Veranderingen in antioxiderende activiteit tijdens enzymfermentatie

Hoofdstuk 4 Veranderingen in antioxiderende activiteit tijdens enzymfermentatie

Fruit is rijk aan voedingsstoffen en zijn in vele variëteiten. De productie van stoffen tijdens fermentatie is complex en gevarieerd, en er zijn veel onderzoeken naar hunantioxiderende activiteit. Mensen zijn altijd aan het verkennen en ontdekken, op zoek naar voedingsmiddelen die voordelig zijnmenselijke gezondheid, dus enzymen zijn de afgelopen jaren een hot topic geworden. Het traditionele enzymproductieproces is om enzymen te verkrijgen door natuurlijke gisting van fruit en fruit. Op basis van eerder onderzoek voegt dit artikel 4 nuttige gistingsbacteriën toe. Deze bacteriën zelf bestaan ​​ook in het enzym. Na de extra toevoeging van bacteriën worden het aantal en het type micro -organismen in het gistingsproces gewijzigd. Welk effect heeft deze verandering op zijn antioxiderende activiteit? In het vorige hoofdstuk namen we appels als een voorbeeld voor een gedetailleerde uitleg. De vergelijking van de antioxidantactiviteit van de experimentele groep en de controlegroep bij verschillende enzymconcentraties toonde aan dat de antioxidantactiviteit van het enzym in de experimentele groep groter was dan die van de controlegroep. De intensiteit van antioxiderende activiteit weerspiegelt ook de betrouwbaarheid van het enzym op een bepaalde manier.

Nieuwe kruiden cistanche met sterke antioxidantkracht

 

Ondersteunende service van Wecistanche-de grootste Cistanche-exporteur in het China:
E -mail: wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/tel: +86 15292862950

 

Dit hoofdstuk voegt gemeenschappelijke fruitperen en citrus toe aan het oorspronkelijke experiment, en volgt en detecteert de veranderingen in hunantioxiderende activiteittijdens gisting. Op basis van het verlagen van de kosten, hopen we via experimenten beter de biologische activiteit van enzymen te weerspiegelen na het toevoegen van bacteriën, en bieden we een bepaalde theoretische basis en gegevensondersteuning voor de productie van microbiële enzymen BY kunstmatige inoculatie van stammen.

 

 

 

4.1 Materialen en methoden

4.1.1 Materialen

(1) experimentele materialen

Was verse appels, peren en citrusvruchten met steriel water onder steriele omstandigheden, droog ze op natuurlijke wijze op een steriele operatietafel, schil ze en snijd ze in plakjes voor later gebruik. Voeg witte suiker en fruit toe aan een gesteriliseerde glazen pot bij een massaverhouding van 1: 1. Activeer de bacteriën die nodig zijn voor het experiment en inoculeer ze in het enzym volgens het optimale schema (deze operatiestap wordt weggelaten voor de controlegroep), sluit deze af en plaats het op een koele en droge plaats. Neem monsters op verschillende tijdsperioden van gisting bij kamertemperatuur om alle enzymvloeistof die fruitpulp bevat te verkrijgen en filter deze. Neem de supernatant als het experimentele monster en gebruik het om relevante gegevens te meten na het centrifugeren bij 10, 000 tpm in een snelle centrifuge gedurende 15 minuten. Het is vermeldenswaard dat in het proces van het maken van enzymen, om onnodige besmetting te voorkomen, al onze bewerkingen worden uitgevoerd onder steriele omstandigheden.

(2) Hoofdinstrumenten

De instrumenten die nodig zijn voor het experiment zijn dezelfde als 3.1.1 (2).

 

4.1.2 Methoden

(1) Veranderingen in het totale fenolgehalte tijdens de gisting

450 μl monsteroplossing werd toegevoegd met gedestilleerd water om het volume van 46 ml te maken en vervolgens werd 1 ml folin-fenolreagens toegevoegd. Meng goed en reageer voor 3min. Vervolgens werd 3 ml 20% NACO3 toegevoegd. Het mengsel werd 2 uur in een constant temperatuurbad geschud op 25 graden. Distilleerd water werd gebruikt als lege controle. De absorptie A werd gemeten bij 760 nm door spectrofotometer. Drie replicaten werden uitgevoerd voor elke behandeling. Het totale fenolgehalte werd berekend volgens de standaardcurve -vergelijking.

(2) Veranderingen in het verminderen van het vermogen tijdens de gisting

Voeg 45 0 μl monster toe aan 2,5 ml fosfaatbuffer met een concentratie van 0. 2mol/l en een pH -waarde van 6,6, vervolgens 2,5 ml van kalium ferricyanide (w/v) met een massaconcentratie van 1%, reageren bij 5 {23 {23}}}}}}}}} graad van 30 minuten, (w/v) met een massaconcentratie van 10%, centrifuge bij 3000 tpm gedurende 10 minuten, haal je eruit en trek 2,5 ml supernatant in een volumetrische kolf, voeg 2,5 ml gedestilleerd water en 0,5 ml ijzerchloride (w/v) toe met een massaconcentratie van 0,1%. Gebruik gedestilleerd water als een lege controle en meet de absorptie A bij een golflengte van 700 nm met een spectrofotometer. Voer 3 replicaten uit voor elke behandeling. De sterkte van het verminderen van het vermogen wordt bepaald op basis van de absorptiewaarde.

 

(3) Veranderingen in superoxide -anion radicaal opruimvaardigheid tijdens fermentatie
Plaats 4,5 ml 0. {{1 0}}} 5 mol/l pH 8.2 tris-HCl-buffer in een waterbad met constant temperatuur en pas de temperatuur aan op 25 graden. Voeg na 20 minuten 1 ml enzymmonsteroplossing en 0,4 ml pyrogalloloplossing toe met een molaire concentratie van 25 mmol/l. Meng goed en plaats in een waterbad van 25 graden gedurende 5 minuten. Voeg 1,0 ml 8 mol/l HCl toe om de reactie te beëindigen. Gebruik Tris-HCl-buffer als referentie en gebruik een spectrofotometer om de absorptie A bij 299 nm te meten om de opruimingssnelheid te berekenen. De lege controlegroep gebruikt 1 ml oplosmiddel in plaats van monster. De radicale opruimingssnelheid van de superoxide -anion wordt berekend volgens formule 4.1: Superoxide anion radicaal opruimingssnelheid (%)=(a 1- a2)/a1 × 100 (4.1) Waar: A1 is de absorptie van de blanke controlegroep; A2 is de absorptie van de enzymmonsteroplossing van de experimentele groep.

 

(4) Veranderingen in hydroxylradicaal opruimvaardigheid tijdens fermentatie

 

Add water to 450μL sample solution to 2mL, then add it to 1.4mL of hydrogen peroxide with a molar mass concentration of 6mmol/L, then add 0.6mL of sodium salicylate with a molar mass concentration of 20mmol/L and 2mL of ferrous sulfate with a molar mass concentration of 1.5mmol/L, and heat in a constant temperature water bath at 37 degree for 1H. Nul met gedestilleerd water en meet de absorptie A bij een golflengte van 562 nm met een spectrofotometer. Drie replicaten werden uitgevoerd voor elke behandeling. De hydroxylradicale opruimingssnelheid werd berekend volgens formule 4.2: Hydroxyl radicale opruimingssnelheid (%)=[(a 1- a2)/a1] × 100 (4.2) Waar: A1 is de gemiddelde absorptie van de blanco; A2 is de gemiddelde absorptie van de monsteroplossing.

 

(5) Veranderingen in DPPH vrije radicalen opruimvaardigheid tijdens fermentatie
Breng 2 ml enzymmonsteroplossing nauwkeurig over naar een 1 0 ml volumetrische kolf en voeg vervolgens 2 ml 80% dpph ethanol waterige oplossing toe aan de volumetrische kolf, met een molaire massaconcentratie van 2 × 10-4 mol/l. Meng goed en laat 30 minuten bij kamertemperatuur staan. Neem 80% ethanoloplossing als referentie en meet de absorptie van het monster bij een golflengte van 517 nm, die wordt geregistreerd als A1. Meng 2 ml DPPH -oplossing en 2 ml 80% ethanoloplossing en meet hun absorptie bij dezelfde golflengte, die wordt opgenomen als A0. Meng 2 ml enzymoplossing en 2 ml 80% ethanoloplossing en meet hun absorptie bij dezelfde golflengte, die wordt geregistreerd als A2. Drie replicaten werden uitgevoerd voor elke behandeling. Bereken de DPPH vrije radicalen opruimtesnelheid volgens formule 4.3:
DPPH Free Radical SaVenging Rate (%) {{0}} [1- (A 1- a2)/a 0] × 100 (4.3) Waar: A1 is de gemiddelde absorptie van 2 ml DPPH 80% Ethanol Aqueous Oplossing en 2 Ml Sample Oplossing; A2 is de absorptie van 2 ml enzymoplossing en 2 ml 80% ethanol gemengde oplossing; A0 is de absorptie van 2 ml DPPH -oplossing en 2 ml 80% ethanol gemengde oplossing.

(6) Veranderingen in ABTS in vrije radicalen opruimvaardigheid tijdens gisting
8 ul monsteroplossing werd aangevuld met 10 ul met fosfaatbuffer (5 mmol/L pH 7,4) en vervolgens gelijkmatig gemengd met 10 ml kaliumsulfaat en ABT's gemengde oplossing om te reageren bij een reactietemperatuur van 30 graden en een reactietijd van 5 minuten. Nul de oplossing met gedestilleerd water en meet de absorptie A bij een golflengte van 734 nm met behulp van een spectrofotometer. Drie replicaten werden uitgevoerd voor elke behandeling. De ABT's vrije radicale opruimingssnelheid werd berekend volgens formule 4.4:
ABTS Free Radical SCAVenging Rate (%)=[(A 1- A2)/A1] × 100 (4.4) Waar: A1 is de absorptie van de lege controlegroep; A2 is de absorptie van de experimentele groep van het monster.