Chemische eigenschappen van een Mannoglucan uit Cistanche Deserticola
Mar 06, 2022
Contact: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com
1. Materialen
Orale pasta's voor paarden van twee verschillende fabrikanten werden gebruikt met respectievelijk 10 mg / g (A) of 20 mg / g (B) ivermectine. De kwantitatieve test voor ivermectine werd uitgevoerd en het gehalte was 104,4- 107,7% van de aangegeven concentratie.
2. Oplosproef
De test werd uitgevoerd met een Ph. Eur. paddle-apparaat (Pharma Test, Heinberg, Duitsland), bij agitaties van 75 rpm of 50 rpm, bij 37 -0,5 C. Natriumlaurylsulfaat (BDH Chemicals, Poole, Engeland) 0,5% (w / v) waterige oplossing werd gebruikt als een oplossingsmedium (900 ml). De pasta (4 g A of 2 g B) werd in het vat geplaatst met een spuit met een canule (A) of liet het monster aan het oppervlak van het oplosmedium vallen (B). Na de tijdsintervallen (15, 30, 45, 60 min en 2 uur) werd een monster van het oplosmedium teruggetrokken (2 ml), gefilterd door een glazen filter en geanalyseerd.
3. HPLC-analyse
De bepaling van ivermectine werd uitgevoerd met een gemodificeerde HPLC-methode zoals beschreven in Ph. Eur. De geanalyseerde oplossingen werden verdund met methanol (1: 10). Het HPLC-systeem bestond uit een octadecylle (250 -4 mm; 5 mm; Lichrospher RP-18; Merck), een integrator D-12500 A, een detector UV-Vis L-4250, pomp L-6200A (Merck-Hitachi, Darmstadt, Duitsland). Een mengsel van acetonitril: methanol: water (64: 24: 16) werd gebruikt als de mobiele fase met een debiet van 1,9 ml/min. Het volume van het geïnjecteerde monster was 20 ml en de detectie werd uitgevoerd bij 254 nm.
4. Oplosbaarheidsstudies
Een toegang van de stof werd geschud in goed gesloten glazen kolven met een geschikt oplosmiddel (tabel 1) gedurende 20 uur bij 37 0,1 C. De suspensies werden gefilterd en het filtraat, na verdunning in methanol, werd geanalyseerd met HPLC.
5. Stabiliteit in zure oplossing
Oplossingen van ivermectine in HCl 0,1 M werden opgeslagen in goed gesloten glazen injectieflacons bij 20 C en 37 C. Chromatogrammen van de oplossingen werden geregistreerd bij t 1/4 0 en na 1, 2 en 6 uur. De oppervlakte van het ivermectine (retentietijd 10,5 min) en extra pieken werden berekend.
Verwijzingen
FDA-richtlijnen voor de industrie: SUPAC-SS niet-steriele semisolide doseringsvormen. Opschaling en postgoedkeuringswijzigingen: chemie, productie en controles; in vitro release testen en in vivo bio-equivalentie documentatie. Mei 1997. FIP-richtlijnen voor het testen van vaste orale producten (1997) Dissolute. Techniek 4: 5–14. Siewert M, Dressman J, Brown C, Shah VP (2003) FIP/AAPS guidelines to dissolution/in vitro release testing of novel/special dosage forms, AAPS PharmSciTech, 4 (1) article 7 Modern Research Center for Traditional Chinese Medicine, School of Pharmaceutical Sciences, Peking University Health Science Center, Beijing, China
Xiang mei Wu, Pengfei Tu Ontvangen 13 februari 2004, geaccepteerd 4 april 2004, Prof. Dr. Pengfei Tu, Modern Research Center for Traditional Chinese Medicine, School of Pharmaceutical Sciences, Peking University Health Science Center, No. 38, Xueyuan Road, Haidian District, Beijing 100083, China Pengfeitu@bjmu.edu.cn Pharmazie 59: 815-816 (2004)
Een nieuwe mannoglucan vanCistanche deserticola |uit China wordt gekenmerkt. De verbinding is verantwoordelijk voor een milde stimulatie van mitogeen-geïnduceerde T- en B-lymfocytenproliferatie.
Cistanche deserticola |Y. C. Ma is een holoparasiet die groeit op de wortels van de tweezaadlobbige plant Haloxylon ammodendron Bunge die wijd verspreid is in het noordwesten van China. Omdat het een belangrijk tonicum is in de oosterse geneeskunde, zijn veel actieve componenten en farmacologische activiteiten geclaimd (Karasawa et al. 1986; Yoshizawa et al. 1990). Deze eigenschappen kunnen worden geassocieerd met sommige van de polysaccharide componenten vanCistanchedie nog niet zijn onderzocht. Mitogene pectische polysachariden en neutrale polysachariden zijn geïsoleerd en gekenmerkt uitCistanche deserticola |uit Mongolië (Radna et al. 1996; Anna et al. 1997; Bozena et al. 1999). Hier rapporteren we de chemische eigenschappen van een nieuwe mannoglucan vanCistanche deserticola |uit China, dat verantwoordelijk is voor milde stimulatie van mitogeen-geïnduceerde T- en B-lymfocytenproliferatie. Na de stengels vanCistanche deserticola |Y. C. Ma werden geëxtraheerd met 95% ethanol, koud gedestilleerd water werd gebruikt om het residu te extraheren. Het koudwaterextract werd neergeslagen met EtOH, het eiwit werd verwijderd en gedialyseerd, waardoor de ruwe polysaccharide CCDP werd verkregen. De ruwe polysacharide werd gefractioneerd op een DEAE-kolom en een Sephadex G-150-kolom om een eiwitvrije polysaccharide (CDP-6) te betalen, die bestond uit glucose (89,2%) en mannose (10,4%), en waarvan de gemiddelde Mr werd geschat op 6,8 -104. De polysaccharide CDP-6 toonde [een 20 D 42 (c 1, H2O). De absolute configuraties van de suikers werden bepaald door GC van TMS (– )-2-butylglycosiden. CDP-6 werd gemethyleerd (Needs et al. 1993), gehydrolyseerd, omgezet in de alditolacetaten en geanalyseerd door GC en GC-MS (tabel). Dit resultaat samen met molaire ratiogegevens van methylatieanalyse suggereerde dat CDP-6 een overwegend 1,6-gebonden Glcp heeft en een backbone 1,6- gekoppeld in kleinere mate vertakt op O-3 van mannose. De methylatieanalyse van twee polymeren (CDP-6-1, CDP-6-2) uit partiële hydrolyse bevestigde dat CDP-6 een ruggengraat heeft die bestaat uit 1,6-gebonden glucosylresiduen en 1,6-gebonden mannosylresiduen, die bij O-3 van mannose worden vervangen door takken bestaande uit de terminale, 1,6-gebonden glucosylresiduen en 1,3,6-gebonden mannosylresiduen. Volgens molaire verhoudingen en de literatuur (Bozena et al. 1999; Bacon et al. 1996), toonde het 13C NMR-spectrum van CDP-6 signalen als gevolg van anomere koolstofatomen van de a- d-Glcp (C-1 bij 98,4 ppm), bd-Map (C-1 bij 104,3-104,9 ppm) en a-d-Map (C-1 bij 100,0 ppm). Het 1 H NMR-spectrum van CDP-6-2 in D2O toonde protonsignalen die overeenkomen met de a-d-Glcp (H-1 bij 4,94-4,95 ppm) en a- d-Map (H-1 bij 4,96-5,00 ppm). Het 13C NMR-spectrum van CDP-6-2 in D2O toonde protonsignalen die overeenkomen met de a-D-Glcp (C-1 bij 98,6 ppm) en a-d-Map (C-1 bij 98,4ppm). Van Mannoglucanen wordt gemeld dat ze een 1,4-gebonden glucopyrannan en 1,4-gebonden mannopyrannan-ruggengraat hebben (Radjabi Nassab et al. 1984; Tanabe et al. 2000). CDP-6 heeft een aantal verschillende structurele kenmerken door zijn a-1,6-gekoppelde Glcp en b-1,6-gekoppelde mapbackbone, en het wordt vervangen door mannoglucan-takken (fig.). Om het gebruik vanCistanche deserticola |in de volksgeneeskunde werd het effect van CDP-6 op de T- en B-celsystemen geëvalueerd. Het bleek de door mitogenen geïnduceerde T- en B-lymfocytenproliferatie mild te stimuleren.
Experimenteel
1. Algemene procedures
Optische rotatie werd gemeten met een W22-1S automatische polarimeter. IR-spectra werden bepaald op een Perkin-Elmer 599B spectrometer. GC-analyse werd uitgevoerd op een Agilent HP6890N-instrument, uitgerust met een FID-detector. GC-MS werd uitgevoerd op een Finnigan Trace GC-MS instrument. Homogeniteit en mr. van CDP-6 werden geschat op basis van de kalibratiecurve van het elutievolume van standaard dextrans, die werd uitgevoerd op
een Agilent 1100-serie apparaat met een Shodex KS-805 kolom.1 H NMR en 13C NMR spectra werden geregistreerd met een INOVA-500 instrument. Eiwitgehalte werd geanalyseerd met de methode van Bradford (Andre et al. 1975). Monosacchariden werden geanalyseerd op hun alditolacetaat nadat ze waren gehydrolyseerd (2 M TFA, 2 h, 110 C), gereduceerd en geaceteerd. De hydrolysaten werden geanalyseerd met behulp van TLC op een silicagelplaat met 5% natriumdiwaterstoffosfaat in BuOH-EtOAc-isopropylalcohol-HOAC--H2Opyridine (3,5: 10: 6: 3,5: 3: 3) en suikers werden gedetecteerd door te spuiten met orcinol-H2SO4. De resulterende alditolacetaten werden geanalyseerd door GLC met behulp van een HP-5 capillaire kolom (30 m 0,32 mm). CDP-6 werd gemethyleerd door de Ciucanu-methode, gevolgd door hydrolyse, en werd geanalyseerd als gedeeltelijk gemethyleerde alditolacetaten door GC-MS. Na gedeeltelijke hydrolyse werden de producten gedialyseerd en gescheiden, waarbij twee polymeren werden verkregen, CDP-6-1 en CDP-6-2.
2. Plantaardig materiaal
De plant werd in augustus 2001 verzameld in de provincie Binnen-Mongolië in China en werd geïdentificeerd door Hu-Biao Chen, Department of Natural Medicine, School of Pharmaceutical Sciences, Peking University Health Science Center. Een voucher specimen [E-1-(9)] van deze plant werd gedeponeerd bij de School of Pharmaceutical Sciences, Peking University. 3. Extractie, isolatie en zuivering van polysaccharide CDP-6 De stengel vanCistanche deserticola |Y. C. Ma (1500 g) werden geëxtraheerd met 95% ethanol (6 L) onder reflux. Het gedroogde ethanol-onoplosbare residu werd driemaal gemacereerd met koud gedestilleerd water per 12 uur. Het koudwaterextract werd gefilterd en het filtraat gecentrifugeerd. Na neerslag met vier volumes EtOH (roeren en 24 uur staan bij 4 C) werd het neerslagproduct (35,5 g) verkregen. Het eiwit in het neerslag werd verwijderd door de methode van Savage. Na oplossing in gedestilleerd water werd het residu (25,5 g) gedialyseerd en gelyofiliseerd (opbrengst: 10,6 g). De ruwe polysacharide (8 g) werd opgelost in gedestilleerd water (100 ml, 8% w/v) en gescheiden met behulp van een DEAE-kolom (70 5 cm, de gradiënt van 0-2 M NaCl, per 1,5 l). Een water geëlueerde fractie (600 mg) werd verkregen. Een monster (250 mg) werd gezuiverd door kolomgel-permeatiechromatografie op een Sephadex G- 150 kolommen (4 - 80 cm, 1600 ml, 5 ml per fractie). Fracties van CDP-6 (1500-1600 ml) werden samengevoegd, gedialyseerd en gevriesdroogd. Na ontzouting door Sephadex G-25 (60 1 cm). CDP-6 (110 mg) werd verkregen en bepaald als een enkele piek door HPSGC.
Erkenning:De auteur bedankt Dr. Baomei Shao en Prof. Xiaoming Gao, School of Basic Medical Sciences, Peking University Health Science Center, voor het meten van de immunomodulerende activiteit van CDP-6.
