door immunohistochemische analyse van type I collageen (Fig. 2A, B). Door de fibrotische respons op transcriptioneel niveau te ontleden door collageentranscripten te evalueren, zagen we echter een vroege, significante opregulatie naar tweevoudig hogere niveaus van Collal-transcripten en een trend naar verhoogde Col3al bij het vergelijken van IL(Interleukine)-33-deficiënte en wildtype nieren op dag 1 (Fig. 2C, D). We hebben daarom besloten om het experimentele ontwerp van Chen et al. door ook monsters te analyseren op dag 4 post-UUO en ST2-deficiënte muizen op te nemen, deze te vergelijken met IL(Interleukine)-33-deficiënte en WT-muizen. Deze analyses onthulden een substantiële toename van Colla2 in IL(Interleukine).33-deficiënte nieren vergeleken met wildtype nieren op dag 4, maar geen overeenkomstige toename van ST-2-deficiënte nieren (Fig 2E). Er was geen duidelijk verschil in Collar- en Col3al-transcriptniveaus tussen genotypen op dag 4, wat aangeeft dat het effect op deze genen van kortere duur is (gegevens niet getoond en Fig.2F).
Figuur 2. Collageenexpressie in IL(Interleukine)-33-/en wildtype nier tijdens UUO.
(A,B) Representatieve microfoto's van weefselcoupes gekleurd voor COL1(bruin)in nieren van I-33--en WT-muizen 7 en 21 dagen na UUO.(C,D)Tijdsverloop waarin mRNA-transcriptie van Collal en Col3al wordt vergeleken in IL(Interleukine)-33--en WT-muizen, met gezonde controlemuizen (n=2), nep-geopereerde muizen (n=1) en muizen die werden onderworpen aan UUO1,7 of 21 dagen eerder (n{{ 7}} op elk tijdstip en van elk genotype). (E, F) Vergelijking van Collal- en Col3al-transcriptie in nieren van IL(Interleukine)-33-,ST2-en WT-muizen 4 dagen na schijnoperatie(n=5 per genotype) of UUO(n=10per genotype). Transcriptieniveaus werden gekwantificeerd door qRT-PCR van mRNA. Gegevenspunten vertegenwoordigen individuele muizen, balken tonen gemiddelde waarden.*p<><><>
IL(Interleukine)-33 verzwakt de expressie van profibrotische genen in de vroege fase van UUO.De verhoogde expressie van Collar en Col31 op dag 1 (Fig. 1CD) en Colla2 op dag 4 (Fig. 2E) in IL(Interleukine).33-deficiënte muizen wezen op een rol van IL(Interleukine)-33 in de vroege reactie op een blessure. We hebben deze mogelijkheid onderzocht door meer dieren op te nemen in een uitgebreid experiment, waarbij we verhoogde transcriptniveaus van Collar, Colla2 en Col3al in IL observeerden.(Interleukine).-33-deficiënte muizen op dag 1 (Fig. 3A-C).
Na te hebben opgemerkt dat IL(Interleukine)-33 in nierweefsels van muizen die werden onderworpen aan UUO gelokaliseerd in celkernen, vroegen we vervolgens of de veranderde genexpressie waargenomen in IL(Interleukine)-33-deficiënte muizen op dag 1 na UUO was te wijten aan het vrijkomen van zijn indrukwekkende, nucleaire IL-33-functie of aan de afwezigheid van extracellulair IL(Interleukine)-33. We hebben de laatste optie aangepakt door toediening van een neutraliserend antilichaam gericht op IL(Interleukine)-33 aan wildtype muizen vóór UUO (Fig. 3D). Deze behandeling reproduceerde niet het fibrogene fenotype van IL(Interleukine)33 mutanten, wat de hypothese versterkt dat de toename in profibrotische genexpressie waargenomen in afwezigheid van IL(Interleukine)-33 was te wijten aan een gebrek aan nucleair in plaats van extracellulair IL(Interleukine)-33.
Figuur 3.IL(Interleukine)-33 verzwakt de expressie van collageen in de vroege fase van UUO.
(AC) Transcriptie van Collal, Colla2 en Col3al in nieren van IL(Interleukine)-33-/en WT-muizen 1 dag na schijnoperatie (n=5 per genotype) of UUO(n=10per genotype). (D) Transcriptie van Col3al in nieren van WT-muizen behandeld met anti-IL(Interleukine)-33, isotype-controle-antilichamen of vehikel voorafgaand aan UUO. Nieren werden 24 uur na UUO(n=10 per behandelingsgroep) of schijnoperatie(n=5) geoogst. Transcriptieniveaus werden gekwantificeerd door qRT-PCR. Gegevenspunten vertegenwoordigen individuele muizen, balken tonen gemiddelde waarden.**p<><>
Transcriptoomanalyse van IL(Interleukine)-33-deficiënte nieren onthullen een profiel van extracellulaire matrixreorganisatie en collageenvorming.Om de vroege reactie op UUO in meer detail te onderzoeken door transcriptionele profilering, werd RNA geëxtraheerd uit nieren van IL(Interleukine)-33-deficiënte en wild-type muizen 24 uur na UUO. Een paarsgewijze Fisher's lineaire discriminant24 werd gebruikt om de top 5 procent (200 genen) differentieel tot expressie gebrachte genen tussen de WT en IL te identificeren(Interleukine)-33-deficiënte nieren die een duidelijke scheiding tussen genotypen onthullen in een hoofdcomponentenanalyse (Fig. 4A). Een niet-stringente aanpak (p<0.05,><0.25, and="" fold="" change="">1.3) identificeerde 134 gedownreguleerde en 46 opgereguleerde probes in de contrast-IL(Interleukine)33−/− (n=5) versus WT (n=4) (Suppl. Tabel S1), waaronder de laatste met name Col1a1, Col1a12 en Col3a1 evenals myofibroblast-geassocieerde Acta2 (Fig. 4B) . Bovendien onthulde genontologie-analyse van differentieel tot expressie gebrachte genen met behulp van DAVID-annotatieclustering (tabel S2) een positieve verrijking voor GO-termen geassocieerd met collagenen en proteaseremmers, evenals PDGF-binding en ECM-receptorinteractie, en negatieve verrijking voor GO- termen geassocieerd met oxidoreductase-activiteit en natriumonafhankelijke aniontransporters.
Figuur 4. Samenvatting van transcriptionele verschillen tussen IL(Interleukine)-33-deficiënte en wildtype muizen 24 uur na UUO.
(A) De 3D-spreidingsplot toont de verdeling van monsters op basis van een hoofdcomponentanalyse van 200 genen. (B) Warmtekaart van top differentieel tot expressie gebrachte genen.
Uitputting van fibroblast IL.33 bevordert een gensignatuur die consistent is met verhoogde afzetting van extracellulaire matrix.De functie van IL . onderzoeken(Interleukine)-33in de dominante IL(Interleukine)Door -33-de celpopulatie van verstopte nieren tot expressie te brengen, hebben we gekweekte menselijke fibroblasten scheefgetrokken naar een myofibroblast-fenotype door ze gedurende 24 uur bloot te stellen aan IFN-y en TGF- na door siRNA gemedieerde knockdowns van I-33. Efficiënte knockdown werd geverifieerd op zowel eiwit- als transcriptniveau (Fig. 5A) en ging gepaard met verhoogde mRNA- en eiwitniveaus van profibrotische COL3A1, COL5A1 en TAGLN (Fig. 5B-D). Eerste analyses wezen op de betrokkenheid van TGF- en brachten ons ertoe om gepoolde, gekweekte menselijke fibroblasten die met siRNA waren behandeld, transcriptioneel te profileren naar IL(Interleukine)-33 en geactiveerd door IFN-y (om IL . te induceren(Interleukine)-33 expressie) of door de combinatie van IFN-y en TGF-B gedurende 24 uur. Deze analyse identificeerde 64 differentieel tot expressie gebrachte genen die geassocieerd zijn met uitputting van IL(Interleukine)-33(bijvoeglijk naamwoord p<0.05 and="" fold="" change="">1.5, Fig. 5E), waarvan 35 gemeenschappelijk waren voor beide cytokinebehandelingen (Fig. 5E, F). Bovendien vertoonden de meeste genen onder beide omstandigheden vergelijkbare trends, zelfs als ze de gekozen drempel voor differentiële expressie slechts onder één van hen bereikten (Fig. 5F), wat de veronderstelling ondersteunt dat het effect van het remmen van IL(Interleukine)-33 was onder beide omstandigheden vergelijkbaar. Voor genontologie-analyse hebben we daarom genen overwogen die differentieel tot expressie werden gebracht door IL(Interleukine)-33 uitputting onder ten minste één voorwaarde en uitgevoerde annotatieclustering (tabel S3), in overeenstemming met onze bevinding in UUO-blootgesteld, IL(Interleukine)-33-deficiënte nieren, we vonden dat remming van IL(Interleukine)-33 in fibroblasten leidde tot verhoogde expressie van genen verrijkt voor GO-termen geassocieerd met collageen en extracellulaire matrixcomponenten. Bovendien werden genen die werden onderdrukt door uitputting van I-33 verrijkt voor GO-termen die geassocieerd zijn met een reactie op ontstekingsstimulatie. Samen impliceren onze gegevens dat IL(Interleukine)-33 expressie in fibroblasten dient om de opregulatie van transcripten gerelateerd aan extracellulaire matrixafzetting en myofibroblastactivering te dempen, terwijl inflammatoire transcripten tot op zekere hoogte worden ondersteund door IL(Interleukine)-33.
Figuur 5. Uitputting van fibroblast IL(Interleukine)-33dwingt een gensignatuur af die consistent is met verhoogde afzetting van extracellulaire matrix.
Expressie van IL(Interleukine)33(A), COL5A1(B), FIBL5(C) en TGLN(D)-expressie in humane fibroblasten behandeld met IL(Interleukine)-33-specifiek en gecodeerd siRNA werd gemeten met gRT-PCR (bovenste panelen) en western blot (onderste panelen). Staven tonen gemiddelde waarden van 4 onafhankelijke experimenten,*p<0.05.(e)venn diagram="" comparing="" differential="" expression="" of="" transcripts="" in="" response="" to="" the="" silencing="" of="">(Interleukine)33 tussen controle en geactiveerde cellen.
(F) Warmtekaart met differentieel tot expressie gebrachte transcripten als reactie op siRNA-silencing van IL(Interleukine)-33 in controle en geactiveerde cellen.
uitputting van IL(Interleukine)-33 in geactiveerde fibroblasten geeft de voorkeur aan myofibroblasten boven een inflammatoir fenotype.Gebaseerd op onze observatie dat het effect van I-33 lijkt aan te houden en in de loop van de tijd prominenter te worden, ook al IL(Interleukine)-33 expressie neemt af (Figuur S2A, B), we vroegen vervolgens of de belangrijkste nucleaire functie van IL(Interleukine)-33 zou de regulatie van fibroblastdifferentiatie kunnen zijn in plaats van directe regulatie van pro-fibrotische effectoren. Na stimulatie ontwikkelen rustende fibroblasten en andere mesenchymale cellen ontstekings- en/of contractiele functies. Het spectrum tussen inflammatoire fibroblasten en contractiele myofibroblasten blijft slecht gedefinieerd en vertegenwoordigt waarschijnlijk een glijdende overgang in plaats van twee verschillende fenotypes. Een recente publicatie van Ohlund et al.23 vergeleek kanker-geassocieerde fibroblasten (CAF's) met rustende pancreasstellaatcellen, waarbij een inflammatoir fenotype werd geïdentificeerd dat iCAF's wordt genoemd (co-gekweekt in Transwells met cytokine-afscheidende tumororganoïden en hoge en lage niveaus van IL(Interleukine)6 en SMA, respectievelijk [IL(Interleukine).dPa-SMAl]) en een contractiel myofibroblastisch fenotype, myCAFs (IL(Interleukine)6"a-SMA-, gekweekt in dichte monolagen), Transcriptionele profilering en vergelijking van iCAF's en mvCAF's identificeerden karakteristieke transcriptionele profielen. Terwijl fibroblasten met een inflammatoir fenotype (iCAF's) hun expressie vaninterleukinesen chemokinen, die met een myofibroblastisch fenotype (myCAF's) werden gekenmerkt door verhoogde expressie van TGF-responsgenen en extracellulaire matrixcomponenten, waaronder collagenen3. We hebben deze dataset gebruikt om handtekeninglijsten te genereren die bestaan uit de top differentieel gereguleerde genen tussen fenotypes en hebben analyses van genensetverrijking uitgevoerd in de GSEA-software. De resultaten gaven aan dat remming van I-33 een contractiel myofibroblastisch fenotype (myFBL) ondersteunde en een inflammatoir fenotype (iFBL) in menselijke fibroblasten remde (Fig. 6A, B, Tabel S4), wat overeenstemt met de resultaten van onze genontologie-analyse . Op dit punt richtten we onze aandacht op IL(Interleukine)6 en CXCL8, cytokines die zijn voorgesteld als markers voor iCAF's, waarbij werd vastgesteld dat hoewel deze genen niet voldeden aan de criteria voor differentiële expressie in onze transcriptoomanalyse, een verlaging van hun expressieniveaus kon worden gedetecteerd door qRT-PCR na uitputting van IL(Interleukine)-33(Afb.6C, D). Van de ontstekingsmediatoren die in onze transcriptoomanalyse werden gedownreguleerd (Fig. 5F), bevestigden we ook een vermindering van expressie voor CCL7 en CCL8 in cellen die werden behandeld met anti-IL(Interleukine)-33 siRNA (Fig. 6E, F).
Deze waarnemingen hebben ons ertoe aangezet om te onderzoeken of onze bevindingen op dag 1 konden worden vertaald naar het UUO-model van muis. Immunohistochemische analyse (Fg.6G) en kwantificering (Fig. 6H) onthulden de inductie van IL(Interleukine)6-tot expressie brengende cellen in wildtype nieren, vergelijkbaar met waarnemingen op transcriptniveau door Chen et al.4. Daarentegen zagen we significant verminderde aantallen IL(Interleukine)-6-positieve cellen in IL(Interleukine)-33- muizen, in goede overeenstemming met onze in vitro gegenereerde gegevens over menselijke fibroblasten.
Figuur 6. Uitputting van IL(Interleukine)-33 verschuift fibroblasten naar een myofibroblastisch fenotype.
(A,B) Analyse van genensetverrijking toonde aan dat cellen behandeld met IL(Interleukine)-33-specifiek siRNA was positief verrijkt voor een myofibroblast (myFBL) versus inflammatoire fibroblast (iFBL)-signatuur en negatief verrijkt voor een inflammatoire versus latente fibroblast-signatuur. (CF) Transcriptie van IL(Interleukine)6(C), IL(Interleukine)8(D), CCL7(E) en CCL8(F) in humane fibroblasten behandeld met IL(Interleukine)33-specifiek of vervormd siRNA werd gemeten met gRT-PCR. Elk gegevenspunt toont gemiddelde waarden van technische drievoud van onafhankelijke experimenten. (G) Representatieve microfoto's van niersecties die 4 dagen na schijn- of UUO-operatie van WT en IL zijn geoogst(Interleukine)-33-/- muizen en immunologisch gekleurd voor IL(Interleukine)-6(bruin signaal). Schaalbalken=100 um.(H)Geblindeerde kwantificering van het signaal dat het gemiddelde aantal positieve cellen per krachtig gezichtsveld opsomt. Individuele gegevenspunten tonen het gemiddelde aantal positieve cellen in één muis, waarbij 3 krachtige velden worden geteld in gebieden met de hoogste dichtheid. *p<>
