Onderzoek naar de antioxidantactiviteiten van fenylethanoïde glycosiden van Cistanche Deserticola

Contactpersoon: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

LI Li et al (Centraal Laboratorium van Changchun Normal University, Changchun, Jilin 13032)

Abstract[ Doelstelling ] Het onderzoek was gericht op het systematisch bestuderen van de antioxiderende activiteiten van fenylethanoïde glycosiden uit:Cistanchedeserticola. [Methode] Twee modelsystemen, de vrije radicaal 2,2-difenyl-l-picrylhydrazyl (DPPH ') test en de fotochemiluminescentie (PCL) test, werden gebruikt om de antioxidantactiviteit van het C. deserticola-extract te meten, acteoside, isoacteoside en echinacoside. [Resultaat] De resultaten toonden aan dat de totale fenolgehalten (TPC's) in echinacoside, acteoside, isoacteoside en 80 procent ethanolextract van C. deserticola 753,95, 659,94, 356,14 en 14,73 mg galluszuur /g monster waren. Het extract van C. deserticola vertoonde een sterke antioxidatieve activiteit in het PCL-experiment, gevolgd door echinacoside, acteoside en isoacteoside. Echinacoside vertoonde echter een sterke antioxidantactiviteit in het DPPH-experiment, gevolgd door acteoside, isoacteoside en het C. deserticola-extract.

[ Conclusie ]Dit onderzoek zou referenties kunnen opleveren voor de farmacologie en biologische activiteitsstudie van fenylethanoïde glycosiden van C. deserticola.

Trefwoorden Cistanche deserticola ; Acteoside; isoacteoside; Echinacoside; Antioxidante werking ; DPPH; PCL

Cistanche (Cistanche deserticolaYC Ma.) is een plant van deCistanchegeslacht (Oro-banehaeeeae) van theCistanchegeslacht (Cistanche). De gedroogde vlezige stengel van Cistanche met geschubde bladeren. Uit een groot aantal onderzoeken is gebleken dat de belangrijkste actieve ingrediënten van Cistanche-planten fenethylalcohol-glycosideverbindingen zijn. . Fenylethanolglycosideverbinding behoort tot een soort polyfenolverbinding, die wijdverspreid is in vele soorten planten. Farmacologische teststudies hebben aangetoond dat deze verbindingen een breed scala aan farmacologische en biologische activiteiten hebben, zoals anti-hepatotoxine, ontstekingsremmende, analgetische en antioxiderende activiteiten. Onder hen is het meest opvallende dat de fenoxyethanol-glycosideverbinding een zeer goede antioxiderende activiteit heeft. De auteur voerde voornamelijk een systematische analyse uit van de antioxidantactiviteit van de fenethylalcoholglycosideverbindingen inCistanche, met behulp van twee in vitro evaluatiemethoden voor antioxidanten, namelijk foto-hemilumineseence (PCL) en 2,2-difenyl-1-pieryl-hydroxyl (DPPH'). Er werden twee verschillende systemen gebruikt om de antioxidantactiviteit van de 80 procent ethanol extract vanCistanche, ergosteroside, isoergoside, enechinacoside.

1 Materiaal en methoden

1.1 Monsters en reagentia

Cistanche (Cistanche deserticola)geneeskrachtige materialen werden gekocht bij Beijing Tongrentang Pharmacy.ergosteroside, iso-ergoside,echinacoside, Folin. Ciocalteu-reagens, galluszuur, 2,2-difenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH.), enz. werden gekocht bij SigmaChemicalCo. Bedrijf (St. Louis, Mo). Het oplosmiddel dat voor PCL-analyse werd gebruikt, werd geleverd door Analytik Jena AG (Berlijn, Duitsland). Andere reagentia zijn allemaal analytische reagentia (geproduceerd door Beijing Chemical Plant). Het water is ultrapuur water (18,2 nPa).

1.2 Monsterextractie

Weeg 2.0005 gram nauwkeurig afCistanchemonsterpoeder, gebruik 50rnl 80 procent ethanol voor ultrasone extractie bij kamertemperatuur gedurende 0,5 uur, extraheer tweemaal, filtreer de monsteroplossing, roterend verdampen tot droog (<40oc), use="" 100ml="" of="" distilled="" water="" dissolve,="" degrease="" twice="" with="" 100ml="" n-hexane,="" discard="" the="" n-hexane="" solution,="" extract="" the="" water="" part="" with="" 100="" ml="" of="" water-saturated="" n-butanol="" 3="" times,="" combine="" the="" n-butanol="" extracts,="" rotary="" evaporate="" to=""><40oc), and="" use="" 4ml="" for="" the="" residue="" the="" volume="" of="" absolute="" ethanol="" is="" fixed="" to="" obtain="" a="" sample="" of="">Cistanche deserticola.

1.3 Bepaling van het totale polyfenolgehalte van het monster

Het totale fenolgehalte van het monster wordt bepaald met behulp van de F{{0}}lin-Ciocaheu-methode en het resultaat wordt uitgedrukt als milligram galluszuur per gram extract. Neem een ​​monsteroplossing met een bepaalde concentratie van 0.2rnI (om de absorptie op de standaardcurve te laten vallen), voeg 1 ml Folin-Ciocaheu-reagens toe met een concentratie van 0.5mol/L, en voeg vervolgens 0,8 ml van een natriumcarbonaatoplossing met een concentratie van 7,5 procent toe om goed te mengen, geplaatst op kamertemperatuur gedurende 0,5 uur, en meet vervolgens de absorptie bij 765 nm (ultraviolet-zichtbare spectrofotometer: DU800, Beckman Couher, Inc., VS). Gebruik galluszuuroplossing (het massaconcentratiebereik is 0.02-0.20me,/m1) om de standaardcurve te maken, en alle tests worden twee keer herhaald.

1.4 Antioxiderende activiteit in vitro-analyse

1.4.1 PCL-methodebepaling.

De test gebruikte Photochem@ (Berlijn, Duitsland) ultrasnelle antioxidant en automatische analyser voor vrije radicalen. Het principe is om vrije radicalen te genereren met de fotochemische methode en de chemiluminescentiemethode te gebruiken om vrije radicalen te detecteren. In het experiment werd een fotosensibilisator met een fotochemisch excitatie-effect gebruikt om de reactiemoleculen te exciteren, zodat onder inwerking van de ultraviolette lamp de oxidatiereactie 1000 keer plaatsvond sneller dan normale omstandigheden en de vrije radicalen werden snel gegenereerd." Kies de PCL-ACW-Kit-methode Meet de antioxidantactiviteit van de in water oplosbare componenten van de psyllium-submonsters. Pipetteer 1.0ml reactiebuffer (inclusief de concentratie van 0,1mol/L Natriumcarbonaat, pH-waarde van 10,5 en concentratie van 0,1mmol/LNA, één EDTA, 1,5ml ACW-verdunningsmiddel (water ), concentratie 1 mmol/LLumino1) werkt als een fotosensibilisator om de reactiemoleculen te prikkelen, zodat snel vrije radicalen worden gegenereerd, en tegelijkertijd als een fotochemiluminescente stof. Zowel het monster als de standaard zijn 10 "l. Door verschillende concentraties (0,5, 1,0, 2,0 en 3,0 nmol/L) van L te meten. De standaardcurvevergelijking voor ascorbinezuur is Y=24,640Ox plus 2,9311, R²=0,9969. Het is noodzakelijk om het monster of de standaardoplossing in de test te verdunnen zodat het vertragingstijdinterval binnen het lineaire bereik van de standaardcurve valt. Photochem genereert de standaardcurve en test automatisch de antioxidantactiviteit van het monster, en de antioxidantactiviteit van het monster is gelijk aan L． Berekend door het aantal nanomol ascorbinezuur.

1.4.2 DPPH-methodebepaling.

Difenylpicrylhydrazinoradicaal [DPPH ·] is een stabiel stikstofgecentreerd radicaal met maximale absorptie bij een golflengte van 515 nm. [DPPH ·] methanoloplossing is paars en de concentratie ervan heeft een lineaire relatie met absorptie." Na toevoeging van antioxidanten aan [DPPH ·] methanoloplossing, kunnen antioxidanten zich combineren met [DPPH ·] vrije radicalen of ze vervangen om [DPPH ·] te maken ] Het aantal vrije radicalen neemt af en de kleur van de oplossing wordt lichter, wat zich manifesteert door de continue afname van de absorptie bij de golflengte van 515 nm totdat deze stabiliteit bereikt." In de test werd ethanol gebruikt in plaats van methanol. Weeg [DPPH ·] nauwkeurig en stel de concentratie in op 0. [DPPH ·] ethanoloplossing van 0.040 76mg/ml, de standaardcurve van [DPPH ·] wordt verkregen: Y: 18.032x-0.0016 , R= 0.9993. De methode voor het meten van de restsnelheid van vrije radicalen verwijst naar de literatuur [16]. Gebruik ethanol als oplosmiddel, bereid verschillende concentraties monster en standaardoplossing, neem respectievelijk 0,1 ml monster of standaardoplossing en voeg 3,9 ml [DPPH·] standaardoplossing toe met een massaconcentratie van 2,5 mg/L (momenteel gebruikt nu)), vervang de monsteroplossing door ethanol als blanco. Schud de gemengde oplossing, gebruik een cuvet om de absorptie op verschillende tijdstippen bij een golflengte van 515 nm te meten en converteer deze volgens de standaardcurve naar de massaconcentratie van [DPPH·] om de restsnelheid van [DPPH·] te berekenen. Afhankelijk van het restgehalte van [DPPH ·] en de overeenkomstige hoeveelheid toegevoegd monster, kan een curve worden opgesteld voor het verwijderen van [DPPH -] vrije radicalen uit het monster. Volgens de relatiecurve tussen de massaconcentratie van [DPPH ·] en de absorptie, kan de absorptie gemeten na de toevoeging van de vrije radicalenvanger worden omgezet in de massaconcentratie van [DPPH ·] om de [DPPH ·] na de toevoeging van de vrije radicalenvanger. De berekeningsformule voor het restpercentage is als volgt: [DPPH ·]REM=[DPPH·]/[DPPH·]r=0×100 procent waarbij [DPPH·] de massaconcentratie van DPPH is · op een bepaald moment in het proces van vrije radicalen, [DPPH·]:. Is de oorspronkelijke massaconcentratie van DPPH·. Afhankelijk van het aantal toegevoegde antioxidanten en de restwaarde van [DPPH ·], wordt de relatiecurve tussen de twee gemaakt en kan de regressievergelijking worden verkregen door middel van lineaire regressieanalyse. Volgens de regressievergelijking kan de dosis antioxidanten worden berekend wanneer de restwaarde van [DPPH ·] 50 procent is. Halve remming. Bereken volgens de [DPPH·]-curve voor het wegvangen van vrije radicalen van verschillende concentraties van monsters of standaarden, de hoeveelheid EC van het monster wanneer de oorspronkelijke massaconcentratie van [DPPH·] wordt verlaagd tot 50 procent (steady-state). Hoe kleiner de EC, hoe meer vrije radicalen worden weggevangen, hoe sterker". Test 3 keer parallel.

cistanche

2 Resultaten en analyse

2.1 Bepaling van het totale polyfenolgehalte van het monster Bij de bepaling van het totale polyfenolgehalte wordt het totale polyfenolgehalte vanechinacosideis het hoogst, namelijk 753,95 mg galluszuur/g. Gevolgd door ergosteroïde glycosiden, isoergosteroïde glycosiden en ruwe extracten vanCistanche, die respectievelijk 468,3, 356,14 en 14,73 mg galluszuur/g waren.

2.2 Bepaling van de antioxidantactiviteit van het monster

2.2.1 Resultaten van PCL-ACW-methodebepaling. In de PCL-ACW antioxidantentest was de antioxidantcapaciteit van 1txgCistanchemedicinaal materiaal is gelijk aan de antioxidantcapaciteit van 15,68 nmol L-ascorbinezuur; 1 gramechinacosidekomt overeen met de antioxidantcapaciteit van 14,03 nmol ascorbinezuur Activiteit: 1txgergosterosidekomt overeen met 11,44 nmolL een antioxidantcapaciteit van ascorbinezuur; 1Ixg isomergosteroside komt overeen met de antioxiderende activiteit van 8,24 nmol ascorbinezuur.

2.2.2 Meetresultaten DPPH-methode. Uit tabel 1 blijkt dat het is gewist. De volgorde van het vermogen van vrije radicalen isergosteroside, echinacoside, isoergoside en het ruwe extract vanCistanche, waaronder ergozijde enechinacosidehebben in principe dezelfde antioxidantcapaciteit in de DPPH-test. Hieruit is het te zien. Omdat verschillende in vitro testsystemen voor antioxidanten worden gebruikt om monsters te meten, is het mechanisme van antioxiderende effecten anders en kunnen de resultaten inconsistent zijn. Dit is ook bevestigd in de test. Daarom is het noodzakelijk om andere antioxidantanalysesystemen te selecteren voor verdere verificatie.

echinacosie

referenties

[1] Yang Cuiping, Su Weiwei. Onderzoeksvoortgang van vleessoep[J]·Chinese Medicinal Materials, 2001, 24(12): 907-909.

[2]Lei Li, Song Zhihong, Tu Pengfei Vooruitgang in het onderzoek naar de chemische bestanddelen van cistancheplanten [J].Chinese Herbal Medicine, 2003,34(5):473 -476.

[3]HIROMI KOBAYASHI,HIROKO KARASAWA JOSHIO MIYASE. Studies over de bestanddelen Cistanchis Herba. HOI. Isolatie en structuren van nieuwe fenylpropanoïde glycosiden, Cistanosides A en B[J]. Chem. Pharm Bull, 19^,32(10):3009 -3014.

[4]LI LI, RONG TSAO, RAYMOND YANG, et al. Isolatie en zuivering van fenylethanoïde glycosiden uitCistanche deserticoladoor tegenstroomchromatografie met hoge snelheid [J]. Voedselchemie, 2008,1(^:702-710.

[5]LI LI, RONG TSAO, LIU ZQ, et al. Isolatie en zuivering van actec^ide en isoacteoside van Plantago psyllium L. door middel van tegenstroomchromatografie met hoge snelheid [J]. Journal of Chromatography A,2005,1063: 161-169.

[6]RAVN H, NISHIBE S, SASAHARA M, et al. Fenolverbindingen van Plantago Asiatica[J]. Fytochemie, 1990, 29: 3627-3631.

[7] TOYAMA Y, MATSUMOTO M, NISHIOKA I. Fenolglycosiden van zieke wortels van Rehmannia gluiinosa var. purpurea [J]. Fytochemie, 1987, 26: 983-986.

[8] Wang Xiaowen, Jiang Xiaoyan, Wu Ji J Ya, et al. Cistanche cistanche totaal glycosiden in vitro wegvangen van vrije radicalen en beschermende effecten op DNA-schade veroorzaakt door OH [J]. Chinees farmaceutisch tijdschrift, 2001, 36(1): 29-31.

[9]XIONG Q, HASE K, TEZUKA Y, et al. Hepatoprotectieve activiteit van fenylethanoïden vanCistanche deserticola[J ]. Planta Med, 1998,64:120.

[10]SCHAPOVAL EES, WINTER DE VARGAS MR, CHAVES CG, et al. Ontstekingsremmende en antinociceptieve activiteiten van extracten en geïsoleerde verbindingen van Stachytarpheta cayeunensis [J]. J Ethnopharmacol, 1998, 60: 53.

[11] LI J, WANG PF, ZHENG RL, et al. Bescherming van fenylpropanoïde glycosiden uit pedicularies tegen oxidatieve hemolyse in vitro [J]. Planta Med, 1993,59:315-317.

[12] HE ZD, LAU KM, Xu HX, et al. Antioxiderende activiteit van fenylethanoïde glycosiden van Brandisia-kanker [J]. Etnofarmacologie, 2000, 71:483-486.

[13]XIONG Q, KADOTA S, TANI T, et al. Antioxiderende effecten van fenylethanoïde vanCistanche deserticola[J]. Biol Pharm Bull, 1996,19: 1580-1585.

[14]TSAO R, YANG R, XIE S, et al. Welke polyfenolische verbindingen dragen bij aan de totale antioxidantactiviteiten van appel? [J]. J Agric Food Chem, 2005,53:4989-4995.

[15] POPOV IN, LEWIN G. Hiotochemiluminescente detectie van antiradicale activiteit: U. testen van niet-enzymatische in water oplosbare antioxidanten [J]. Free Rad Biol Med, 1994, 17: 267-271.

[16]BRAND-WILLIAMS W, CUVEHER ME, BERGET C. Gebruik van een methode met vrije radicalen om de antioxidantactiviteit te evalueren [J]. Lebensm Wiss Technol, 1995,28:25-30.

[17] Li Chunyang, Xu Shiying, Wang Zhang. DPPH-methode om het vermogen van proanthocyanidinen van druivenpitten te bepalen om vrije radicalen op te vangen [J]. Tijdschrift voor voedsel en biotechnologie, 2006, 25(2)" 02-106.

SCHLESIER K, HARWICH M, BOHM V, et al. Beoordeling van antioxidantactiviteit met behulp van verschillende in vitro-methoden [J]. Onderzoek naar vrije radicalen, 2002,36(2):177-187.