Circulair RNA CircDVL1 remt progressie van niercelcarcinoom met heldere cellen via de MiR-412-3p/PCDH7-as

Abstract

Heldercellig niercelcarcinoom (ccRCC) is een primaire nierkanker met een hoog agressief fenotype en een extreem slechte prognose. Steeds meer bewijs suggereert dat circulaire RNA's (circRNA's) een centrale rol spelen bij het ontstaan ​​en de ontwikkeling van verschillende vormen van kanker bij de mens. De expressie, klinische betekenis en regulerende rol van circRNA's in ccRCC blijven echter grotendeels onduidelijk. Hier rapporteren we dat circDVL1 is verminderd in de serums en weefsels van ccRCC-patiënten en negatief correleert met ccRCC kwaadaardige kenmerken. Overexpressie van circDVL1 remt proliferatie, induceert G1/S-arrestatie, triggert apoptose en vermindert migratie en invasie in verschillende ccRCC-cellen in vitro. Dienovereenkomstig onderdrukt de overexpressie van circDVL1 de ccRCC-tumorigeniciteit in een xenotransplantaatmodel van een muis. Mechanisch gezien dient circDVL1 als een spons voor oncogene miR-412-3p, waardoor miR-412-3p-gemedieerde repressie van zijn doelwit protocadherine 7 (PCDH7) in ccRCC-cellen wordt voorkomen. Gezamenlijk tonen onze resultaten aan dat circDVL1 een tumoronderdrukkende functie uitoefent tijdens ccRCC-progressie via de circDVL1/miR-412-3p/PCDH7-as, en suggereren dat circDVL1 een nieuwe diagnostische en prognostische marker en therapeutisch doelwit voor ccRCC zou kunnen zijn.

Trefwoorden

circDVL1; Niercelcarcinoom; miR-412-3p; PCDH7; biomarker

Klik hier om te zien wat de voordelen zijn van Cistanche

Invoering

Niercelcarcinoom (RCC) is een uiterst dodelijk kwaadaardig carcinoom van het urologische systeem en heeft ernstige gevolgen voor de gezondheid van de mens [1]. De incidentie van RCC is de afgelopen decennia toegenomen, met 73.750 nieuwe gevallen gediagnosticeerd in de Verenigde Staten in 2020 [2, 3]. Clear cell RCC (ccRCC), het meest voorkomende en agressieve subtype van RCC, is goed voor 70-75 procent van de RCC-gevallen [4]. Belangrijk is dat meer dan 30 procent van de ccRCC-patiënten in verband wordt gebracht met metastase bij de eerste diagnose. Bovendien, hoewel radicale chirurgie de belangrijkste behandelingsoptie is voor primaire ccRCC, ervoer nog steeds ongeveer 40 procent van de patiënten terugval en metastasen met een totale overleving van 5-jaar van minder dan 10 procent [5, 6]. Deze dilemma's onderstrepen de dringende noodzaak om de moleculaire mechanismen te onderzoeken die ten grondslag liggen aan de ontwikkeling van ccRCC, zowel als diagnostische en prognostische biomarkers als als potentiële therapeutische doelen.

Circulaire RNA's (circRNA's) zijn niet-coderende RNA's met enkelketenige gesloten-lusstructuren waardoor ze zeer stabiel zijn [7, 8]. Recente studies hebben aangetoond dat circRNA's overvloedig aanwezig zijn in bloed [9, 10], speeksel [11] en exosomen [12], wat aangeeft dat ze zouden kunnen dienen als nieuwe diagnostische biomarkers [13]. Aangezien vloeibare biopsie minder invasief is dan traditionele weefselbiopsie [14], worden circRNA's beschouwd als waardevolle voorspellende hulpmiddelen voor precisiegeneeskunde [15-17]. In het bijzonder kunnen verschillende circRNA's, zoals cricNOX4, circEGLN3 en circPRRC2A, fungeren als potentiële biomarkers voor RCC-diagnose en/of -prognose, die zijn samengevat in onze recente review [18]. Bovendien richt het huidige onderzoek zich voornamelijk op de afwisseling van circRNA-expressie in ccRCC-weefsels [19, 20], maar hun niveaus in vloeibare biopsie blijven grotendeels onbekend, wat de verkenning van potentiële biomarkers belemmert. Bovendien, hoewel is aangetoond dat verschillende circRNA's, waaronder circHIAT1 [21], circ-AKT3 [22] en cRAPGEF5 [23], een belangrijke rol spelen bij de initiatie en progressie van ccRCC [18], is systematisch onderzoek naar circRNA's die betrokken zijn bij ccRCC ontwikkeling, evenals hun onderliggende moleculaire mechanismen, ontbreken nog.

Hier bepaalden we eerst de expressie van circRNA's in serummonsters van ccRCC-patiënten en gezonde controles met behulp van een circRNA-microarray. Het is veelbetekenend dat we een nieuw ccRCC-geassocieerd circRNA circDVL1 (karkas-ID: hsa_circ_ 0009267) hebben geïdentificeerd, dat is gecodeerd in het DVL1-gen. CircDVL1 is significant verlaagd in serum van ccRCC-patiënten, en de expressie ervan is omgekeerd gecorreleerd met ccRCC Fuhrman-grading, wat het potentieel als biomarker suggereert. Bovendien is CircDVL1 verlaagd in ccRCC-tumorweefsels. Dienovereenkomstig kan circDVL1 proliferatie remmen, celcyclusstilstand induceren, apoptose veroorzaken en ccRCC-celmigratie en -invasie verminderen. Mechanisch functioneert circDVL1 als een miR-412-3p-spons om de expressie van PCDH7 op te waarderen. Gezamenlijk identificeren deze bevindingen circDVL1 als een tumoronderdrukker voor ccRCC en suggereren het potentieel ervan als zowel een diagnostische biomarker als een therapeutisch doelwit.

Cistanche-supplement

Materialen en methodes

1. Klinische monsters

Dit onderzoek is goedgekeurd door de ethische commissie van het First Affiliated Hospital van de Zhejiang University (2021-104). Achttien gematchte monsters van ccRCC en aangrenzende niet-tumorweefsels werden verzameld van ccRCC-patiënten. De monsters werden na de operatie snel geconserveerd in vloeibare stikstof en vervolgens bewaard bij -80 graden tot verder gebruik. Serumspecimens van 60 ccRCC-patiënten en 66 gezonde controles werden verzameld. Vervolgens werden de monsters verwerkt met behulp van geschikte methoden en het verkregen serum werd tot verder gebruik bij -80 graden bewaard.

2. Cellijnen en celcultuur

Alle cellijnen zijn gekocht bij de National Collection of Authenticated Cell Cultures (China). 786-O- en Caki-1-cellen werden gekweekt in RPMI 1640 (HyClone), ACHN-cellen werden gekweekt in MEM (HyClone) en 293T-cellen werden gekweekt in DMEM (Gibco)-media. Alle celkweekmedia werden aangevuld met 10 procent foetaal runderserum (Gibco) en 1 procent penicilline en streptomycinemengsel (Gibco). Celkweken werden bewaard in een bevochtigde incubator bij 37 graden en 5 procent CO2₂.

3. CircRNA microarray-analyse

CircRNA-microarrayprofilering in serummonsters werd uitgevoerd met behulp van een Arraystar menselijke CircRNA Array V2 (Capital Biotechnology, China). GeneSpring-software V13.0 (Agilent Technologies) werd gebruikt voor gegevenssamenvatting, normalisatie en microarray-kwaliteitscontrole. CircRNA's met een drempel van de vouwverandering van Groter dan of gelijk aan 2 en Kleiner dan of gelijk aan −2 en P-waarde < 0.05 werden als statistisch significant beschouwd. Hiërarchische clusteranalyse werd uitgevoerd met behulp van gestandaardiseerde Euclidische afstand met volledige koppeling.

4. RNA-sequencing (RNA-seq) en data-analyse

RNA-seq van de volgende generatie werd uitgevoerd zoals eerder beschreven [24, 25]. miR-412-3p en controle mimic-getransfecteerde 786-0 cellen werden gebruikt voor RNA-sequencing. Bibliotheekconstructie en bioinformatica-analyses van de onbewerkte gegevens werden uitgevoerd door Novogene Co., Ltd. (Beijing, China). De RNA-seq-gegevens werden gedeponeerd in Gene Expression Omnibus (GEO) onder toegangsnummer GSE175492.

5. RNA-extractie en realtime kwantitatieve RT-PCR (RT-qPCR)

RT-qPCR werd uitgevoerd zoals eerder beschreven [26, 27]. Totaal RNA werd geïsoleerd uit serum, cellen en tumorweefsels met behulp van AG RNAex Pro Reagent (AG, Hunan, China). Voor circRNA-detectie werd 1 ug totaal RNA gedigereerd met RNase R (3 U / ug, Epicenter Technologies, Madison, VS, Cat # RNR07250) bij 37 graden gedurende 10 minuten, en complementair DNA (cDNA) werd gegenereerd met behulp van de HiScript II 1st Streng cDNA-synthesekit (Vazyme). CircRNA- en mRNA-expressieniveaus werden genormaliseerd naar -actine. Om miRNA-expressie te bepalen, werd reverse transcriptie uitgevoerd met een miR-XTM miRNA First-strand Synthesis-kit (Takara Bio USA, CA, VS, Cat. # 638313) met U6 (Rnu6-1) expressie als een endogene controle. Het relatieve RNA-expressieniveau werd bepaald met de 2-ΔΔCt-methode. Alle primersequenties voor qRT-PCR-analyse worden weergegeven in Tabel S2.

6. Plasmideconstructie en stabiele transfectie

Om de circDVL1- en circDVL1-MUT-overexpressievector te construeren, werden de circDVL1- en gemuteerde circDVL1-sequentie gekloneerd in de pcDNA 3.1(plus) Laccase 2 MCS Exon-vector, die was besteld bij Addgene (#69893) [28]. ACHN- en 786-O-cellen werden getransfecteerd met circRNA en negatieve controlevectoren met behulp van Lipofectamine 3000 (Invitrogen, Carlsbad, CA). Na 48 uur werden stabiel getransfecteerde cellen die circDVL1 tot expressie brachten geselecteerd door toevoeging van 800 µg/ml G418 aan het kweekmedium.

7. Levensvatbaarheid van de cellen

De levensvatbaarheidstest van de cellen werd bepaald met de CCK8-kit (Dojindo Laboratories, Kumamoto, Japan, Cat # CK04), zoals eerder beschreven [29]. 786-O en ACHN circDVL1 tot overexpressie brengende en controlecellen werden gezaaid in 96-putjesplaten. CCK8-oplossing (10 μl) werd op het aangegeven tijdstip toegevoegd en gedurende 2 uur bij 37 graden geïncubeerd, en de absorptie werd gemeten met behulp van een spectrofotometer.

Herba Cistanche

8. Kolonievorming

Kolonievormingstesten werden uitgevoerd zoals eerder beschreven [24]. ACHN (800 cellen/putje) en 786-O-cellen (400 cellen/putje) werden 10 dagen gekweekt en vervolgens gefixeerd met 4 procent paraformaldehyde gedurende ongeveer 30 minuten, gevolgd door kleuring met 0,1 procent kristalviolette oplossing gedurende ongeveer 15 min. Klonen met meer dan 50 cellen werden geteld als een enkele kolonie.

9. Analyse van de celcyclus

Cellen werden 's nachts gesynchroniseerd in RPMI 1640-medium zonder FBS en schakelden de volgende 48 uur over op medium met 10 procent FBS. De cellen werden gewassen, opnieuw gesuspendeerd in 70 procent ethanol in PBS en overnacht bewaard bij -20 graden. Vervolgens werden cellen gekleurd met propidiumjodide (PI) -oplossing die RNase A bevat voor analyse van de celcyclus.

10. Apoptose-analyse

ACHN- en 786-O-celapoptose-analyse werd uitgevoerd met een Annexin V-FITC/PI-apoptosedetectiekit (Beijing Biosea Biotechnology, China) volgens de instructies van de fabrikant.

11. Celmigratie- en invasieassays

In vitro werd de celmigratiecapaciteit geëvalueerd met behulp van transwell-kamers met polycarbonaatmembranen met poriën van 8 μm (Millipore, MA, VS). Celinvasietesten werden uitgevoerd met de transwell-kamers bekleed met 100 μl Matrigel (BD Biosciences, VS). 786-O-cellen (2x104) of ACHN-cellen (4x104) werden gesuspendeerd in 200 μl RPMI 1640 zonder serum en geënt in de bovenste transwellkamers, en vervolgens werd 600 μl medium met 20 procent FBS toegevoegd in de onderste kamers. Vervolgens werden cellen gedurende 24 uur gekweekt om de migratie te meten en gedurende 48 uur om de invasie te evalueren. Cellen in de bovenste kamer werden zorgvuldig geschraapt en cellen in het onderste compartiment werden gefixeerd met 4 procent paraformaldehyde en gekleurd met kristalviolet. Beelden werden verkregen en cellen werden geteld met een microscoop.

12. Western-blot

Het totale eiwit werd geëxtraheerd, gekwantificeerd en gescheiden op 10 procent SDS-PAGE-gels en vervolgens overgebracht naar polyvinylideendifluoridemembranen (Millipore, MA, VS), die werden geïncubeerd met primair anti-glyceraldehyde3-fosfaatdehydrogenase (GAPDH) (Proteinch, 60004-1-Ig), anti-PCDH7 (Abcam, ab139274) primaire antilichamen bij 4 graden 's nachts.

13. Immunofluorescentiekleuring

Cellen werden gedurende 24 uur op dekglaasjes gezaaid en gefixeerd met 4 procent paraformaldehyde, permeabel gemaakt met 0,2 procent Triton X-100 gedurende 20 minuten en geïncubeerd met 5 procent runderserumalbumine. Vervolgens werden de cellen geïncubeerd met een primair antilichaam dat specifiek is voor Ki67 (1:400, ab48027, Abcam) bij 4 graden overnacht, en vervolgens geïncubeerd met een 488-geconjugeerd anti-konijn IgG van geit (1:150, D110088, Sangon ) bij 37 graden gedurende 1 uur. De cellen werden gekleurd met 4′,6-diamidino-2-fenylindool (DAPI) en beelden werden verkregen met een Leica fluorescentiemicroscoop (DM4000).

14. In vivo tumorvorming en Ki67-kleuring

Zes weken oude mannelijke BALB/c naakte muizen (gekocht bij Shanghai SLAC) werden verdeeld in 2 groepen (n=5 voor elke groep). Muizen werden geïnoculeerd met ongeveer 3 x 106 controlecellen of circDVL1 die ACHN-cellen tot overexpressie brengen door subcutane injectie. De tumorgrootte werd elke 3 dagen gemeten met een glijdende schuifmaat, te beginnen op dag 6 na de injectie. Het tumorvolume werd berekend als lengte × breedte × hoogte/2. Alle experimenten werden uitgevoerd volgens de richtlijnen voor de verzorging en het gebruik van laboratoriumdieren (NIH-publicatie 80-23, herzien 1996) en werden goedgekeurd door de Animal Care Committee van de Zhejiang University, Hangzhou, China.

Cistanche-capsules

15. Fluorescentie in situ hybridisatie (FISH)

Een circDVL1 dubbel-digoxigenine (DIG) - mierikswortelperoxidase (HRP) -sonde (Exon Biotechnology, Guangzhou, China) werd gesynthetiseerd. Controle- en circDVL1-cellen die ACHN tot overexpressie brengen, werden gekweekt op dekglaasjes en gedurende 24 uur bij 37 graden geïncubeerd met de gelabelde sonde. Na het wassen werden de objectglaasjes gedurende 1 uur bij 37 graden geïncubeerd in een anti-DIG secundair antilichaam. Een tyramine-signaalversterkingsmethode werd gebruikt om circDVL1-signalen te detecteren en cellen werden tegengekleurd met DAPI. Voor co-FISH werden dekglaasjes geïncubeerd met DIG-gelabeld circDVL1 en biotine-gelabeld miR-412-3p.

16. RNA-immunoprecipitatie (RIP)-assay

RIP-assays werden uitgevoerd met de Magna RIP ™ RNA-Binding Protein Immunoprecipitation Kit (Millipore, MA, VS). 786-O-cellen werden gelyseerd in volledige RIP-lysisbuffer en vervolgens geïncubeerd met immunoprecipitatiebuffer die magnetische bolletjes bevatte die werden geconjugeerd met AGO2 (Abcam, MA, VS) of IgG-antilichaamcomplex bij 4 graden overnacht. Vervolgens werden immuungeprecipiteerde RNA's getest met RT-qPCR.

17. Dual-luciferase-reportertest

CircDVL1-, PPM1H-3'UTR- en PCDH7-3'UTR-sequenties, die gemuteerde miR-412-3p-bindingsplaatsen en hun overeenkomstige gemuteerde sequenties bevatten, werden gesynthetiseerd en vervolgens gesubkloneerd in de luciferasereporter vector psiCHECK-2 (Promega) om de circDVL1-WT, circDVL1-Mut1, circDVL1-Mut2, PPM1H-3'UTR-WT, PCDH{ te produceren {14}}'UTRWT-, PCDH7-3'UTR-Mut1- en PCDH7-3'UTR-Mut2-vectoren. De verschillende 3'UTR-sequenties van PPM1H en PCDH7 bevatten het fragment van 500 bp dat potentiële miR-412-3p-bindingsplaatsen bevat (geflankeerd door 250 bp). De relatieve luciferase-activiteit werd beoordeeld met een dual-luciferase-reporterassay (Promega, VS). Alle assays werden uitgevoerd in drie onafhankelijke herhalingen.

18. Statistische analyse

Statistische analyses zijn uitgevoerd met GraphPad Prism 7.0 (GraphPad Software, La Jolla, CA). De verschillen tussen groepen werden beoordeeld met Student's t-tests of one-way variantieanalyse (ANOVA). Verschillen tussen groepen werden als statistisch significant beschouwd wanneer P-waarden < 0.05 waren.

Discussie

Er zijn verschillende typen ccRCC-biomarkers voorgesteld en experimenteel geëvalueerd, waaronder mRNA's [32], miRNA's [33], lncRNA's [34] en circRNA's [35]. Geen van hen is echter bevestigd als nauwkeurige diagnostische biomarkers voor routinematig klinisch gebruik bij ccRCC-patiënten. Hier illustreerde onze studie dat circDVL1 een belangrijke rol speelt bij de progressie van ccRCC. Eerst hebben we serum van ccRCC-patiënten en gezonde controles gescreend om differentieel tot expressie gebrachte circRNA's te identificeren met behulp van een circRNA-microarray. De RT-qPCR-gegevens onthulden dat circDVL1 drastisch was verlaagd in ccRCC-monsters. Eerdere studies hebben aangetoond dat circRNA's kunnen dienen als latente serumbiomarkers bij verschillende kankers [36, 37]. Bijvoorbeeld Bei et al. toonden aan dat exosomale has-circ-0004771 verhoogd was in serum verzameld van colorectale kankerpatiënten [38]. Desalniettemin is onderzoek naar de specifieke rol van circRNA als niet-invasieve biomarker in ccRCC nog beperkt. Onze studie onthulde dat circDVL1 significant verlaagd was in serum van ccRCC-patiënten en dat de verminderde expressie van serum circDVL1 mogelijk afkomstig is van een tumor. Bovendien had het serum circDVL1-niveau een significante diagnostische waarde bij het onderscheiden van patiënten met Fuhrman graad I-II en Fuhrman graad III-IV tumoren. Daarom zou serum circDVL1 een veelbelovende diagnostische marker voor ccRCC kunnen zijn. Verschillende gezonde patiënten vertoonden echter lage niveaus van circDVL1 in hun serum, wat aangeeft dat patiëntmonitoring uitsluitend op basis van de analyse van dit circulerende RNA zou kunnen leiden tot vals-positieve resultaten. Daarom is de waarde van circDVL1 als een enkele diagnostische marker enigszins beperkt en moet mogelijk een combinatie van verschillende circulerende RNA's worden geanalyseerd om een ​​betrouwbare voorspelling voor tumorontwikkeling en metastase te verkrijgen.

Als nieuw geïdentificeerd circRNA was de biologische en pathologische rol van circDVL1 niet onderzocht. In deze studie evalueerden we de rol en het regulerende mechanisme van circDVL1 in ccRCC. Functionele assays toonden aan dat tot overexpressie gebracht circDVL1 de proliferatie van ccRCC-cellen, het vermogen tot kolonievorming en het tumorigene potentieel zou kunnen verminderen, waarschijnlijk als gevolg van verhoogde celapoptose in vitro en onderdrukte tumorontwikkeling in vivo. De gegevens impliceerden dat circDVL1 een tumoronderdrukkende functie zou kunnen hebben in ccRCC.

CircRNA's kunnen de initiatie en progressie van tumoren bevorderen door op te treden als miRNA-sponzen. Daarom hebben we onderzocht of circDVL1 miRNA-biogenese tijdens ccRCC-carcinogenese zou kunnen reguleren. Met behulp van miRanda- en miRWalk-software ontdekten we dat circDVL1 een potentiële bindingsplaats had voor miR-412-3p. Luciferase-reporterassays toonden een direct verband aan tussen circDVL1 en miR-412-3p. Eerdere studies hebben aangetoond dat miR-412-3p via verschillende moleculaire mechanismen betrokken was bij de pathogenese van verschillende kankers [31, 39, 40]. MiR-412-3p speelde bijvoorbeeld een oncogene rol bij darmkanker, het bevorderen van migratie, invasie en celproliferatie van kankerstamcellen [31]. Bovendien was miR-412-3p-expressie opgereguleerd in extracellulaire blaasjes van patiënten met oraal plaveiselcelcarcinoom (OSCC) [39]. Evenzo suggereerden onze resultaten dat miR-412-3p een belangrijke tumorpromotor was in ccRCC.

Cistanche-poeder

Daarnaast werd ook het doelwit van circDVL1/miR-412-3p geïdentificeerd. Protocadherines (PCDH's) zijn transmembraaneiwitten die behoren tot de cadherinesuperfamilie, die een belangrijke rol spelen bij celadhesie en signaalroutes. PCDH7 is een lid van de PCDH-familie en heeft een gevestigde rol in cel-celherkenning en celadhesie [41]. Het is algemeen bekend dat verlies van adhesie een vroege stap is in tumorcelinvasie en metastase. Opkomend bewijs suggereert dat PCDH7 afwijkend tot expressie wordt gebracht in een verscheidenheid aan tumortypes. Bij menselijke niet-kleincellige longkanker werd PCDH7 bijvoorbeeld vaak tot overexpressie gebracht en functioneerde het als een oncogen om cellulaire transformatie te induceren en longtumorigenese te bevorderen door MAPK-signalering te versterken [42]. Omgekeerd remde PCDH7 migratie en invasie van maagkankercellen via E-cadherine [43]. Bovendien is verminderde PCDH7-expressie gevonden bij colorectale kanker [44] en blaaskanker [45]. Deze gegevens gaven aan dat PCDH7 verschillende functies had in verschillende tumortypen. In deze studie hebben we aangetoond dat PCDH7-niveaus waren verlaagd in ccRCC-tumorspecimens. Interessant is dat uit functionele reddingsexperimenten bleek dat de tumoronderdrukkende eigenschappen van circDVL1 deels te danken zijn aan het effect ervan op PCDH7. Onze studie suggereert sterk het belang van de circDVL1/miR-412-3p/PCDH7-regulerende as in ccRCC-progressie.

Deze studie heeft verschillende beperkingen. We hebben drie specifieke siRNA's getest voor endogene circDVL1, maar helaas konden al deze siRNA's circDVL1 niet uitschakelen, waarschijnlijk vanwege de unieke structuur van dit circRNA, evenals de lage basale expressie in ccRCC-cellen. Bovendien toonden onze resultaten aan dat circDVL1 een therapeutisch doelwit zou kunnen zijn bij ccRCC-patiënten, klinische studies met grote cohorten patiënten zijn nodig om het klinische belang ervan verder aan te tonen. In onze studie hebben we de oorzaak van de neerwaartse regulatie van circDVL1 in ccRCC-laesies niet onderzocht. Er is gemeld dat RNA-bindende eiwitten (RBP's), waaronder quaking (QKI), epithelial-splicing regulatory protein 1 (ESRP1) en fused-in-sarcoma (FUS) betrokken zijn bij de posttranscriptionele vorming van circRNA's [{{10 }}]. Bovendien zijn sommige transcriptiefactoren (bijv. ZEB1, c-Myb en c-Jun) ook betrokken bij de biogenese van specifieke circRNA's [49-52]. Studies hebben ook aangetoond dat m6A-modificatie de afbraak van circRNA bemiddelt. Park et al. rapporteerden dat m6A-gemodificeerde circRNA's ook werden gedownreguleerd via een YTHDF2- HRSP12-RNase P/MRP-as [53]. Of deze RBP's, transcriptiefactoren en m6A-methylering betrokken zijn bij de downregulatie van circDVL1 blijft onzeker. In ons toekomstig onderzoek zullen we proberen het stroomopwaartse regulerende mechanisme van circDVL1 bij de ontwikkeling van ccRCC en het ontstaan ​​van tumoren te onderzoeken.

Samenvattend hebben we aangetoond dat het circDVL1-niveau was verlaagd in serum van ccRCC-patiënten. We hebben met name de regulatiemechanismen van circDVL1 verder onderzocht en aangetoond dat circDVL1 de vorming van ccRCC-tumoren onderdrukte door PCDH7-expressie te bevorderen door miR-412-3p te sponzen. Daarom toonde onze studie aan dat circDVL1 een potentieel therapeutisch doelwit zou kunnen zijn voor toekomstige ccRCC-behandelingen.

Referenties

1.Cheng SK, Chuah KL. Gemetastaseerd niercelcarcinoom naar de pancreas: een overzicht. Archieven van pathologie en laboratoriumgeneeskunde. 2016; 140: 598-602.

2. Jonasch E, Walker CL, Rathmell WK. Ontogenese van niercelcarcinoom met heldere cellen en mechanismen van letaliteit. Nat Rev Nephrol. 2021; 17: 245-61.

3. Siegel RL, Miller KD, Jemal A. Kankerstatistieken, 2020. CA Cancer J Clin. 2020; 70.

4. Shuch B, Amin A, Armstrong AJ, Eble JN, Ficarra V, Lopez-Beltran A, et al. Pathologische varianten van niercelcarcinoom begrijpen: therapeutische mogelijkheden destilleren uit biologische complexiteit. Europese urologie. 2015; 67: 85-97.

5. Koul H, Huh JS, Rove KO, Crompton L, Koul S, Meacham RB, et al. Moleculaire aspecten van niercelcarcinoom: een overzicht. Ben J Kanker Res. 2011; 1: 240-54.

6. Sanchez-Gastaldo A, Kempf E, Gonzalez Del Alba A, Duran I. Systemische behandeling van niercelkanker: een uitgebreid overzicht. Kankerbehandeling Rev. 2017; 60: 77-89.

7. Kristensen LS, Andersen MS, Stagsted LVW, Ebbesen KK, Hansen TB, Kjems J. De biogenese, biologie en karakterisering van circulaire RNA's. Natuurrecensies Genetica. 2019; 20: 675-91.

8. Patop IL, Wüst S, Kadener S. Verleden, heden en toekomst van circRNA's. Het EMBO-tijdschrift. 2019; 38: e100836.

9. Perez de Acha O, Rossi M, Gorospe M. Circulaire RNA's in bloedmaligniteiten. Voor Mol Biosci. 2020; 7: 109.

10. Zhang SJ, Chen X, Li CP, Li XM, Liu C, Liu BH, et al. Identificatie en karakterisering van circulaire RNA's als een nieuwe klasse van vermeende biomarkers bij diabetesretinopathie. Onderzoekende oogheelkunde en visuele wetenschap. 2017; 58: 6500-9.

11. Bahn JH, Zhang Q, Li F, Chan TM, Lin X, Kim Y, et al. Het landschap van microRNA, Piwi-interacterend RNA en circulair RNA in menselijk speeksel. Klinische chemie. 2015; 61: 221-30.

12. Li Y, Zheng Q, Bao C, Li S, Guo W, Zhao J, et al. Circulair RNA is verrijkt en stabiel in exosomen: een veelbelovende biomarker voor de diagnose van kanker. Cel onderzoek. 2015; 25: 981-4.

13. Li S, Han L. Circulaire RNA's als veelbelovende biomarkers bij kanker: detectie, functie en meer. Geneesmiddel van het genoom. 2019; 11: 15.

14. Ye Q, Ling S, Zheng S, Xu X. Vloeibare biopsie bij hepatocellulair carcinoom: circulerende tumorcellen en circulerend tumor-DNA. Mol Kanker. 2019; 18: 114.

15. Wen G, Zhou T, Gu W. Het potentieel van het gebruik van circulair bloed-RNA als een vloeibare biopsie-biomarker voor ziekten bij de mens. Eiwit Cel. 2020.

16. Zhang Z, Yang T, Xiao J. Circulaire RNA's: veelbelovende biomarkers voor ziekten bij de mens. EBioMedicine. 2018; 34: 267-74.

17. Wang S, Zhang K, Tan S, Xin J, Yuan Q, Xu H, et al. Circulaire RNA's in lichaamsvloeistoffen als biomarkers voor kanker: de nieuwe grens van vloeibare biopsieën. Mol Kanker. 2021; 20: 13.

18. Wang Y, Zhang Y, Wang P, Fu X, Lin W. Circulaire RNA's bij niercelcarcinoom: implicaties voor tumorigenese, diagnose en therapie. Mol Kanker. 2020; 19: 149.

19. Chen D, Chen W, Xu Y, Zhu M, Xiao Y, Shen Y, et al. Opwaarts gereguleerd immuuncontrolepunt HHLA2 bij niercelcarcinoom met heldere cellen: een nieuwe prognostische biomarker en potentieel therapeutisch doelwit. J Med Genet. 2019; 56: 43-9.

20. Lv Q, Wang G, Zhang Y, Shen A, Tang J, Sun Y, et al. CircAGAP1 bevordert tumorprogressie door miR-15-5p te sponzen in heldercellig niercelcarcinoom. J Exp Clin Kankeronderzoek. 2021; 40: 76.

21. Wang K, Sun Y, Tao W, Fei X, Chang C. Androgeenreceptor (AR) bevordert de migratie en invasie van niercelcarcinoom met heldere cellen (ccRCC) door wijziging van de circHIAT1/miR-195-5p/29a{{ 4}}p/29c-3p/CDC42-signalen. Kanker brieven. 2017; 394: 1-12.

22. Xue D, Wang H, Chen Y, Shen D, Lu J, Wang M, et al. Circ-AKT3 remt metastase van niercelcarcinoom met heldere cellen door miR-296-3p/E-cadherine-signalen te veranderen. Moleculaire kanker. 2019; 18: 151.

23. Chen Q, Liu T, Bao Y, Zhao T, Wang J, Wang H, et al. CircRNA cRAPGEF5 remt de groei en metastase van niercelcarcinoom via de miR-27a-3p/TXNIP-route. Kanker brieven. 2019; 469: 68-77.

24. Guo X, Lin W, Wen W, Huyghe J, Bien S, Cai Q, et al. Identificatie van nieuwe gevoeligheidsgenen voor het risico op colorectale kanker uit een transcriptoom-brede associatiestudie van 125.478 proefpersonen. Gastro-enterologie. 2021; 160.

25. Wang J, Nie W, Xie X, Bai M, Ma Y, Jin L, et al. MicroRNA-874-3p/ADAM (A-desintegrine en metalloprotease) 19 Bemiddelt bij macrofaagactivering en nierfibrose na acuut nierletsel. Hypertensie. 2021; 77: 1613-26.

26. Kun-Peng Z, Chun-Lin Z, Jian-Ping H, Lei Z. Een nieuwe circulerende hsa_circ_0081001 fungeert als een potentiële biomarker voor de diagnose en prognose van osteosarcoom. Int J Biol Sci. 2018; 14: 1513-20.

27. Yuan Y, Bao J, Chen Z, Villanueva AD, Wen W, Wang F, et al. Multi-omics-analyse om gevoeligheidsgenen voor colorectale kanker te identificeren. Hum Mol Genet. 2021.

28. Kramer MC, Liang D, Tatomer DC, Gold B, March ZM, Cherry S, et al. Combinatorische controle van circulaire RNA-expressie van Drosophila door intronische herhalingen, hnRNP's en SR-eiwitten. Genen ontwikkelaar 2015; 29: 2168-82.

29. Guo X, Lin W, Bao J, Cai Q, Pan X, Bai M, et al. Een uitgebreide cis-eQTL-analyse onthulde doelwitgenen in borstkankergevoeligheidsloci geïdentificeerd in genoombrede associatiestudies. Ben J Hum Genet. 2018; 102: 890-903.

30. Zhong S, Wang J, Zhang Q, Xu H, Feng J. CircPrimer: software voor het annoteren van circRNA's en het bepalen van de specificiteit van circRNA-primers. BMC Bioinformatica. 2018; 19: 292.

31. Zhu K, Wang Y, Liu L, Li S, Yu W. Lang niet-coderend RNA MBNL1-AS1 reguleert proliferatie, migratie en invasie van kankerstamcellen bij darmkanker door interactie met MYL9 via sponzend microRNA -412-3blz. Klinieken en onderzoek in hepatologie en gastro-enterologie. 2020; 44: 101-14.

32. Schrödter S, Braun M, Syring I, Klümper N, Deng M, Schmidt D, et al. Identificatie van de dopaminetransporter SLC6A3 als biomarker voor patiënten met niercelcarcinoom. Moleculaire kanker. 2016; 15: 10.

33. Ran L, Liang J, Deng X, Wu J. miRNA's in voorspelling van prognose bij niercelcarcinoom met heldere cellen. Biomed Res Int. 2017; 2017: 4832931.

34. Li JK, Chen C, Liu JY, Shi JZ, Liu SP, Liu B, et al. Lang niet-coderend RNA MRCCAT1 bevordert de metastase van heldercellig niercelcarcinoom door NPR3 te remmen en p38-MAPK-signalering te activeren. Moleculaire kanker. 2017; 16: 111.

35. Sheng JQ, Liu L, Wang MR, Li PY. Circulaire RNA's bij kanker van het spijsverteringsstelsel: potentiële biomarkers en therapeutische doelen. Ben J Kanker Res. 2018; 8: 1142-56.

36. Vea A, Llorente-Cortes V, de Gonzalo-Calvo D. Circulaire RNA's in bloed. Adv Exp Med Biol. 2018; 1087: 119-30.

37. Vo JN, Cieslik M, Zhang Y, Shukla S, Xiao L, Zhang Y, et al. Het landschap van circulair RNA bij kanker. Cel. 2019; 176.

38. Pan B, Qin J, Liu X, He B, Wang X, Pan Y, et al. Identificatie van serum exosomale has-circ-0004771 als een nieuwe diagnostische biomarker van colorectale kanker. Front Genet. 2019; 10: 1096.

39. Gai C, Camussi F, Broccoletti R, Gambino A, Cabras M, Molinaro L, et al. Speeksel extracellulaire vesikel-geassocieerde miRNA's als potentiële biomarkers bij oraal plaveiselcelcarcinoom. BMC Kanker. 2018; 18: 439.

40. Lenherr SM, Tsai S, Silva Neto B, Sullivan TB, Cimmino CB, Logvinenko T, et al. MicroRNA-expressieprofiel identificeert hoogwaardige, niet-spierinvasieve blaastumoren met een verhoogd risico op progressie naar een invasief fenotype. Genen (Basel). 2017; 8.

41. Yoshida K. Fibroblast celvorm en adhesie in vitro wordt veranderd door overexpressie van de 7a en 7b isovormen van protocadherine 7, maar niet de 7c isovorm. Cell Mol Biol Lett. 2003; 8: 735-41.

42. Zhou X, Updegraff BL, Guo Y, Peyton M, Girard L, Larsen JE, et al. PROTOCADHERIN 7 Werkt via SET en PP2A om MAPK-signalering door EGFR en KRAS tijdens longtumorigenese te versterken. kanker res. 2017; 77: 187-97.

43. Chen HF, Ma RR, He JY, Zhang H, Liu XL, Guo XY, et al. Protocadherine 7 remt celmigratie en invasie door E-cadherine bij maagkanker. Tumor Biol. 2017; 39: 1010428317697551.

44. Bujko M, Kober P, Mikula M, Ligaj M, Ostrowski J, Siedlecki JA. Expressieveranderingen van cel-celadhesie-gerelateerde genen in colorectale tumoren. Oncol Lett. 2015; 9: 2463-70.

45. Lin YL, Wang YL, Fu XL, Li WP, Wang YH, Ma JG. Lage expressie van protocadherine7 (PCDH7) is een potentiële prognostische biomarker voor primaire niet-spierinvasieve blaaskanker. Oncotarget. 2016; 7: 28384-92.

46. ​​Conn SJ, Pillman KA, Toubia J, Conn VM, Salmanidis M, Phillips CA, et al. Het trillen van het RNA-bindende eiwit reguleert de vorming van circRNA's. Cel. 2015; 160: 1125-34.

47. Errichelli L, Dini Modigliani S, Laneve P, Colantoni A, Legnini I, Capauto D, et al. FUS beïnvloedt circulaire RNA-expressie in motorneuronen van muizenembryonale stamcellen. Nat gemeenschappelijk. 2017; 8: 14741.

48. Yu CY, Li TC, Wu YY, Yeh CH, Chiang W, Chuang CY, et al. Het circulaire RNA circBIRC6 neemt deel aan het moleculaire circuit dat de menselijke pluripotentie regelt. Nat gemeenschappelijk. 2017; 8: 1149.

49. Lee YH, Kim HS, Kim JS, Yu MK, Cho SD, Jeon JG, et al. C-my reguleert autofagie voor pulpavitaliteit bij glucose-oxidatieve stress. J Dent Res. 2016; 95: 430-8.

50. Li Q, Wang Y, Wu S, Zhou Z, Ding X, Shi R, et al. CircACC1 reguleert de assemblage en activering van het AMPK-complex onder metabolische stress. Cel Metab. 2019; 30.

51. Ren C, Zhang Z, Wang S, Zhu W, Zheng P, Wang W. Circulair RNA hsa_circ_0001178 vergemakkelijkt de invasie en metastase van colorectale kanker door ZEB1 opwaarts te reguleren door meerdere miRNA's te sponzen. Bio Chem. 2020; 401: 487-96.

52. Zeng K, Chen X, Xu M, Liu X, Hu X, Xu T, et al. CircHIPK3 bevordert de groei en uitzaaiing van colorectale kanker door miR-7 te sponzen. Celdood Dis. 2018; 9: 417.

53. Park OH, Ha H, Lee Y, Boo SH, Kwon DH, Song HK, et al. Endoribonucleolytische splitsing van mA-bevattende RNA's door RNase P/MRP-complex. Mol cel. 2019; 74.

Ying Wang1,2, Yunjing Zhang1,2, Xinwan Su3, Qiongzi Qiu4, Yuan Yuan2, Chunhua Weng2, Sailan Zou5, Yan Tian5, Weidong Han6, Pengyuan Liu4, Xingyi Guo7, Jianhua Mao8, Xianghui Fu5, Ping Wang3, Weiqiang Lin1

1. Het Fourth Affiliated Hospital en International Institutes of Medicine, Zhejiang University School of Medicine, Jinhua 322000, Zhejiang, China.

2. Kidney Disease Center, het First Affiliated Hospital en Institute of Translational Medicine, Zhejiang University School of Medicine, Hangzhou 310003, Zhejiang, China.

3. Afdeling Urologie, het eerste aangesloten ziekenhuis, Zhejiang University School of Medicine, Hangzhou 310003, Zhejiang, China.

4. Afdeling Ademhalingsgeneeskunde, Sir Run Run Shaw Hospital en Instituut voor Translationele Geneeskunde, Zhejiang University School of Medicine, Hangzhou 310016, Zhejiang, China.

5. Afdeling Endocrinologie en Metabolisme, State Key Laboratory of Biotherapy and Cancer Center, West China Hospital, Sichuan University en Collaborative Innovation Center of Biotherapy, Chengdu 610041, Sichuan, China.

6. Afdeling Medische Oncologie, Sir Run Run Shaw Hospital, Zhejiang University School of Medicine, Hangzhou 310016, Zhejiang, China.

7. Afdeling Epidemiologie, Afdeling Geneeskunde, Vanderbilt Epidemiology Center en Vanderbilt-Ingram Cancer Center, Vanderbilt University School of Medicine, Nashville 37203, TN, VS.

8. Afdeling Nefrologie, National Clinical Research Center for Child Health, Children's Hospital, Zhejiang University School of Medicine, Hangzhou 310003, Zhejiang, China.