Waarom kunnen Herba-cistanches worden gebruikt om het nierdeficiëntiesyndroom te behandelen?

Metabolische profilering onthult therapeutische effecten van Herba Cistanches in een diermodel van door hydrocortison geïnduceerd 'nierdeficiëntiesyndroom'

Contactpersoon: emily.li@wecistanche.com

Yunping Qiu, Minjun Chen, Mingming Su, Guoxiang Xie, Xin Li, Mingmei Zhou, Aihua Zhao, Jian Jiang & Wei Jia

Abstract

Achtergrond

Herba Cistanches(Roucongrong) is effectief bij de behandeling van Shenxu Zheng ('nierdeficiëntiesyndroom'). De mechanismen en systemische metabole reacties op de kruideninterventie zijn echter onduidelijk.

Methoden:

Met behulp van op GC-MS gebaseerde metabole profilering onderzochten we de metabole reacties opHerba Cistanchesinterventie in een rattenmodel van de door hydrocortison geïnduceerde 'nierdeficiëntiesyndroom'.

Resultaten

De metabolische profielen van de ratten na hydrocortison-injectie weken af ​​van de pre-dosis metabolische toestand op verschillende tijdstippen, variërend van dag 1 tot dag 10, terwijl de metabolische profielen van de ratten die werden behandeld met zowel hydrocortison als waterextract vanHerba Cistancheskeerde terug naar de toestand van vóór de dosis op dag 10.

Conclusie

de tussenkomst vanHerba Cistanchesveroorzaakte een systemisch herstel van de hydrocortison-geïnduceerde metabole verstoring bij ratten. Deze studie toont ook aan dat metabole profilering nuttig is bij het bestuderen van therapeutische mechanismen van kruidengeneesmiddelen.

Achtergrond

Door modulatie van biochemische reacties, controlemechanismen en enzymactiviteiten veroorzaken veel medicijnen of chemicaliën fluctuaties van metabolieten die aanwezig zijn in afzonderlijke cellen, weefsels of lichaamsvloeistoffen [1]. Metabolische profilering, dwz het onderzoeken van metabolieten met een laag molecuulgewicht (MW < 1000="" da)="" door="" middel="" van="" een="" geavanceerd="" analytisch="" instrument="" in="" combinatie="" met="" multivariate="" statistieken,="" kan="" systemische="" reacties="" van="" levende="" systemen="" op="" xenobiotica="" aantonen.="" het="" is="" ook="" technisch="" mogelijk="" om="" alle="" multifactoriële="" erfelijke="" en="" door="" de="" omgeving="" beïnvloede="" metabole="" profielen="" van="" een="" organisme="" te="" catalogiseren,="" inclusief="" de="" fysiopathologische="" gevolgen="" van="" toxine-="" en/of="" ziekte-geïnduceerde="" stoornissen="" of="" onevenwichtigheden="" in="" het="" metabole="" regulerende="" netwerk="" op="" systemisch="" niveau.="" tot="" op="" heden="" is="" metabolische="" profilering="" vastgesteld="" bij="" screening,="" diagnose,="" de="" prognose="" van="" ziekten="" [2-4]="" en="" veiligheidsevaluatie="" van="" bepaalde="" medicijnen="" en="" chemicaliën="">

Nucleaire magnetische resonantie (NMR) [12] en massaspectrometrie (MS) [13], afzonderlijk of in combinatie toegepast, zijn gebruikt bij het profileren en karakteriseren van metabole gevolgen van toxine- en/of ziekte-geïnduceerde verstoringen. NMR, dat geen vervelende voorbewerking van monsters vereist, is een snelle en eenvoudige methode om intrinsieke informatie te verkrijgen uit complexe en intacte biologische monsters. Aan de andere kant is de brede toepassing van gekoppelde MS bij metabole profilering te wijten aan de hoge gevoeligheid en beschikbaarheid ervan [14, 15]. Met name is op GC-MS gebaseerde metabole profilering gebruikt bij het ontdekken van mechanismen van medicijnen en herbiciden in vivo, biomarkers van ziekten [16] en effecten van veranderde genexpressie op het metabolisme, en het monitoren van de prestaties van organismen in biotechnologische toepassingen [17-20] .

Herba Cistanches(Roucongrong), een veel voorkomend Chinees tonisch kruid dat in de woestijn groeit, vertoont duidelijke activiteiten voor het verbeteren van het geheugen [21] en/of seksuele potentie [22], het opruimen van vrije radicalen, anti-veroudering [23–26] en neuroprotectie [27] , 28]. Eeuwenlang,Herba Cistanchesis effectief gebruikt bij de behandeling van Shenxu Zheng ('nierdeficiëntiesyndroom') [29]. Sinds kortHerba Cistancheswerd aangetoond dat het door hydrocortison geïnduceerde nieraandoeningen heeft verbeterd [30]; de metabolische gevolgen zijn echter niet duidelijk. Onze eerdere studie [31] vond dat metabolische profielen van ratten die werden blootgesteld aan hydrocortison in een hoge dosering (dwz een diermodel voor de 'nierdeficiëntiesyndroom') [32], toonde een uniek biochemisch patroon van endogene metabolieten in urine. Deze resultaten inspireerden ons om de mechanismen van consistente biochemische veranderingen na hydrocortisonmodificatie te bestuderen, met behulp van op GC-MS gebaseerde metabole profilering om te onderzoeken of Herba Cistanches afwijkende metabole effecten van hydrocortison zouden kunnen omkeren of tegengaan.

Cistanche kan de nierfunctie verbeteren

Methoden:

Materialen en instrument

Herba Cistancheswerd gekocht van Shanghai Leiyunshang Pharmaceutical Co Ltd (China) en geïdentificeerd als Cistanche deserticola YC Ma door Dr. Mengyue Wang (Laboratory of Pharmacognostics, School of Pharmacy, Shanghai Jiao Tong University) volgens een standaardprotocol [33]. Hydrocortison-oplossing voor injectie (0,5 procent) werd gekocht bij Shanghai Xinyi Pharmaceutical Co (China). De derivatiserende reagentia waren N-methyl-N-trimethylsilyltrifluoracetamide (MSTFA) (Sigma-Aldrich Inc, VS) en Trimethyliodosilaan (TMSI) (Sigma-Aldrich Inc, VS) gemengd in een verhouding van 1000:1. Alle in het experiment gebruikte reagentia waren van analytische kwaliteit. Ultrazuiver water werd bereid met een Millipore-zuiveringssysteem (18,2 MΩ, VS). Metabole kooien werden gekocht bij Suzhou Fengshi Laboratory Animal Experiment Co Ltd (China).

Bereiding van Herba Cistanches-extract

Vijfhonderd gram grof verpulverd plantenmateriaal werd 2 uur onder terugvloeikoeling gekookt met 2 L ultrazuiver water. Na filtratie werd het extract verdampt tot ongeveer een tiende van het oorspronkelijke volume op een Buchi rotatieverdamper en werd het verdund tot 250 ml in een maatkolf met ultrazuiver water. De uiteindelijke concentratie van ruwe olieHerba Cistanchesextract was 2 g/ml.

Dosering en bemonstering

De behandeling van alle dieren in deze studie was in overeenstemming met de nationale richtlijnen en werd uitgevoerd in het Centrum voor Laboratoriumdieren, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai, China. Een totaal van 19 negen weken oude mannelijke Wistar-ratten werden gekocht bij Shanghai Laboratory Animal Co Ltd (China). Alle dieren werden gehouden bij een barrièresysteem met gereguleerde temperatuur (20-22 graden) en vochtigheid (60 ± 10 procent), en op een 12 uur donker/licht cyclus met lichten aan om 8:00 am. De ratten kregen ad libitum voedsel en water. Na twee weken acclimatisatie werden de dieren overgebracht naar individuele metabole kooien en willekeurig verdeeld in drie groepen: (1) behandelingsgroep (n=7) waarin hydrocortison (5 procent) ip werd geïnjecteerd met 1,5 mg/100 g lichaamsgewicht gevolgd door orale toediening vanHerba Cistanchesextract gedurende 10 dagen; (2) modelgroep (n=7) waarin hydrocortison (5 procent) ip werd geïnjecteerd met 1,5 mg/100 g eenmaal daags gedurende 10 dagen; en (3) controlegroep (n=5) waarin het vehikel gedurende 10 dagen ip werd geïnjecteerd met ongeveer 0,6 ml [31].Herba Cistancheswerd toegediend aan de behandelingsgroep in een dosis van 20 g/kg volgens de aanbeveling van Shen et al. [30]. Er werden 24 uur urinemonsters verzameld met specifieke tijdsintervallen: pre-dosis (-24 – 0 uur), dag 1 (0 – 24 uur), dag 3, dag 7 en dag 10. Alle urine monsters werden 10 minuten gecentrifugeerd (6383 x g, LG 16-W, Beijing Jingli Centrifuge Co Ltd, China) om gesuspendeerd vuil te verwijderen en onmiddellijk opgeslagen bij -80 graden voor daaropvolgende GC-MS-analyse.

Monstervoorbereiding en GC-MS

GC-MS werd uitgevoerd volgens onze eerdere studie met kleine aanpassingen [31]. In het kort, elke 0,5 μL aliquot van trimethylsilyl (TMS) gederivatiseerde analyt werd geïnjecteerd in een fused-silica capillaire kolom (17 m × 220 m binnendiameter, 0,11 μm filmdikte; HP Ultra{ {9}}, Agilent J&W Scientific, VS). GC-MS werd uitgevoerd op een afgebroken PerkinElmer-gaschromatografie en TurboMass-Auto system XL-massaspectrometer (PerkinElmer Inc, VS).

Gegevensverwerking en multivariate analyse

De GC-MS-gegevens werden geconverteerd naar NetCDF-formaat via DataBridge (PerkinElmer Inc, VS). Aangepaste scripts werden uitgevoerd in MATLAB 7.0 (The MathWorks Inc, VS) om basislijncorrectie, piekdeconvolutie en uitlijning, interne standaarduitsluiting en normalisatie tot de totale som van het chromatogram uit te voeren. De resulterende 3-dimensionale matrix die willekeurige piekindex (gepaarde retentietijd-m/z), monsters (waarnemingen) en genormaliseerde piekgebieden (variabelen) omvat, werd geïmporteerd in de SIMCA-P 11.0-software pakket (Umetrics, Zweden) voor multivariate analyse.

Gemiddelde centrering werd kolomsgewijs uitgevoerd om de offsets te verwijderen. Alle gemeten metabolieten werden op een gelijk niveau behandeld met auto-scaling (geschaald naar eenheidsvariantie) voorafgaand aan multivariate analyse. Principale componentenanalyse (PCA) werd uitgevoerd met behulp van de SIMCA-P 11.0-software om de algemene clustering, groepering en trends tussen de onderwerpen zonder voorkennis te onthullen. De eerste hoofdcomponent (PC1) vertegenwoordigt de meeste variantie in de gegevens. De tweede hoofdcomponent (PC2) staat loodrecht op PC1 en vertegenwoordigt de maximale hoeveelheid variantie die niet wordt verklaard door PC1. De overige hoofdcomponenten werden op dezelfde manier geconstrueerd. Ondertussen werden gemiddelde trajecten van PCA-scores gebruikt om een ​​dynamische indicatie te geven voor het begin, de progressie en/of het herstel van het syndroom door de tijd heen. Correlatiecoëfficiënten van de partiële kleinste-kwadraten-discriminantanalyse (PLS-DA) werden gebruikt om het belang van elke variabele te rangschikken om de differentieel tot expressie gebrachte metabolieten die verantwoordelijk zijn voor de scheiding tussen groepen verder vast te leggen. PLS-DA is afgeleid van de PLS-methode (partial least squares), een gegeneraliseerde meervoudige regressiemethode die zich bezighoudt met meerdere collineaire voorspellers en responsvariabelen [34]. De PLS-DA is uitgevoerd met de SIMCA-P 11.0 software [35]. Er werd een typische 7-ronde kruisvalidatie uitgevoerd. Een zevende van de monsters werd in elke ronde uitgesloten van het model om het model te valideren. Deze procedure werd iteratief herhaald voor kruisvalidatie totdat elk monster eenmaal was uitgesloten.

Herba Cistanches kunnen worden gebruikt om het nierdeficiëntiesyndroom te behandelen

Univariate analyse

De differentieel tot expressie gebrachte metabolieten die uit de multivariate analyse werden geïdentificeerd, werden ook geverifieerd in de MATLAB 7.0-software (The MathWorks Inc, VS) door een niet-parametrische Kruskal-Wallis-test met een significantieniveau van P < 0.05 .

Resultaten en discussie

Interpretatie van GC-MS-spectra

Typische GC-MS totale ionenstroom (TIC) chromatogrammen van rattenurine op dag 10 van de behandelingsgroep, modelgroep en controlegroep worden weergegeven in figuur 1. Met behulp van ons geoptimaliseerde GC-MS-analyseprotocol in combinatie met een op software gebaseerde piek deconvolutieprocedure werden in totaal 117 individuele metabolieten consistent gedetecteerd in ten minste 90 procent van de urinemonsters. Verbindingsidentificatie van interessante pieken werd uitgevoerd door het massaspectrale fragment te vergelijken met de NIST (National Institute of Standards and Technology) referentiebibliotheken, Wiley-bibliotheken en referentiestandaarden. We konden 23 van de 117 metabolieten (20 procent) verifiëren, waarvan de meeste aminozuren, polyaminen, vetzuren, purines en bijnierhormonen waren die voornamelijk betrokken zijn bij het energiemetabolisme, het lipidenmetabolisme en het aminozuurmetabolisme.

Figuur 1 Typische GC-MS totale ionenstroom (TIC) chromatogrammen van urine op dag 10 van de behandelingsgroep (A), modelgroep (B) en controlegroep (C).

Tijdsafhankelijke veranderingen in urinemonsters

De gemiddelde trajecten van de PCA-scores afgeleid van de modelgroep en de behandelingsgroep werden geïllustreerd in figuur 2. De tijdelijke verschuiving in de trajectgrafiek onthulde de dynamische voortgang van de 'nierdeficiëntiesyndroom' geïnduceerd door hydrocortison alleen of in combinatie metHerba Cistanchesbehandeling. In de modelgroep waren de metabolische patronen op dag 1 en dag 3 anders dan die op dag 7 en dag 10, wat suggereert dat het metabolische regulerende netwerk op dag 1 en dag 3 een voorbijgaande periode met hoge fluctuaties zou kunnen hebben ondergaan en dat het verstoorde netwerk was mogelijk hersteld op dag 7 en dag 10, wat uiteindelijk leidde tot een stabiel patroon dat dicht bij de toestand van vóór de dosis lag. Analoog duidde het feit dat het metabolische patroon van dag 1 en dag 3 duidelijk afweek van dat van pre-dosis in de behandelingsgroep op de dominante 'nierdeficiëntiesyndroom' staat. In deze periode waren de effecten van hydrocortison waarschijnlijk dominant over die van deHerba Cistanchesextract. Deze bevindingen kwamen overeen met de algemene waarneming dat ratten uit beide groepen minder activiteit vertoonden op dag 1 en dag 3. Interessant is dat de metabole patronen op dag 7 en dag 10 geleidelijk en significant de pre-dosistoestand naderden, wat suggereert datHerba Cistancheshad enige tegenwerkende of therapeutische effecten op de ratten die waren blootgesteld aan hydrocortison. Deze resultaten ondersteunen de klinische bevindingen dat:Herba Cistanchesis effectief bij de behandeling van de 'nierdeficiëntiesyndroom'. Over het algemeen geven beide trajecten een visueel, algemeen en dynamisch beeld van het begin, de progressie en het herstel van de 'nierdeficiëntiesyndroom'.

Figuur 2 Gemiddeld traject van PC1 vs. PC2 scores voor urinemonsters van de modelgroep (-●-) en behandelgroep (--●--). Elke stip geeft een gemiddelde score aan op verschillende tijdstippen, dwz pre-dosis, dagen 1, 3, 7 en 10. De foutbalk geeft de standaarddeviatie weer voor elk tijdstip verkregen door de eerste hoofdcomponent.

Vergelijkende metabole analyse van urinemonsters

Om de metabole effecten van hydrocortison beter te begrijpen, vergeleken we de metabole profielen die werden verkregen uit de controle-, model- en behandelingsgroepen. Algemene clustering van de drie groepen kan gemakkelijk worden waargenomen op verschillende tijdstippen, dwz pre-dosis, dag 3 en dag 10 (Figuur 3). Hoewel er geen scheidingsneiging is in urineprofielen vóór toediening, week de metabole profielen af ​​van die van de controlegroep op dag 3 na blootstelling aan hydrocortison. De metabole verstoring door hydrocortison verscheen in zowel de model- als de behandelingsgroepen. Echter, na een opeenvolgende 7-dagbehandeling metHerba Cistanches, werden metabolische profielen van de behandelingsgroep weer vergelijkbaar met die van de controlegroep, wat aangeeft datHerba Cistanchesheeft de verstoorde stofwisseling effectief hersteld.

Figuur 3 Vergelijking van metabole profielen van de controlegroep (zwarte ruit), modelgroep (rode ruit) en behandelingsgroep (blauwe ruit) op verschillende tijdstippen: pre-dosis (A), dag 3 (B) en dag 10 (C). Elke stip in de PCA-scoregrafiek vertegenwoordigt de gegevens die zijn verkregen van een rat.

Differentiële identificatie van metabole profielen

Een kruisgevalideerd PLS-DA-model werd gebruikt om de belangrijkste metabolieten in verschillende metabole profielen te identificeren voor een gemakkelijker onderscheid tussen de ratten in de controlegroep en de ratten uit de modelgroep (dwz door hydrocortison geïnduceerde) met of zonderHerba Cistanchesbehandeling op dag 3 (tabel 1). Vouwveranderingen in de relatieve concentratie van elke belangrijke metaboliet tussen groepen werden bepaald en de overeenkomstige visualisatie van de veranderingen tussen groepen op pre-dosis, dag 3 en dag 10 werd geproduceerd (Figuur 4). Zoals weergegeven in figuur 4 en tabel 1, terwijl de meeste endogene metabolieten significant toenamen of afnamen in de modelgroep, ondergingen die in de behandelingsgroep een voorbijgaande periode zoals waargenomen op dag 1 en dag 3 en naderden geleidelijk het controleniveau (normaal). . Bijvoorbeeld, vergeleken met de kleine variatie (1,1-1,5 keer) van de metabolieten in de behandelingsgroep op dag 10, werden de sterk verhoogde niveaus (1,7-3,0 keer) van urinair tyrosine, tyramine, dopamine en noradrenaline waargenomen in de modelgroep gedurende het experiment. Onze vorige studie toonde aan dat het verhoogde catecholaminemetabolisme, geïnduceerd door glucocorticoïden, resulteerde in overconsumptie van immuunfuncties, wat leidde tot de 'nierdeficiëntiesyndroom' [31]. Herba Cistanches, een versterkend kruid dat het immuunsysteem verbetert [36], kan sommige effecten van hydrocortison tegengaan.Herba Cistancheskan mogelijk ook een normaal metabool regulerend netwerk herstellen. Verdere experimenten met verschillende benaderingen zoals moleculaire biologie, celbiologie en plantenchemie zijn nodig om de acties vanHerba Cistanches(en zijn bestanddelen) in de 'nierdeficiëntiesyndroom'.

Tabel 1 Een lijst van metabolieten die zijn opgenomen in de metabole profilering van de huidige studie

Uit: Metabolische profilering onthult therapeutische effecten vanHerba Cistanchesin een diermodel van hydrocortison-geïnduceerde 'nierdeficiëntiesyndroom'

Opmerking: de correlatiecoëfficiënten (corr-coëfficiënten) van alle verbindingen werden berekend op basis van een kruisgevalideerd PLS-DA-model (Q2Ycum=0.899, een bevredigend model met twee componenten) op dag 3 tussen de controlegroep en de modelgroep met of zonderHerba Cistanchesbehandeling. Bovendien werden de vouwveranderingen getest met de niet-parametrische Kruskal-Wallis-test. Kw (P) geeft de P-waarden van de test aan. H=controlegroep, M=modelgroep, D=behandelgroep. H/M/0 vertegenwoordigt bijvoorbeeld de relatieve vouwveranderingen (model naar controle) in de pre-dosistoestand.

Figuur 4 Vouw veranderingen van de belangrijkste metabolieten. Rode kleur geeft relatieve verhoogde concentraties aan (vouwveranderingen > 1,5), terwijl groene kleur relatieve verlaagde concentraties aangeeft (vouwveranderingen < -1,5).="" vouwveranderingen="" variërend="" van="" -1.5="" tot="" 1.5="" worden="" beschouwd="" als="" fysiologische="" variaties.="" een="" veelvoud="" van="" verandering="" (m/h,="" d/h)="" is="" de="" concentratieverhouding="" van="" de="" modelgroep="" of="" behandelgroep="" tot="" de="">

Conclusie

De huidige metabole profileringsstudie met GC-MS toonde aan dat:Herba Cistanchesveroorzaakte een systemisch herstel van de hydrocortison-geïnduceerde metabole verstoring bij ratten, een diermodel voor de 'nierdeficiëntiesyndroom'. Deze studie toont ook aan dat metabole profilering een bruikbare methode is om de therapeutische effecten van kruidengeneesmiddelen te bestuderen.

Afkortingen

MS: massaspectrometrie

GC-MS: gaschromatografie-massaspectrometrie

NMR: nucleaire magnetische resonantie

PCA: hoofdcomponentenanalyse

PLS-DA: gedeeltelijke kleinste kwadraten - discriminantanalyse

Referenties

1. Nicholson JK, Lindon JC, Holmes E: 'Metabonomics': inzicht in de metabole reacties van levende systemen op pathofysiologische stimuli via multivariate statistische analyse van biologische NMR-spectroscopische gegevens. Xenobiotica. 1999, 29 (11): 1181-1189. 10.1080/004982599238047.

2. Brindle JT, Antti H, Holmes E, Tranter G, Nicholson JK, Bethell HWL, Clarke S, Schofield PM, McKilligin E, Mosedale DE, Grainger DJ: snelle en niet-invasieve diagnose van de aanwezigheid en ernst van coronaire hartziekte met behulp van 1H -NMR-gebaseerde metabonomics. Nat Med. 2002, 8 (12): 1439-1444. 10.1038/nm802.

3. Constantinou MA, Papakonstantinou E, Benaki D, Spraul M, Shulpis K, Koupparis MA, Mikros E: Toepassing van kernmagnetische resonantiespectroscopie gecombineerd met hoofdcomponentenanalyse bij het detecteren van aangeboren stofwisselingsfouten met behulp van bloedvlekken: een metabonomische benadering. Anale Chim Acta. 2004, 511 (2): 303-312. 10.1016/j.aca.2004.02.012.

4. Beckonert O, Monnerjahn J, Bonk U, Leibfritz D: visualisatie van metabole veranderingen in borstkankerweefsel met behulp van 1H-NMR-spectroscopie en zelforganiserende kaarten. NMR Biomed. 2003, 16 (1): 1-11. 10.1002/nbm.797.

5. Mortishire-Smith RJ, Skiles GL, Lawrence JW, Spence S, Nicholls AW, Johnson BA, Nicholson JK: Gebruik van metabonomica om een ​​verstoord vetzuurmetabolisme te identificeren als het mechanisme van door geneesmiddelen veroorzaakte toxiciteit. Chem Res Toxicol. 2004, 17 (2): 165-173. 10.1021/tx034123j.

6. Waters NJ, Holmes E, Williams A, Waterfield CJ, Duncan Farrant R, Nicholson JK: NMR- en patroonherkenningsonderzoeken naar de tijdgerelateerde metabole effecten van -naftylisothiocyanaat op lever, urine en plasma bij de rat: een integratieve metabonomische nadering. Chem Res Toxicol. 2001, 14 (10): 1401-1412. 10.1021/tx010067f.

7. Coen M, Lenz EM, Nicholson JK, Wilson ID, Pognan F, Lindon JC: een geïntegreerd metabonomisch onderzoek naar de toxiciteit van paracetamol bij de muis met behulp van NMR-spectroscopie. Chem Res Toxicol. 2003, 16 (3): 295-303. 10.1021/tx0256127.

8. Small-Howard A, Turner H: Blootstelling aan van tabak afgeleide materialen induceert overproductie van uitgescheiden proteïnasen in mestcellen. Toxicol Appl Pharmacol. 2005, 204 (2): 152-163. 10.1016/j.taap.2004.09.003.

9. Waters NJ, Waterfield CJ, Farrant RD, Holmes E, Nicholson JK: Metabonomische deconvolutie van ingebedde toxiciteit: toepassing op hepato- en nefrotoxiciteit van thioacetamide. Chem Res Toxicol. 2005, 18 (4): 639-654. 10.1021/tx049869b.

10. Robertson DG: Metabonomics in toxicologie: een overzicht. Toxicol Sci. 2005, 85 (2): 809-822. 10.1093/toxisch/kfi102.

11. Robertson DG, Bulera SJ: Toxicologie met hoge doorvoer: praktische overwegingen. Curr Opin Drug Discovery Dev. 2000, 3 (1): 42-47.

12. Nicholson JK, Connelly J, Lindon JC, Holmes E: Metabonomics: een platform voor het bestuderen van medicijntoxiciteit en genfunctie. Nat Rev Drug Discov. 2002, 1 (2): 153-161. 10.1038/nrd728.

13. Taylor J, King RD, Altmann T, Fiehn O: Toepassing van metabolomics op plantengenotypediscriminatie met behulp van statistieken en machine learning. Bio-informatica. 2002, 18 (SUPPL 2): S241-S248.

14. Wilson ID, Nicholson JK, Castro-Perez J, Granger JH, Johnson KA, Smith BW, Plumb RS: "ultra-performance" vloeistofchromatografie met hoge resolutie gekoppeld aan oa-TOF-massaspectrometrie als hulpmiddel voor differentiële metabolische routeprofilering in functionele genomische studies. J Proteoom Res. 2005, 4 (2): 591-598. 10.1021/pr049769r.

15. Jonsson P, Gullberg J, Nordstrom A, Kusano M, Kowalczyk M, Sjostrom M, Moritz T: een strategie voor het identificeren van verschillen in grote reeksen metabolomische monsters geanalyseerd door GC/MS. Anale Chem. 2004, 76 (6): 1738-1745. 10.1021/ac0352427.

16. Ohdoi C, Nyhan WL, Kuhara T: Chemische diagnose van het Lesch-Nyhan-syndroom met behulp van gaschromatografie-massaspectrometriedetectie. J Chromatogr, B: Anal Technol Biomed Life Sci. 2003, 792 (1): 123-130. 10.1016/S1570-0232(03)00277-0.

17. Fiehn O, Kopka J, Dormann P, Altmann T, Trethewey RN, Willmitzer L: Metabolietprofilering voor functionele plantengenomica. Nat Biotechnologie. 2000, 18 (11): 1157-1161. 10.1038/81137.

18. Lafaye A, Junot C, Pereira Y, Daniel G, Tabet JC, Ezan E, Labarre J: Gecombineerde analyses van proteoom- en metabolietprofilering onthullen verrassende inzichten in het zwavelmetabolisme van gist. J Biol Chem. 2005, 280 (26): 24723-24730. 10.1074/jbc.M502285200.

19. Schauer N, Steinhauser D, Strelkov S, Schomburg D, Allison G, Moritz T, Lundgren K, Roessner-Tunali U, Forbes MG, Willmitzer L, Fernie AR, Kopka J: GC-MS-bibliotheken voor de snelle identificatie van metabolieten in complexe biologische monsters. FEBS Lett. 2005, 579 (6): 1332-1337. 10.1016/j.febslet.2005.01.029.

20. Willse A, Belcher AM, Preti G, Wahl JH, Thresher M, Yang P, Yamazaki K, Beauchamp GK: identificatie van belangrijke histocompatibiliteitscomplex-gereguleerde lichaamsgeuren door statistische analyse van een vergelijkend gaschromatografie / massaspectrometrie-experiment. Anale Chem. 2005, 77 (8): 2348-2361. 10.1021/ac048711t.

21. Wang XW, Wang XF, Wu LY: Verbetering van de herinnering aan muizen van fenylethanoïde glycosiden van Cistanche deserticola. Rep Chin Pharm. 2002, 19: 41-42.

22. Xie JH, Wu CF: Effect van ethanolisch extract van Cistanche deserticola op de inhoud van monoamine-neurotransmitters in rattenhersenen. Zhongcaoyao. 1993, 24: 417-419.

23. Li LL, Wang XW, Wang XF: antilipideperoxidatie en antistralingswerking van glycosiden inherba Cistanches.Chin J Chin Mater Med. 1997, 22 (6): 364-367.

24. Shahat AA, Nazif NM, Abousetta LM, Ibrahim NA, Cos P, Van Miert S, Pieters L, Vlietinck AJ: Fytochemisch onderzoek en antioxidantactiviteit van Duranta repens. Phytother Res. 2005, 19 (12): 1071-1073. 10.1002/ptr.1766.

25. Gao J, Igarashi K, Nukina M: Drie nieuwe fenylethanoïde glycosiden van Caryopteris incana en hun antioxidatieve activiteit. Chem Pharm Bull. 2000, 48 (7): 1075-1078.

26. Kyriakopoulou I, Magiatis P, Skaltsounis AL, Aligiannis N, Harvala C: Samioside, een nieuwe fenylethanoïde glycoside met vrije radicalen en antimicrobiële activiteiten van Phlomis samia. J Nat Prod. 2001, 64 (8): 1095-1097. 10.1021/np010128 plus .

27. Deng M, Zhao JY, Ju XD, Tu PF, Jiang Y, Li ZB: beschermend effect van tubuloside B op TNF-alfa-geïnduceerde apoptose in neuronale cellen. Acta Pharmacol Sin. 2004, 25: 1276-1284.

28. Geng XC, Song LW, Pu XP, Tu PF: Neuroprotectieve effecten van fenylethanoïde glycosiden van Cistanches salsa tegen 1-methyl-4-fenyl-1, 2, 3, 6- tetrahydropyridine (MPTP) induceerde dopaminerge toxiciteit bij C57-muizen. Biol Pharm Bull. 2004, 27: 797-801. 10.1248/bpb.27.797.

29. He W, Shu X, Zong G, Shi M, Xiong Y, Chen M: Nierversterking en yang ondersteunen de werking van cistanche deserticola YC Ma voor en na de bereiding. Zhongguo Zhong Yao Zazhi. 1996, 21 (9): 534-537. 575

30. Shen LZ, Zhong XY, Wang SX: Effect van Cistanche deserticola op normale en deficiënte Shen-yang-ratten. Zhongyao Yaoli Yu Linchuang. 2001, 17 (1): 17-18.

31. Chen M, Zhao L, Jia W: Metabonomisch onderzoek naar de biochemische profielen van een door hydrocortison geïnduceerd diermodel. J Proteoom Res. 2005, 4 (6): 2391-2396. 10.1021/pr050158o.

32. Chen Q, Yi NY: De diermodellen en medicijnen voor Yin-deficiëntie en Yang-deficiëntie. Experimentele methodologie van farmacologisch onderzoek in de traditionele Chinese geneeskunde. Bewerkt door: Chen Q. 1993, Beijing: People's Health Publishing House, 982-984.

33. Nationaal Comité voor Farmacopee: Farmacopee van de Volksrepubliek China. 2005, Peking: Press of Chemical Industry, 1: 90-

34. Multi- en megavariate data-analyse, deel I: basisprincipes en toepassingen, tweede herziene en uitgebreide editie. [http://www.umetrics.com/default.asp/pagename/training_literature/c/5]

35. SIMCA-P en SIMCA-P plus 11 Gebruikershandleiding. [http://www.umetrics.com/default.asp/pagename/downloads_gebruikersgids/c/3]

36. Chin HL, Su YC: onderzoek naar de farmacologische effecten van Cistanche deserticola Ma. Zhongguo Zhong Yao Zazhi. 1993, 19: 143-146.

Uit: Chinese Geneeskunde deel 3, Artikelnummer: 3 (2008)