Isolatie en zuivering van fenylethanoïde glycosiden van Cistanche Deserticola door tegenstroomchromatografie met hoge snelheid

Contactpersoon: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Li a,b, Rong Tsao b,*, Raymond Yang b, Chunming Liu a, J. Christopher Young b, Honghui Zhu b

Abstract

Vijf fenylethanoïde glycosiden (PhG's), echinacoside, cistanoside A, acteoside, isoacteoside en 20-acetylacteoside, werden geïsoleerd en gezuiverd uitCistanche deserticolavoor de eerste keer door hogesnelheidstegenstroomchromatografie (HSCCC) met behulp van twee bifasische systemen, een bestaande uit ethylacetaat-ethanol-water (5:0.5:4.5, v/v/v) en een ander ethylacetaat-n-butanol-ethanol-water ({{10}}.5:0.5:0.1:1, v/v/v/v). In totaal werden 28,5 mg echinacoside, 18,4 mg cistanoside A, 14,6 mg acteoside, 30,1 mg isoacteoside en 25,2 mg 20-acetylacteoside gezuiverd uit 1412 mg n-butanolextract van C. deserticola, elk met een zuiverheid van meer dan 92,5%, zoals bepaald met HPLC. De structuren werden geïdentificeerd door hun retentietijd, UV, LC-ESI-MS in de negatieve ionenmodus, en bevestigd door NMR-experimenten. Het karakteristieke LC-ESI-MSn fragmentatiepatroon van de vijf verbindingen wordt besproken en blijkt een zeer specifiek en nuttig hulpmiddel te zijn voor de structurele identificatie van PhG's van deze belangrijke medicinale plant.

trefwoorden:Cistanche deserticola; Fenylethanoide; Echinacoside; Cistanoside A; acteoside; isoacteoside; 20-Acetylacteoside; HSCCC; LC-ESI-MS; NMR

1. Inleiding

Cistanche deserticola YC Mais een bekend Chinees kruidengeneesmiddel en wordt veel gebruikt in traditionele bereidingen, vergelijkbaar met de huidige functionele voedingsingrediënten of voedingssupplementen (Wong, Li, Cheng, & Chen, 2006). De belangrijkste bioactieve bestanddelen in C. deserticola zijn fenylethanoïde glycosiden (PhG's), waaronder echinacoside, acteoside, isoacteoside, 20-acetylacteoside en cistanoside A (Kobayashi, Karasawa, & Miyase, 1984; Kobayashi et al., 1987). PhG's zijn wijd verspreid in het plantenrijk en zijn uitgebreid bestudeerd voor hun verschillende biologische functies zoals hepatoprotectieve (Xiong et al., 1998), anti-inflammatoire, antinociceptieve activiteit (Schapoval et al., 1998) en antioxiderende activiteiten ( Cheng, Wei, Guo, Ni, & Liu, 2005; Hij, Lau, Xu, Li, & Maar, 2000; Li, Wang, & Wang, 1997; Li, Wang, Zheng, Liu, & Jia, 1993; Wang, Jiang, Wu, & Wang, 2001; Xiong, Kadota, Tani, & Namba, 1996), verbetering van de seksuele functie (Xie & Wu, 1993; Zong, He, Wu, & Chen, 1996) en kalmerend effect (Lu, 1998 ).

Vanwege de bovengenoemde significante biologische activiteiten zijn grote hoeveelheden zuivere verbindingen dringend nodig als referentiestandaarden en voor verschillende in vitro en in vivo studies met betrekking tot het gebruik van traditionele Chinese medicijnen. Effectieve methoden voor de isolatie, zuivering en structurele karakterisering van PhG's zijn daarom noodzakelijk. Dergelijk werk vereist echter meestal het gebruik van meerdere chromatografische stappen voor het opschonen en isoleren van monsters (Gross, Lahloub, Anklin, Schulten, & Sticher, 1988; Nishimura, Sasaki, Inagaki, Chin, & Mitsuhashi, 1991; Ravn, Nishibe , Sasahara, & Li, 1990; Shoyama, Matsumoto, & Nishioka, 1987), wat gewoonlijk resulteert in lage terugwinningspercentages als gevolg van onomkeerbare adsorptie van PhG's op de vaste drager tijdens scheiding (Lei et al., 2001). Daarentegen is snelle tegenstroomchromatografie (HSCCC) een effectief alternatief geworden voor de conventionele chromatografische technieken voor de scheiding van sommige PhG's uit plantenextracten (Lei et al., 2001; Li et al., 2005). Lei et al. succesvol gescheiden acteoside en 20-acetylacteoside vanCistanches salsa(CA Mey.) G. Beck met behulp van HSCCC (Lei et al., 2001). De auteurs van dit artikel hebben eerder melding gemaakt van de scheiding van acteoside en isoacteoside van Plantago psyllium L. door HSCCC (Li et al., 2005). Er is echter geen rapport gepubliceerd over de scheiding en zuivering van meerdere PhG's van C. deserticola met behulp van HSCCC. Vanwege het gebrek aan standaarden zijn LC-MS-methoden ontwikkeld en gebruikt als een krachtig analytisch hulpmiddel voor snelle karakterisering en identificatie van sommige PhG's in plantenextract (Li et al., 2005; Wang et al., 2000).

In dit artikel rapporteren we een HSCCC-methode die is ontwikkeld voor de bereiding van echinacoside, cistanoside A, acteoside, isoacteoside en 20-acetylacteoside van C. deserticola. Karakterisering en analyse van de vijf gescheiden PhG's werden bereikt door het gebruik van LC gekoppeld aan in-line ESI-massaspectrometrie en NMR-experimenten. De retentietijd, het molecuulgewicht en de karakteristieke fragmentionen van de vijf PhG's worden in dit artikel gepresenteerd en besproken. De structuren van de vijf PhG's die in dit onderzoek zijn geïdentificeerd, zijn weergegeven in Fig. 1.

Effectieve ingrediënten van Cistanche deserticola

2. experimenteel

2.1. Chemicaliën en reagentia

Acteoside werd gekocht bij Sigma-Aldrich (Oak-Ville, ON), echinacoside werd gekocht bij ChromaDex (Santa Ana, CA). Isoacteoside werd geïsoleerd uit P. psyllium L. (Li et al., 2005). C. deserticola werd gekocht bij Beijing TongRenTang Medicinal Store (China). Alle oplosmiddelen waren van HPLC-kwaliteit en gekocht bij Caledon Laboratories Ltd. (Georgetown, ON).

2.2. Monstervoorbereiding

C. deserticola (20 g) werd vijf keer gedurende 12 uur bij kamertemperatuur geëxtraheerd met telkens 100 ml 80 procent waterige ethanol. Elke keer werd het extractiemengsel gefiltreerd door een Whatman No.1-filterpapier (Whatman International Ltd., Maidstone, Engeland). Het gecombineerde filtraat werd onder vacuüm bij < 40°="" tot="" 100="" ml="" geconcentreerd.="" de="" resulterende="" waterige="" oplossing="" werd="" tweemaal="" ontvet,="" elk="" met="" 100="" ml="" hexaan,="" en="" vervolgens="" vijfmaal="" achtereenvolgens="" geëxtraheerd,="" elk="" met="" 100="" ml="" n-butanol.="" de="" n-butanollagen="" werden="" gecombineerd="" en="" onder="" vacuüm="" bij="">< 40°="" tot="" droog="" geconcentreerd,="" hetgeen="" 2,2="" g="" n-butanolextract="" opleverde.="" het="" extract="" werd="" vóór="" hsccc-scheiding="" bij="" -20="" graden="">

2.3. HSCCC-scheidingsprocedure

De preparatieve HSCCC werd uitgevoerd in een Model CCC{{0}} hogesnelheidstegenstroomchromatografie (Pharma-Tech Research, Baltimore, Maryland, VS). Dit apparaat had drie preparatieve spoelen, in serie geschakeld (totaal volume, 325 ml). Het toerental van het apparaat kon worden geregeld tussen 0 en 2000 rpm. Het HSCCC-systeem was uitgerust met een HPLC-pomp (Pharma-Tech Research, Baltimore, Maryland, VS), een Model 450 UV-detector (Alltech, VS), een Model L 120 E vlakbedrecorder (Linseis Inc., Princeton Jct, VS), een fractiecollector (Advantec MFS Inc., VS) en een monsterinjectieklep met een 10-mL monsterlus.

Een mengsel van ethylacetaat-ethanol-water (5:0.5:4.5, v/v/v) werd krachtig geschud in een scheitrechter en bij kamertemperatuur laten staan ​​en scheiden. De twee fasen werden gebruikt in de HSCCC nadat ze evenwicht hadden bereikt. De gehele opgerolde kolom werd eerst gevuld met de bovenste laag, die dienst doet als stationaire fase. De onderste laag (mobiele fase) werd vervolgens in het kopeinde van de kolom gepompt met een stroomsnelheid van 1,5 ml/min. De rotatiesnelheid was ingesteld op 1050 rpm. Een monster (elke keer ca. 230 mg) opgelost in 8 ml van het mengsel van ethylacetaat-ethanol-water (5:0,5:4,5, v/v/v) werd in de injectieklep geladen nadat het systeem hydrodynamisch was bereikt evenwicht. Dit tweefasige oplosmiddelsysteem werd geselecteerd op basis van de partitiecoëfficiënt (K), die respectievelijk 0,87, 1,11 en 1,32 was voor acteoside, isoacteoside en 20 acetylacteoside. De K-waarde was de verhouding van de concentraties in de bovenste en onderste lagen van dezelfde verbinding zoals bepaald met HPLC (Fig. 2). Het effluent uit de uitlaat van de kolom werd continu gevolgd door een UV-detector bij 254 nm en verzameld in reageerbuizen met een fractiecollector ingesteld op 4 minuten voor elke buis.

2.4. LC-voorwaarden

statische autosampler en een fotodiode-arraydetector (DAD) werden gebruikt voor de analyse van PhG's in het n-butanolextract van C. deserticola en fracties verzameld uit de HSCCC-scheiding. De scheiding werd uitgevoerd in een Phenomenex ODS-C18-kolom (250 x 4,6 mm, 5 lm) met een C18-bewakingskolom. De binaire mobiele fase bestond uit acetonitril (oplosmiddel A) en water met 2 procent azijnzuur (oplosmiddel B). Alle oplosmiddelen werden gefilterd door een

{{0}},45 lm filter voor gebruik. De stroomsnelheid werd constant gehouden op 1.0 ml/min gedurende een totale looptijd van 25 minuten. Het systeem werd uitgevoerd met een gradiëntprogramma: 0–20 min: 90 procent B tot 60 procent B; 20–22 min: 60 procent B tot 0 procent B; en 22-25 min, 0 procent B tot 90 procent B. Het monsterinjectievolume was 10 lL. Van belang zijnde pieken werden gevolgd bij 320 nm door een DAD-detector.

2.5. LC-ESI-MS-experimenten

LC-MS-experimenten werden uitgevoerd met behulp van een Finnigan LCQ DECA-iontrap-massaspectrometer (Thermo Finnigan, San Jose, CA, VS) uitgerust met een elektrospray-ionisatiebron (ESI). De monsters werden in dezelfde chromatografische toestand geanalyseerd. Voor het verzamelen van gegevens is een negatief model gebruikt. De omhullingsgas- en hulpstroomsnelheden werden vastgesteld op respectievelijk 96 en 7 (willekeurige eenheid). De capillaire spanning werd ingesteld op 29 V en de temperatuur werd geregeld op 350 graden. De ingangslensspanning werd vastgesteld op 40 V en de meerpolige RF-amplitude werd ingesteld op 540 V. De ESI-naaldspanning werd geregeld op 4,5 kV. De afwijking van de buislens was 16 V, de afwijking van de meerpolige lens 1 was 8,20 V en de afwijking van de meerpolige lens 2 was 10,5 V. De spanning van de elektronenvermenigvuldiger was ingesteld op 980 V voor ionendetectie.

2.6. NMR voor identificatie

NMR-spectra werden opgenomen op een Bruker Avance-600-spectrometer (Bruker BioSpin Ltd., Milton, Canada). Alleen verbindingen 2 en 5 (geen standaarden beschikbaar) werden onderworpen aan NMR-experimenten. Monsters werden opgelost in CD30D.

Actieve ingrediënten van cistanche: echinacoside en acteoside

3. Resultaten en discussie

Een succesvolle HSCCC-scheiding hangt grotendeels af van een geschikt tweefasenoplosmiddelsysteem dat een ideale verdelingscoëfficiënt (K) rond 1 voor de gewenste verbinding biedt. Een dergelijk bifasisch systeem zou ook een redelijk korte inwerktijd moeten opleveren (Chen, Games, & Jones, 2003; Foucault & Chevolot, 1998; Oka, Oka, & Ito, 1991). In ons experiment hebben we vier reeksen oplosmiddelsystemen geselecteerd op basis van de oplosbaarheid van de doelverbindingen in C. deserticola. HPLC werd gebruikt om de concentratie in elke fase te meten, waaruit de K-waarden van de doelverbindingen werden berekend. Twee systemen, ethylacetaat-n-butanol-ethanol-water (4:0,6:0,6:5, v/v/v/v) en ethylacetaat-water (1:1, v/v), zijn eerder gebruikt in HSCCC om acteoside en 20-acetylacteoside te scheiden van

C. salsa, en acteoside en isoacteoside van P. Psyllium,

respectievelijk (Lei et al., 2001; Li et al., 2005). Hoewel het eerste systeem een ​​relatief korte bezinktijd had, presteerde het slecht bij het scheiden van de PhG's van C. deserticola, vanwege de lage K-waarden voor verbindingen 1 en 2 en hoge K-waarden voor verbindingen 3-5. De K-waarden waren erg laag voor verbindingen 1-4 in het tweede systeem, maar erg hoog voor verbinding 5 (tabel 1). Een gemodificeerd systeem met ethylacetaat-ethanol-water (5:0,5:4,5, v/v/v), gaf een ideale K-waarde voor verbindingen 3-5 bij respectievelijk 0,87, 1,11 en 1,32 en resulteerde in de goede scheiding van deze drie verbindingen (Fig. 3A en B). Dit systeem produceerde echter

een te kleine K-waarde voor verbindingen 1 en 2, waardoor de twee verbindingen co-elueren nabij het oplosmiddelfront (fractie 1 in Fig. 3A). Een verdere wijziging van het systeem (ethylacetaat-n-butanol-ethanol-water (0.5:0.5:0.1:1, v/v/v/ v) verhoogde de K-waarden voor verbinding 1 en 2 tot respectievelijk 0,52 en 0,92 en leidde tot volledige scheiding (Fig. 3C).Fig. 3A toont de HSCCC-scheiding van een monster met 230 mg van het n-butanolextract van C. deserticola met ethylacetaat-ethanol-water (5:0.5:4.5, v/v/v). door HPLC om alleen verbindingen 3, 4 of 5 te bevatten, werden afzonderlijk gecombineerd, en die met verbindingen 3 en 4 werden samengevoegd, gevriesdroogd en opnieuw onderworpen aan de HSCCC voor verdere scheiding (Fig. 3B). De hierboven beschreven HSCCC-scheiding leverde in totaal 14,6 mg, 30,1 mg en 25,2 mg verbindingen 3-5 op uit 1412 mg n-butanolextract.Fig. 3C toont de HSCCC-scheiding van een monster dat verbindingen 1 bevat. en 2 (fractie 1 in de eerste scheiding) met behulp van ethylacetaat-n-butanol-ethanol-water (0.5:0.5:0.1:1, v/v/v/v). Een totaal van 28.5 en 1 Er werd 8,4 mg verbindingen 1 en 2 verkregen. De chromatografische zuiverheden van de gevriesdroogde verbindingen 1-5 waren meer dan 92,5 procent, die direct werden gebruikt voor LC-ESI-MS- en NMR-analyses.

Voorlopige identificatie van verbindingen 1, 3 en 4 werd bereikt door congruente retentietijden en UV-spectrale gegevens met die van het authentieke echinacoside, acteoside en isoacteoside (Fig. 2). Verbindingen 2 en 5 waren onbekend, maar de UV-spectra van alle vijf verbindingen waren zeer vergelijkbaar, wat wijst op vergelijkbare structurele kenmerken.

Om de structuren van deze vijf verbindingen verder te onderzoeken, werden LC-ESI-MSn-experimenten geprobeerd en de resultaten worden getoond in Fig. 4 en Tabel 2. Verbindingen gerelateerd aan de pieken (1-5) in Fig. 2 vertoonden intense gedeprotoneerde moleculaire ionen [MH] — bij m/z respectievelijk 785, 799, 623, 623 en 665 in de negatieve modus. Dimere [2M H]--ionen werden ook waargenomen voor pieken 1-4 in Fig. 2. Deze bevestigden dat de molecuulgewichten van pieken 1-5 respectievelijk 786, 800, 624, 624 en 666 waren. De LC-MSN-gegevens (tabel 2) leverden zeer bruikbare structurele informatie voor de vijf PhG's, zoals het neutrale verlies van een experimentele procedure: ongeveer 1 mg van elk monster werd afgewogen in een reageerbuis van 10 ml waarin 1 ml van elke fase van het vooraf in evenwicht gebrachte tweefasenoplosmiddelsysteem werd toegevoegd. De reageerbuis werd afgesloten en 1 minuut krachtig geschud, en men liet hem staan ​​totdat hij volledig scheidde. Een aliquot van 100 lL van elke laag werd eruit gehaald en afzonderlijk onder vacuüm drooggedampt<40 °c.="" the="" residue="" was="" dissolved="" in="" 10="" ll="" methanol="" and="" analyzed="" by="" hplc="" for="" determining="" the="" partition="" coefficient="" (k)="" of="" compounds="" 1–5.="" the="" k="" value="" was="" expressed="" as="" the="" peak="" area="" of="" the="" target="" compound="" in="" the="" upper="" phase="" divided="" by="" that="" in="" the="" lower="">

De LC-ESI-MS van piek 1 wordt getoond in Fig. 4A. Het gedeprotoneerde moleculaire ion [MH] - bij m/z 785 met een hoge abundantie en een dimeer gedeprotoneerd moleculair.ion [2M H]- bij m/z 1571 werd waargenomen in de negatieve modus, wat wijst op een molecuulgewicht van 786, wat hetzelfde was als dat van echinacoside. Nader onderzoek in het LC-MS2-experiment van de m/z 785-ionen leverde één hoofddochterion op bij m/z 623 (Fig. 4B), direct geproduceerd uit m/z 785 door verlies van een caffeoyl-eenheid of een hexose-eenheid als [M 162 H]—. Het LC-MS3-spectrum van m / z 623 vertoonde twee hoofdionen bij m / z 477 en 461 en twee kleine ionen bij m / z 315 en 179 (Fig. 3C, Tabel 2). De massaverschillen tussen m/z 623 en de fragmentionen m/z 477 en 461 waren respectievelijk 146 en 162, wat overeenkomt met het verlies van een rhamnose-eenheid en een glucose-eenheid of een caffeoyl-eenheid [M 162 H]—. De m/z 623-ionen verloren ook een caffeoylgroep en een rhamnosegroep om de m/z 315-ionen te produceren. Het ion bij m/z 179 werd geproduceerd door de splitsing van de caffeoylgroep, waarbij de negatieve lading aan de kant van de caffeoylgroep achterbleef. LC-ESI-MSN-experiment op het authentieke echinacoside vertoonde hetzelfde fragmentatiepatroon. Piek 1 werd daarom bevestigd als echinacoside.

Voor piek 2 toonde de LC-ESI-MS m/z 799 als het gedeprotoneerde moleculaire ion [MH]- en m/z 1599 als zijn dimere ion, wat duidt op een molecuulmassa van 800. Tijdens MS2-experimenten liet de m/z 799 ionen vormden drie dochters bij m/z 637, 623 en 475 (Tabel 1). Het ion bij m/z 637 werd direct geproduceerd uit het oorspronkelijke ion van m/z 799, wederom vanwege het neutrale verlies van de caffeoyl [M-162-H]- of een glucosegroep [M-162-H]-. Het ion bij m/z 623 was het gevolg van het verlies van een CH2-radicaal. Het ion bij m/z 475 werd gevormd door het neutrale verlies van zowel de caffeoylgroep [M162H]— als de glucosegroep van het ouderion. Het MS3-experiment op m/z 637 produceerde drie ionen bij m/z 619, 491 en 475, overeenkomend met de verliezen van respectievelijk één water, een rhamnose-eenheid en een glucose-eenheid. Het m/z 623-dochterion produceerde m/z 461 en 315 in de MS3-studie, die dezelfde fragmentatieroutes volgde als echinacoside zoals hierboven besproken. De LC-ESI-MSN-gegevens ondersteunden een voorlopige identificatie voor piek 2 als cistanoside A. Beide pieken vertoonden hetzelfde [MH]--ion bij m/z 623 en dimeer bij m/z 1247 in de negatieve modus (Tabel 1), wat aangeeft het zijn mogelijk isomeren met hetzelfde molecuulgewicht van

624, hetzelfde als acteoside en isoacteoside. De MS2-spectra van de [MH]--ionen toonden ook hetzelfde dochterion van m/z 461, wat het verlies van de caffeoylgroep van het ouderion m/z 623 aangaf (Tabel 1). Vergelijkbare MS3-spectra werden verkregen voor de twee verbindingen. Voor piek 3 vormde het MS3-spectrum van het ion bij m/z 461 drie ionen bij m/z 315, 161 en 135. De m/z 315 wordt gevormd na verlies van rhamnose zoals eerder besproken. Het ion m/z 161 werd geproduceerd uit de splitsing van de caffeoylgroep, gevolgd door een verder verlies van één water; de lading bleef aan de kant van de caffeoylgroep. Het ion op m/z 135 [aglycone 18 H]— kwam voort uit de splitsing van de glycosidische binding op de C1-positie met een extra verlies van één water, waardoor de lading aan de kant van de aglyconrest kwam. Het MS3-spectrum van piek 4 volgde dezelfde fragmentatieroute als piek 3, behalve het ontbrekende ion bij m/z 135. Het moleculaire ion en de fragmentatiepatronen van deze twee verbindingen komen overeen met de literatuurgegevens over acteoside en isoacteoside (Wang et al. ., 2000), hoewel een extra ion m/z 153 werd gevonden en Proton-NMR-gegevens van cistanoside A en 20-acetylacteoside werden toegewezen als [aglycon H]— door Wang et al. (Wang et al., 2000). Dit ion was mogelijk onstabiel en verloor water om m/z 135 te geven in ons experiment. Op basis van de MS-gegevens en de congruente retentietijden van pieken 3 en 4 met de standaarden, worden ze daarom geïdentificeerd als respectievelijk acteoside en isoacteoside.

De LC-ESI-MS-gegevens van piek 5 worden weergegeven in Tabel 2. Een gedeprotoneerd moleculair ion [MH]- (m/z 665) was het enige ion dat in de negatieve modus werd gevonden, wat een molecuulmassa van 666 impliceert. Drie dochter-ionen werden waargenomen bij m/z 623, 503 en 461 in het MS2-experiment (Tabel 2). De dochterionen bij m/z 623 en 503 werden direct gevormd uit het ouderion door respectievelijk verlies van een COCH2-groep en een caffeoylgroep. Het ion bij m/z 461 kwam van het verlies van zowel de caffeoyl- als de COCH2-eenheid [M 162 42 H]— van het ouderion. In het MS-experiment produceerde m/z 623 m/z 461 en leverde m/z 503 drie ionen op bij m/z 485, 461 en 315. Het MS3-spectrum van het dochter-ion m/z 461 gaf twee ionen bij 443 en 315. Door het LC-MSN-fragmentatiepatroon van piek 5 te vergelijken met andere verbindingen die in dit onderzoek zijn gerapporteerd en met andere gerapporteerde (Li et al., 2005; Wang et al., 2000), concludeerden we dat piek 5 structureel sterk verwant was naar acteoside met als enige verschil de COCH3-eenheid op de R3-positie. Een voorlopige identiteit werd daarom gegeven aan piek 5 als 20-acetylacteoside (Fig. 1).

De structuren van de twee voorlopig geïdentificeerde verbindingen, piek 2 (als cistanoside A) en piek 5 (als 20-acetyl-acteoside) werden bevestigd door middel van 1H NMR. De chemische verschuivingen en koppelingsconstanten van alle protonen in verbindingen 2 en 5, zoals weergegeven in Tabel 3., kwamen overeen met de gerapporteerde NMR-gegevens voor respectievelijk cistanoside A en 20-acetylacteoside (Kobayashi et al., 1984, 1987) . 2D NMR-experimenten (COSY-, ROESY- en CH-correlatie op lange afstand) werden ook uitgevoerd in de huidige studie en ze bevestigden de identificatie verder (gegevens niet getoond).

Acteoside van Cistanche deserticola

4. Conclusies

In dit artikel werd HSCCC met succes gebruikt voor de isolatie en zuivering van echinacoside, cistanoside A, acteoside, isoacteoside en 20-acetylacteoside uit het n-butanolextract van C. deserticola. Het is daarom een ​​bewezen middel voor semi-preparatieve scheiding van bioactieve stoffen. Inmiddels zijn de structuren van de vijf PhG's in C. deserticola onderzocht met behulp van LC-ESI-MSN; er werden enkele karakteristieke kenmerken van PhG's gevonden, waardoor we de functionele groepen in de structuren konden bepalen. De LC-ESI-MSN-methode is daarom een ​​krachtig hulpmiddel voor snelle identificatie van fenylethanoïden en hun glycosiden in C. deserticola-extracten, vooral wanneer dit wordt onderbouwd met NMR-gegevens.

Erkenning

De auteurs willen Jun Gu van het Nuclear Magnetic Resonance Centre, University of Guelph, Ontario, Canada bedanken voor haar hulp bij NMR-experimenten. Dit project werd gedeeltelijk ondersteund door financiering van de provincie Jilin, China (nr. 20060904).

Referenties

Chen, LJ, Games, DE, & Jones, J. (2003). Isolatie en identificatie van vier flavonoïde-bestanddelen uit de zaden van Oroxylum Indicum door tegenstroomchromatografie met hoge snelheid. Dagboek voor chromatografie A, 988, 95-105.

Cheng, XY, Wei, T., Guo, B., Ni, W., & Liu, CZ (2005). Cistanche deserticola celsuspensieculturen: biosynthese van fenylethanoïde glycosiden en antioxiderende activiteit. Procesbiochemie, 40, 3119– 3124.

Foucault, AP, & Chevolot, L. (1998). Tegenstroomchromatografie: instrumentatie, oplosmiddelselectie en enkele recente toepassingen voor de zuivering van natuurlijke producten. Dagboek voor chromatografie A, 808, 3-22.

Gross, G.-A., Lahloub, MF, Anklin, C., Schulten, H.-R., & Sticher, O. (1988). Teucrioside, een fenylpropanoïde glycoside van Teucrium Chamaedrys. Fytochemie, 27, 1459-1463.

Hij, ZD, Lau, KM, Xu, HX, Li, PC, & Maar, PPH (2000). Antioxidant activiteit van fenylethanoïde glycosiden van Brandisia kansen. Journal of Ethnopharmacology, 71, 483-486.

Kobayashi, H., Karasawa, H., & Miyase, T. (1984). Studies over de bestanddelen van Cistanchis Herba. III. Isolatie en structuren van nieuwe fenylpropanoïde glycosiden, Cistanoside A en B. Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 32, 3009-3014.

Kobayashi, H., Oguchi, H., Takizawa, N., Miyase, T., Ueno, A., Usmanghani, K., et al. (1987). Nieuwe fenylethanoïde glycosiden van Cistanche tubulosa (Schrenk) Hook. FI. Chemisch en farmaceutisch bulletin, 35, 3309-3314.

Lei, L., Yang, FQ, Zhang, TY, Tu, PF, Wu, LJ en Ito, Y. (2001). Preparatieve isolatie en zuivering van acteoside en 2'-acetylacteoside uit Cistanches salsa (CA Mey) G. Beck door tegenstroomchromatografie. Dagboek voor chromatografie A, 912, 181-185.

Li, L., Tsao, R., Liu, ZQ, Liu, SY, Yang, R., Young, JC, et al. (2005). Isolatie en zuivering van acteoside en isoacteoside van Plantago psyllium L. door hogesnelheidstegenstroomchromatografie. Dagboek voor chromatografie A, 1063, 161-169.

Li, LL, Wang, XW, & Wang, XF (1997). Antilipideperoxidatie en antiradicale werking van glycosiden in herba Cistanches. China Journal of Chinese Materia Medica, 22, 364-367.

Li, J., Wang, PF, Zheng, RL, Liu, ZM, & Jia, ZJ (1993). Bescherming van fenylpropanoïde glycosiden van Pedicularis tegen oxidatieve hemolyse in vitro. Planta Medica, 59, 315-317.

Lu, MC (1998). Onderzoek naar het kalmerende effect van Cistanche deserticola. Journal of Ethnopharmacology, 59, 161-165.

Nishimura, H., Sasaki, H., Inagaki, N., Chin, M., & Mitsuhashi, H. (1991). Negen fenethylalcoholglycosiden van Stachys szeboldzz. Fytochemie, 30, 965-969.

Oka, F., Oka, H., & Ito, Y. (1991). Een systematische zoektocht naar geschikte tweefasige oplosmiddelsystemen voor snelle tegenstroomchromatografie. Dagboek voor chromatografie, 538, 99-108.

Ravn, H., Nishibe, S., Sasahara, M., & Li, X. (1990). Fenolverbindingen van Plantago Asiatica. Fytochemie, 29, 3627-3631.

Schapoval, EES, Winter de Vargas, MR, Chaves, CG, Bridi, R., Zuanazzi, JA, & Henriques, AT (1998). Anti-inflammatoire en antinociceptieve activiteiten van extracten en geïsoleerde verbindingen van Stachytarpheta cayennensis. Journal of Ethnopharmacology, 60, 53-59.

Shoyama, Y., Matsumoto, M., & Nishioka, I. (1987). Fenolglycosiden van zieke wortels van Rehmannia glutinosa Var. Purpurea. Fytochemie, 26, 983-986.

Wang, XW, Jiang, XY, Wu, LY en Wang, XF (2001). Opruimingseffect van glycosiden van Cistanche deserticola op vrije radicalen en de bescherming ervan tegen OH-geïnduceerde DNA-schade in vitro. Tijdschrift voor Chinese Farmacologie, 36, 29-31.