Bepaling van de inhoud van vijf verbindingen in sperma Rehmanniae en vaststelling van de HPLC-vingerafdruk

Tabel 3 Resultaten van hersteltest (n=6)

2.4 Monsterbepaling

De zes verzamelde batches Rehmannia werden bereid volgens de methode onder "2.2.2" en bemonsterd en bepaald volgens de chromatografische omstandigheden onder "2.1". De resultaten van de bepaling van het gehalte worden weergegeven in Tabel 4. Uit de resultaten blijkt dat van de vijf componenten het gehalte aan rehmannia-glycoside D het hoogste is, variërend van 0,460% tot {{1 0}}.730%; het gehalte aan leonuriglycoside komt op de tweede plaats, variërend van 0,100% tot 0,270%, en het gehalte van de twee componenten in monsters uit verschillende productiegebieden verschilt niet significant. In monster SX1 is, met uitzondering van echinacoside, de inhoud van de overige vier componenten aanzienlijk hoger dan die van andere partijen monsters; de inhoud van echinacoside, cistancheside A en verbascoside in Rehmannia glutinosa uit verschillende productiegebieden is behoorlijk verschillend en onregelmatig.

CISTANCHEKRUIDEN METGOEDE KWALITEIT CONSISTENTIE

2.5 Vaststelling en evaluatie van gelijkenis van HPLC-vingerafdruk van Rehmannia glutinosa

De chromatogrammen en gegevens van de bepaling van het uit meerdere componenten bestaande gehalte in Rehmannia glutinosa werden geïmporteerd in de software "Chinese Herbal Medicine Chromatographic Fingerprint Likenity Evaluation System (2012 Edition)", en het chromatogram van het SX1-testmonster werd geselecteerd als referentiespectrum. De tijdvensterbreedte werd ingesteld op 0.10 min, en de mediaanmethode werd gebruikt om over elkaar heen geplaatste spectra en referentiespectra te genereren. Er werden in totaal 23 gemeenschappelijke pieken geïdentificeerd (zie Figuur 3). De gelijkenis tussen de vingerafdrukken van het Rehmannia glutinosa-monster en de referentie was 0,904~0,950, wat aangeeft dat de monsters van Rehmannia glutinosa uit verschillende productiegebieden en tussen rauwe Rehmannia glutinosa en gekookte Rehmannia glutinosa vergelijkbaar waren en een goede consistentie van kwaliteit hadden.

Tabel 4 Resultaten van gehaltebepaling van 5 componenten in Sperma Rehmanniae/%

13. rehmannioside D; 17. leonuride; 19. echinacoside; 20. castanoside A; 21. acteoside

Figuur 3 Overlappende HPLC-chromatogrammen van 6 batches sperma Rehmanniae (SX1-SX4, HN1, HN2) en referentie (R)

3 Discussie

3.1 Selectie van chromatografische omstandigheden

Vier mobiele fasesystemen, acetonitril-water, acetonitril-0.1% mierenzuuroplossing, methanol-water en methanol-0.1% mierenzuuroplossing, werden in deze studie onderzocht. De resultaten toonden aan dat de vijf componenten goede scheidingseffecten hadden in het acetonitrilsysteem; vergeleken met het acetonitril-water mobiele fasesysteem waren de pieken van rehmannia glutinosa en moederkruidglycosiden in de acetonitril -0.1% mierenzuuroplossing mobiele fase smaller en hadden ze een goede pieksymmetrie. Tegelijkertijd varieert de inhoud van de componenten sterk vanwege de verschillende ultraviolette absorptie van de vijf componenten. Om de inhoud van elke component nauwkeuriger te bepalen en ervoor te zorgen dat de absorptie-intensiteit van de vijf componenten gelijkmatig verdeeld is in hetzelfde chromatogram, wordt de ultraviolette absorptie vanrehmannia-glycoside D, motherwort-glycoside, echinacoside, cistancheside A en verbascoside werden geanalyseerd en de bepaling van de variabele golflengte werd geselecteerd, dat wil zeggen: 0-24 min, het eerste gescheiden rehmannia-glycoside werd bepaald bij 203 nm, en 24-40 min, de gescheiden echinacoside, cistancheside A en verbascoside werden bepaald bij 330 nm. Daarnaast onderzocht deze studie ook de extractie-effecten van methanol, 70% methanoloplossing, 50% methanoloplossing en 50% acetonitriloplossing als extractiemiddelen. De resultaten toonden aan dat een 70% methanoloplossing als extractieoplosmiddel de te testen componenten beter kan oplossen en dat het geëxtraheerde monster minder onzuiverheden bevat. Daarom selecteerde deze studie 70% methanol als extractiemiddel, acetonitril-0.1% mierenzuuroplossing als het mobiele fasesysteem, en gebruikte variabele golflengte om de inhoud van de vijf componenten in Rehmannia te bepalen.

3.2 Analyse van monsterbepalingsresultaten

Uit de resultaten van de bepaling blijkt dat na het stomen, afgezien van een lichte toename van het gehalte aan echinacoside, het gehalte aan de andere vier componenten aanzienlijk was verminderd, vooral het gehalte aan leonuriside en cistancheside A; het gehalte aan rehmannia-glycoside D en cistancheside A in Rehmannia glutinosa uit hetzelfde productiegebied was enigszins verschillend, en het gehalte aan leonuriside, echinacoside en verbascoside was aanzienlijk verschillend; het gehalte aan echinacoside in Rehmannia glutinosa uit het productiegebied van Henan was aanzienlijk hoger dan dat van de monsters uit het productiegebied van Shanxi, en het gehalte aan de andere vier componenten was enigszins verschillend. Tegelijkertijd was, volgens de HPLC-vingerafdruk die in dit onderzoek werd vastgesteld, de gelijkenis tussen de zes batches Rehmannia-monsters en de controlevingerafdruk 0.904~0,950, wat aangeeft dat de belangrijkste chemische stof componenten van de 6 batches Rehmannia-monsters voor en na verwerking waren zeer consistent.

Samenvattend zijn de inhoudsbepalingsmethode en de HPLC-vingerafdruk die in dit onderzoek zijn vastgesteld nauwkeurig, betrouwbaar en hebben ze een goede specificiteit. Ze kunnen worden gebruikt om de veranderingen in de componenten en de mate van verwerking van Rehmannia glutinosa voor en na de verwerking te karakteriseren, en om technische ondersteuning te bieden voor de kwaliteitscontrole van Rehmannia glutinosa. Dit onderzoek heeft echter de nadelen van kleine monsterbatches en een onvolledige dekking van productiegebieden, wat verdere analyse en verificatie vereist.

Referenties

[1] Comité Chinese Farmacopee. Farmacopee van de Volksrepubliek China: deel 1 [S]. Peking: China Medical Science and Technology Press, 2020: 129-130.

[2] Xu Jun, Fu Zhetong. Onderzoek naar de historische evolutie van de namen van verwerkte Rehmannia glutinosa en de studie van de werkzaamheid ervan [J]. Chinese patentgeneeskunde, 2017, 39 (9): 1913-1916.

[3] Zhu Jue, Zhu Xiangmei, Shi Yuhe, et al. Onderzoeksvoortgang op Rehmannia glutinosa en voorspellingsanalyse van de kwaliteitsmarkers ervan [J]. Chinese patentgeneeskunde, 2022, 45 (2): 1273-1281.

[4] Chen Jinpeng, Zhang Kexia, Liu Yi, et al. Onderzoeksvoortgang naar de chemische samenstelling en farmacologische effecten van Rehmannia glutinosa [J]. Chinese kruidengeneeskunde, 2022, 52 (6): 1772-1784.

[5] Li Hongwei, Meng Xiangle. Onderzoeksvoortgang naar chemische componenten en farmacologische effecten van Rehmannia glutinosa［J］.

Onderzoek naar geneesmiddelenevaluatie, 2015, 38(2): 218-228.

[6] Zhang Boyong, Jiang Zhenzuo, Wang Yuefei, et al. Analyse van chemische componenten van verse Rehmannia glutinosa, rauwe Rehmannia glutinosa en gekookte Rehmannia glutinosa door UPLC/ESI-Q-TOF MS［J］. Chinese patentgeneeskunde, 2016, 38(5): 1104-1108.

[7] Zhang Lixian, Wei Yue, Li Feifei, et al. Herkenning van vingerafdrukpatronen en bepaling van de inhoud van meerdere componenten van verschillende verwerkte Rehmannia glutinosa-producten［J］. Hubei Landbouwwetenschappen, 2023, 62(9): 135-141.

[8] Chen Jinpeng, Zhang Kexia, Liu Yi, et al. Onderzoeksvoortgang naar chemische componenten en farmacologische effecten van Rehmannia glutinosa［J］. Chinese kruidengeneeskunde, 2021, 52(6): 1772-1784.

[9] Tao Yi, Jiang Yanhui, Tang Kejian, et al. Vergelijkende studie van chemische componenten van Rehmannia glutinosa voor en na verwerking door UHPLC-Q-TOF/MS［J］. Nieuwe Chinese medicijnen en klinische farmacologie, 2016, 27(1): 102-106.

[10] Xu Zhuo, Dai Xinxin, Su Shulan, et al. Dynamische accumulatie van nucleoside- en aminozuurcomponenten in Rehmannia glutinosa op basis van UPLC-TQ-MS［J］. Chinese kruidengeneeskunde, 2021, 52(23): 7323-7330.

[11] Li Yujiao. Studie naar de verwerkingstechnologie en het mechanisme van "negen stomen en negen blootstelling" van Rehmannia glutinosa［D］. Jinan: Shandong Universiteit, 2023.

[12] Wang Yue, Zhou Qiao, Zhang Xuelan, et al. HPLC Gelijktijdige bepaling van de inhoud van acht componenten in Rehmannia glutinosa en de verschillende verwerkte producten ervan door UPLC-vingerafdrukanalyse en bepaling van de inhoud van componenten met meerdere indexen [J]. Chinese geneeskrachtige materialen, 2021, 44 (7): 64-68.

[13] Guo Xiaokai, Xue Shujuan, Chen Suiqing. Kwaliteitsevaluatie van Rehmannia glutinosa op basis van UPLC-vingerafdruk en bepaling van de inhoud van componenten met meerdere indexen [J]. Chinese medicinale materialen, 2021, 44 (4): 917-923.