Effecten van ruw polysacharide van Cistanche Deserticola op mond- en klauwzeer Viraal vaccin-antilichaam en subgroep T-cellen

Contactpersoon: Audrey Huéaudrey.hu@wecistanche.com

ZHANG Ai-Lian; BA Xue-li; WANG Dan-yang; ZHAO Bing

Mond- en klauwzeer (MKZ)is een ziekte veroorzaakt door demond- en klauwzeervirus (MKZV)die zich onder evenhoevige dieren verspreidt, de gezondheid van de veestapel ernstig in gevaar brengt en enorme economische verliezen veroorzaakt. Vaccinatie wordt veel gebruikt als een effectief middel om mond- en klauwzeer te voorkomen en heeft opmerkelijke resultaten opgeleverd. Vanwege de zwakke immunogeniciteit van het door mond- en klauwzeervirus geïnactiveerde antigeen, is het vaak nodig om een ​​adjuvans toe te voegen om zijn rol te spelen [1-2]. Momenteel is het algemeen gebruikte adjuvans in commerciële mond- en klauwzeervaccins de ISA-206-olie-emulsie, die een activator is van de cellen en ook de humorale immuunrespons kan versterken, maar de bijwerkingen zijn relatief groot. Hoewel er veel soorten hulpstoffen zijn, zoals veelgebruikte hulpstoffen (aluminiumzouthulpstoffen, olie-wateremulsies, enz.) en nieuwe hulpstoffen (MF59, plantaardige polysachariden enz.), zijn de hulpstoffen die worden gebruikt voor mond- en klauwzeervaccins zijn nog steeds beperkt, voornamelijk met inbegrip van aluminiumhydroxide, span, lichte minerale olie, enz., hebben allemaal verschillende defecten, zoals een onbevredigend immuuneffect of zeer toxische en bijwerkingen [3-4]. Daarom is er een dringende behoefte aan de ontwikkeling van nieuwe adjuvantia met hoge efficiëntie en lage toxiciteit voor mond- en klauwzeervaccins om het immuunbeschermende effect van het vaccin te verbeteren, wat van positieve betekenis is voor depreventie en behandeling van mond- en klauwzeer.

Chinees medicijnkruiden heeft brede toepassingsmogelijkheden in de preventie en behandeling van infectieziekten. Chinese kruidengeneeskunde heeft een lange geschiedenis in de behandeling van ziekten bij mens en dier. Op het gebied van onderzoek naar adjuvante vaccins hebben binnenlandse en buitenlandse onderzoekers polysachariden geëxtraheerd uit een verscheidenheid aan Chinese kruidengeneesmiddelen om hun adjuvante effecten te bestuderen, zoals ginseng-polysachariden, astragalus-polysachariden, tuckahoe-polysachariden, epimedium-polysachariden, enz. immuunfuncties voor mens en dier. Het heeft een goed promotie-effect en wordt een nieuwe kandidaat-adjuvans [5-7].

Cistanche (Cistanche deserticola YCMa)is een plant van de familie Dang. Het is een veelgebruikt voedend Chinees kruidengeneesmiddel en is gebruikt als voedzaam voedsel voor langdurige consumptie door mensen. In de afgelopen jaren hebben onderzoekers veel onderzoek gedaan naar de chemische structuur en farmacologische activiteit van Polysaccharide uit Cistanche en ontdekten dat de actieve ingrediënten ervan voornamelijk polysacchariden, totaal fenylethanoïde glycoside, alkaloïden, enz. omvatten, waaronder het gehalte aan polysacchariden is relatief hoog en verstelbaar. Het immuunsysteem heeft anti-oxidatie en anti-aging effecten [8-9].

Cistanche (Cistanche deserticola YCMa)

Voorlopige studies hebben aangetoond dat de combinatie van ruwe cistanche-woestijnpolysacharide en met OVA geïmmuniseerde muizen het niveau van OVA-specifieke antilichamen aanzienlijk verhoogde, en dat compatibiliteit met het griepvaccin het antilichaamniveau van het griepvaccin kan verhogen [10-11]. Met het oog hierop werd in deze studie het ruwe polysacharide van Cistanche deserticola gebruikt als kandidaat-adjuvans voor het geïnactiveerde mond- en klauwzeervaccin, en geselecteerde in water oplosbare adjuvantia met significante immuunversterkende effecten en kleine bijwerkingen, zodatRuw polysacharide van Cistanche deserticola kan effectief worden gebruikt als nieuw adjuvans voor mond- en klauwzeervaccins.

Voorbereiding van de agent

In dit onderzoek,Ruw polysacharide van Cistanche deserticola (CDCP)werd gecombineerd metmond- en klauwzeervirusvaccins te bereiden. ICR-muizen werden geïmmuniseerd via de spierroute. De effecten van immunisatie op de humorale en cellulaire immuunresponsen van muizen werden gedetecteerd en hun veiligheid werd waargenomen. De ontwikkeling van een veilig nieuw adjuvans voor het mond- en klauwzeervaccin biedt een referentie.

Ruw polysacharide van Cistanche deserticola

Het effect van Ruwe Polysaccharide van Cistanche Deserticola (CDCP) op het niveau van MKZ-specifieke antilichamen in serum

Het serum-IgG-niveau vertoonde een geleidelijk stijgende trend op 14 dagen, 21 dagen en 28 dagen na de eerste epidemie (Figuur 1). Op 14 en 21 dagen na de initiële immunisatie was het antilichaamniveau van de FMDV Ag/CDCP-groep significant hoger dan dat van de FMDV-Ag-adjuvansvrije groep (P<0.05), and="" there="" was="" no="" significant="" difference="" from="" the="" fmdv="" group="" (p="">0.05). Op 28 dagen na de initiële immunisatie, vergeleken met FMDV-Ag zonder adjuvans, was het IgG-antilichaamniveau van FMDV-Ag/CDCP significant verhoogd (P<0.05), but="" it="" was="" extremely="" significantly="" lower="" than="" that="" of="" the="" fmdv/isa-206="" group=""><0.01). the="" antibody="" level="" of="" the="" fmdv-ag="" adjuvant-free="" group="" was="" significantly="" different="" from="" that="" of="" the="" 0.9%="" nacl="" control="" group=""><>

Ruw polysacharide van Cistanche deserticola (CDCP) op de proliferatie van miltlymfocyten

21 dagen na de eerste immunisatie werd de MTT-methode gebruikt om het proliferatie-effect van ruw polysacharide van Cistanche deserticola op miltlymfocyten te detecteren. Zoals weergegeven in figuur 2, was de lymfocytstimulatie-index van de FMDV-Ag/CDCP-groep, nadat FMDV-Ag in vitro miltlymfocyten had gestimuleerd, significant hoger dan die van de FMDV-Ag zonder adjuvans (P<0.05), and="" compared="" with="" fmdv/isa-206="" there="" was="" no="" significant="" difference="" between="" the="" groups="" (p="">0.05). Na stimulatie door ConA en LPS kan het de proliferatie van miltlymfocyten (P<>

Het effect van ruw polysacharide van Cistanche deserticola (CDCP) op de expressie van CD4 plus en CD8 plus T-cellen

21 dagen na de initiële immunisatie werden de effecten van CDCP en FMDV-Ag op CD4 plus en CD8 plus T-cellen in de milt van muizen getest. De resultaten worden getoond in figuur 3-A D. De verhouding van CD3 plus, CD4 plus, CD3 plus, CD8 plus T-celsubsets in de FMDV-Ag/CDCP-groep was significant hoger dan die van het FMDV-Ag-adjuvans -vrije groep (P<0.05), and="" compared="" with="" fmdv/isa-="" the="" difference="" between="" the="" 206="" groups="" was="" not="" significant="" (p="">0.05). De FMDV-Ag-adjuvansvrije groep verhoogde de expressie van CD4 plus en CD8 plus T-cellen niet.

Het effect van ruw polysacharide van Cistanche deserticola (CDCP) op subsets van CD4 plus, CD44 plus en CD8 plus CD44 plus effector T-cellen

Om het effect van ruw polysacharide van Cistanche deserticola op effector-T-cellen waar te nemen, werd flowcytometrie gebruikt om de expressie van CD4 plus, CD44 plus en CD8 plus, CD44 plus in de miltcellen van muizen na immunisatie te detecteren. De resultaten worden getoond in figuur 4-AD. De percentages CD4 plus, CD44 plus en CD8 plus, CD44 plus in de FMDV Ag/CDCP-groep waren significant hoger dan die in de FMDV-Ag-adjuvansvrije groep (P<0.05), and="" were="" different="" from="" the="" fmdv/isa-206="" group="" not="" significant="" (p="">0.05).

Effect van ruw polysacharide van Cistanche deserticola (CDCP) op de groei van muizen

After immunizing animals with Crude Polysaccharide from Cistanche deserticola through the muscle route, the growth of the mice was observed during the entire immunization period and the body weight was weighed weekly to observe the granuloma at the injection site (Table 1). After the immunization, the mice did not have hair loss or refusal to eat. The weight of each group of mice increased normally at 14 d, 21 d, and 28 d after immunization, and there was no significant change in body weight between the groups (P>0.05). De muizen in de FMDV Ag/CDCP-groep hadden geen granulomen op de injectieplaats en de muizen in demond- en klauwzeervirusvaccingroep die ISA 206-olieadjuvans bevatte, had granulomen op de injectieplaats.

Adjuvantia worden al heel lang in verschillende vaccins gebruikt, kunnen vaccins helpen een immuunbevorderend effect te hebben, de vaccindosering te verlagen en een zeer belangrijke rol te spelen bij de preventie en epidemie van infectieziekten [3]. Met de ontwikkeling van nieuwe vaccins, of het nu gaat om onderzoek naar veterinaire vaccins of onderzoek naar menselijke vaccins, worden de eisen voor de kwantiteit en kwaliteit van vaccinadjuvantia steeds hoger. Het ideale nieuwe adjuvans moet een effectief stimulerend effect hebben op de cellulaire of humorale immuniteit van het lichaam, een langdurig en stabiel effect hebben, het aantal immunisaties verminderen, minder bijwerkingen hebben en gemakkelijk te produceren en gemakkelijk te injecteren zijn [13] .

Inmond- en klauwzeervirusBij geïnactiveerde vaccins worden gewoonlijk olie-adjuvantia toegevoegd om de immuniteit van het vaccin te versterken, maar er zijn nadelen zoals hoge immuunstress. Vergeleken met olieadjuvantia zijn wateradjuvantia eenvoudig te gebruiken, kunnen ze in elke verhouding mengbaar zijn met vaccinantigenen, hoeven ze niet te worden geëmulgeerd en zijn ze gemakkelijk te injecteren. Daarom hebben wateradjuvantia goede vooruitzichten voor toepassing in MKZ-vaccins. Chinese kruidenpolysacchariden hebben goede immunomodulerende effecten, gecombineerd met hun voordelen op het gebied van veiligheid, pleiotropie en onafhankelijkheid, en worden een hotspot in het onderzoek naar nieuwe vaccinadjuvantia [14]. Op het gebied van onderzoek naar MKZ-vaccinadjuvantia worden enkele Chinese kruidenpolysacchariden gebruikt bij het onderzoek naar nieuwe adjuvantia. Astragalus-polysacchariden worden bijvoorbeeld gebruikt als adjuvantia voor MKZ-vaccins. Orale immunisatie kan de humorale en cellulaire immuniteit versterken, en lage doses kunnen de rijping van dendritische cellen remmen, hoge doses kunnen de rijpheid ervan bevorderen.

Onderzoekers hebben ook polysachariden uit Baizu en polysachariden uitEucommiaals hulpstoffen van demond- en klauwzeervirusvaccin om hun immuunversterkende effecten te onderzoeken [15-17]. Vanwege de grote verschillen in het gehalte aan actieve ingrediënten van verschillende Chinese kruidengeneesmiddelen, is uitgebreide screening van Chinese kruidengeneesmiddelen met immunologische activiteit om geschikte hulpstoffen te vinden van groot belang voor ziektepreventie en de menselijke gezondheid en is het ook een onderzoekshotspot op het gebied van vaccinologie. In dit experiment wordt eenRuw polysacharide van Cistanche deserticolawerd geselecteerd als kandidaat-adjuvans voor demond- en klauwzeervirusvaccin en er werd een experimenteel onderzoek naar het adjuvanseffect uitgevoerd. De preventie en behandeling van infectieziekten hangt voornamelijk af van de humorale immuunrespons gemedieerd door B-lymfocyten en de cellulaire immuunrespons gemedieerd door T-lymfocyten [18-20].

Omdat demond- en klauwzeervirusvaccin gebruikt in feite spierimmunisatie bij de productie, de spierroute wordt gebruikt om muizen in het experiment te immuniseren, en het immuunversterkende effect van CDCP wordt geëvalueerd door het effect van CDCP op de productie van antilichamen en T-celsubsets te evalueren, en de veiligheid ervan wordt geëvalueerd. Voorlopige opmerkingen. De resultaten van de studie toonden aan dat het ruwe polysacharide van Cistanche cistanche het niveau van antilichamen specifiek voor MKZ 14 en 21 dagen na immunisatie kan verhogen, en er is geen significant verschil tussen het effect en het niveau van ISA-206-adjuvans ; het antilichaamniveau 28 dagen na immunisatie lager is dan dat van ISA-206 olieadjuvans, wat aantoont datRuw polysacharide van Cistanche deserticola kan het niveau van humorale immuniteit verhogenbinnen een bepaalde tijd na vaccinatie. De proliferatiesnelheid van lymfocyten is positief gecorreleerd met de mate van stimulatie-index. In het MTT-experimentRuw polysacharide van Cistanche deserticola kan de proliferatie van lymfocyten bevorderengestimuleerd door FMDV-antigeen, ConA en LPS. In het T-celsubgroepexperiment kan CDCP niet alleen de expressie van CD4 plus en CD8 plus T-cellen verhogen, maar ook de niveaus van CD4 plus, CD44 plus en CD8 plus, CD44 plus effector T-cellen verhogen, en er is geen significant verschil uit de ISA-206 adjuvansgroep; in veiligheid Bij seksuele experimenten werd gevonden dat de muizen in de vaccingroep die ISA-206 bevatte granulomen hadden op de injectieplaats, terwijl de vaccingroep die CDCP wateradjuvans bevatte geen granulomen vond, wat er voorlopig op wees datRuwe polysacharide van Cistanche deserticola heeft een goede veiligheid. Voor verdere veiligheid moeten relevante experimenten worden uitgevoerd om te bevestigen.

Ruw polysacharide van Cistanche deserticolaniet alleen verbeterde de humorale immuunrespons, maar verhoogde ook het proliferatieniveau van lymfocyten, bevorderde het niveau van CD4 plus en CD8 plus T-celsubsets, geactiveerde effector T-cellen en er werden geen granulomen op de injectieplaats gevonden na injectie. De muizen groeien normaal en vertonen geen abnormaal gedrag. Deze onderzoeksresultaten vormen een basis voor verder onderzoek naar:Ruw polysacharide van Cistanche deserticolaals een nieuw adjuvans voor demond- en klauwzeervirusvaccin en verschaffen ook een bruikbare referentie voor de toepassing van polysacharideadjuvantia in andere vaccins.

Referentie

(1) Diaz-san Segundo F, Median GN, Steinfeldt C, et al. Mond- en klauwzeervaccins［J］. Dierenarts Microbiol, 2017, 206:102-112.

(2) Park JH. Eisen voor verbeterde vaccins tegen mond- en klauwzeerepidemieën［J］. Clin Exp Vaccine Res, 2013, 2(1): 8-18.

［3］Cao Y. Adjuvantia voor mond- en klauwzeervirusvaccins: recente vooruitgang［J］. Expert Rev Vaccins, 2014, 13-11:1377-1385.

(4) Parid AS. Vaccinatie tegen mond- en klauwzeervirus: strategieën en effectiviteit［J］. Expert Rev Vaccins, 2009, 8:347-365.

(5) Licciardi PV, Underwood JR. Plantaardige geneesmiddelen: een nieuwe klasse van immunologische adjuvantia［J］. Int Immunopharmacol, 2011, 11(3):390-398.

(6) Sun B, Yu S, Zhao D, et al. Polysachariden als vaccinadjuvantia［J］. Vaccin, 2018, 36:5226-5234.

(7) Meng XY, Chu ZF, Zhang JJ, et al. Immunomodulerende functies van Ginkgo biloba laten polysaccharide achter op vvIBDV-vaccin［J］. ChinaJ Dierenarts Sci, 2019, 39(4):640-645.

(8) Tu PF, Jiang Y, Guo YH, et al. Onderzoek en industriële ontwikkeling van Cistanche［J］. Chin Pharm J, 2011, 46(12):882-887.

(9) Zhang W, Huang J, Wei W, et al. Extractie, zuivering, karakterisering en antioxiderende activiteiten van polysachariden uit Cistanche tubulosa［J］. Int J Biol Macromol, 2016, 93:448-458.