Bepaling van echinacoside in waterextract van Cistanche Herba door HPLC

Abstract: ObjectiefEr werd een HPLC-methode ontwikkeld voor de bepaling van echinacoside in het waterextract vanKruidige kruiden.MethodenEchinacoside werd bepaald met HPLC. De scheiding werd uitgevoerd op de Inertsil ODS-SP C18 kolom met een mobiele fase bestaande uit acetonitril(A)en 0,4% fosforzuuroplossing(B), per gradiëntelutie. De detectiegolflengte werd ingesteld op 333 nm, en de kolomtemperatuur was 30 graden. Het debiet bedroeg 1,0ml·min-1 en het injectievolume was 10μL. ResultatenDe lineaire relatie vanechinacosidebinnen de concentratiebereik van 44.939 7-539.276 4 ug ·ml- 1 was goed(r = 0.999 8). De terugvorderingen bedroegen 94,59%-105,31%(RSD=2.93%,n = 9). Het gehalte aan echinacoside in waterextracten van Cistanche herba was 15,527,7.347,12,267 mg·g-1. 

ConclusieDe gevestigde HPLC-methode met goede herhaalbaarheid is nauwkeurig, eenvoudig en haalbaar. Het is geschiktvoor de bepaling van echinacoside in dewaterextract van Cistanche herba. 

Trefwoorden:HPLC;waterextract van Cistanche herba; echinacoside; bepaling van de inhoud

NIEUWE KRUIDENFORMULERING VOORVOEDENDE NIEREN YANG

Cistanche woestijnis een versterkend traditioneel Chinees medicijn dat veel wordt gebruikt in de klinische praktijk en staat bekend als "woestijnginseng" [1]. DeCistanche deserticolaopgenomen in de 2015-editie van deChinese Farmacopeeis de gedroogde, vlezige stengel met geschubde bladerenCistanche deserticola YC MaofCistanche tubulosa (Schenk) Wight. Het is warm, zoet en zout en keert terug naar de meridianen van de nieren en de dikke darm. Het heeft de effecten van het voeden van nier-yang, het aanvullen van essentie en bloed, en het hydrateren van de darmen en laxeermiddelen [2]. "Shen Nong's Materia Medica", zegt dat het "het midden kan versterken, de vijf interne organen kan voeden, yin kan versterken en de essentie kan voeden". Cistanche deserticola bevat voornamelijk fenylethanoïde glycosiden, iridoïden en hun glycosiden, lignanen en hun glycosiden, polysachariden, esterverbindingen en alkaloïden [3].

Fenylethanoïde glycosiden zijn de belangrijkste actieve ingrediënten van Cistanche deserticola, waaronder echinaceaside en verbascoside de indexcomponenten zijn voor identificatie en bepaling van het gehalte van Cistanche deserticola in de Chinese Farmacopee. Farmacologische onderzoeken [4] tonen aan dat Cistanche deserticola verschillende farmacologische effecten heeft, zoals laxerend, leverbescherming, anti-osteoporose, antioxidant, anti-veroudering en anti-vermoeidheid. Het waterige extract van Cistanche deserticola kan het botmorfogenetische proteïne 2-gen in osteoblasten van ratten bevorderen, evenals tartraatresistente zure fosfatase en botcalcium in het serum van muizen waarbij de eierstokken zijn verwijderd.

De expressie van Smad1-, Smad5-genen, transformerende groeifactoren, etc. in het beenmerg en het beenmerg heeft een anti-osteoporotisch effect [5-6].

Echinacea kan de proliferatie van osteoblasten bevorderen en de differentiatie van mesenchymale stamcellen uit het beenmerg bevorderen die in vitro tot osteoblasten zijn gekweekt [7-9]. De afgelopen jaren zijn er veel onderzoeksrapporten verschenen over de gehaltebepaling van echinacoside en verbascoside in Cistanche deserticola ethanolextract en de samengestelde preparaten [10-12], maar er zijn weinig rapporten over de gehaltebepaling van indexcomponenten in Cistanche deserticola waterig extract. In dit onderzoek werd voor de bepaling gebruik gemaakt van hogedrukvloeistofchromatografie (HPLC).de inhoud van echinaceasidein dewaterig extract van Cistanche deserticola.

1 Materiaal

1.1 Instrumenten

LC-20AT hoogwaardige vloeistofchromatograaf, SPD-20Een detector, SIL-20Een autosampler, CTO-10ASvp-kolomoven, LC-oplossing vloeistofchromatografiewerkstation, Shimadzu Corporation, Japan; MES125P-OCE-DU elektronische analytische balans, Sartorius, Duitsland; SHZ-D (III) multifunctionele vacuümpomp met circulatiewater, Henan Yuhua Instrument Co., Ltd.; RC2B SO25 rotatieverdamper koelcirculatiesysteem, RV 10 D S96 rotatieverdamper, IKA, Duitsland; DK-S26 elektrisch waterbad met constante temperatuur, Shanghai Jinghong Experimental Equipment Co., Ltd.; UPR-serie ultrapuur watermachine, Sichuan Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd.

1.2 Medicinale materialen en reagentia

De medicinale materialen van Cistanche deserticola werden gekocht bij Guangzhou Lingnan Chinese Medicine Pieces Co., Ltd., batchnummers: 1801001, 1806001 en 181001. Het werd door Chief Chinese geïdentificeerd als de gedroogde, vlezige stengel met geschubde bladeren van Cistanche deserticola YCMa van de familie Orobanchaceae. Geneeskundeapotheker Tu Xingming van het derde aangesloten ziekenhuis van de Guangzhou University of Chinese Medicine. Het monster wordt opgeslagen in de Drug Testing Room van het derde aangesloten ziekenhuis van de Guangzhou University of Chinese Medicine; de referentiestof echinacoside, het gehalte is 89,7%, het batchnummer is: 111670-201706 van het China Food and Drug Inspection Institute; het acetonitril is chromatografisch zuiver (Merck, Duitsland); de methanol en het fosforzuur zijn analytisch zuiver (Tianjin Fuyu Fine Chemical Co., Ltd.); het water is ultrapuur.

2 Methoden en resultaten

2.1 Bereiding van waterig extract van Cistanche deserticola

Neem het ruwe poeder van Cistanche deserticola, voeg 10 keer de hoeveelheid gedestilleerd water toe, verwarm en reflux om tweemaal te extraheren, elke keer gedurende 1 uur, filtreer, combineer het filtraat en concentreer het filtraat tot 0,100 g·ml -1 ruw medicijn met behulp van een roterende verdamper en bewaar het bij 4 graden voor later gebruik.

2.2 Chromatografische omstandigheden en geschiktheid van het systeem

Chromatografische kolom: Inertsil ODS SP C18-kolom (150 mm x 4,6 mm, 5 μm); mobiele fase: acetonitril (A)-0,4% fosforzuuroplossing (B), gradiëntelutie: 0 ~ 5 min, 17%A; 5 ~ 25 min, 20% A; 25 ~ 30 min, 17% A; detectiegolflengte: 333 nm; kolomtemperatuur: 30 graden; stroomsnelheid: 1,0 ml·min-1; injectievolume: 10 μl. Onder deze chromatografische omstandigheden is de scheiding tussen echinacoside en de aangrenzende componentpieken groter dan 1,5, en het theoretische plaatgetal op basis van de echinacosidepiek mag niet minder zijn dan 4,000. Het chromatogram wordt getoond in Figuur 1.

Figuur 1 HPLC-chromatogrammen van echinacoside(A) en waterextract van Cistanche herba(B)

2.3 Voorbereiding van de oplossing

2.3.1 Referentieoplossing

Weeg een geschikte hoeveelheid echinacoside-referentie af, weeg het nauwkeurig, plaats het in een maatkolf van 10 ml, voeg methanol toe om het op te lossen en bereid een referentieoplossing met 898,794 ug echinacoside per ml, en bewaar deze bij 4 graden voor later gebruik.

2.3.2 Testoplossing

Meet nauwkeurig 2.0 ml Cistanche deserticola-waterextract af, damp het droog in een waterbad, voeg methanol toe om het op te lossen, breng het tot de maat in een maatkolf van 10 ml, schud goed, en filtreer het door een microporeus filtermembraan van 0,22 μm om de oplossing te verkrijgen.

2.4 Lineair relatieonderzoek

Meet nauwkeurig {{0}}.25, 0.50, 1.00, 2.00, 2.50, 3.00 ml van de referentieoplossing af onder 2.3.1 en plaats het in een maatkolf van 5 ml, voeg methanol toe om het volume te verkrijgen, schud goed en verkrijg een referentieoplossing met een gradiëntconcentratie van 44.939 7, 89.879 4, 179.{ {21}}, 359.517 6, 449.397 0, 539.276 4 ug·mL-1,en filtreer door een microporeus membraan van 0.22 μm. Meet volgens de chromatografische omstandigheden onder 2.2 en noteer het piekoppervlak.

Voer lineaire regressie uit met de referentiemassaconcentratie als de horizontale as (X, ug·mL{{0}}) en het piekgebied als de verticale as (Y), en verkrijg de regressievergelijking: Y{{1 }}.0X-32 273.0, r=0.999 8. De resultaten toonden aan dat echinacoside een goede lineaire relatie had in het concentratiebereik van 44,939 7 ~ 539,276 4 ug·mL-1.

2.5 Precisietest

Neem 539,276 4 ug ·ml- 1 referentieoplossing, injecteer en meet continu 6 keer volgens de chromatografische omstandigheden onder 2.2, en noteer het piekoppervlak. De RSD van het piekoppervlak van echinacoside was 1,81%, wat aangeeft dat het instrument een goede nauwkeurigheid had.

2.6 Stabiliteitstest

Meet nauwkeurig 2.0 ml Cistanche deserticola-waterextract af, damp droog in een waterbad, los op in methanol, verdun in een maatkolf van 10 ml, schud goed, filtreer met 0 0,22 μm microporeus filtermembraan, en injecteer en meet op 0, 2, 4, 8, 12 en 24 uur volgens de chromatografische omstandigheden onder 2.2, en noteer het piekoppervlak. Resultaten De RSD van het piekoppervlak van echinacoside was 1,16%, wat aangeeft dat de testoplossing binnen 24 uur een goede stabiliteit had.

2.7 Herhaalbaarheidstest

Meet nauwkeurig 6 porties van 2.0 ml Cistanche deserticola-waterextract af, bereid parallel 6 porties testoplossing volgens de methode in 2.3.2, en injecteer en meet ze volgens de chromatografische omstandigheden in 2.2, en registreer het piekgebied. Resultaten De RSD van de massaconcentratie van echinacoside was 1,28%, wat aangeeft dat de methode een goede herhaalbaarheid had.

2.8 Monsterhersteltest

Meet nauwkeurig 9 porties van 1.0 ml Cistanche deserticola-waterextract af, voeg 0.8, 1.0 en 1,2 ml referentieoplossing (1,552 mg·ml{{11) toe }}) respectievelijk indampen tot droog in een waterbad, oplossen in methanol en verdunnen in een maatkolf van 10 ml; goed schudden, filtreren met een microporeus filtermembraan van 0,22 μm om hoge, gemiddelde en lage concentraties van de testoplossing te verkrijgen, 3 porties van elke concentratie parallel bereiden en meten volgens de chromatografische omstandigheden onder 2.2, noteer het piekoppervlak en bereken het monsterherstel. De resultaten worden weergegeven in Tabel 1.

2.9 Bepaling van de voorbeeldinhoud

Meet nauwkeurig 2.0 ml Cistanche deserticola-waterextract af in 3 porties, damp droog in een waterbad, los op in methanol, verdun tot 10 ml in een maatkolf, schud goed, filtreer met een microporeus filtermembraan van 0,22 μm, en bepaal volgens de chromatografische omstandigheden onder 2.2, noteer het piekoppervlak en bereken het gehalte aan echinacoside. De resultaten worden weergegeven in Tabel 2.