Interventieonderzoek naar fenylethylalcoholglycosidesine Cistanche bij het perimenopauzale syndroom Diermodel Ⅱ

Experiment 1 Bereiding van Cistanche-fenylethanoïdeglycoside 1 Bron van medicinale materialen

Cistanche tubulosa, Chengdu Wecistanche biotech Ltd.d, batchnummer: 20130501.

2 reagentia

95% ethanol (medische kwaliteit); AB-8 macroporeuze adsorptiehars, Tianjin Guangfu Fine Chemical Research Institute, batchnummer: 20130618.

Echinacoside-referentiestof, geleverd door het China Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products, batchnummer: 111670-200503.3

HOE LANG DUURT HET VOORDAT CISTANCHE WERKT?

Voorbereidingsmethode

Er werd verwezen naar de literatuurmethode [19] en deze werd uitgevoerd onder leiding van professor Feng Suxiang van de afdeling Geneesmiddelenanalyse van het Henan College of Traditional Chinese Medicine.Maal Cistanchetot een grof poeder, voeg 10 maal de hoeveelheid 70% ethanol toe aan de reflux, en extraheer tweemaal, telkens 1,5 uur, combineer de twee alcoholextracten, concentreer onder verminderde druk tot er geen alcoholgeur meer is, en verspreid met gedestilleerd water (de concentratie bedraagt ​​0,5 g medicinaal materiaal/ml) als monsteroplossing. Laat het door AB-8-hars gaan (kolom geneesmiddel: hars is 1:10), laad het monster in een stroom en laat het 5 uur staan ​​totdat het volledig is geadsorbeerd. Was eerst met 10 keer het kolomvolume gedestilleerd water, gooi het water weg en gebruik dan 10 keer het kolomvolume. Gebruik 10% ethanol om onzuiverheden te verwijderen en elueer uiteindelijk met 7 keer het kolomvolume van 60% ethanol. Verzamel het eluaat en damp in tot droog, waarbij een poeder wordt verkregen. 4 Selectie van de meetgolflengte

Meet nauwkeurig {{0}},5 ml van de referentieoplossing af, voeg 1 ml 5% natriumnitrietoplossing toe, schud goed en laat 6 minuten staan; voeg 1 ml 10% aluminiumnitraatoplossing toe, schud goed en laat 6 minuten staan; voeg 10% natriumhydroxideoplossing 10 ml toe, verdun tot 25 ml met water, schud goed en laat 18 minuten staan ​​om als referentieoplossing te dienen. 0,5ml vanCistanche fenylethanolglycosideoplossing werd op dezelfde manier bereid als de testoplossing. Gebruik het parallelle monster zonder de referentiestof toe te voegen en test de oplossing als blanco, en bereid de blanco-oplossing op dezelfde manier voor. Voer op de UV-spectrofotometer een scan van de volledige golflengte uit op de drie bovenstaande oplossingen in het golflengtebereik van 200-800nm. Zowel de referentiestof als de testoplossing hebben maximale absorptiepieken bij 507 nm, dus wordt 507 nm bepaald als de absorptiegolflengte.

Na kleurontwikkeling van Cistanche-fenylethanolglycosidemonster + kleurontwikkeling van Echinacea-mandarijnreferentiestof (gesuperponeerde vergelijking), zie figuur 1.

Figuur 1 Na kleurontwikkeling van Cistanche-fenylethanoïdeglycosidemonster + na kleurontwikkeling van referentiestof Echinacea mandarijn Figuur 5 Methode voor detectie van inhoud

Meet nauwkeurig 1 ml van de te testen oplossing af, voeg 1 ml 5% natriumnitrietoplossing toe, schud goed en laat 6 minuten staan; voeg 1 ml 10% aluminiumnitraatoplossing toe, schud goed en laat 6 minuten staan; voeg 10% natriumhydroxide toe. De oplossing is 10 ml, verdun tot 25 ml met water, schud goed en laat 18 minuten staan. Gebruik het parallelle monster zonder de monsteroplossing als blanco toe te voegen en bereid op dezelfde manier een blanco-oplossing. Gemeten met behulp van een UV-spectrofotometer bij 507 nm. 6 Methodologische beoordeling

6.1 Bereiding van referentieoplossing en monsteroplossing

Bereiding van de referentieoplossing: Weeg nauwkeurig 3.06 mg van de echinacoside-referentiestandaard die is gedroogd tot constant gewicht, plaats deze in een maatkolf van 25 ml, voeg 70% oplossing toe om op te lossen en verdun tot de maatstreep, goed schudden en opzij zetten. De standaardconcentratie is 0,1224 mg/ml.

Bereiding van de monsteroplossing: Weeg nauwkeurig 5 mg afCistanche fenylethanoïde glycoside extractin een maatkolf van 10 ml, los dit op in 70% ethanol en vul aan tot de maatstreep.

6.2 Voorbereiding van standaardcurve

Teken nauwkeurig {{0}}, 1.0, 2.0, 3.0, 4.{{10}}, 5,0 6,0 ml referentieoplossing, ontwikkel de kleur en verdun tot volume volgens de methode in 4.2, en meet de absorptiewaarde bij 507 nm. Als we concentratie versus absorptie gebruiken om een ​​regressiecurve te maken, is de regressievergelijking: Y=20.296X-0.0015 (r=0.9994), en het lineaire bereik is 4.{{ 23}}.4ug/ml.

6.3 Precisietest

Neem de monsteroplossing en meet deze zes keer parallel volgens het item "Inhoudsbepalingsmethode". Bereken de relatieve standaardafwijking van de absorptie. De absorpties zijn respectievelijk {{0}}.299, 0.299, 0.298, 0.297, 0.297, 0,297. De gemiddelde absorptie=0.298, RSD=0.330% (n =6).

6.4 Stabiliteitstest

Neem een ​​geschikte hoeveelheid van de monsteroplossing en meet volgens het item 'Inhoudsbepalingsmethode' de absorptiewaarden bij {{0}}, 15, 30, 50 , en 60 minuten nadat de oplossing volledig gekleurd is, en bereken de relatieve standaarddeviatie. De absorpties zijn respectievelijk 0.304, 0,303, 0,300 en 0,296. , 0,295, 0,295, gemiddelde absorptie=0.299, RSD=1.362% (n=5).

6.5 Herhaalbaarheidstest

Neem een ​​monster, bereid 6 monsteroplossingen volgens het item "Bereiding van de monsteroplossing", meet de absorptiewaarde volgens het item "Inhoudsbepalingsmethode" en bereken de inhoud. De inhoud is respectievelijk 65,2%, 65,6%, 66,7%, 67,2% en 66,5%. , 65,8%, gemiddelde inhoud 66,2%, RSD=1.142% (n=6).

6.6 Monsterhersteltest

Trek nauwkeurig 0,5 ml van de monsteroplossing met bekende inhoud, in totaal 9 delen, en voeg respectievelijk 200, 250 en 300 ul van de standaardoplossing toe. Meet en bereken het herstelpercentage en de relatieve standaardafwijking van Cistanche-fenylethanolglycoside. De herstelpercentages zijn respectievelijk 101,45% en 99,26%. , 98,94%, 101,83%, 99,05%, 99,47%, 98,72%, 99,17%, 100,64%, het gemiddelde herstelpercentage is 99,84%, RSD=1,164% (n=9).

7 Bepaling van de monsterinhoud

Tabel 1 Bepalingsresultaten van het gehalte aan fenylethanoïdeglycoside in Cistanche