Blootstelling aan dieseluitlaatgassen verandert de expressie van netwerken die betrokken zijn bij neurodegeneratie in zebravishersenen Deel 3
Mar 04, 2024
De resultaten van een proteomics-vergelijking onthulden de opregulatie (oververtegenwoordiging) van ACTG2 (actine, gamma 2), CAT (catalase), GSR (glutathion-disulfidereductase), GST (glutathion S-transferase), HMOX1 (heem-oxygenase 1) en PRDX1 (peroxiredoxine). 1), evenals de downregulatie van ubiquitine-conjugerend enzym ubcM2, RAP1A (RAP1A, lid van de RASoncogene-familie), UBE2E3 (ubiquitine-conjugerend enzym E2 E3) en ACTA1 (actine, alfa 1).
Proteomics is een grootschalige wetenschappelijke technologie die de soorten, structuren, hoeveelheden en functies van eiwitten in organismen bestudeert. De afgelopen jaren hebben steeds meer onderzoeken aangetoond dat proteomics nauw verwant zijn aan het geheugen.
Onderzoekers hebben ontdekt dat eiwitten in de hersenen de signalering tussen neuronen kunnen beïnvloeden, waardoor cognitieve activiteiten zoals leren en geheugen worden beïnvloed. De meeste eiwitmoleculen die nodig zijn voor geheugencodering en opslagprocessen worden bijvoorbeeld gesynthetiseerd in synapsen. Deze eiwitmoleculen zijn niet alleen direct betrokken bij de geleiding en transductie van zenuwsignalen, maar kunnen ook de synaptische verbindingen en hun stabiliteit tussen neuronen beïnvloeden, waardoor de vorming en consolidatie van het geheugen wordt beïnvloed.
Uit onderzoek is ook gebleken dat bepaalde eiwitten een cruciale rol spelen in het geheugenproces. CaMKII-eiwitkinase in neuronen reguleert bijvoorbeeld de kracht en stabiliteit van synaptische verbindingen en speelt een belangrijke rol bij het leren en het geheugen. Een ander belangrijk eiwit is BDNF, dat de groei van neuronen, synaptische versterking en neuronale overleving kan bevorderen, waardoor de consolidatie en het onderhoud van het geheugen wordt verbeterd.
Bovendien hebben sommige onderzoeken aangetoond dat lichamelijke gezondheid en voeding ook significante effecten hebben op proteomics en geheugen. Voldoende slaap, passende lichaamsbeweging en een vetarm en eiwitrijk dieet kunnen de eiwitsynthese en -reparatie bevorderen, wat gunstig is voor het verbeteren van het geheugen en de cognitieve vaardigheden.
Samenvattend zijn proteomics en geheugen nauw met elkaar verbonden. Wetenschappers die de levenswetenschappen bestuderen, ontdekken steeds vaker hoe ze het proteoom kunnen moduleren om het geheugen te verbeteren en behandelingen voor cognitieve stoornissen zoals de ziekte van Alzheimer te voorkomen. Daarom moeten we aandacht besteden aan de resultaten van wetenschappelijk onderzoek en goede eet-, leef- en bewegingsgewoonten aanhouden om gezonde, sterke hersenen te behouden en een beter geheugen te hebben. Het is duidelijk dat we het geheugen moeten verbeteren, en Cistanche deserticola kan het geheugen aanzienlijk verbeteren, omdat Cistanche deserticola ook de balans van neurotransmitters kan reguleren, zoals het verhogen van de niveaus van acetylcholine en groeifactoren. Deze stoffen zijn erg belangrijk voor het geheugen en het leren. Bovendien kan Cistanche deserticola ook de bloedstroom verbeteren en de zuurstoftoevoer bevorderen, wat ervoor kan zorgen dat de hersenen voldoende voedingsstoffen en energie ontvangen, waardoor de vitaliteit en het uithoudingsvermogen van de hersenen worden verbeterd.
Klik op 10 manieren kennen om het geheugen te verbeteren
Onder hen kan de downregulatie van ubcM2, een remmer van Nrf2, leiden tot de hogere activiteit van deze route. Omdat verschillende componenten van het cytoskelet (ACTG2 en ACTA1) zich verschillend gedragen en gezien het gebrek aan significante differentiële expressie in Nrf2 of Keap1, kan worden geconcludeerd dat de blootstelling aan DEPe de herschikking van het cytoskelet kan veroorzaken (ten gunste van Nrf2-translocatie naar de kern) en activering van het cytoskelet. Nrf2-route indirect via oxidatieve stressstimuli (Fig. 4).
Deze bevindingen worden goed ondersteund door onze transcriptomische analyse, die de opregulatie van PRDX-, GSR- en GST (stroomafwaartse genen) laat zien. De transcriptoomanalyse heeft echter verder gedetailleerd dat c-Fos en FRA1 (twee remmers van nucleair Nrf2) aanzienlijk zijn gedownreguleerd en daarom een hogere Nrf2-activiteit mogelijk maken tijdens de DEPe-behandeling.
Fagosoomrijping
De rijping van fagosomen vergemakkelijkt het verkeer van geïnternaliseerde deeltjes naar een reeks steeds meer verzuurde, membraangebonden subcellulaire structuren, wat resulteert in degradatie van deeltjes. Na afsluiting of splitsing van het oppervlaktemembraan wordt het fagosoom gefuseerd met vroege endosomen, late endosomen en lysosomen, vergezeld van significante verzurende veranderingen in de samenstelling ervan, waardoor het wordt omgezet in een oxidatief en degradatief milieu.
De fagosoombeweging vindt plaats op basis van cytoskeleteiwitbinding (microtubuli), wat leidt tot de fusie van endosomen en lysosomen op een dynamische manier (Gotthardt et al. 2002). Tijdens de rijping stuurt de GTPase Rab5 de fusie van vroege endosomen aan via interactie met verschillende moleculen, waaronder het vroege endosoomantigeen 1 (EEA1), VPSS34-complex en SNARE-eiwitten.
Bovendien vindt verzuring gelijktijdig plaats via vATPase (een vacuolaire protonpomp) die H+ door het membraan transloceert en het lumen verder verzuurt (Desjardins et al. 1994).
Hoewel er op transcriptomisch niveau geen significante betrokkenheid van deze route werd gevonden, toont onze proteomische analyse downregulatie aan van ATP6V1A (ATPase H + transporterende V1-subeenheid A), ATP6V1E1, ATP1B2B, ATP1B3A, ATP6V1F, DYNLRB1 (dyneïne lichte keten wegversperring-type 1), TUBA1C (tubuline alfa 1c), TUBB2A, TUBB4A en VAMP2 (blaasje-geassocieerd membraaneiwit 2), wat suggereert dat de behandeling met DEPe kan leiden tot lagere fagosoomrijpingsactiviteit of veranderde lysosomale pH (Fig. 4). Dit komt overeen met ons recente rapport dat blootstelling aan DEPe resulteert in een lagere neuronale autofagische flux en suggereert een mechanisme dat ten grondslag ligt aan de neuronale toxiciteit van luchtvervuiling (Barnhill et al.2020).
Amyloïde verwerking
Amyloïde plaques zijn kenmerken van neuropathologische hersenlaesies bij AD en PD met dementie. Deze structuren zijn samengesteld uit A-bèta-peptide, dat centraal staat in de pathofysiologie van AD (SadighEteghad et al. 2015).
Amyloïde bèta wordt verwerkt door het gamma-secretasecomplex (Preseniline1/2) en bèta-secretase (BACE1) uit het type 1 transmembraaneiwit-amyloïde eiwit (APP). Het is bekend dat een abnormale Ca2+-instroom leidt tot de afwijkende activering van Calpaïne, dat een rol speelt bij de fosforylatie van het microtubuli-geassocieerde eiwit Tau via de CDK5-route.
Bovendien draagt oxidatieve stress geassocieerd met de accumulatie van A-beta bij aan de activering van verschillende kinasen, waaronder MAP-kinasen, resulterend in de fosforylering van tau. De pathologische hyperfosforylering van tau speelt een essentiële rol bij de destabilisatie van microtubuli (Sadigh-Eteghad et al. 2015). ). Deze veranderingen zijn met name relevant voor de pathogenese van AD en PD en kunnen een bijdragende factor zijn in de manier waarop luchtverontreiniging het risico vergroot.
Onze expressieanalyses suggereren een destabiliserende impact van DEPe op de regulatoren van amyloïdeverwerking, aangezien drie regulatoren, waaronder CAPNS1 (kleine calpaïne-subeenheid 1), MARK1 (microtubulusaffiniteitregulerende kinase 1) en PRKAR1B (eiwitkinasecAMP-afhankelijke type I regulerende subeenheid bèta) werden gedownreguleerd op het moment dat eiwitniveau (Fig. 4).
Mitochondriale disfunctie
Als de belangrijkste zuurstofverbruikers in een cel bevatten mitochondriën een groot aantal redoxdragers om elektronen naar zuurstof over te brengen, wat resulteert in de vorming van reactieve zuurstofsoorten (ROS).
Deze organellen bevatten een antioxidant afweersysteem om ROS te ontgiften en oxidatieve schade aan andere cellulaire componenten te voorkomen. Blootstelling aan DEPe leidde tot veranderingen in de expressie van belangrijke eiwitten die waarschijnlijk resulteerden in mitochondriale disfunctie. Zoals weergegeven in figuur 4 is er een significante afname in het eiwitniveau van ATP-synthase (ATP5F1D, ATP5mea), cytochroom-c-oxidase (COX7A2), NADH-dehydrogenase (NDUFA10,NDUFS8), 2-oxoglutaraatdehydrogenase (OGDH), en Cytochroom b-c1 complexe subeenheid 2 (UQCRC2) die een cruciale rol spelen bij het elektronentransport.
Dit zou de ATP-productie kunnen veranderen en ook direct resulteren in een verhoogde ROS-productie en toxiciteit. Er is voorgesteld dat mitochondriale disfunctie bijdraagt aan de pathogenese van AD en Parkinson en, zoals bij sommige van de hiervoor genoemde routes, zou luchtverontreiniging het risico kunnen veranderen door de functie van dit cruciale organel te verstoren.
Axonale begeleidingssignalering
De vorming van neuronale verbindingen vereist de uitbreiding van axonen die naar hun synaptische doelen migreren. Aan de voorkant van het axon bevat de axonale groeikegel receptoren met het vermogen om aantrekkelijke en afstotende begeleidingssignalen waar te nemen die nodig zijn voor de navigatie van het axon.
Naast BMP, Shh en Wnt (die recentelijk zijn betrokken bij axonale geleiding), zijn er op zijn minst vier grote groepen begeleidingssignalen: (i) netrinen en DCC/UNC-5-receptoren; (ii) Plexine-, semaforinen- en neuropilinereceptoren; (iii) Slits en Robo-receptoren; en (iv) Ephrinen en Eph-receptoren. Deze eiwitten kunnen worden uitgescheiden en geassocieerd met de extracellulaire matrix (Slits, Netrins en sommige Semaphorins) of worden verankerd aan het celoppervlak (Ephrins en andere Semaphorins) (Stoeckli 2018). Behandeling met DEPe heeft invloed op verschillende aspecten van axonale geleiding.
Op eiwitniveau veranderden verschillende belangrijke factoren en regulatoren tijdens de behandeling. De oververtegenwoordiging van PLXNB2 (plexine B2) en ondervertegenwoordiging van verschillende eiwitten, waaronder ARHGEF11 (Rho guanine nucleotideexchange factor 11), CHMP1A (geladen multivesiculair lichaamseiwit 1A), COPS5 (COP9 signaalosomesubeenheid 5), GNAT1 (G-eiwit subeenheid alfa-transducine 1), GNAT2 (G-eiwit subeenheid alfa-transducine 2), GNB5 (G-eiwit subeenheid bèta 5), MYL1 (myosine lichte keten 1), MYL2 (myosine lichte keten 2), NCK1 (adaptereiwit 1), PLXNA1 (plexine A1), PRKAR1B (proteïnekinase cAMP-afhankelijke type I regulerende subeenheid bèta), RAC3 (Rac-familie smallGTPase 3), RAP1A (een lid van de RAS-oncogenfamilie), SHANK2 (SH3 en meerdere ankyrine-herhalingsdomeinen 2), TUBA1C (tubuline alfa 1c), TUBB2A (tubuline bèta 2A klasse IIa ), en TUBB4A (tubulinbeta 4A klasse Iva) suggereren een significante verslechtering van de axongeleiding in het zich ontwikkelende embryo (aanvullende tabel 5).
Interessant genoeg werd de axonale geleidingsroute niet significant beïnvloed op transcriptomisch niveau, wat suggereert dat de betrokkenheid van deze route een stroomafwaarts resultaat kan zijn waardoor sommige van de effector/regulator-eiwitten zijn afgebroken.
Veranderingen in de axonale geleidingsroutes die hier worden beschreven, kunnen neurotoxische routes weerspiegelen die relevant zijn voor AD en PD of eenvoudigweg interferentie van de neurale ontwikkeling bij zich ontwikkelende embryo's weerspiegelen. Analyse van expressieprofielen bij volwassenen die aan DEPe zijn blootgesteld, zou deze vraag helpen oplossen.
Andere trajecten
Onze proteomische en transcriptomische analyses toonden ook de betrokkenheid aan van verschillende routes en metabolische routes, waaronder afbraak van melatonine, circadiane ritme, signalering van Sertoli-cel-Sertoli-celovergangen, signalering van epitheliale hechtingen, metabolisme van schildklierhormoon II (via conjugatie en/of afbraak), RhoA-signalering, inosine. -5′-fosfaatbiosynthese II, GP6-signaleringsroute, RhoGDI-signalering, extrinsieke protrombine-activeringsroute en het coagulatiesysteem. Veel van deze veranderingen kunnen veranderingen weerspiegelen als gevolg van de onderbreking van de ontwikkeling.
Zowel proteomic als transcriptomische analyses onthulden bijvoorbeeld dat de fototransductieroute de grootste veranderingen in expressie vertoont na behandeling met DEPe. Zoals weergegeven in aanvullende tabel 5 hebben verschillende genen, waaronder Opsin, GRK, S-arrestin, Transducin-, Transducin-, PDC en GUCA een verzwakt transcriptieniveau als gevolg van de blootstelling aan DEPe. Vanwege het gebrek aan bewijs voor de inductie van welk element dan ook in deze route, lijkt DEPe-behandeling de ontwikkeling van het visuele systeem te schaden. Dit komt overeen met onze waarneming dat de ogen na de behandeling nooit volledig ontwikkeld zijn en klein zijn.
Functionele beoordeling
In dit rapport was de aanzienlijke verhoging van cytochroom P450 (Cyp1A) het meest opvallende effect van blootstelling aan DEPe. Cyp1A metaboliseert veel endogene en exogene verbindingen en een verhoogde expressie in de hersenen kan beschermend zijn tegen, of bijdragen aan, toxiciteit. Om de rol van Cyp1A bij DEPe-toxiciteit beter te begrijpen, hebben we CRISPR/Cas9 gebruikt om een Cyp1A-knockdown-model te genereren. Omdat de procedure voor het bewerken van genen bij de zebravis waarschijnlijk een gedeeltelijk proces is dat resulteert in mozaïekembryo's, gebruiken we de term 'knockdown' (KD) in plaats van 'knock-out'. Met behulp van een sequentiespecifiek gids-RNA hebben we de eerste CCA PAM-site omgezet in een TGA-(stop)codonine, het eerste exon van Cyp1A. Als alternatief werd een niet-doelwitgids-RNA gebruikt als scramble control (SC).
Totaal RNA werd vervolgens geïsoleerd uit de hoofden van maximaal 20 KD- en SC-embryo's (5 pdf), en de knockdown-efficiëntie werd gevalideerd door qPCR-analyse. Vergelijkbaar met wat werd waargenomen in de RNA-Seq-studie met hoge doorvoer, demonstreerde dit experiment een scherpe inductie (30,59- maal ten opzichte van de basislijn) van Cyp1A na DEPe-behandeling in de SC-embryo's, terwijl de KD-embryo's een dergelijke toename in expressie achterwege lieten ( Afb. 5a).
De overleving van zes groepen embryo's tijdens een 7-dagkuur (n groter dan of gelijk aan 40) wordt weergegeven in figuur 5b. In het kort was de gemiddelde overleving bij 7pdf 89,1%, 74,4%, 79,4%, 68,5%, 48,8% en 7,6% voor de WT/DMSO, WT/DEPe, SC/DMSO, SC/DEPe, KD/DMSO en KD/DEPe, respectievelijk. KD van Cyp1A resulteerde dus in een verminderde overleving, maar was dramatisch verminderd bij de met DEPe behandelde vissen vergeleken met controles.
Bovendien resulteerde KD ook in een significant hoger aantal morfologische misvormingen (figuur 5c). De inductie van Cyp1A-expressie door DEPe lijkt dus een beschermend compensatiemechanisme te zijn. Een significante beperking van onze bevindingen is dat we Cyp1A-inductie van expressie in de hersenen van de zebravis hebben gemeten, maar dat KDexperiments de expressie in het gehele embryo verminderde.
Belang en implicaties voor neurodegeneratieve ziekten
Het is bekend dat luchtverontreiniging een negatieve invloed heeft op de levenskwaliteit en een belangrijke rol speelt bij de ontwikkeling van ziekten bij mens en dier. Met behulp van high-throughput-expressieanalyses hebben we aangetoond dat DEPe-behandeling verschillende biologische processen en signaalroutes in de hoofden van zebravisembryo's veranderde. Veranderingen in fagosoomvorming, amyloïdeverwerking en mitochondriale functie zijn bijzonder relevant voor neurodegeneratie.
Verrassend genoeg duidden onze resultaten niet op enige duidelijke betrokkenheid van ontstekingen, waarvan wordt verondersteld dat ze een belangrijke rol spelen bij de toxiciteit van luchtverontreiniging. Dit komt waarschijnlijk omdat we de expressie alleen in de hoofden van 5-eendagsoude zebravissen hebben gemeten en niet in het hele lichaam. Deze onderzoeken waren bedoeld om te bepalen hoe de hersenen worden beïnvloed door blootstelling aan DEPe.
De hersenen bevatten microglia, die waarschijnlijk worden geactiveerd door DEPe, maar ze vormen zo'n klein deel van de cellen in de hersenen dat eventuele veranderingen niet waarneembaar zijn. Bovendien zijn microglia pas aanwezig en functioneren ze niet in de hersenen van zich ontwikkelende larven. Hierdoor is vroege blootstelling mogelijk niet het meest relevant voor het bestuderen van ontstekingsreacties. De inductie van xenobiotisch metabolisme is waarschijnlijk ook relevant als compenserende of beschermende reactie op luchtverontreiniging.
Ons Cyp1AKD-model valideerde de beschermende rol van deze route en vertegenwoordigt een uitstekend voorbeeld van hoe expressiestudies belangrijke aanwijzingen kunnen opleveren om mechanismen van toxische stoffen zoals luchtvervuiling te bepalen. Het is niet bekend of polymorfismen in het Cyp1A-gen het risico op AD of PD veranderen bij mensen die worden blootgesteld aan luchtvervuiling, maar deze resultaten suggereren een potentiële gen-omgevingsinteractie en verdienen verder onderzoek.
Een belangrijke vraag die moet worden beantwoord, is de relevantie van blootstelling aan DEPe voor luchtverontreiniging. DEPe is het meest gebruikte mengsel dat wordt gebruikt bij onderzoek naar luchtverontreiniging voor celcultuur en andere modellen die niet geschikt zijn voor inhalatiekamers. De dichloormethaanextracten van DEP bevatten hydrofobe delen zoals PAK's waarvan de kans het grootst is dat ze in de bloedbaan terechtkomen en zich bioaccumuleren in de hersenen. Een recente studie bepaalde de concentratie van verschillende PAK's in de hersenen van menselijke autopsie en ontdekte dat deze concentraties PAK's bevatten die sterk leken op de concentraties die werden gebruikt in de hier gepresenteerde onderzoeken (Pastor-Belda et al. 2019). De blootstelling aan de hersenen van zebravissen is dus zeer relevant, omdat deze PAK's en andere delen bevatten waarvan is waargenomen dat ze bioaccumuleren in de menselijke hersenen.
Dankbetuiging Wij danken de volgende instanties voor de financiering van dit werk: De Levine Foundation (JMB), subsidies van het National Institute of Environmental Health Sciences, NIEHST32ES015457 (LMB, SK), en The Parkinson's Alliance (JMB).
Bijdrage van de auteur Conceptie en ontwerp van de studie (MSJ, LMB, JMB); Verwerving van gegevens (MSJ, HM, LMB, SL):Analyse en interpretatie van gegevens (MSJ, LMB, JMB); Het artikel opstellen of kritisch herzien op belangrijke intellectuele inhoud (MSJ, HM, LMB, JMB).
Financiering Deze onderzoeken werden ondersteund door de Levine Foundation (JMB), subsidies van het National Institute of Environmental Health Sciences, NIEHS T32ES015457 (LMB, SK) en de Parkinson's Alliance (JMB).
Beschikbaarheid van gegevens Alle gegevens zijn beschikbaar in onze aanvullende bestanden.
Verklaringen
Ethische goedkeuring Alle dierproeven zijn goedgekeurd door de Animal Research Committee van de UCLA.
Toestemming voor publicatie Alle auteurs keuren deze inzending voor publicatie goed.
Concurrerende belangen De auteurs verklaren geen concurrerende belangen.
Open Access Dit artikel is gelicentieerd onder een Creative Commons Attribution 4.0 Internationale licentie, die het gebruik, delen, aanpassen, distribueren en reproduceren in elk medium of formaat toestaat, zolang u de oorspronkelijke auteur(s) op passende wijze vermeldt. en de bron, geef een link naar de Creative Commons-licentie en geef aan of er wijzigingen zijn aangebracht.
De afbeeldingen of ander materiaal van derden in dit artikel zijn opgenomen in de Creative Commons-licentie van het artikel, tenzij anders aangegeven in een creditregel bij het materiaal. Als materiaal niet is opgenomen in de Creative Commons-licentiehouder van het artikel en uw beoogde gebruik niet is toegestaan door wettelijke voorschriften of het toegestane gebruik overschrijdt, moet u rechtstreeks toestemming verkrijgen van de houder van het auteursrecht. Om een kopie van deze licentie te bekijken.
Referenties
Ahmadinejad F, Møller, SG Hashemzadeh-Chaleshtori M, BidkhoriG, Jami MS. Moleculaire mechanismen achter vrije radicalenvangers werken tegen oxidatieve stress Antioxidanten 2017;6https://doi.org/10.3390/antiox6030051
Barnhill LM, Khuansuwan S, Juarez D, Murata H, AraujoJA, Bronstein JM. 2020. Blootstelling aan dieseluitlaatgassen veroorzaakt neuronale toxiciteit door autofagie te verstoren. Toxicol Sci; https://doi.org/10.1093/toxsci/kfaa055. Beschikbaar: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/32298450 [geraadpleegd op 1 mei 2020].
Bostancıklıoğlu M. Een update over de interacties tussen de ziekte van Alzheimer, autofagie en ontstekingen. Gene.2019;705:157–66. https://doi.org/10.1016/j.gene.2019.04.040.
Calderón-Garcidueñas L, Maronpot RR, Torres-Jardon R, Henriquez-Roldán C, Schoonhoven R, Acuña-Ayala H, et al. DNA-schade in neus- en hersenweefsel van honden die worden blootgesteld aan luchtverontreinigende stoffen wordt in verband gebracht met aanwijzingen voor chronische hersenontsteking en neurodegeneratie. Toxicol Pathol. 2003;31:524–38. https://doi.org/10.1080/01926230390226645.
Calderón-Garcidueñas L, Mora-Tiscareño A, Ontiveros E, Gómez-Garza G, Barragán-Mejía G, Broadway J, et al. Luchtvervuiling, cognitieve tekorten en hersenafwijkingen: een pilotstudie met kinderen en honden. Brain Cogn.2008a;68:117–27. https://doi.org/10.1016/j.bandc.2008.04.008.
Calderón-Garcidueñas L, Reed W, Maronpot RR, HenríquezRoldán C, Delgado-Chavez R, Calderón-Garcidueñas A, et al. Hersenontsteking en Alzheimer-achtige pathologie bij personen die zijn blootgesteld aan ernstige luchtvervuiling. Toxicol Pathol. 2004;32:650–8. https://doi.org/10.1080/01926230490520232.
Calderón-Garcidueñas L, Solt AC, Henríquez-Roldán C, TorresJardón R, Nuse B, Herritt L, et al. Langdurige blootstelling aan luchtvervuiling wordt geassocieerd met neuro-ontsteking, een veranderde aangeboren immuunrespons, verstoring van de bloed-hersenbarrière, afzetting van ultrafijne deeltjes en accumulatie van amyloïde -42 en -synucleïne bij kinderen en jonge volwassenen. Toxicol Pathol. 2008b;36:289–310. https://doi.org/10.1177/0192623307313011.
Calderón-Garcidueñas L, Villarreal-Calderon R, ValenciaSalazar G, Henríquez-Roldán C, Gutiérrez-Castrellón P, Coria-Jiménez R, et al. Systemische ontsteking, endotheeldysfunctie en activering bij klinisch gezonde kinderen die worden blootgesteld aan luchtverontreinigende stoffen. Toxicol inhaleren. 2008c;20:499–506. https://doi.org/10.1080/08958370701864797.
For more information:1950477648nn@gmail.com
