Abstract:Fytochemisch onderzoek van zaden van Egyptische mandarijn (Citrus reticulata Blanco, F. Rutaceae) leverde dertien bekende verbindingen op, 1–13. De structuren van geïsoleerde verbindingen werden toegewezen met behulp van 1D- en 2D-NMR- en HRESIMS-analyses. Om de farmacologische activiteit van deze verbindingen te karakteriseren, werden verschillende geïntegreerde op virtuele screening gebaseerde en op moleculaire dynamische simulatie gebaseerde experimenten toegepast. Als resultaat werden verbindingen 2, 3 en 5 vermoedelijk geïdentificeerd als hyaluronidase, xanthine-oxidase en tyrosinaseremmers. De daaropvolgende in vitro tests werden uitgevoerd om de in silico-gebaseerde experimenten te valideren om het potentieel van deze flavonoïden te benadrukken als veelbelovende hyaluronidase-, xanthine-oxidase- en tyrosinaseremmers met IC50-waarden variërend van 6,39 ± 0,36 tot 73,7 ± 2,33 µM . De huidige studie wierp licht op het potentieel van het afvalproduct van de Egyptische mandarijn (dwz de zaden) als een natuurlijk middel dat de gezondheid van de huid bevordert. Bovendien onthulde het de toepasbaarheid van geïntegreerde op inverse docking gebaseerde virtuele screening en op MDS gebaseerde experimenten bij het efficiënt voorspellen van het biologische potentieel van natuurlijke producten.

Glycoside van cistanche kan ook de activiteit van SOD in hart- en leverweefsels verhogen en het gehalte aan lipofuscine en MDA in elk weefsel aanzienlijk verminderen, waardoor verschillende reactieve zuurstofradicalen (OH-, H₂O₂, enz.) door OH-radicalen. Cistanche-fenylethanoïdeglycosiden hebben een sterk wegvangend vermogen van vrije radicalen, een hoger reducerend vermogen dan vitamine C, verbeteren de activiteit van SOD in spermasuspensie, verminderen het gehalte aan MDA en hebben een zeker beschermend effect op de functie van het spermamembraan. Cistanche-polysacchariden kunnen de activiteit van SOD en GSH-Px in erytrocyten en longweefsels van experimenteel senescente muizen veroorzaakt door D-galactose verbeteren, evenals het gehalte aan MDA en collageen in long en plasma verminderen en het gehalte aan elastine verhogen, hebben een goed wegvangend effect op DPPH, verlengt de tijd van hypoxie bij senescente muizen, verbetert de activiteit van SOD in serum en vertraagt ​​​​de fysiologische degeneratie van de longen bij experimenteel senescente muizen Met cellulaire morfologische degeneratie hebben experimenten aangetoond dat Cistanche het goede antioxiderende vermogen heeft en heeft het potentieel om een ​​medicijn te zijn om huidverouderingsziekten te voorkomen en te behandelen. Tegelijkertijd heeft echinacoside in Cistanche een aanzienlijk vermogen om DPPH-vrije radicalen op te vangen en heeft het het vermogen om reactieve zuurstofsoorten op te vangen en door vrije radicalen veroorzaakte collageenafbraak te voorkomen, en heeft het ook een goed herstellend effect op schade door anionen door vrije radicalen van thymine.

Klik op de voordelen van Cistanche-tabletten

【Voor meer info: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

1. Inleiding

Mandarijnen, C. reticulata, zijn enkele van de meest opmerkelijke citrusgewassen voor vers gebruik [1]. Ze worden vaak geïntroduceerd als 'mandarijnen'; 'Mandarijn' is echter de meer populaire naam. Verschillende hybriden en variëteiten van mandarijnsoorten komen in de natuur voor [1]. De meest bekende, verfijnde soorten bestaan ​​uit C. unshiu Marcovitch, C. nobilis Loureiro, C. deliciosa Tenore en C. reticulata Blanco [1,2]. Mandarijnen behoren tot de belangrijkste citrusvruchten die in veel landen worden geoogst. Hoewel de gewassen voornamelijk als dessert worden gebruikt, hebben ze vanwege hun essentiële oliën een aanzienlijk commercieel belang [3]. Citrusaroma's worden toegepast in dranken, zoetwaren, koekjes en desserts [4]. Ook wordt C. reticulata-schil gebruikt voor smaakstoffen van sterke drank [4].

Inverse docking is een soort virtuele screeningmethode die kan worden gemanipuleerd om te anticiperen op de potentiële moleculaire doelen voor een bepaalde samengestelde structuur. Eerder hebben we deze efficiënte virtuele screeningmethode gebruikt om de beste eiwitdoelen voor verschillende geïsoleerde natuurlijke producten te bepalen [5]. De koppelingsscores die het resultaat waren van deze voorbereidende screeningsstap geven echter slechts enige informatie over de structurele complementariteit tussen de eiwitdoelen en de structuur van de queryverbinding [6]. Dienovereenkomstig bieden moleculaire dynamische simulatie (MDS) -experimenten, inclusief absolute bindingsvrije energie (∆Gbinding) meer rigoureuze en betrouwbare resultaten die kunnen worden geselecteerd voor in vitro testen. Hierin hebben we C. reticulata-zaden onderworpen aan een stapsgewijze chromatografische isolatie om enig idee te krijgen van de belangrijkste fytochemische stof in dit afvalproduct. Vervolgens hebben we onderzocht of die fytochemicaliën bepaalde farmacologische effecten hebben door ze te onderwerpen aan een stapsgewijze in silico-gebaseerde analyse die werd geïnitieerd door een uitgebreide inverse docking en eindigde met verschillende MDS-experimenten. Het potentieel van de bioactieve fytochemicaliën afgeleid van de C. reticulata-zaden werpt licht op de hoge capaciteit van de afvalproducten van eetbare vruchten als een enorm reservoir voor gezondheidsbevorderende middelen.

2. materialen en methoden

2.1. Plantaardig materiaal

C. reticulata-vruchten werden in januari 2021 verzameld in een lokale regio in Beni-Suef, Egypte, en gewaarmerkt door een senior botanicus, prof. dr. Abd El-Halim A. Mohammed Department of Flora and Phytotaxonomy Research; Tuinbouw Onderzoeksinstituut; Dokkie; Cairo; Egypte). Een exemplaar van de vruchten werd bewaard onder bonnummer 2021-BuPD 80 op de afdeling Farmacognosie; School voor farmacie; Universiteit van Beni-Suef; Egypte).

2.2. Chemicaliën en reagentia

Ethylacetaat (EtOAc), methanol (MeOH), n-hexaan (n-Hex), ethanol (EtOH), dichloormethaan (DCM) en n-butanol (n-BuOH) werden overgenomen van El-Nasr Company, Egypte. Sigma Aldrich, Saint Louis, MO, VS, leverde gedeutereerde oplosmiddelen voor NMR-analyse, evenals zeer zuivere oplosmiddelen voor HPLC, spectroscopische en chromatografische analyses (bijv. methanol-d4 (CD3OD), dimethylsulfoxide-d6 (DMSO), chloroform -d (CDC13), methanol voor HPLC, water van HPLC-kwaliteit en acetonitril van HPLC-kwaliteit). Voor chromatografische isolatie, Sephadex LH20 (0.25–0,1 mm, GE Healthcare, Sigma-Aldrich; CA, VS) en silicagel (E-Merck, Sigma-Aldrich, CA, VS) waren gebruikt. Voor vacuümvloeistofchromatografie werd een silicagel voor TLC (Pharmaceuticals and Chemicals; El-Nasr Company; Cairo, Egypte) gebruikt (VLC). Voor TLC-onderzoeken werd voorgecoate silicagel (E-Merck, Darmstadt, Duitsland) gebruikt. Geproduceerde plekken werden geïdentificeerd door para-anisaldehyde na verhitting tot 110 ◦C [7]. Alle materialen voor biologisch onderzoek waren afkomstig van Sigma Chemical Company (SCC; CA, VS).

2.3. Spectrale analyses

NMR-signalen werden verkregen bij 400 voor 1H-NMR en 100 MHz voor 13C-NMR. De pieken van het CDCl3-d-, CD3OD-d4- en DMSO-d6-oplosmiddel werden gebruikt als referentiesignalen. Het NMR-signaal werd verkregen met behulp van een NMR-machine Bruker Advance-III 400 MHz (Bruker AG-Billerica, California, MA, VS).

Massagegevens met hoge resolutie werden verzameld met behulp van een Acquity-Ultra-Performance-LiquidChromatography-machine gekoppeld aan een Quadrupole-Time-of-Flight-Hybrid-Mass-Spectrometer (Waters, Milford, MA, VS). Een Agilent/1260-Infinity-preparative-HPLC werd gebruikt om HPLC-chromatografische scheidingen te bereiken.

2.4. Bereiding van C. reticulata-zaadextract

C. reticulata-zaden (1 kilogram) werden vers gekocht en vervolgens in de schaduw aan de lucht gedroogd. Daarna werden de zaden geraspt met behulp van een maalmachine (Henan, China). Het poedervormige product werd vervolgens grondig geëxtraheerd met 70 procent EtOH (1 L x 5). Het resulterende vloeibare extract werd geconcentreerd met behulp van een roterende verdamper (Buchi-Rotavapor-R-300, ColeParmer, Vernon Hills, IL, VS) onder vacuüm bij 45 ◦C om 100 g ruw droog extract, dat vervolgens werd verdeeld met behulp van een reeks oplosmiddelen met toenemende polariteit: n-Hex-DCMEtOAc-n-BuOH. De fracties I (24,0 g), II (5,0 g), III (3,0 g) en IV (6,0 g) werden verkregen door de afgescheiden organische fase bij verlaagde druk in te dampen. Alle extracten en fracties werden bewaard bij 4 ◦C voor daaropvolgende fytochemische en biochemische analyse.

2.5. Isolatie van de belangrijkste natuurlijke producten van C. reticulata Seeds 

TLC-silicagelkolom werd gebruikt om fractie I (20 g) bloot te stellen aan normale VLC. EtOAc en n-Hex opeenvolgende elutie (0–100 procent, 5 procent toenemend) werden gebruikt. Drie subfracties (I1-I3) werden verkregen door identieke fracties te verzamelen en ze onder verlaagde druk te verdampen. Op een andere kiezelgelkolom werd subfractie I1 (1,0 g) uitgebreid gefractioneerd. Chromatografische elutie werd uitgevoerd door n-Hex naar EtOAc, gradiëntmengsels (0-10 procent, 1 procent stijgend, 100 ml elk) om verbinding 13 (10 mg) op te leveren.

Subfractie I2 (50 mg) werd verder gechromatografeerd op silicagel-60 (100 × 1 cm, 20 g). De chromatografische procedure werd uitgevoerd met behulp van DCM: MeOH, isocratisch mengsel (0,5 procent, 500 ml) om verbindingen 8 (20 mg) en 9 (15 mg) op te leveren. Subfractie I3 werd enigszins gefractioneerd op silicagel 60 (100 x 1 cm, 20 g). Elutie geproduceerd met behulp van DCM: MeOH, isocratisch mengsel (0,5 procent, 500 ml) om 10 (20 mg) op te leveren.

TLC-silicagelkolom werd gebruikt om fractie II (2,5 g) bloot te stellen. DCM: EtOAc (0–100 procent , stijgend met 5 procent ) werd gebruikt om de monsters te elueren. De geproduceerde effluenten werden opgevangen in delen van 250 ml. Identieke fracties werden verkregen en teruggebracht tot twee subfracties (II1-II2) bij verlaagde druk. Op een andere kiezelgelkolom werd subfractie I1 (1,0 g) uitgebreid gefractioneerd. Verbinding 5 werd geëlueerd met behulp van DCM: EtOAc (0-10 procent, 1 procent stijgend, 100 ml elk) (10 mg).

Subfractie I2 (50 mg) werd verder gechromatografeerd over silicagel60 (100 x 1 cm, 20 g). Chromatografische elutie werd toegepast met behulp van DCM op MeOH (isocratische elutie; 0,5 procent, 500 ml) om verbindingen 11 (20 mg) en 12 (15 mg) aan te bieden.

Op normale VLC werd fractie IV (6,0 g) gescheiden met behulp van silicagel. DCM: EtOAc (0–100 procent, 5 procent stijgend, elk 250 ml) werd gebruikt om de monsters te elueren. De chromatografische effluenten werden ontvangen in stappen van 250 ml.

Identieke fracties werden gegroepeerd en gereduceerd onder verlaagde druk om vijf subfracties op te leveren (IV1-V5); subfracties IV1, IV2, IV3 en IV4 werden slechts licht gechromatografeerd op een Sephadex-LH20-kolom geëlueerd met MeOH om 4 (30 mg), 6 (50 mg), 7 (70 mg) en 1 (15 mg, respectievelijk, terwijl subfractie IV5 significant zuiver was (10 mg).

2.6. In Silico-studie

2.6.1. Inverse Docking

De waarschijnlijke moleculaire doelwitten voor de gescheiden flavonoïden werden geconcludeerd door hun structuren te onderwerpen aan een virtuele screening, afhankelijk van inverse docking tegen bijna alle eiwitten die in de Protein-Data-Bank werden uitgedeeld; VOB.

Voor deze stap is gebruik gemaakt van het online platform IdTarget. Dit schamele screeningprogramma met virtuele structuur maakt gebruik van een bepaalde inverse docking-methode, namelijk DivideConquer-Docking, die beperkte overlappende netwerken construeert, waardoor het verkennen van het eiwit beperkter wordt. Als gevolg hiervan kan het in korte tijd een groot aantal koppelingen uitvoeren [8]. De resulterende scores werden beschreven als een lijst met beoordelingen, variërend van de slechtste tot de beste. Om de optimale eiwitdoelen voor elke gegeven structuur te identificeren, gebruikten we een affiniteitsscore van −10 kcal/mol als grenswaarde (Tabel 1).

Experimenten met moleculaire dynamische simulatie (MDS) werden uitgevoerd zoals eerder gerapporteerd door Alhadrami et al. 2021 [6]. De MDS-machine van Maestro-software (dwz Desmond v. 2.2; Hamburg, Duitsland) werd gebruikt voor het uitvoeren van MDS-experimenten [9-11]. Het OPLS-Force-Field werd gebruikt voor simulatieruns.

De voorbereiding van de eiwitstructuren werd uitgevoerd door het System-Builder-algoritme, waarin ze werden verpakt in een orthorhombische waterbox (20 Å3 ) met behulp van het TIP3P-watermodel samen met Na plus en Cl-ionen, {{ 16}}.15 miljoen voor elk van hen. Vervolgens werden de geoptimaliseerde gemodelleerde structuren onderworpen aan een voorlopige equilibratie gedurende 10 ns. Ligandstructuren werden automatisch geparametriseerd tijdens de structuurvoorbereidingsstap volgens het OPLSForce-Field. Metaalbevattende eiwitten zoals MMP's waarbij histidine-Zn plus 2-complex op de effectieve plaats is betrokken, moeten worden geparametriseerd tijdens de eiwitvormingsstap. Om verder te gaan, moet een heterotoestand worden ingesteld voor heteroatomen zoals Zn (Generate Hetero States). Deze functie maakt deel uit van de wizard Eiwitvorming van de maestro. Deze stap zal de ontwikkeling van een juiste heterotoestand of gecoördineerde covalente toestand voor het heteroatoom (dwz Zn plus 2) in een netwerk met het eiwit vergemakkelijken, zodat krachtvelden zoals OPLS snel het zinkatoom kunnen waarnemen. Voor reproducties gedaan door Nano-scale Molecular Dynamics-software (NAMD 3.0) [12], werden de topologieën en parameters van gemodelleerde structuren bepaald door het online platform Ligand Reader and Modeler. Harmonische Tcl-krachten werden gebruikt om Zn plus 2 op zijn plaats te houden.

De berekening van bindingsvrije energie (∆Gbinding) werd uitgevoerd zoals eerder beschreven door Alhadrami et al. 2021 [6]. ∆Grinding werd uitgevoerd met behulp van de free energy perturbation (FEP)-procedure [12], die gedetailleerd wordt beschreven in de publicatie van Kim et al. In een notendop, deze techniek berekent de vereiste toegankelijke energie ∆Gbinding met behulp van de vergelijking ∆Gbinding=∆GComplex − ∆GLigand. De waarde van elke ∆Grinding wordt berekend met behulp van het NAMD-programma in afzonderlijke experimenten.

Alle invoerbestanden kunnen worden voorbereid via de website CharmmGUI. De bestanden werden vervolgens gebruikt om de geplande ∆Gbinding-berekeningen te produceren met behulp van het FEP-protocol in NAMD. De equilibratie werd later ingesteld in de NPT (300 K, 1 atm, Langevin-Piston-Pressure "Complex"-"Ligand") in het bestaan ​​van het TIP3P-watermodel. Later werden voor elke structuur 10 ns FEP-simulaties gemaakt en werden de laatste 5 ns van de beschikbare energiehoeveelheden berekend voor de voltooide vrije energietarieven [12]. Uiteindelijk werden de bindende poses geanticipeerd en geëvalueerd door gebruik te maken van het VMD-programma [13].

2.7. In vitro assay van hyaluronidase-activiteit

De activiteit van hyaluronidase-remmend werd gevormd volgens de eerder vastgestelde procedure verleend aan Chaiyana et al. 2019 [14]. Het remmende effect op hyaluronidase-activiteit werd geschat aan de hand van de volgende vergelijking: hyaluronidase-remming ( procent )=(1 − A/B) × 100, waarbij A en B het hyaluronzuurkarakter zijn na behandeling in aanwezigheid of gebrek aan het monster afzonderlijk. Als positieve controle werd 6-O-palmitoyl-lascorbinezuur toegepast. Het experiment werd in drievoud uitgevoerd.

2.8. In vitro assay van xanthine-oxidase-activiteit

Xanthine-oxidase (XO) remmend potentieel werd uitgevoerd volgens de eerder beschreven methode [15]. De kleur die werd geproduceerd vanwege het vrijkomen van waterstofperoxide tijdens het oxidatieproces van XO werd gemeten bij 570 nm met behulp van de plaatlezer EPOCH™ "MICROPLATE READER (BIOTEK)". Vierenveertig microliter xanthine-oxidasebuffer werd gemengd met 2 µl xanthinesubstraatoplossing en 2 µl XO. L-mimosine werd toegepast als een positieve controle. Dit experiment werd in drievoud uitgevoerd.

2.9. In vitro assay van tyrosinase-activiteit

De activiteit van tyrosinase-remmend van elke flavonoïde werd waargenomen met behulp van het DOPAchrome-proces volgens een schema van Momtaz et al.. 2008 [16], gewijzigd van Nerya et al. 2003 [17], en Curto et al. 1999 [18]. De tyrosinase-remmende activiteit werd gemeten met de volgende vergelijking: remmende activiteit ( procent )=(1 − A/B) × 100, (9) waarbij A en B de absorpties van het mengsel zijn in aanwezigheid of afwezigheid van test flavonoïde, respectievelijk. Elk experiment werd in drievoud uitgevoerd.

3. Resultaten en discussie

3.1. Fytochemisch onderzoek van C. reticulata-zaden

Gebruikmakend van UV, 1H en DEPT-Q NMR, naast vergelijking met de literatuur en gebruik van enkele authentieke monsters, de bekende verbindingen kaempferol 1 [19], kaempferol-40 -O- -Dglucopyranoside 2 [19], kaempferol -7-O- -D-glucopyranoside 3 [19], 2-hydroxy genisteïne 4 [19], hesperetin 5 [19], 3000 (1000-O- - D-glucopyranosyl)-sucrose 6 [20], 6(1000 -O- -Dfructofuranosy)-30 (1"-O- -D-glucopyranosyl)-sucrose 7 [20 ], 1-O-elaidoyl-glycerol 8 [21], 1- O-oleoyl-2-palmitoyl-glycerol 9 [22], 1-O-oleoyl-glycerol 10 [ 21], (E)-3-((4-methylheptyloxy)carbonyl)acrylzuur 11 [23], (E)-3-((6-methylnonyloxy) carbonyl)acrylzuur 12 [23] en -sitosterol 13 [24] (Figuur 1) werden geïdentificeerd uit het ruwe ethanolische extract van C. reticulata-zaden. Alle geïdentificeerde verbindingen 11 en 12 werden hierin voor het eerst gescheiden van het geslacht Citrus ( Het is vermeldenswaard dat, in tegenstelling tot de wijdverspreide flavanonen en flavonen in de bovengrondse delen van C. reticulata, inclusief de vruchten, flavonolen het overheersende type flavonoïden in de zaden leken te zijn.

3.2. In Silico-onderzoek

Om de biologische activiteit van de geïsoleerde verbindingen te karakteriseren, hebben we ze onderworpen aan een reeks in-silico-gebaseerde analyses. Eerst hebben we ons gericht op de geïsoleerde flavonoïden (1-5) voor onze eerste virtuele screeningsstap, omdat flavonoïden bekende bioactieve secundaire metabolieten van planten zijn. Bovendien zijn de resterende geïsoleerde verbindingen (6–13) gewone primaire metabolieten die waarschijnlijk geen therapeutische werkzaamheid hebben.

De structuren van flavonoïden 1-5 werden onderworpen aan een op docking gebaseerde virtuele screening tegen bijna alle eiwitten die in PDB worden gehost. Het online platform, namelijk idTarget, werd ingezet voor deze voorbereidende virtuele screeningstaak [8]. De herstelde scores werden opgehaald als een lijst van de grootste negatieve waarde tot de kleinste. We hebben een sluitende affiniteitsscore van −10 kcal/mol vastgesteld als uitschakelwaarde om de goede doelen voor elke geïsoleerde flavonoïde te selecteren (1–5). Verschillende interessante moleculaire doelen bleken waarschijnlijk goede doelen te zijn voor deze verwante verbindingen, waaronder proteïnekinasen en synthasen (Tabel 1).

Interessant is dat er drie gemeenschappelijke moleculaire doelen werden gerapporteerd tussen deze flavonoïden, hyaluronidase, xanthine-oxidase en tyrosinase-enzymen. Deze enzymen zijn gerelateerd aan het behoud van een gezonde huid [25-30], en daarom identificeerde de voorbereidende virtuele screeningstap deze flavonoïden vermoedelijk als waarschijnlijke huidverzorgingsbevorderende middelen.

3.3. Moleculaire Dynamica-simulatie en berekening van absolute bindingsvrije energie

Om de voorlopige op docking gebaseerde screeningstap verder te ondersteunen, hebben we de absolute bindingsvrije energieën (∆Gbinding) van verbindingen 1-5 met hyaluronidase, xanthine-oxidase en tyrosinase-enzymen geschat met behulp van de MDS-afhankelijke methode, namelijk de vrije energie-verstoringsmethode ( FEP) [26,31].

Zoals weergegeven in tabel 2, waren alleen verbindingen 2, 3 en 5 in staat om de hoogste affiniteit voor hyaluronidase, xanthine-oxidase en tyrosinase-enzymen te bereiken met ∆Grinding-waarden variërend van −8,1 tot −9,9 kcal/mol. De overige verbindingen kregen ∆G-bindingswaarden hoger dan −6 kcal/mol.

Verdere 50 ns MDS-experimenten werden uitgevoerd om de interacties en bindingsstabiliteit van verbindingen 2, 3 en 5 met hyaluronidase, xanthine-oxidase en tyrosinase-enzymen te onderzoeken. Zoals afgebeeld in figuur 2, bereikten zowel verbinding 3 als het gecokristalliseerde ligand een vergelijkbare bindingsstabiliteit binnen de bindingsplaats van het enzym in heel MDS met een RMSD van ~2,8 Å vanaf de initiële docking-posities. Verbinding 2 0 s RMSD's waren ook vergelijkbaar met die van verbinding 3 tot 28,7 ns wanneer het iets meer begint af te wijken van verbinding 3 en het gecokristalliseerde ligand om een ​​gemiddelde RMSD van 3,8 Å te bereiken in MDS. De laatste momentopname afgeleid van de MDS van verbindingen 2 en 3 en het gecokristalliseerde ligand gaf aan dat TYR-75, ASP-129 en GLU-131 de meest voorkomende wisselwerkende aminozuurresiduen waren via H- hechting.

Met betrekking tot xanthine-oxidase bereikte verbinding 3 een stabiele binding binnen zijn actieve plaats in MDS, waarbij een gemiddelde RMSD van 2,6 Å werd geregistreerd die convergent was met die van de gecokristalliseerde remmer (RMSD ~ 2,4 Å). Een dergelijke stabiele binding van verbinding 3 was duidelijk te danken aan het netwerk van H-bindingen dat het tot stand bracht met LYS-771, PHE-798, GLU-802, SER-876, ARG{{ 12}}, PHE-911, ARG-912 en THR-1010 (Afbeelding 3).

Ten slotte was verbinding 5 ook stabiel binnen de actieve plaats van de tyrosinase gedurende 50 ns MDS met een gemiddelde RMSD-waarde van 4,9 Å, wat hoger was dan die van de gecokristalliseerde remmer (RMSD ~3,8 Å). Zoals getoond in de laatste MDS-afgeleide momentopname, was verbinding 5 in staat om te interageren met de twee Zn2 plus-ionen op dezelfde manier als de co-gekristalliseerde remmer. Bovendien werd het gestabiliseerd met verschillende H-bindingen met LYS-198, GLY-209, TYR-362, ARG-374 en THR-391 (Afbeelding 4 ).

【Voor meer info: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】