Contactpersoon: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Yu Lixin Chen Xueqiang Wu Qunfeng Dong Weiqin Guo Songhua Yu Jian Feng Wei Yang Lei Fu Yifeng Li Junjie Luo Cheng

1 Het 98e ziekenhuis van het Chinese Volksbevrijdingsleger, Huzhou, Zhejiang 313000

2 Zhejiang Universiteit voor Traditionele Chinese Geneeskunde, Hangzhou, Zhejiang 310053

3 Fuyang Traditional Chinese Medicine Orthopedics Hospital, Hangzhou City, provincie Zhejiang, Hangzhou 311400, Zhejiang, China

Abstract

Doel: observeren van het effect vanCistanchewater extractop de genezing vanosteoporotischfracturen bij ratten en om het mechanisme ervan te onderzoeken. Methoden: vrouwelijke SD-ratten van SPF-kwaliteit werden willekeurig verdeeld in controlegroep, modelgroep en behandelingsgroep en gemodelleerd volgens verwante methoden. 24 uur na fractuurmodellering kregen de controlegroep en de modelgroep een normale zoutoplossing, en de behandelingsgroep kreeg een sonde metCistanchewaterextract eenmaal per dag. Na 2 weken en 6 weken interventie werd bloed verzameld uit de abdominale aorta om interleukines te detecteren. TP (IL-1 B) en transformerende groeifactor-B l (TGF-8 1) niveaus, verzamel fractuurspecimens tegelijkertijd, voer micro-CT-scan uit na fixatie, meet R0 I callusbotvolumefractie (BV/TV) en andere gerelateerde parameters Na ontkalking, uitdroging en inbedding werd het verwerkt tot wasblokken voor gebruik. Resultaten: 6 weken nadat het osteoporosemodel was vastgesteld, was de botmineraaldichtheid van ratten in de modelgroep en de behandelingsgroep lager dan die van de controlegroep (P<0.05), but="" there="" is="" no="" significant="" difference="" between="" the="" treatment="" group="" and="" the="" model="" group.="" although="" the="" bone="" density="" of="" the="" treatment="" group="" is="" still="" lower="" than="" that="" of="" the="" control="" group="" after="" 2="" weeks="" and="" 6="" weeks="" of="" intervention,="" it="" is="" significantly="" higher="" than="" that="" of="" the="" model="" group=""><0.05). micro-ct="" scan="" shows="" the="" treatment="" group="" bv/tv,="" tb.="" sp,="" tb.="" n,="" tb.="" th,="" smi="" was="" better="" than="" the="" model="" group="" at="" 2="" and="" 6="" weeks="" after="" the="" intervention,="" and="" the="" bv/tv,="" tb.="" sp,="" smi="" parameters="" of="" the="" control="" group="" and="" the="" treatment="" group="" were="" not="" different="" from="" those="" of="" the="" treatment="" group.="" obviously,="" the="" micro-ct="" parameters="" of="" the="" model="" group="" at="" 2-time="" points="" were="" inferior="" to="" the="" control="" group.="" after="" 2="" weeks="" and="" 6="" weeks="" of="" intervention,="" comparing="" the="" serum="" ilt="" b="" and="" tgf-p="" 1="" levels="" of="" the="" 3="" groups,="" it="" was="" found="" that="" the="" il-1="" p="" levels="" of="" the="" treatment="" group="" were="" lower="" than="" those="" of="" the="" other="" two="" groups="" at="" 2="" weeks.="" at="" 6="" weeks,="" the="" il-1="" p="" levels="" of="" the="" treatment="" group="" were="" higher="" than="" those="" of="" the="" other="" two="" groups.="" the="" control="" group,="" but="" still="" significantly="" lower="" than="" the="" model="" group=""><0.05); in="" terms="" of="" tgf-b="" 1="" level,="" the="" treatment="" group="" was="" higher="" than="" the="" model="" group="" and="" the="" control="" group="" at="" 2="" and="" 6="" weeks,="" and="" there="" was="" no="" statistical="" difference="" between="" the="" control="" group="" and="" the="" control="" group.="" significance.="" conclusion:="" according="" to="" the="" analysis="" of="" bone="" mineral="" density,="" micro-ct="" scan="" parameters,="" and="" serum="" il-1="" b="" and="" tgf-b="" 1="" levels,="" it="" is="" found="" that="" the="" aqueous="" extract="" of="">Cistanchekan de genezing vanosteoporotischfracturen, en het mechanisme ervan kan verband houden met de remming vanosteoporotischbreuken. Na het rattenserum IL-1 B en de afscheiding van TGF-8 1 bevorderen, wat osteoporose kan verbeteren en de genezing van fracturen kan bevorderen.

Trefwoorden: osteoporotische fractuur, Cistanche, fractuurgenezing, rat

Osteoporose is een ziekte waarbij de botdichtheid afneemt, de fijne structuur van botweefsel wordt vernietigd en de kwetsbaarheid van bot toeneemt. Patiënten kunnen in het dagelijks leven onder lichte externe kracht fracturen veroorzaken. Het is een veel voorkomende klinische ziekte en een vaak voorkomende ziekte. Bovendien zijn dit type fracturen meestal oudere patiënten, vaak geassocieerd met andere ziekten, en de meeste fracturen zijn verkleind, met een slechte stabiliteit, en soms treedt er langzame of niet-genezende fractuurgenezing op, en is er een hoge mate van invaliditeit en letaliteit. Momenteel vindt de behandeling ervan voornamelijk plaats door middel van chirurgie, handmatige restauratie en anti-osteoporosebehandeling. Er is een gebrek aan gerichte behandelingsmedicijnen voor patiënten met:osteoporotischbreuken. Traditionele Chinese geneeskunde heeft een lange geschiedenis van de behandeling van osteoporose en heeft een positief effect. Van veel traditionele Chinese medicijnen is bewezen dat ze de botten verbeteren. Slechtheid kan ook de genezing van fracturen bevorderen. Rongrong wordt vaak gebruikt als een representatief medicijn voor het voeden van nier-yang en heeft als effect dat het de lever en de nieren voedt. Traditionele Chinese geneeskunde gelooft dat de nier het bot regeert, en de behandeling van fracturen is ook onlosmakelijk verbonden met de nier en de essentie. De moderne farmacologie heeft ontdekt dat vleesas ook een bepaald oestrogene werking heeft. Deze studie is bedoeld om botdichtheidsmeting, micro-CT en serum interleukine-13 (IL-10 ), transformerende groeifactor-P KTGF-P 1) niveauwaarneming en waterextract van vleesherniapasta op de genezing vanosteoporotischfracturen bij ratten

Cistanche

1Materialen en methoden

1.1 Proefdieren en reagensapparatuur: 52 SPF vrouwelijke SD-ratten met een gewicht van 210~250g worden grootgebracht in het Animal Experiment Center van de Zhejiang University of Traditional Chinese Medicine. Complex jodium, Hangzhou Lonzo Medical Disinfectant Co., Ltd., batchnummer 20160720; Penicilline, North China Pharmaceutical Co., Ltd., batchnummer F3117217; IL-18 kit (batchnummer: 20160715), TGF-8 1 kit (batchnummer: 20160722); Dual-energy X-ray botdichtheidsscanner, 0STE0C0RE2; Micro-CT, Skyscan1176O

1.2 Extractie vanCistanchewaterextract: de grond wekencistanche(Zhejiang University of Traditional Chinese Medicine Pharmaceutical Factory) 10 keer ultrapuur water gedurende 0,5 uur, braadpan afkooksel gedurende 1,5 uur, herhaal de extractie 2 keer, en de gemengde medicinale vloeibare roterende stomer Concentreer tot een concentratie van 1,5 g /ml en bewaar in de koelkast op 4 graden voor later gebruik.

1.3 Modellering voorbereiding: De punten zijn als volgt.

1.3. 1 Osteoporosemodel: de ratten werden adaptief gefokt gedurende 1 week vóór het modelleren en willekeurig verdeeld in controlegroep, modelgroep en behandelingsgroep, met respectievelijk 16 ratten, 18 ratten en 18 ratten, en elke groep was gebaseerd op het tijdstip van 2 weken en 6 weken. Elk werd in twee groepen verdeeld. Zowel de behandelingsgroep als de modelgroep werden verdoofd met 1 procent pentobarbital-natrium (0,4 ml/100 g), de huid werd verdoofd, gedesinfecteerd, gedrapeerd en de huid werd gesneden. De bilaterale eierstokken van de rat werden verwijderd. De controlegroep had alleen een incisie. Niet doen

Verwijdering van de eierstokken

1.3. 2 Fractuurmodel: 6 weken na het opstellen van het osteoporosemodel wordt het fractuurmodel gemaakt. Nadat de ratten in elke groep zijn verdoofd, wordt de botmineraaldichtheid van het middelste dijbeen gemeten. , Incisie, maak een model van transversale breuk van het middelste dijbeen, fixeer het met 1 mm Kirschner-draad, steriliseer en hecht de huid van de incisie

1.4 Geneesmiddelinterventie: röntgendetectie van het dijbeen werd uitgevoerd na modellering, ratten die faalden in de modelvoorbereiding werden geëlimineerd en 80 000 eenheden penicilline werden intramusculair geïnjecteerd na modellering om infectie te voorkomen. 24 uur na de operatie kreeg de behandelingsgroep het waterextract van vleesherniapasta (concentratie 1,5 g/ml, lg/kg, eenmaal per dag). De controlegroep en de modelgroep kregen hetzelfde volume normale zoutoplossing.

1.5 Monstername: Rattenmonsters werden 2 en 6 weken na de interventie verzameld. Na 1% pentobarbital-natriumanesthesie werd 5-10ml bloed uit de abdominale aorta verzameld om serum te bereiden en bewaard in een -20B-koelkast. Reserve. Daarna werden de ratten opgeofferd en werden de femurfractuurmonsters verzameld en 72 uur in 10% neutraal formaldehyde geplaatst.

1.6 Testindicatoren: De punten zijn als volgt.

1.6. 1 Botmineraaldichtheid: Alle ratten na het osteoporosemodel werden verdoofd vóór het fractuurmodel, en vervolgens werd de botmineraaldichtheid van het middelste dijbeen gemeten. De drie groepen ratten kregen monsters na 2 en 6 weken interventie, en de monsters werden 72 uur gefixeerd en daarna werd de botdichtheid opnieuw gemeten.

1.6. 2 Micro-CT: Micro-CT-scan wordt uitgevoerd nadat het monster 72 uur is gefixeerd, met 200 foto's boven en onder het breukuiteinde als het interessegebied (R01), scanhoek 360 graden, stroom 555uA, spanning 42kV, filter Al 0,2 mm, resolutie 8,73um, na voltooiing van de driedimensionale beeldreconstructie en analyse van de callus. De detectieparameters zijn als volgt: botvolumefractie BV/TV, bottrabeculaire modelfactor (Tb. Pf); structurele modelindex (SMI), enz."

1.6.3 Bepaling van serum IL-1P en TGF-P1: Ontdooi het rattenserum uit de koelkast op -20 graden, en voer de detectie stapsgewijs uit volgens de IL-13 en TGF" 1 kit instructies.

1.7 Statistische methoden: gebruik statistische analysesoftware SPSS.19 voor verwerking. De experimentele gegevens worden uitgedrukt in termen van gemiddelde ± standaarddeviatie (G ± s) en de botmineraaldichtheid van de drie groepen ratten. Micro-CT-parameters JL-1 P JGF-P 1-niveaus worden gemiddeld door eenrichtingsanalyse van variantie, en paarsgewijze vergelijkingen tussen groepen worden gebruikt Inspectie, het inspectieniveau is P<0.>

2 resultaten

2.1 Botdichtheid van de drie groepen: zie Tabel 1.

Tabel 1 Resultaten van botmineraaldichtheid in het middelste dijbeen van elke groep ratten (x±s, g/cm²)

Opmerking: Vergeleken met de modelgroep, *P<0.05; compared="" with="" the="" control="" group.△=""><>

2.2 Micro-CT tweedimensionale dwarsdoorsnede: de sagittale tweedimensionale dwarsdoorsnede selecteert de afbeeldingen van de lengteas van het dijbeen op elk tijdstip in elke groep (zie figuur 1), en de horizontale tweedimensionale dwarsdoorsnede sectie selecteert de 100ste afbeelding onder de breuklijn ter vergelijking (Figuur 2). Uit de figuur blijkt dat de callus van elke groep geleidelijk toenam, maar 6 weken na de breuk was deze in verschillende mate plastisch; tegelijkertijd is te zien dat de callus in de controlegroep groot was en de calluscortex dik was en na 6 weken over de breuklijn kroop, terwijl de callus in de modelgroep Er was minder bot in de callus bij 2 weken en de calluscortex was na 6 weken los. Hoewel het volume van de callus in de behandelingsgroep niet groot was na 2 weken, was de botmassa in de callus groter dan die in de modelgroep. De callus was na 6 weken beter gevormd. En de breuklijn is niet duidelijk.

Controlegroep Modelgroep Behandelgroep

Figuur 1 De sagittale doorsnede van het middelste dijbeen van elke groep

Figuur 2 Horizontale doorsnede van het middelste dijbeen van elke groep

2.3 Driedimensionale micro-CT-reconstructie: de driedimensionale reconstructie van de callus aan het gebroken uiteinde van het dijbeen wordt weergegeven in figuur 3. In figuur 3 is te zien dat de callus zich langs het periosteum aan beide uiteinden van de fractuur heeft gevormd lijn 2 weken na de breuk in elke groep waren de breukstrengen in elke groep nog steeds helder, vooral in de modelgroep en de behandelingsgroep, terwijl de callus in de controlegroep dik en dik was, meestal met platen 6 weken na de breuk . De trabeculaire botten waren overheersend en de fractuurlijn verdween, terwijl de modelgroep losse botten was en de fractuurlijn wazig was, maar de behandelingsgroep had meer callusbot, regelmatig en dik trabeculair bot, en de fractuurlijn was niet duidelijk.

Figuur 3 Driedimensionale reconstructie van R0I-callus aan het gebroken uiteinde

2.4 Micro-CT-parameters: gebruik software om de callus aan het gebroken uiteinde te analyseren. Zie Tabel 2 voor gerelateerde parameters.

Tabel 2 Vergelijking van micro-CT-parameters van elke groep (x ± s)

Controlegroep Modelgroep Behandelgroep

Opmerking: Vergeleken met de modelgroep, *P<0. 05;="" compared="" with="" the="" control="" group.=""><0.>

2.5 Serum IL-1 P .TGF-P 1-niveau: zie tabel 3.

Tabel 3 Vergelijking van IL-1 P JGF-0 1-niveaus in elke groep G±s, n=8)

Opmerking: Vergeleken met de modelgroep, *P<0.05; compared="" with="" the="" control="" group,=""><0.05 0="" 3="">

In de afgelopen jaren is in de klinische praktijk bewezen dat de traditionele Chinese medicijnen Yinyangdian, Drynaria Fortune en zijn verbindingen (Qing's Pills, Liuwei Dihuang Pills, etc.) osteoporose aanzienlijk verbeteren. Dit type Chinese geneeskunde en verbindingen worden meestal gebruikt om de lever en de nieren te voeden. Dit is in overeenstemming met het principe van het voeden van de nier en het vernieuwen van de spieren in de middelste en late stadia van de fractuur. "Tien dagen. De vlezige ledemaatpasta werd voor het eerst gepubliceerd in "Shen Nong's Materia Medica". , Warm van aard, heeft de functies van het voeden van de nier en het versterken van yang, het aanvullen van essentie en merg, het voeden van bloed en het hydrateren van droogheid, en aangename kleur en levensduur verlengen.

In deze studie was de botmineraaldichtheid van de behandelingsgroep hoger dan die van de modelgroep na 2 en 6 weken interventie (P<0.05). micro-ct="" scan="" bv/tv="" parameters="" showed="" the="" results="" and="" bone="" mineral="" density="" of="" the="" treatment="" group="" at="" two="" time="" points="" after="" the="" intervention="" the="" measurement="" results="" are="" consistent,="" and="" bv/tv="" is="" an="" important="" indicator="" for="" the="" evaluation="" of="">osteoporotischgenezing van breuken. Het weerspiegelt direct het botgehalte van de callus. Dit toont aan dat Rouganrong het effect kan hebben van het bevorderen van osteogenese. De analyse kan effectief zijn in de vleesherniapasta. De ingrediënten hebben het effect dat BMP2 omhoog wordt gereguleerd, en BMP2 is een van de leden van de TGF-8-familie. En dit resultaat wordt ook bevestigd door andere parameters van de Micro-CT-scan (Tb. Spjb. N, Tb. Th. SMI). tb. Sp en SMI weerspiegelen de biomechanische eigenschappen van callus, en de waarden in de behandelingsgroep zijn aanzienlijk beter dan de modelgroep, dit suggereert ook verder dat Roudongrong het effect heeft van het verbeteren van botverlies, het bevorderen van osteogenese en het versnellen van fractuurgenezing.

In termen van serum-IL-1B- en JGF-P1-niveaus werd na 2 weken en 6 weken interventie gevonden dat het IL-1P-niveau van de behandelingsgroep lager was dan de andere twee groepen na 2 weken en na 6 weken. Hoewel het IL-1 B-niveau van de behandelingsgroep hoger was dan de controlegroep, nog steeds significant lager dan de modelgroep (『<0.05); while="" the="" tgf-p="" 1="" level="" of="" the="" treatment="" group="" was="" higher="" than="" the="" model="" group="" and="" the="" control="" group="" at="" 2="" and="" 6="" weeks,="" and="" there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" from="" the="" control="" group="" the="" level="" of="" il-1="" p="" directly="" affects="" the="" differentiation="" and="" activity="" of="" osteoclasts.="" an="" increase="" in="" its="" level="" will="" promote="" bone="" resorption="" and="" inhibit="" the="" proliferation="" and="" differentiation="" of="" osteoblasts.="" jhtgf-p="" 1="" is="" closely="" related="" to="" the="" proliferation,="" differentiation,="" and="" migration="" of="" osteoclasts.="" it="" has="" the="" effect="" of="" promoting="" cartilage="" and="" bone="" callus="" formation="" ⑵="" and="" accelerating="" the="" shaping="" of="" bone="" callus.="" this="" suggests="" that="">Cistanchekanbotverlies verbeteren, osteogenese bevorderen en fractuurgenezing versnellen. Het kan het niveau van IL-13 in . verminderenosteoporotischbreuk ratten en remmen breuk. Botcelactiviteit wordt bereikt; daarnaast kan het ook te maken hebben met het feit dat:Cistanchekan het niveau van TGF-B 1 bij gebroken ratten verhogen, osteogene differentiatie en callusrijping en -vorming bevorderen.

Samenvattend, op basis van de analyse van botmineraaldichtheid, Micro-CT-scanparameters en serum IL-1 P, TGF"1-niveaus, werd gevonden dat het waterige extract vanCistanchekanbotverlies verbeterenengenezing van osteoporotische fracturen bevorderen. Het mechanisme kan hiermee verband houden. Het kan de secretie van serum ILT 8 remmen en daarna de secretie van TGF-B 1 bij ratten bevorderenosteoporotischfracturen, waardoor osteoporose verbetert en de genezing van fracturen wordt bevorderd.

4 referenties

[1] Ma Yuanzheng, Wang Yipeng, Liu Qiang, et al. Richtlijnen voor de diagnose en behandeling van osteoporose bij ouderen in China (2018) [J], Chinese Journal of Osteoporose, 2018, 24(12): 1541-1567.

[2]Zhu Gang, Sun Haibin, Xu Gang, et al. Het therapeutisch effect en mechanisme van het alcoholextract van vleeshernia bij ratten waarbij de eierstokken zijn verwijderd met osteoporose [J]. Journal of Jilin University (Medicine Edition), 2018, 44(1): 68-72.

[3] Karvande A, Khedgikar V, Kushwaha P, et al. Kernhoutextract van Dalbergia sissoo bevordert de genezing van fracturen en de toepassing ervan bij door ovariëctomie geïnduceerde osteoporotische ratten [J]. Journal of Pharmacy and Pharmacology, 2017, 69(10): 1381-1397.

[4]Kevin 0'Neill, Christopher MS, Nicholas AM, et al. Microcomputertomografiebeoordeling van de progressie van fractuurgenezing bij muizen [j]. Bot, 2012, (6): 1357-1367.

[5] Yao Xinmiao, Shi Xiaolin, Wang Jian, et al. Deskundige consensus over graduele diagnose en behandeling van primaire osteoporose met traditionele Chinese geneeskunde in de provincie Zhejiang (2017) [J], Zhejiang Journal of Traditional Chinese Medicine, 2018, 53(4): 237- 241.

[6] Ma Meng, Zhang Zhiguo, Ma Xiaohui. Onderzoeksvooruitgang in de preventie en behandeling van osteoporose door enkelvoudige en samengestelde Chinese medicijnen [J]. China Medische Gids, 2018, 20(8) =477-481.

[7] Zhang Yuequan, Zheng Danhong, Xu Jianfeng, et al. Het effect van puree van woestijnvlees op de BMP-2-eiwitexpressie in snel verouderende osteoporotische muizen [J]. Ningxia Medisch Tijdschrift, 2014, 36(12): 1114-1116